Kết quả bước đầu nghiên cứu ứng dụng tế bào gốc trung mô trong điều trị bệnh nhân mạn do lupus ban đỏ

Bài viết Kết quả bước đầu nghiên cứu ứng dụng tế bào gốc trung mô trong điều trị bệnh nhân mạn do lupus ban đỏ báo cáo một trường hợp ghép ATMSCs tự thân để điều trị bệnh viêm thận lupus, được thực hiện tại trung tâm Huyết học – Truyền máu - bệnh viện Trung Ương Huế.

KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU KẾT QUẢ BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TRONG ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN MẠN DO LUPUS BAN ĐỎ Nguyễn Duy Thăng1, Phan Thị Diệu Ngân2, Tơn Thất Trí1, Phan Thị Thuỳ Hoa1, Đồng Sĩ Sằng1, Chế Thị Cẩm Hà2 TÓM TẮT Viêm thận lupus (LN) biến chứng nghiêm trọng lupus ban đỏ hệ thống (Systemic lupus erythematosus – SLE) Các chiến lược điều trị chưa đạt yêu cầu khả đáp ứng hoàn toàn thận, ngăn ngừa tái phát, suy thận tiến triển thành bệnh thận giai đoạn cuối Liệu pháp tế bào trở thành chiến lược điều trị hấp dẫn nhiều loại bệnh khác thu kết định điều trị bệnh SLE Tế bào gốc trung mô tủy xương bệnh nhân SLE có biểu giảm khả di chuyển, biệt hóa, điều hịa miễn dịch kiểu hình lão hố sớm Trong đó, tế bào gốc từ mỡ (AT-MSCs) nguồn tế bào gốc đa năng, sử dụng phổ biến ứng dụng lâm sàng năm gần Mục đích nghiên cứu đánh giá hiệu MSCs điều trị SLE phân tích tổng hợp Trong nghiên cứu này, báo cáo nam bệnh nhân 35 tuổi, chẩn đoán viêm thận lupus truyền AT-MSCs để cải thiện LN Trong thử nghiệm này, kết sau ghép AT- MSCs bệnh nhân có protein niệu thấp thời điểm tháng, tháng, Bệnh viện TW Huế Trường Đại học Khoa học, Đại học Huế Chịu trách nhiệm chính: Chế Thị Cẩm Hà Email: chethicamha@husc.edu.vn SĐT: 0362.596.712 Ngày nhận bài: 01/8/2022 Ngày phản biện khoa học: 01/8/2022 Ngày duyệt bài: 29/9/2022 26 tháng, tháng 18 tháng Kết luận, AT- MSCs tác nhân điều trị đầy hứa hẹn cho bệnh viêm thận lupus Từ khóa: Tế bào gốc trung mô, bào gốc trung mô từ mô mỡ, suy thận mãn tính, lupus ban đỏ, ghép tế bào gốc tự thân SUMMARY APPLICATION OF MESENCHYMAL STEM CELLS IN TREATMENT FOR LUPUS NEPHRITIS CAUSED BY SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS Lupus nephritis (LN) is a severe manifestation of systemic lupus erythematosus Current treatment strategies remain unsatisfactory in terms of complete renal response, prevention of relapses, CKD, and progression to end-stage kidney disease Cell therapy has become an attractive therapeutic strategy for various types of diseases, and it has achieved certain curative effects in induction therapy in patients with SLE Bone marrow MSCs from SLE patients exhibit impaired capabilities of migration, differentiation, and immune regulation and display senescent phenotype Meanwhile, MSCs derived from adipose tissue (AT-MSCs), known as multipotent stem cells, are most commonly used in the clinical applications in recent years The purpose of this study was to evaluate the efficacy of MSCs in the treatment of SLE by meta-analysis In this research, we reported a 35year man diagnosed with lupus nephritis who infused ATMSCs to improve of LN In this case, the results TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 indicated that AT-MSC infusions had lower proteinuria at month, months, months, months, and 18 months In conclusion, ATMSCs might be a promising therapeutic agent for patients lupus nephritis Keywords: Mesenchymal stem cells, MSCs derived from adipose tissue, lupus nephritis, systemic lupus erythematosus, autologous stem cell transplant I ĐẶT VẤN ĐỀ Lupus ban đỏ hệ thống (Systemic lupus erythematosus - SLE) bệnh