Nghiên cứu quy trình thu nhận tế bào gốc trung mô từ mô mỡ người hướng đến ứng dụng trong lĩnh vực y học

Tế bào gốc ngày nay được nghiên cứu và ứng dụng rất nhiều đặc biệt trong y học tái tạo và công nghệ mô. Do đó, để thu nhận, phân lập và ứng dụng hiệu quả cần có những quy trình hiệu quả cho tế bào gốc. Vì vậy, nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình thu nhận, phân lập và xác định nguồn tế bào gốc trung mô từ mô mỡ người để hướng đến các ứng dụng trong y học và công nghệ mô.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH THU NHẬN TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỪ MÔ MỠ NGƯỜI HƯỚNG ĐẾN ỨNG DỤNG TRONG LĨNH VỰC Y HỌC Huỳnh Duy Thảo*, Trần Lê Bảo Hà**, Lê Thanh Hùng***, Võ Quốc Vũ*, Hoàng Kc Hương*, Thái Trúc Quỳnh*, Trần Cơng Toại* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Tế bào gốc ngày nghiên cứu ứng dụng nhiều đặc biệt y học tái tạo cơng nghệ mơ Do đó, để thu nhận, phân lập ứng dụng hiệu cần có quy trình hiệu cho tế bào gốc Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng quy trình thu nhận, phân lập xác định nguồn tế bào gốc trung mô từ mô mỡ người để hướng đến ứng dụng y học công nghệ mô Phương pháp nghiên cứu: Thí nghiệm thực nghiệm mơ tả Mơ mỡ người thu nhận điều kiện vơ trùng phòng mổ phân lập tế bào gốc hỗn hợp enzyme Collagenase-Dispase Sau đó, tế bào ni mơi trường để bám dính phát triển Các tế bào định danh để xác định tế bào gốc trung mô cách dựa vào khả bám dính chai ni, khả biệt hóa biểu marker cho dòng tế bào gốc trung mô Kết quả: Quần thể tế bào sau lần cấy chuyền thứ hai đem định danh tế bào gốc trung mơ Đó tế bào bám dính vào chai ni, có hình thái giống với nguyên bào sợi Các tế bào biệt hóa thành nguyên bào xương tế bào mỡ điều kiện in vitro Các tế bào dương tính cao với marker CD44, CD73, CD90 CD105 biểu thấp marker CD45 HLA-DR Kết luận: Quần thể tế bào nuôi cấy từ mô mỡ tế bào gốc trung mơ Từ đó, ứng dụng tế bào gốc nghiên cứu ứng dụng y học công nghệ mơ Từ khóa: Tế bào gốc trung mơ, mơ mỡ người, biệt hóa, marker tế bào gốc trung mô ABSTRACT RESEARCH PROCESS TO COLLECT MESENCHYMAL STEM CELLS FROM HUMAN ADIPOSE TISSUE TOWARDS APPLICATIONS IN THE MEDICAL FIELD Huynh Duy Thao, Tran Le Bao Ha, Le Thanh Hung, Vo Quoc Vu, Hoang Kc Huong, Thai Truc Quynh, Tran Cong Toai * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - Supplement of No - 2013: 459 - 466 Background: Stem cells research and use a lot especially in regenerative medicine and tissue engineering today Therefore, to capture, isolate and performance applications need to have efficient protocol suitable for stem cell Objectives: Set up the acquisition process, the isolation and identification of mesenchymal stem cells from human adipose tissue toward applications in medicine and tissue engineering Methods: The experiment was arranged as described experiments Human adipose tissue were collected in a sterile operating room conditions and isolation of stem cells with a mixture of enzyme collagenaseDispase Then, the cells were cultured in a basic medium for cell adhesion and growth These cells will be * Bộ môn Mô – Phôi – Di truyền, ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch ** Phòng Nghiên cứu Ứng dụng Tế bào gốc, ĐH Khoa học Tự nhiên TP.HCM *** Khoa Răng – Hàm – Mặt, ĐH Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: BS Lê Thanh Hùng, ĐT: 0918.686.151, Email: ranghammat@gmail.com Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 459 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 identified to determine whether mesenchymal stem cells by relying on the ability to stick on the surface of culture flask, based on their ability to differentiate into other cell lines and the expression of specific markers signal for mesenchymal stem cell lines Results: Cell populations in the second subculture are identified mesenchymal stem cells It is the cell adhesion to the surface of culture bottles, with morphology similar to fibroblasts These cells differentiate into osteoblasts and adipocytes in vitro conditions These cells highly positive for the markers CD44, CD73, CD90 and CD105 and low expression of markers CD45 and HLA-DR Conclusion: Populations of cultured cells from the adipose tissue are mesenchymal stem cells Since then, the possible application of stem cells in research applications in medicine and tissue engineering Keywords: Mesenchymal stem cells, human adipose tissue, differentiation, mesenchymal stem cell markers điều kiện in vitro phát triển thành mô ĐẶT VẤN ĐỀ xương, mỡ sụn in vivo(5,11) Do có tiềm Nghiên cứu ứng dụng tế bào gốc biệt hóa kết hợp với việc dễ dàng phân phát triển vào nhiều lĩnh vực lập nuôi cấy làm cho MSC trở thành nghiên cứu, từ nghiên cứu khoa học nguồn tế bào gốc ứng dụng quan trọng ứng dụng lâm sàng y học công nghệ mô y học tái tạo Mặc dù Nhiều loại tế bào gốc thể MSC có nhiều tiềm ứng dụng nghiên cứu triển khai ứng dụng Hiện có chúng quần thể tế bào hiếm, bốn nhóm tế bào gốc quan tâm nghiên cứu: chiếm khoảng 0.001%-0.01% toàn tế bào tế bào gốc phôi, tế bào gốc trung mô, tế bào gốc đơn nhân tủy xương(5,11) Do đó, MSC cần phải tạo máu tế bào gốc thần kinh Mỗi nhóm tế có quy trình thu nhận phù hợp để phát bào gốc có ưu nhược điểm riêng Tế triển in vitro trước có ứng dụng(4) bào gốc phơi thu nhận từ khối tế bào bên Trong số nguồn mô dùng để thu nhận phơi nang, có khả biệt hóa thành MSC, bật mơ mỡ loại mơ loại tế bào thể vấp phải có đặc điểm thuận lợi tiến hành thu rào cản mặt đạo đức luật pháp nghiên nhận, nghiên cứu ứng dụng: thứ nhất, việc cứu làm cho chúng trở thành đối tượng thu nhận mơ mỡ đơn giản, xâm lấn nên nghiên cứu loại tế bào gốc tiềm gây đau đớn cho bệnh nhân so với việc thu Tế bào gốc tạo máu nghiên cứu nhận tủy xương Thứ hai, mơ mỡ có chứa ứng dụng từ sớm có khả biệt tế bào trơn thành mạch, tế bào nội mơ, hóa thành dòng tế bào máu tế bào nguyên bào sợi … đặc biệt MSC(3) trơn nội mô, làm cho nguồn tế bào gốc Các MSC dễ dàng phân lập, nuôi cấy hạn chế tiến hành nghiên cứu Tế bào gốc tăng sinh in vitro cảm ứng biệt hóa thần kinh tương tự tế bào gốc tạo máu thành tế bào dòng tế bào khác(1,10) có khả biệt hóa thành tế bào thần Thứ bà, mô mỡ chứa MSC với tỉ lệ cáo, kinh Do đó, có tế bào gốc trung mô gam mô mỡ chứa 105 MSC(6) Thứ tư, khả (Mesenchymal Stem Cells – MSC) thu nhận từ đặc biệt lưu ý MSC