Khảo sát đáp ứng kháng thể ở chuột nhiễm angiostrongylus cantonensis bằng kỹ thuật elisa

Nghiên cứu này được tiến hành nhằm mô tả thời gian xuất hiện, diễn biến và đáp ứng kháng thể ở chuột nhiễm angiostrongylus cantonensis với 2 liều khác nhau (50 ấu trùng/chuột và 100 ấu trùng/chuột).

��c trùng hợp với xuất AT phân(7) Trong nghiên cứu, lô chuột gây nhiễm với liều 100AT/chuột, kết OD đo tương tự lô chuột gây nhiễm với liều 50 AT/chuột thời điểm xuất biến động kháng thể huyết chuột Yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng kháng thể chuột bị gây nhiễm A cantonensis Liều gây nhiễm Bhopale cs gây nhiễm cho lô chuột với liều ấu trùng khác từ 15 AT/chuột, 100 AT/chuột, 500 AT/chuột, 2000 AT/chuột, 5000 AT/chuột 10000 AT/chuột(1) Khi dùng kỹ thuật miễn dịch điện di đối lưu (CIEP) để phát kháng thể, tác giả nhận thấy kháng thể xuất vào ngày 21 sau nhiễm tất lô chuột, 34 trừ lô chuột gây nhiễm với liều 15 AT/chuột Yoshimura cs dùng kỹ thuật ngưng kết hồng cầu thụ động (IHA) phát kháng thể chuột nhiễm A cantonensis với liều trung bình 77 AT/chuột , IHA dương tính mức thấp từ tuần thứ tiếp tục tăng sau đó(13) Yong WK Dobson dùng kỹ thuật IHA để phát kháng thể lô chuột bị nhiễm A cantonensis với liều khác (thấp 10-30 AT, trung bình 40-50 AT cao 100-150 AT) phát kháng thể IHA vào ngày thứ 12 sau nhiễm, sau tăng nhanh đến đỉnh vào tuần thứ trì đến tuần sau Nhóm tác giả chứng minh có tương quan hiệu giá kháng thể liều gây nhiễm từ tuần thứ 14(11) Khi so sánh giá trị OD lô chuột nghiên cứu này, nhận thấy giá trị OD khác đo thời điểm Ở lô gây nhiễm với liều 100AT/chuột, trị số OD cao trị số OD lô chuột bị nhiễm 50AT/chuột (bảng 2) rõ rệt Giá trị OD gấp so với chứng ghi nhận tuần thứ lô gây nhiễm với liều thấp, đạt hiệu giá OD gấp lần từ tuần thứ với liều gây nhiễm 100AT/chuột Kanbara cs có nhận xét tương tự gây nhiễm cho lô chuột với liều 150AT/chuột 50AT/chuột tác giả kết luận kháng thể xuất sớm lô chuột gây nhiễm với liều cao (150/chuột) (ngày 20 sau nhiễm) so với lơ chuột nhiễm liều thấp (ngày 30 sau nhiễm)(9) Vì vậy, nhận định đáp ứng miễn dịch thể dịch nhiễm A cantonensis chuột tỷ lệ thuận với số lượng AT gây nhiễm Thời gian nhiễm ký sinh trùng Thời điểm kháng thể phát máu chuột mhiễm A cantonensis sớm hay muộn tùy thuộc vào kỹ thuật thử nghiệm kháng nguyên làm từ ấu trùng hay giun trưởng thành Kỹ thuật kết tủa phát kháng thể tuần sau nhiễm, kỹ thuật ngưng kết hồng cầu phát kháng thể tuần sau nhiễm(2, 4, 6, 7, 13, 14) Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Chen dùng kỹ thuật ELISA với nhiều loại kháng nguyên làm từ giai đoạn phát triển khác giun, phát kháng thể chuột từ tuần thứ tới tuần thứ 26 sau nhiễm kết luận kháng nguyên làm từ giun trưởng thành tốt kháng nguyên khác(2) Với kỹ thuật ngưng kết hồng cầu gián tiếp (IHA) kháng nguyên làm từ giun trưởng thành, Yong Dobson phát kháng thể vào ngày 35 giun non di chuyển phổi cho kết dùng kháng nguyên làm từ giun trưởng thành(11) Dharmkrong cs ghi nhận kết tương tự sớm vào ngày thứ 14 họ dùng kháng nguyên làm từ ấu trùng(4) Theo Yong Dobson, kháng nguyên làm từ giun trưởng thành phát kháng thể giun tới phổi(11) Kháng thể kháng AT biến phản ứng kháng thể chống kháng nguyên giun trưởng thành phát Đáp ứng miễn dịch có tính đặc hiệu giai đoạn phát triển Vấn đề đặt có khác biệt cấu tạo kháng nguyên làm từ ấu trùng kháng nguyên làm từ giun trưởng thành Dhamkrong-At Sirisinha chứng minh polypeptide có lượng phân tử 80 000, 39 500 22 000 có mặt nhiều giai đoạn phát triển giun có tính kháng ngun(5) Năm 2005, Li cs dùng kỹ thuật điện di dấu thấm miễn dịch (SDS-PAGE Immunoblot) để phân tích kháng nguyên làm từ giai đoạn phát triển khác A.cantonenesis Tác gỉa kết luận băng protein giống giai đoạn phát triển khác nhau(11) Kết tác giả cho thấy đáp ứng kháng thể chuột bị nhiễm A cantonensis tỷ lệ thuận với thời gian gây nhiễm Tuần thứ đến tuần thứ sau nhiễm thời gian tìm thấy ấu trùng não, giá trị OD đo chưa có thay đổi có ý nghĩa so với chứng âm, đồng nghĩa với kháng thể chưa xuất máu Tuy vậy, OD chưa cao kháng thể bắt Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Nghiên cứu Y học đầu có mức thấp khả phát phản ứng ELISA kỹ thuật khác kỹ thuật kết tủa tìm thấy kháng thể tuần sau gây nhiễm Mặt khác, giun não giai đoạn ấu trùng nên chưa có tính sinh kháng nguyên mạnh, chưa gây đáp ứng miễn dịch đáng kể Từ tuần thứ trở lúc giun trưởng thành di chuyển từ não xuống đến ruột Chúng ghi nhận giá trị lúc OD tỷ lệ Voller