tự miễn, liên quan đến nhiều loạng 2,76-8,07 mmol/L), Creatinine huyết (Cr) 183,3 ± 5,4 umol/L (bình thường, 62-106 umol/L), mức lọc cầu thận ước tính (eGFR) 36,7 ± 1,2 (bình thường > 90 mL/phút/1,73m2), số protein niệu 0,49 ± 0,12 g/L (bình thường - 0,15 g/L) 2.2 Phương pháp nghiên cứu Lấy ml máu tĩnh mạch khơng chống đơng, ly tâm 3000vịng/phút thu nhận huyết Định lượng creatinin huyết theo phương pháp Jaffe Định lượng protein niệu Định lượng ure huyết phương pháp enzyme với salicylate - Ghép tế bào gốc mô mỡ tự thân Liều ghép: 2,6 x 106 tb/kg Mô mỡ da vùng rốn, phân lập enzyme collagenase, nuôi tăng sinh AT-MSCs ghép sau 10 ngày Đánh giá hiệu an toàn phương pháp, số huyết học, sinh hóa máu, xét nghiệm ANA anti dsDNA Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả, theo dõi dọc Báo cáo trường hợp, thời gian nghiên cứu từ tháng 01/2019 đến 05/2021 Thời gian theo dõi bệnh nhân sau ghép: 18 tháng 2.3 Phân lập, nuôi tăng sinh đánh giá chất lượng ADSC Mô mỡ da, thu nhận 0,12g rốn AT-MSC phân lập enzyme collagenase Nuôi cấy chuyền chai nuôi 175 cm2 (Corning) môi trường StemMACS 28 (Miltenyi – Đức), 37°C, 5% CO2 Khi AT-MSC hợp dòng khoảng 80% bề mặt chai nuôi, tiến hành đánh giá chất lượng tế bào xác định liều ghép/trọng lượng bệnh nhân AT-MSC đánh giá dựa tiêu chí tối thiểu xác định Hiệp hội Trị liệu Tế bào Quốc tế (ISCT) [4] Tế bào sau tăng sinh kiểm tra độ vô trùng kiểm tra nội độc tố, mycoplasma, nhiễm vi khuẩn, nấm virus trước ghép Truyền AT-MSC vào tĩnh mạch, số lượng: 2,6x106 tế bào/kg Tính an tồn khả dung nạp theo dõi thử nghiệm nội độc tố, phản ứng bệnh nhân sau trình ghép 2.4 Xử lý số liệu Số liệu thu thập xử lý phần mềm SPSS 18.0 ANOVA test để so sánh trung bình quan sát biến có phân bố chuẩn III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đánh giá chất lượng tế bào sau tăng sinh Tế bào gốc trung mô (MSC) tế bào tiền thân đa Khi AT-MSC hợp dịng, tăng sinh, tiến hành đánh giá tính đồng tế bào xác định liều ghép/trọng lượng bệnh nhân Chúng đánh giá chất lượng tế bào AT-MSC dựa theo tiêu chí Hiệp hội Trị liệu Tế bào Quốc tế (ISCT) (Hình 1) [4] Tế bào AT-MSC nghiên cứu chúng tơi biệt hóa thành cơng thành tế bào nguyên bào xương, tế bào sụn tế bào mỡ sau tuần điều kiện biệt hóa in vitro Hình ảnh tế bào AT-MSC cảm ứng biệt hóa thành tế bào xương (1A), sụn (1B), mỡ (1C) (1D) [8] Đồng thời, tế bào AT-MSC biểu dương tính với phân tử bề mặt CD90, CD73 CD105 âm tính với CD45, CD34 HLA-DR Kết ni tạo TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 cụm CFU- F AT-MSC thứ cấp (1E) Độ đồng sau nuôi cấy thứ cấp P1 > 99% (1F) Các kết yếu tố quan trọng để đánh giá hiệu điều trị, MSC tiết exosomes Các exosomes từ MSC điều chỉnh phản ứng viêm, điều hòa miễn dịch, hình thành mạch, đơng máu, tái tạo chất ngoại bào chu trình chết tế bào Hơn nữa, exosomes làm giảm nồng độ creatinin (Cr) urê máu (BUN), hoại tử ống thận gần [9,10,11] Kết luận: với kết chứng minh AT-MSCs quần thể tế bào gốc trung mô, chúng có khả tái tạo điều hịa miễn dịch Hình Đánh giá chất lượng khối tế bào 3.2 Chỉ số huyết học xét nghiệm sinh hóa máu Hai tuần sau ghép, xét nghiệm sinh hóa máu thực cho thấy urê máu (BUN) 14 mmol/L, creatinine 180 umol/L eGFR 37,43 mL/phút/1,73m2 có giảm Xét nghiệm thường quy lupus thơng qua kết kháng thể kháng nhân (ANA) âm tính (ODserum / ODcontrol ≤ 1) kháng thể kháng chuỗi kép (anti dsDNA) Bệnh nhân giảm đau khớp, hết sốt lại Số lượng hồng cầu cải thiện với 4,51 triệu tế bào/L giảm sử dụng erythropoietin Bảng Kết theo dõi số trung bình bạch cầu hồng cầu trước sau ghép 18 tháng tế bào AT-MSC Chỉ số