So sánh hiệu quả của hai phương pháp chuẩn bị tinh trùng bằng thang nồng độ Percoll và Swim-up

Nghiên cứu so sánh hiệu quả của hai phương pháp chuẩn bị tinh trùng thang nồng độ Percoll và Swim-up được tiến hành từ tháng 9/2003 đến tháng 9/2004 tại bệnh viện Từ Dũ. Kết quả cho thấy dối với nhóm tinh trùng bình thường không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa hai phương pháp. Đối với nhóm tinh trùng dưới mức bình thường thì phương pháp thang nồng độ Percoll có độ thu hồi tinh trùng cao hơn phương pháp Swim-up sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 SO SÁNH HIỆU QUẢ CỦA HAI PHƯƠNG PHÁP CHUẨN BỊ TINH TRÙNG BẰNG THANG NỒNG ĐỘ PERCOLL VÀ SWIM-UP Trần Thị Lợi*, Nguyễn Châu Mai Phương** TÓM TẮT Nghiên cứu so sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng thang nồng độ Percoll Swim-up tiến hành từ tháng 9/2003 đến tháng 9/2004 bệnh viện Từ Dũ Kết cho thấy dối với nhóm tinh trùng bình thường khác biệt có ý nghóa thống kê hai phương pháp Đối với nhóm tinh trùng mức bình thường phương pháp thang nồng độ Percoll có độ thu hồi tinh trùng cao phương pháp Swim-up khác biệt có ý nghóa thống kê SUMMARY COMPARISION OF THE METHODS OF SPERM PREPARATION: PERCOLL GRADIENT CENTRIFUGATION AND SWIM-UP PROCEDURES Tran Thi Loi, Nguyen Chau Mai Phuong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol * Supplement of No * 2005: 125 – 129 This study was to comparision of the methods of sperm preparation: percoll gradient centrifugation and swim-up procedures at Tu du hospital from September,2003 to September, 2004 The results in the normal groups revealed that the sperm concentration and the percentage of motile sperm recovery in both the Percoll and Siwm-up samples was’nt significantly In the abnormal groups revealed that the sperm concentration and the percentage of motile sperm recovery in the Percoll samples was significantly greater than that in the swim-up samples ĐẶT VẤN ĐỀ: Bơm tinh trùng vào buồng tử cung coi thực lần cách 200 năm Jonh Hunter khuyên người đàn ông bò lỗ tiểu đóng thấp bơm tinh dòch tươi vào âm đạo vợ kết đứa bé đời niềm vui sướng bố mẹ Đến năm 1970 – 1980, với tiến khoa học kỹ thuật, phương pháp chuẩn bò lọc rửa tinh trùng để bơm vào buồng tử cung (IUI) đời làm thay đổi hẳn mặt kỹ thuật thụ tinh nhân tạo(1) Phương pháp góp phần nâng cao tỷ lệ thành công việc điều trò vô sinh Mặt khác, phương pháp bơm tinh trùng vào buồng tử cung lại thực đơn giản, tốn mà hiệu điều trò cao Cho nên phương pháp áp dụng rộng rãi trung tâm sản phụ khoa tuyến quận huyện nước Hiện giới có nhiều phương pháp lọc rửa tinh trùng Mỗi phương pháp có ưu khuyết điểm riêng Tại bệnh viện Từ Dũ - đơn vò nước áp dụng kỹ thuật đạt thành công đáng kể - áp dụng hai phương pháp lọc rửa tinh trùng phương pháp thang nồng độ phương pháp Swim-up, mà hiệu ưu khuyết điểm phương pháp chưa có nghiên cứu thực Chính thế, tiến hành thực nghiên cứu nhằm so sánh hiệu hai phương pháp khả thu hồi tinh trùng di động tốt, độ di động mật độ tinh trùng để đạt hiệu cao điều trò Từ đưa số đánh giá ban đầu việc sử dụng phương pháp thích hợp cho lọai mức độ tinh trùng khác * Bộ môn Phụ Sản Đại Học Y Dược TPHCM ** Bệnh viện Từ Dũ 125 ĐỐI TƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đậc điểm thói quen, tiền bệnh lý thới gian vô sinh Trong thời gian từ 01/9/2003 đến 30/9/2004 bệnh viện Từ Dũ, thực nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng không đối chứng 263 mẫu tinh trùng nhằm so sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng phương pháp thang nồng độ sử dụng Percoll phương pháp Swim-up Bảng 2: Đậc điểm thói quen, tiền bệnh lý thới gian vô sinh Số liệu nhập xử lý phần mềm Access 98, SPSS 11.5 Độ di động tinh trùng trước, sau lọc rửa, độ thu hồi tinh trùng sau lọc rửa tính tỉ lệ phần trăm So sánh tỉ lệ tinh trùng di động trước sau rữa phép kiểm Student’s t test mẫu độc lập KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trong thời gian tiến hành nghiên cứu, có 236 người nhận vào mẫu gồm: 135 người thuộc nhóm nhóm tinh trùng bình thường 101 người thuộc nhóm nhóm tinh trùng mưc bình thưởng, với đặc điểm sau Đặc điểm đòa dư, văn hóa xã hội Bảng 1: Một số đặc điểm đòa dư, văn hóa xã hội mẫu nghiên cứu Đặc điểm Tuổi trung bình mẫu Đòa dư Trình độ học vấn Nội thành Ngoại thành Tỉnh Cấp I Cấp II Cấp III Trung cấp, đại học N = 236 30,7 ± 5,07 32% 26% 42% 15% 32% 29% 24% Nhận xét: Yếu tố Thói quen sinh hoạt Tiề n că n bệ n h lý N = 236 Hút thuốc 52% Uống rượu 31% Quai bò 16% Nhiễm trùng tiểu 7,5% Nguyên phát 69,7% Loại vô sinh Thứ phát 30,3% Thời gian muộn trung bình 48 ± tháng 57,2% Tinh dịch đồ bình thường Tinh dịch đồ Tinh dịch đồ mức bình 42,8% thường Nhận xét: Hơn phân bệnh nhân tham gia nghiên cứu có thói quen hút thuốc 31% có thói quen uống rượu chiếm tỉ lệ cao Các thói quen ảnh hưởng xấu đến chất lượng tinh trùng Về tiền bệnh lý, quai bò nhiễm trùng tiểu chiếm tỉ lệ thấp 16% 7,5% Đa số bệnh nhân vô sinh nguyên phát 69,7% với thời gian muộn trung bình 48 ± tháng Khi tiến hành so sánh tinh dòch đồ hai nhóm phương pháp lọc rửa Percoll Swim-up ta nhận th khác biệt có ý nghóa thống kê hai nhóm Bảng 3: So sánh tinh dòch đồ hai nhóm thang nồng độ Percoll Swim-up Biến số Phương pháp chuẩn bò tinh trùng Thang nồng độ Swim-up P 2,29 ± 1,21 2,34 ± 1,07 0,73 V trước lọc (ml) Mật dộ trước loïc 50,88 ± 24,11 52,82 ± 32,51 0,60 (106/ml) Di động trước lọc (%) 31,53 ± 11,59 32,53 ± 10,61 0,34 Về phân bố đòa dư tập trung chủ yếu thành phố với 32% nội thành 26% ngoại thành Ghi chú: giá trò số trung bình ± độ lệch chuẩn Trình độ học vấn cấp II cấp III chiếm chủ yếu mẫu nghiên cứu với 32% cấp II 29% cấp III Không có khác biệt có ý nghóa thống kê tinh dòch đồ hai nhóm thang nồng độ Percoll Swim-up Chứng tỏ có tương đồng tinh dòch đồ hai nhóm 126 Nhận xét: Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 Nghiên cứu Y học So sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng gradient đệm Percoll Swim-up tinh dòch đồ bình thường So sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng gradient đệm Percoll Swim-up tinh