thu từ mô mỡ mô trưởng thành tủy xương, mô liên kết, tiềm biệt hóa tế bào chịu tuyến tiêu hóa … phần phụ thai ảnh hưởng người hiến mô(7) máu cuống rốn, cuống rốn(11) … Do đó, để thu nhận ứng dụng MSC tế bào gốc đa tiềm năng, có khả MSC từ mơ mỡ cách hiệu nên tự đổi với khả biệt hóa thành tiến hành thực nghiên cứu quy trình phân tế bào thuộc dòng trung mơ bao gồm lập, ni cấy xác định MSC từ mô mỡ nguyên bào xương, tế bào mỡ tế bào sụn 460 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 người Từ đó, sử dụng MSC cho nghiên cứu triển khai ứng dụng liệu pháp tế bào, y học tái tạo công nghệ mô ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Sỏi tán với Holmium: YAG LASER 200micron: SPHINX 30, tán nát sỏi hồn tồn Sau bơm rửa sỏi với quan sát máy soi CArm Cuối đánh giá tỉ lệ sỏi CArm siêu âm Rút kim đặt thông mono- J vào bể thận Đối tượng nghiên cứu Mô mỡ người thu nhận từ việc chọc hút mỡ mơ mỡ thừa thu nhận từ quy trình phẫu thuật Mẫu mô thu nhận từ người hiến khỏe mạnh, đồng ý hiến mô để tiến hành nghiên cứu có xét nghiệm âm tính với HIV, HBV, HCV VDRL Phương pháp nghiên cứu Thí nghiệm thực phương pháp thực nghiệm mô tả Thu nhận mô mỡ Mẫu mô thu nhận điều kiện vơ trùng phòng mổ Sau giữ mẫu môi trường vận chuyển gồm: Môi trường DMEM/F12, FBS (10%), Gentamycine (50μg/ml) nhanh chóng chuyển phòng thí nghiệm Phân lập ni cấy tế bào gốc từ mô mỡ Mô mỡ đặt đĩa petri rửa với dung dịch PBS có chứa penicillin /Streptomycin Bổ sung môi trường nuôi (môi trường DMEM/F12, FBS (10%), Gentamycine (50μg/ml), HEPES (15 mm), NaHCO3 (14nM), Biotin (33μm), D-Panto (17 μm), penicillin (100U/ml) and streptomycin (0.1 mg/ml)) vào đĩa, loại bỏ phần mô liên kết thừa rửa máu Cắt nhỏ mẫu mô chuyển tất vào tube 50 ml có nắp đậy, bổ sung hỗn hợp enzyme Dispase-Collagenase (với tỉ lệ 3:1, v/v), mẫu mô ủ nhiệt độ 370C, thời gian 90 phút Nghiên cứu Y học Sau đó, ly tâm thu nhận phần cặn lắng đáy chai Bổ sung môi trường nuôi vào tube huyền phù phần cặn lắng đáy chai Lọc phần dịch tế bào qua phễu lọc tế bào (cell strainer, BD FalconTM) với đường kính 70 μM Quay li tâm phần dịch tế bào thu phần cặn lắng đáy chai Sau đó, bổ sung dung dịch ly giải hồng cầu để loại bỏ hồng lẫn tạp dịch tế bào, để yên khoảng 10 phút để loại bỏ hồng cầu Sau đó, quay li tâm phần dịch tế bào thu phần cặn lắng đáy chai Bổ sung môi trường nuôi huyền phù phần cặn lắng, đánh giá mật độ tế bào cách nhuộm với dung dịch Trypan blue đếm tế bào buồng đếm Neubauer Tế bào nuôi chai nuôi T-25 cm2 nhiệt độ 370C 5% CO2 Định danh tế bào gốc trung mô Theo tổ chức The International Society for Cellular Therapy đưa nguyên tắc chung để xác định loại tế bào gốc MSC cần phải thỏa điều kiện sau: thứ nhất, MSC phải tế bào có khả bám dính tiến hành ni cấy bề mặt chai ni Thứ hai, phải có khả biệt hóa thành nguyên bào xương, tế bào mỡ tế bào sụn điều kiện in vitro Thứ ba, tế bào phải biểu marker bề mặt CD105, CD73 CD90, không biểu marker CD45, CD34, CD14 HLA-DR(2) Dựa theo tiêu chuẩn trên, đánh giá tế bào bào nuôi cấy từ mô mỡ MSC Để đánh giá khả bám dính phát triển bề mặt chai nuôi Quan sát tế bào kính hiển vi đảo ngược nhuộm tế bào thuốc nhuộm Giemsa để quan sát hình thái