Trước ghép Sau ghép Trị số bình thường 6,5 ± 0,98 7,7 ± 1,1 4,0 - 1,0 Bạch cầu 10 tb/ml Hồng cầu 10 tb/ml 3,8 ± 0,25 4,5 ± 0,33 - 5,5 Chỉ số Trước ghép Sau ghép Trị số bình thường 6,5 ± 0,98 7,7 ± 1,1 4,0 - 10 Bạch cầu 10 tb/ml Hồng cầu 10 tb/ml 4,6 ± 0,33 4,6 ± 0,33 - 5,5 29 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU Năm tháng sau ghép, xét nghiệm sinh hóa máu cho thấy liệu thấp đáng kể Mặc dù BU giảm nhẹ 13 mmol/L, creatinine (150 umol/L) eGFR (46,19 mL/phút/1,73m2) cải thiện rõ rệt, nguyên nhân dẫn đến tình trạng suy thận tiến triển nhanh chóng Xét nghiệm ANA cho kết âm tính với bệnh lupus (bảng 2), liệu huyết học cho thấy cải thiện hồng cầu tế bào lympho mức bình thường (bảng 1) Bệnh nhân giảm liều thuốc điều trị lupus huyết học kể từ tháng sau ghép AT-MSCs Mặc dù liệu nằm phạm vi tiêu chuẩn sinh lý bình thường, bệnh nhân cho thấy cải thiện đáng kể chức thận giảm đau, khớp cử động mềm mại (Bảng 2) Bảng Thay đổi số ANA trước sau truyền AT-MSCs tự thân ca lâm sàng Chỉ số 5/9/2019 11/20/2019 12/25/2019 5/27/2020 Sau ghép ANA (+) OD: 2,2 (+) OD: 1,3 (+) OD: 1,2 (+) OD: 1,2 (-) Anti-dsDNA (-) (-) (-) (-) (-) Các nghiên cứu giới tập thể chấn thương thận cấp, bệnh cầu thận đái trung vào điều trị suy thận mạn giai tháo đường, bệnh suy thận lupus[14] Sandra đoạn sớm tế bào gốc Trong đó, MSC Villanueva et al (2019) nghiên cứu thử lựa chọn khả thi khả tăng sinh nghiệm ban đầu cung cấp chứng cho biệt hóa đa thành nhiều loại tế bào thấy ghép AT-MSCs hiệu điều trị Các nghiên cứu thực giai bệnh suy thận, làm giảm tiết protein đoạn tiền lâm sàng lâm sàng pha bệnh nhân suy thận mạn Sự giảm protein cho thấy hiệu MSC không niệu sau ghép AT-MSC, xảy số điều trị bệnh thận mạn viêm cầu bệnh nhân nghiên cứu [12] thận nguyên phát, mà điều trị Hình Chỉ số Protein niệu, Creanine Ure trước (1/2019) sau ghép AT-MSC (6/2021) 30 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 Dongwei Liu et al (2020) đánh giá tổng quan đặc điểm loại tế bào gốc khác nhau, chứng có từ nghiên cứu tiền lâm sàng/ lâm sàng liệu pháp dựa tế bào bệnh thận Tế bào gốc trung mô (MSC) ứng cử viên hứa hẹn cho liệu pháp tế bào gốc bệnh thận liên quan đến tự miễn dịch [6] Do MSC tủy xương bệnh nhân SLE có biểu suy giảm khả homing, di chuyển, biệt hóa, điều hịa miễn dịch dấu hiệu lão hố kiểu hình Nên ghép dị thân MSCs allogeneic giúp ngăn chặn trình tự miễn dịch phục hồi chức thận mơ hình chuột bệnh nhân viêm thận lupus cách tạo tế bào miễn dịch điều hòa ngăn chặn phản ứng tế bào hỗ trợ Th1, Th17, T tế bào B Ngồi ra, MSC cư trú thận tích hợp vào tế bào ống thận biệt hóa thành tế bào trung bì [13] Theo số liệu Viện sức khỏe quốc gia Mỹ (2015), 30 thử nghiệm liệu pháp tế bào MSC bệnh lý thận, liều tế bào MSC ghép đường tĩnh mạch thường sử dụng - x 106/kg, thời gian theo dõi - 36 tháng [14].Từ cho thấy liều ghép sử dụng nghiên cứu phù hợp, đem lại hiệu điều trị suy thận lupus Theo dõi 18 tháng sau ghép, bệnh nhân hồn tồn khơng có tác dụng phụ, đặc biệt cải thiện vận động thể, thiếu máu giảm dùng thuốc IV KẾT LUẬN Thử nghiệm lâm sàng nhấn mạnh tính an tồn tính khả thi phương pháp điều trị tế bào gốc trung mô bệnh nhân suy thận - bệnh tự miễn TÀI LIỆU THAM KHẢO Liu L N., Wang P., Guan S Y., et al Comparison of plasma/serum levels of procalcitonin between infection and febrile disease flare in patients with systemic lupus erythematosus: a meta-analysis Rheumatology International 2017;37(12):1991–1998 doi: 10.1007/s00296-017-3827-x Sattwika P D., Mustafa R., Paramaiswari A., Herningtyas E H Stem cells for lupus nephritis: a concise review of current