dòch đồ mức bình thường: Bảng So sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng gradient đệm Percoll Swim-up tinh dòch đồ bình thường: Bảng 5: So sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng gradient đệm Percoll Swim-up tinh dòch đồ mức bình thường: Phương pháp chuẩn bò tinh trùng Biến số Thang nồng Swim-up P độ 61,66 ± 70,11 ± Mật độ trước lọc (106/ml) 0,77 21,66 32,84 35,46 ± Di động trước lọc (%) 37,86 ± 7,78 0,13 10,18 Mật độ sau loïc (10 /ml) 15,14 ± 5,41 16,82 ± 6,50 0,10 Di động sau lọc (%) 97,41 ± 1,59 97,75 ± 0,94 0,13 Độ thu hồi tinh trùng di 8,76 ± 2,65 7,69 ± 3,04 0,000 động sau lọc (%) Ghi chú: giá trò số trung bình ± độ lệch chuẩn Ở nhóm tinh dòch đồ bình thường phân tích tinh trùng sau lọc rửa ta nhận thấy khác biệt có ý nghóa thống kê mật độ tinh trùng, độ di động tinh trùng hai phương pháp Percoll Swim-up Nhưng khả thu hồi tinh trùng di động tốt sau lọc rửa phương pháp Percoll 8,76% cao phương pháp Swim-up 7,69% có ý nghóa thống kê với p < 0,00005 95.80% Phương pháp chuẩn bò tinh trùng Biến số Thang nồng Swim-up P độ 35,27 ± 31,54 ± Mật độ trước lọc (106/ml) 0,2 18,35 14,62 Di động trước lọc (%) 24,9 ± 10,71 25,98 ± 9,98 0,6 Mật độ sau loïc (106/ml) 6,27 ± 3,38 4,40 ± 2,57 0,002 Di động sau lọc (%) Độ thu hồi tinh trùng di động sau lọc (%) 95,12 ± 4,24 91 ± 7,06 18,25 ± 10 ± 4,38 11,28 Đối với nhóm tinh trùng mức bình thường phương pháp Percoll cho kết tinh trùng sau lọc rủa cao phương pháp Swim-up mật độ tinh trùng, độ di động tinh trùng khà thu hồi tinh trùng di động tốt sau lọc có khác biệt có ýnghóa thống kê 80% 30% 60% Mẫu không đạt tiêu chuẩn 40% Mẫu đạt tiêu chuẩn 0% 4.20% Percoll 61.50% 70% 40% 20% 81.60% 90% 38.50% 50% 80% 1.60% Swim-up Biều Đồ 1.1 Tiêu Chuẩn Chất Lượng Mẫu Tinh Trùng Sau Lọc Rửa Nhận xét: Khi so sánh tiêu chuẩn cần đạt mẫu tinh trùng sau lọc rửa ta nhận thấy khác biệt phương pháp Percoll phương pháp Swimup (p > 0,3) nhóm tinh trùng bình thường 0,03 Ghi chú: giá trò số trung bình ± độ lệch chuẩn 60% 98.40% 100% 0,001 Mẫu không đạt tiêu chuẩn Mẫu đạt tiêu chuẩn 18.40% 20% 10% 0% Percoll Swim-up Biểu đồ 1.2: Tiêu chuẩn chất lượng mẫu tinh trùng sau lọc rửa Nhận xét: Khi so sánh tiêu chuẩn cần đạt mẫu tinh trùng sau lọc rửa ta nhận thấy phương pháp Percoll có số mẫu tinh trùng đạt tiêu chuẩn cao phương pháp Swim-up (81,6% so với 38,5%, p < 0,00005) nhóm tinh trùng mức bình thường BÀN LUẬN Trong nghiên cứu dựa vào đặc điểm 127 tinh dòch đồ để phân loại nhóm nghiên cứu yếu tố khác yếu tố đòa dư, trình độ học vấn v.v không ảnh hường đến kết nghiên cứu, nên tiến hành so sánh đặc điểm tinh dòch đồ hai nhóm: thang nồng độ Percoll Swim-up Chúng không nhận thấy có khác biệt hai nhóm với p>0,05 (bảng 5), chứng tỏ hai nhóm tương đồng với Tuy thực thời gian gần IUI thực góp phần không nhỏ điều trò muộn bệnh viện Từ Dũ, phải kể đến đóng góp kỹ thuật lọc rửa tinh trùng, mà chủ yếu hai phương pháp thang nồng độ Percoll Swim-up Khi tiến hành so sánh hiệu hai phương pháp chia mẫu nghiên cứu thành nhóm khảo sát nhóm tinh