khả bám dính tế bào Để khảo sát tiềm biệt hóa tế bào, tiến hành thu nhận tế bào kể từ sau lần cấy chuyền thứ hai Các tế bào thử nghiệm để cảm ứng biệt hóa thành nguyên bào xương tế bào mỡ Quy trình biệt hóa thành ngun bào xương Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 461 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 từ tế bào gốc mô mỡ sau: tế bào sau lần cấy chuyền thứ hai chuyển lên chai nuôi sau ngày nuôi cấy thay môi trường cảm ứng tạo nguyên bào xương gồm DMEM/F12, 10% FBS, 10-7M Dexamethasone, 10mM/ml -Glycerol phosphate, 50ng/ml Ascorbic acid, 10ng/ml FGF9, 10-7M vitamin D2 kháng sinh(8) Kết sau 14 ngày ni cấy quan sát kính hiển vi đảo ngược để đánh giá thay đổi mặt hình thái Tiến hành nhuộm Alizarin Red (AR), Von Kossa (VK) để đánh giá khả tạo chất xương Alkaline phosphatase (AP) để đánh giá hoạt tính enzyme đặc trưng cho tế bào xương Ngoài ra, thực phản ứng RT-PCR để khảo sát biểu gien Osteocalcin (là gien sử dụng để xác định cho tế bào xương) Quy trình biệt hóa thành tế bào mỡ từ tế bào gốc mô mỡ sau: tế bào sau lần cấy chuyền thứ hai chuyển lên chai nuôi sau ngày nuôi cấy thay môi trường cảm ứng tạo tế bào mỡ gồm DMEM/F12, FBS (10%), Gentamycine (50μg/ml), HEPES (15 mm), NaHCO3 (14nM), Biotin (33μm), D-Panto (17 μm), Human insulin (66 nM), Triiodo-L-thyronine (1nM), Human transferrin (10μg/ml)(9) Kết sau 14 ngày nuôi cấy quan sát kính hiển vi đảo ngược để đánh giá thay đổi mặt hình thái Tiến hành nhuộm Oil Red O để đánh giá tích tựu giọt lipid bên tế bào nhuộm hóa mơ miễn dịch huỳnh quang Nile Red (là phương pháp nhuộm đặc hiệu sử dụng để xác định cho tế bào mỡ) KẾT QUẢ Phân lập nuôi cấy tế bào gốc từ mơ mỡ Hình 1: Phân lập ni cấy tế bào gốc từ mô mỡ (A) Tế bào bắt đầu tăng trưởng sau ngày nuôi cấy (B) Tế bào tăng trưởng sau ngày nuôi cấy (C) Tế bào nhuộm với thuốc nhuộm giemsa sau 10 ngày nuôi cấy cấy, tế bào đạt đến mật độ phù hợp Các tế bào sau phân lập từ mơ mỡ bắt đầu xuất bám dính sau hai ngày nuôi cấy để cấy chuyền (chiếm khoảng 75-80% diện môi trường nuôi Các tế bào tích bề mặt chai ni) dạng riêng lẻ, có hình dạng thon, dài giống Định danh tế bào gốc mơ mỡ với hình thái ngun bào sợi Những tế Dựa vào khả biệt hóa tế bào gốc từ bào bám dính đáy chai nuôi Sau mô mỡ tuần nuôi cấy, tế bào tăng Biệt hóa tế bào gốc mơ mỡ thành nguyên trưởng phát triển mạnh, tạo thành bào xương cụm (CFU) chai nuôi Sau 14 ngày nuôi 462 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Sau 14 ngày cảm ứng biệt hóa tế bào môi trường tạo xương, tế bào bắt đầu thay hình thái từ hình dạng thon dài giống với nguyên bào sợi, tế bào bắt đầu xuất dạng hình thái đa diện chế tiết chất xương Trong chai nuôi xuất Nghiên cứu Y học nốt xương dạng kết tựu chất xương đặc trưng in vitro Sau 14 ngày nuôi cấy, tế bào biểu protein chất xương Osteocalcin biểu enzyme đặc trưng AP E A B D C Biệt hóa tế bào gốc mơ mỡ thành tế bào mỡ Sau 14 ngày cảm ứng biệt hóa tế bào môi trường tạo tế bào mỡ, tế bào bắt đầu thay hình thái từ hình dạng thon dài giống với nguyên bào sợi, tế bào bắt đầu xuất dạng hình tròn, bên bào tương bắt đầu xuất hạt lipid nhỏ Sau đó, bên bào tương tế bào hạt lipid tiếp tục kết tựu vào