knowledge Lupus 2018;27(12):1881–1897 doi: 10.1177/0961203318793206 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] A Wardowska, M Komorniczak, B Bułło-Piontecka, M A Dȩbska-Ślizień, and M Pikuła (2019) Transcriptomic and Epigenetic Alterations in Dendritic Cells Correspond With Chronic Kidney Disease in Lupus Nephritis, Front Immunol, vol 10(pp 2026 A D Salama and B Caplin (2020) Lupus Nephritis and Chronic Kidney Disease, J Rheumatol, vol 47(9), pp 1303-1304 Tsai, C Y., Shen, C Y., Liao, H T., Li, K J., Lee, H T., Lu, C S., & Yu, C L (2019) Molecular and cellular bases of immunosenescence, inflammation, and cardiovascular complications mimicking “inflammaging” in patients with systemic lupus erythematosus International Journal of Molecular Sciences, 20(16), 3878 Liu, D., Cheng, F., Pan, S., & Liu, Z (2020) Stem cells: a potential treatment 31 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU 10 32 option for kidney diseases Stem cell research & therapy, 11(1), 1-20 Trương Việt Dũng (2014), Thực hành lâm sàng tốt đạo đức nghiên cứu y sinh học có đối tượng người, Phương pháp nghiên cứu khoa học, Nhà xuất Y học, tr 86-103 Li J., Chen J., Li X., Qian Y Vaccination efficacy with marrow mesenchymal stem cell against cancer was enhanced under simulated microgravity Biochemical and Biophysical Research Communications 2017;485(3):606–613 doi: 10.1016/j.bbrc.2017.01.136 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] Joo H., Suh J H., Lee H J., Bang E S., Lee J M Current knowledge and future perspectives on mesenchymal stem cellderived exosomes as a new therapeutic agent International Journal of Molecular Sciences 2020;21(3):p 727 doi: 10.3390/ijms21030727 [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] Tao H., Chen X., Cao H., et al Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles for corneal wound repair Stem Cells International 2019;2019:9 doi: 10.1155/2019/5738510.5738510 [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11 Tsuji K., Kitamura S., Wada J Immunomodulatory and regenerative effects of mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles in renal diseases International Journal of Molecular Sciences 2020;21(3):p 756 doi: 10.3390/ijms21030756 [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12 Sandra Villanueva, Fernando González, Eduardo Lorca, Adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells for treating chronic kidney disease: A pilot study assessing safety and clinical feasibility, Kidney Res Clin Pract 2019 Jun 30;38(2):176-185 doi: 10.23876/j.krcp.18.0139 13 Liu, Q M., Zhao, H Y., Zhong, X K., & Jiang, J G (2012) Eclipta prostrata L phytochemicals: isolation, structure elucidation, and their antitumor activity Food and Chemical Toxicology, 50(11), 4016-4022 14 Murphy, G., & Isenberg, D A (2019) New therapies for systemic lupus erythematosus— past imperfect, future tense Nature Reviews Rheumatology, 15(7), 403-412  ... chuẩn III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đánh giá chất lượng tế bào sau tăng sinh Tế bào gốc trung mô (MSC) tế bào tiền thân đa Khi AT-MSC hợp dòng, tăng sinh, tiến hành đánh giá tính đồng tế bào xác định... 2022 Dongwei Liu et al (2020) đánh giá tổng quan đặc điểm loại tế bào gốc khác nhau, chứng có từ nghiên cứu tiền lâm sàng/ lâm sàng liệu pháp dựa tế bào bệnh thận Tế bào gốc trung mơ (MSC) ứng. .. chuột bệnh nhân viêm thận lupus cách tạo tế bào miễn dịch điều hòa ngăn chặn phản ứng tế bào hỗ trợ Th1, Th17, T tế bào B Ngoài ra, MSC cư trú thận tích hợp vào tế bào ống thận biệt hóa thành tế bào