trùng bình thường nhóm tinh trùng mức bình thường Đối với nhóm tinh trùng bình thường Khi khảo sát mật độ, độ di động tinh trùng sau lọc rửa nhận thấy khác biệt có ý nghóa thống kê hai kỹ thuật Kết phù hợp với nghiên cứu khác(2,3) William C cộng không nhận thấy có khác biệt mật độ, độ di động tinh trùng sau lọc rửa phương pháp thang nồng độ Percoll Swim-up Bảng 2.1: So sánh độ thu hồi tinh trùng nghiên cứu nghiên cứu khác(nhóm tinh trùng bình thường) Độ thu hồi tinh trùng (%) Tác giả Năm PO Karlstrom Chan SY Chen SU NC 1991 1991 1995 2003 Thang nồng độ Percoll 17,7% 9% 8,7% 8,76% Swim-up 8,6% 5% 6,8% 7,69% P < < < < 0,01 0,05 0,05 0,03 Khi so saùnh độ thu hồi tinh trùng sau lọc rửa, nhận thấy phương pháp thang nồng độ Percoll cho kết cao phương pháp Swim-up, khác biệt có ý nghóa mặt thống kê Điều nhận thấy nghiên cứu PO Karlstrom,1991 hay Ng FL,1992 (4,5) Bảng 2.1 cho ta thấy số kết nghiên cứu khác so với nghiên cứu khả thu hồi tinh 128 trùng sau lọc rửa Chúng tiến hành so sánh tiêu chuẩn cần có để đạt kết bơm tinh trùng vào tử cung Với tiêu chuẩn ≥ 1×106/ml 95% di động tìm thấy 1,6% nhóm Swim-up 4,2% nhóm thang nồng độ không đạt yêu cầu, không tìm thấy khác biệt có ý nghóa thống kê Từ kết nhận thấy nhóm tinh trùng bình thường hai phương pháp lọc rửa có hiệu Đối với nhóm tinh trùng mức bình thường Trong mẫu khảo sát, mật độ tinh trùng, độ di động sau lọc rửa nhóm tinh trùng mức bình thường lại có khác biệt có ý nghóa thống kê hai phương pháp thang nồng độ Percoll Swim-up Ở phương pháp thang nồng độ Percoll cho mật độ tinh trùng 6,27 × 106/ml độ di động 95,12% cao phương pháp Swim-up 4,4 × 106/ml 91% Và so sánh độ thu hồi tinh trùng sau lọc rửa nhận thấy phương pháp thang nồng độ Percoll cao phương pháp Swim-up có ý nghóa thống kê (18,25% so với 10%) Kết phù hợp với nghiên cứu khác (bảng 2.2) Bảng 2.2: So sánh độ thu hồi tinh trùng nghiên cứu nghiên cứu khác(nhóm tinh trùng mức bình thường) Độ thu hồi tinh trùng (%) Tác giả Năm Ng FL, Liu DY Chan SU Chen SU NC 1992 1996 1996 2003 Thang nồng độ Swim-up P Percoll 18 - 19% 5% < 0,01 43,2% 32,2% < 0,05 23,5% 15,8% < 0,05 18,25% 10% < 0,00005 Về tiêu chuẩn sau lọc rửa nhóm tinh trùng mức bình thường nhận thấy tỉ lệ không đạt tiêu chuẩn phương pháp Swim-up cao 38,5% so với 18,4% phương pháp thang nồng độ Percoll có khác biệt có ý nghóa thống kê Từ kết nhận thấy nhóm tinh trùng mức bình thường phương pháp thang nồng độ Percol tỏ có hiệu so với Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 phương pháp Swim-up Akerlof E cộng cho với mẫu tinh trùng 20 × 106/ml kỹ thuật dùng thang nồng độ cho chuẩn bò tinh trùng tốt kỹ thuật Swim-up (5) KẾT LUẬÄN Đối với nhóm tinh trùng bình thường Không có khác biệt có ý nghóa thống kê mật độ, độ di động tinh trùng sau lọc rửa hai phương pháp thang nồng độ Percoll Swim-up Khi khảo sát độ thu hồi tinh trùng sau lọc rửa, kết cho thấy phương pháp thang nồng độ Percoll có độ thu hồi tinh trùng cao so với phương pháp Swim-up (8,76% so với 7,69%), nhiên, khác biệt ý nghóa mặt thống kê Đối