để tạo thành Hình 2: Biệt hóa tế bào gốc từ mô mỡ thành nguyên bào xương (A) mẫu tế bào chưa biệt hóa (B) nhuộm VK (C) nhuộm AP (D) Nhuộm AR Tất nhuộm dương tính với thuốc nhuộm (vật kính X10) (E) Thực phản ứng RT-PCR với gien Osteocalcin (khung màu trắng) biểu hai mẫu nghiên cứu (OST1; OST2) so sánh với mẫu chứng (MSC) hạt lipid lớn chiếm gần hết bào tương tế bào, nhân tế bào bị đẩy phía ngoại vi Tiến hành nhuộm Oil Red O, tế bào dương tính xuất với bên chứa nhiều hạt lipid màu đỏ nhuộm Nile Red cho thấy hạt lipid hình thành bên bào tương tế bào nhiều so sánh với tế bào đối chứng khơng cảm ứng biệt hóa tạo tế bào mỡ (hình 3) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 463 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học A B D E Dựa vào khả biểu marker bề mặt Tế bào sau lần cấy chuyền thứ hai, thu nhận enzyme Trypsin-EDTA (0.25% - 0.02%) Sau đó, tế bào thu nhận cách quay ly tâm tốc độ 3000 vòng/phút phút Tế bào rửa lần với dung dịch PBS để tinh để tách tế bào thành tế bào đơn nhằm phục vụ cho đánh giá tế bào kỹ thuật Flow Cytometry (đếm tế bào dòng chảy) Kết cho thấy, quần thể tế bào khảo sát biểu số marker gồm CD105, CD73, CD90, C Hình 3: Biệt hóa tế bào gốc mơ mỡ thành tế bào mỡ (A) Tế bào đối chứng (B) Sau ngày ni mơi trường biệt hóa, tế bào thay đổi hình dạng bào tương bắt đầu tích trữ lipid (C) Sau 14 ngày, nhiều tế bào chuyển dạng thành tế bào mỡ giọt lipid kết tựu vào nhiều (D) Tế bào nhuộm Oil Red, bào tương giọt lipid nhuộm màu đỏ thuốc nhuộm (E) Các giọt lipid xuất đầy bào tương có xu hướng kết tựu vào bào thực phản ứng lặp lại lần với kết cho bảng Sự biểu marker thực hình Bảng 1: Kết khảo sát biểu marker từ quần thể tế bào gốc mô mỡ STT Loại CD Lần Lần Lần 3 CD73 CD90 CD105 CD44 HLA-DR CD45 97.70 99.46 99.36 99.46 0.31 0.26 97.33 97.44 99.64 99.66 99.31 99.24 99.46 99.6 0.31 0.23 0.25 0.22 Giá trị Độ lệch trung bình chuẩn (%) (%) 97.49 0.19 99.59 0.11 99.30 0.06 99.51 0.08 0.28 0.05 0.24 0.02 CD45, CD34, CD14 HLA-DR Trong đó, tế 464 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học Hình 4: Kết nhuộm Nile Red để xác định tế bào mỡ sau biệt hóa (A) Mẫu tế bào đối chứng (B) Mẫu MSC sau cảm ứng biệt hóa thành tế bào mỡ, kết cho thấy bên bào tương tế bào xuất nhiều giọt lipid bắt màu đỏ cam, giọt lipid diện hầu hết bào tương tế bào, nhân tế bào bị đẩy lệch phía tích tựu giọt lipid Hình 5: Kết phân tích marker cho quần thể tế bào gốc từ mơ mỡ Kết phân tích cho thấy, quần thể tế bào âm tính hồn tồn với marker CD45 HLA-DR (biểu dương tính khơng q 2%) Tế bào dương tính hồn tồn với marker CD44, CD73, CD90 CD105 (biểu dương tính 95%) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 465 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 KẾT LUẬN Với quần thể tế bào gốc thu nhận từ mô mỡ phân lập nuôi cấy sau lần cấy chuyền thứ hai Chúng đánh giá tiêu để xác định cho MSC, kết cho thấy tế bào nuôi cấy tế bào bám dính chai ni, có hình dạng thon dài đặc trưng cho tế bào gốc trung mô Thứ hai, quần thể tế bào có khả biệt hóa thành dòng tế bào khác thuộc nguồn gốc trung mơ nguyên bào xương tế bào mỡ với phương pháp xác định đáng tin cậy chứng tỏ tế bào có khả biệt hóa thành