tăng ngày cao hơn, chứng tỏ kháng thể diện đủ mạnh ngày nhiều để phát Điều giun trưởng thành có tính kháng ngun mạnh ổn định thời lâu dài Trở lại với trường hợp nhiễm A cantonensis người, theo y văn giới, giun đến não không trở phổi nên không trưởng thành Đáp ứng miễn dịch dịch thể người nào, có giống chuột? Đây câu hỏi để ngõ, cần có nghiên cứu để làm rõ diễn biến động học kháng thể kháng A cantonensis người KẾT LUẬN Kỹ thuật ELISA phát kháng thể chống Angiostrongylus cantonensis huyết chuột từ tuần thứ sau nhiễm Hiệu giá kháng thể tính đơn vị OD hay tỷ lệ Voller tăng đến đỉnh vào tuần thứ sau gây nhiễm tồn với hiệu giá cao hết thời gian nghiên cứu (tuần thứ 20) Liều gây nhiễm thời gian sau gây nhiễm có ảnh hưởng đến đáp ứng kháng thể chuột bị nhiễm A cantonensis TÀI LIỆU THAM KHẢO Bhopale MK, Limaye LS, Pradhan VR, Renapurkar DM Sharma KD (1985) Studies on suspected clinical and experimemtal angiostrongyliasis; serological responses J of Hygiene Epidemiology, Micrology and Immunology, 29, No 3, p 283-288 Chen SN (1986) Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antobodies to Angiostrongylus cantonensis, Transaction of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 80:395-405 35 Nghiên cứu Y học 36 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Cross JH (1978) Clinical manifestations and laboratory diagnosis of eosinophilic meningitis syndome associated with angiostrongyliasis, Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth, 9:161-170 Dharmkrong –at A, Uahkowithchai V, Sirisinha S (1978) The humoral nd cell-mediated immune responses to somatic and metabolic antigens in rats infected with Angiostrongylus cantonensis, Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth, 9: 330-337 Dharmkrong –at A, Sirisinha S (1983) Analysis of antigens from different developmental stages of Angiostrongylus cantonensis, Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth, 14: 154-162 Kamiya M (1970) Haemagglutination test in rats infected with Angiostrongylus cantonensis, Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth, 1: 570-571 Kamiya M, Tanaka H (1969) Haemagglutination test in rats infected with Angiostrongylus cantonensis, Jap J Exp Med, 39: 593599 Kamiya M, Klongkamamnuankaran K, Tharavanij S, Tanaka H, Kamiya M (1972) Change of indirect haemaglutination reactions in serum after transfer of adult Angiostrongylus cantonensis to abdominal cavity of rats, Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth, 4: 1119-123 Kanbara T, Ohmono N, Umemura T , Kajigaya H, Umeda M , Sugiyama M and Isoda M (1988) Local antibody production and immune complex formation in rats experimentally infected with Angiostrongylus cantonensis, Am Jtrop Med Hyg, 39 (4): 353-360 10 11 12 13 14 15 Li H, Chen XG, Shen HX, Peng HJ, Zhao XC (2005) Antigen analysis of Angiostrongylus cantonensis in different developmental stages, Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Bing Za Zhi, 23 (1): 36-9 Yong WK and Dobson C (1982) The biology of Angiostrongylus cantonensis larvae in immune rats, Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth, 13 (2): 244-248 Yong WK and Dobson (1982) Antibody responses in rats infected with A cantonensis and the passive transfer of protectve immunity with immune serum, Z Parasitenkunde, 67: 329-336 Yoshimura K and Soulsby JL (1976) Angiostrongylus cantonensis: lymphoid cell responsiveness and antobody production in rats, The American J of Tropical and Hygiene, 25 (1): 99-107 Yoshimura K, Aiba H, Hirayama N, Yosida TH (1979) Acquired resistance and immune responses of eigth strains of inbred rats to infection with Angiostrongylus cantonensis, Jap J vet Sci, 41: 245-259 Yoshimura K and Yamagishi T (1976) Reaginic antibody ptoduction in rabbits and rats infected with Angiostrongylus cantonensis, Jap J vet Sci, 38: 34- 40 Chuyên Đề Ký Sinh Trùng ... LUẬN Kỹ thuật ELISA phát kháng thể chống Angiostrongylus cantonensis huyết chuột từ tuần thứ sau nhiễm Hiệu giá kháng thể tính đơn vị OD hay tỷ lệ Voller tăng đến đỉnh vào tuần thứ sau gây nhiễm. .. với chứng âm, đồng nghĩa với kháng thể chưa xuất máu Tuy vậy, OD chưa cao kháng thể bắt Chuyên Đề Ký Sinh Trùng Nghiên cứu Y học đầu có mức thấp khả phát phản ứng ELISA kỹ thuật khác kỹ thuật. .. phổi(11) Kháng thể kháng AT biến phản ứng kháng thể chống kháng nguyên giun trưởng thành phát Đáp ứng miễn dịch có tính đặc hiệu giai đoạn phát triển Vấn đề đặt có khác biệt cấu tạo kháng nguyên