với nhóm tinh trùng mức bình thường Có khác biệt có ý nghóa thống kê mật độ, độ di động tinh trùng sau lọc rửa hai phương pháp thang nồng độ Percoll Swim-up Độ thu hồi tinh trùng sau lọc phương pháp thang nồng độ Percoll chiếm 18,25% cao phương pháp Swim-up 10% Sự khác biệt có ý nghóa mặt thống kê với p 0,00005 TÀI LIỆU THAM KHAÛO Nguyễn Thiện Thực (2000) Chuẩn bị tinh trùng Kỹ thuật xét nghiệm tinh trùng, 18-23 10 11 Brian Dale and Kay Elder In vitro fertilization: Semen analaysis and preparation for assissted reproductive techniques Cambridge University 1999:85-99 Akerlof E, Fredricson B, Gustafsson O, Lundin A, Lunell NO, Nylund L, Rosenborg L, Pousette A Comparison between a siwm-up and Percoll gradient technique for the separation of human spermatozoa Int J Androl 1987 Oct; 10(5):663-9 PO Karlstrom, O Bakos, T Bergh and O Lundkvist Intrauterine Insemination and comparison of two methods of sperm preparation Human Reproduction 1991., 6, 390-395 Ng FL, Liu DY, Baker HW Comparison of Percoll, mini-Percoll and Swim-up methods for sperm preparation from abnormal semen samples Hum Reprod 1992 Feb;7(2):261-6 Chan SY, Chan YM, Tucker MJ Comparison of characteristics of human spermatozoa selected by the multiple-tube Swim-up and simple discontinuous Percoll gradient centrifugation Andrologia 1991 MayJun;23(3):213-8 Chen SU, Ho HN, Chen KH, Chao KH, Wu MY, Chen CD, Huang SC, Lee TY, Yang YS Combination of direct Swim-up technique and discontinuous Percoll gradient centrifugation for sperm preparation of oligoasthenozoospermic samples Chen SU, Ho HN, Chen HF et al Comparison between a twolayer discontinuous Percoll gradient and Swim-up for sperm preparation on normal nad abnormal semen samples J Assist Reprod Genet 1995; 12: 698-703 Chen SU, Ho HN, Chen HF et al Combination of direct Swim-up technique and discontinuous Percoll gradient centrifugation for sperm preparation of olligoasthenozoospermic samples Arch Androl 1996; 37:103-109 William C Dodson MD, Janis Moessner BS, Jeri Miller BS, Richard S Legro, MD, and Carol L Gnatuk, MD A ramdomized comparison of the methods of sperm preparation for intrauterine insemination Fertil Steril 1998; 70: 574-575 Van Der Zawalmen P, Bertin-Segal G, Geert L, Debauche C, Schoysman R Sperm morphology and IVF pregnancy rate: comparison between Percoll gradient centrifugation and Swim-up procedures Hum Reprod 1991 Apr:6(4):581-8 129 ... thường So sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng gradient đệm Percoll Swim-up tinh dòch đồ mức bình thường: Bảng So sánh hiệu hai phương pháp chuẩn bò tinh trùng gradient đệm Percoll Swim-up. .. hai phương pháp thang nồng độ Percoll Swim-up Khi khảo sát độ thu hồi tinh trùng sau lọc rửa, kết cho thấy phương pháp thang nồng độ Percoll có độ thu hồi tinh trùng cao so với phương pháp Swim-up. .. mật độ tinh trùng 6,27 × 106/ml độ di động 95,12% cao phương pháp Swim-up 4,4 × 106/ml 91% Và so sánh độ thu hồi tinh trùng sau lọc rửa nhận thấy phương pháp thang nồng độ Percoll cao phương pháp