dòng tế bào khác Thứ ba, khảo sát biểu marker dùng để xác định cho quần thể MSC từ mô mỡ, kết cho thấy tế bào dương tính cao (trên 95%) với marker CD73, CD90 CD105 Đây ba marker phổ biến chấp thuận để xác định cho MSC Các tế bào biểu thấp 2% marker CD45 HLA-DR Như vậy, với kết khảo sát khả bám dính, tiềm biệt hóa biểu marker bề mặt cho thấy quần thể tế bào ni cấy MSC Đây nguồn tế bào gốc quan trọng tiềm cho ứng dụng lâm sàng Tuy nhiên, để ứng dụng tế bào cách an toàn hiệu quả, cần thực thêm thí nghiệm khác để khảo sát an toàn mặt di truyền thực nghiên cứu nuôi cấy in vitro tiềm biệt hóa tế bào theo thời gian ni cấy số 466 lần nhân đơi hệ, để từ sử dụng tế bào điều trị góp phần nâng cao chất lượng điều trị cho người bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 Coleman SR (2006) Structural fat grafting: more than a permanent filler Plast Reconstr Surg 118:108S-120S Dominici M et al (2006) Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells The international Society for Cellular Therapy position statement Cytotherapy 8:315-317 Katz AJ, Mesenchymal cell culture: Adipose tissue In: Atala A, Lanza R (2002) Method of Tissue Engineering Academic Press San Diego Locke M, Windsor J, Dunbar PR (2009), Human adiposederived stem cell: isolation, characterization and application in surgrey, ANZ Surgrey Journal, 79:235-244 Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC et al (1999) Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cell Science; 284:143-147 Sen A et al (2001) Adipogenic potential of human adipose derived stromal cells from multiple donors is heterogenous J Cell biochem 81:312-319 Strem BM et al (2005) Multipotential differentiation of adipose tissue-derived stem cells The Keio journal of medicine, 54:132-141 Tran CT, Gargiulo C, Huynh DT, Huynh MT, Filgueira L and Strong DM (2011) Culture and differentiation of osteoblasts on coral scafford from human bone marrow mesenchymal stem cells Cell and Tissue Banking 12:247-261 Tran CT, Huynh DT, Nguyen PT, C Gargiulo C and Phan KN, et al (2010) In vitro culture and differentiation of osteoblasts from human umbilical cord blood Cell and Tissue Banking 11:269-280 Wolter TP, Von Heimburg D, Stoffels I et al (2005) Cryopreservation of mature human adipocytes: In vitro measurement of viability Ann Plast Surg 55:408-413 Zuk P.A, Zhu M, Ashjian P et al (2002), Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells, Molecular Biological Cell, 13:4279-4295 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Chợ Rẫy Năm 2012 ... thực nghiên cứu quy trình phân tế bào thu c dòng trung mô bao gồm lập, nuôi c y xác định MSC từ mô mỡ nguyên bào xương, tế bào mỡ tế bào sụn 460 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thu t Bệnh Viện Chợ R y Năm... tượng nghiên cứu Mô mỡ người thu nhận từ việc chọc hút mỡ mô mỡ thừa thu nhận từ quy trình phẫu thu t Mẫu mô thu nhận từ người hiến khỏe mạnh, đồng ý hiến mô để tiến hành nghiên cứu có xét nghiệm... nhóm tế có quy trình thu nhận phù hợp để phát bào gốc có ưu nhược điểm riêng Tế triển in vitro trước có ứng dụng( 4) bào gốc phôi thu nhận từ khối tế bào bên Trong số nguồn mô dùng để thu nhận