Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá sinh khả dụng của viên nén acyclovir (ACV) kết dính sinh học (KDSH)có so sánh với viên nén zovirax trên chó thực nghiệm.
Tạp chí y - dợc học quân số chuyên đề dƯợC-2016 NH GI SINH KH DNG CA VIấN NẫN AYCLOVIR KẾT DÍNH SINH HỌC TRÊN CHĨ THỰC NGHIỆM Lê Văn Thanh*; Vũ Thị Thu Giang**; Trần Cát Đông*; Nguyễn Thị Trang** TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá sinh khả dụng viên nén acyclovir (ACV) kết dính sinh học (KDSH)có so sánh với viên nén zovirax chó thực nghiệm Phương pháp: sử dụng phương pháp chéo đôi đơn liều giai đoạn; phân tích ACV huyết tương chó phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Kết quả: Tmax AUC0-∞ viên ACV KDSH tương đương, Cmax MRT khơng tương đương với viên đối chiếu Kết luận: xác định thông số dược động học Cmax, Tmax, λz, MRT viên nén ACV KDSH có so sánh viên nén zovirax * Từ khóa: Acyclovir; Sinh khả dụng; Kết dính sinh học Bioavailability of Acyclovir Mucoadhesive Tablets on Experimental Dogs Summary Objectives: To compare the bioavailability of ACV mucoadhesive tablets with zovirax tablets on experimental dogs Methods: Using a single-dose, cross-over design, 2-stage method, HPLC method was used to identify and assay acyclovir concentrations in dog plasma Results: The Tmax and AUC0-∞ of acyclovir mucoadhesive tablets were equivalent to zovirax counterparts, whereas the values of Cmax and MRT were inequivalent Conclusion: Were recognised pharmacokinetic parameters Cmax, Tmax, λz, MRT of acyclovir mucoadhesive gastrointestinal tablets and zovirax tablets * Key words: Acyclovir; Bioavailability; Mucoadhesive ĐẶT VẤN ĐỀ Acyclovir dẫn chất tổng hợp axít nucleoxit-guanosin, có tác dụng mạnh chọn lọc virut gây bệnh người, bao gồm virut Herpes simplex týp 2, virut Varicella-zoster, virut Epstien-barr Cytomegalo Tuy nhiên, ACV có thời gian bán thải ngắn, hấp thu chậm khơng hồn tồn [1, 2] Để khắc phục nhược điểm trên, giới Trường Đại học Dược Hà Nội có nhiều nghiên cứu hệ KDSH dày chứa ACV vi cầu, viên nén nhằm cải thiện hấp thu thuốc đường tiêu hóa, tăng hiệu điều trị Chúng tiến hành nghiên cứu sinh khả dụng viên nén ACV KDSH chó thực nghiệm * Học viện Quân y ** Trường Đại học Dược Hà Nội Người phản hồi (Corresponding): Lê Văn Thanh (levanthanh090963@yahoo.com) Ngày nhận bài: 20/07/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 30/08/2016 Ngày báo đăng: 12/09/2016 94 T¹p chí y - dợc học quân số chuyên đề d−ỵC-2016 NGUN VẬT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu, thiết bị đối tượng nghiên cứu * Nguyên liệu hóa chất: Hóa chất ACV chuẩn Methanol Tiêu chuẩn Nơi sản xuất Chuẩn Viện Kiểm nghiệm quốc gia Thuốc TW HPLC Merck, Đức Axít phosphoric 85% Nhà sản xuất Merck, Đức Axít percloric Nhà sản xuất Merck, Đức Natri 1-octansulfonic Nhà sản xuất Baker, Anh Axít hydrocloric TKHH Trung Quốc Natri hydroxyd BP Merck, Đức HPLC Merck, Đức Axít acetic băng * Thuốc thử-thuốc đối chiếu: - Thuốc thử: viên nén ACV 200 mg KDSH đạt tiêu chuẩn sở - Thuốc đối chiếu: viên nén zovirax 200 mg (Hãng GlaxoSmithKline, số lô 8953, hạn sử dụng 01 - 2017) * Thiết bị: - Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao SHIMADZU (Nhật) - Máy ly tâm lạnh Sartorius Sigma 2-16K (Đức) - Máy lắc xoáy Volp (Italia) - Tủ lạnh sâu (-400C) Sanyo MDF-236 (Nhật) - Micropipet dụng cụ thủy tinh dùng cho phân tích * Đối tượng nghiên cứu: Chó ta khoẻ mạnh, giống đực, cân nặng 12 - 14 kg, ni dưỡng điều kiện thí nghiệm với chế độ ăn uống đầy đủ kiểm soát Chó để nhịn đói 10 qua đêm trước tiến hành thí nghiệm Phương pháp nghiên cứu Chia ngẫu nhiên chó làm nhóm (mỗi nhóm con), thử theo phương pháp chéo đôi, đơn liều Đợt đầu tiên, cho uống viên nén ACV KDSH đường tiêu hóa, lại uống viên nén zovirax với liều viên/con Đợt sau đổi ngược lại Hai đợt tiến hành cách ngày Thời điểm lấy mẫu: 0,5-1-1,5-2-2,5-3-3,5-4-4,55-5,5-6-8-10-12 24 sau uống thuốc thử; 0,5-1-1,5-2-2,5-3-3,5-4,5-6-810-12 24 sau uống thuốc chứng Mỗi lần lấy khoảng - ml máu * Xử lý mẫu: Mẫu huyết tương để rã đông nhiệt độ phòng Lấy ml huyết tương, thêm 250 µl dung dịch axít percloric 20%, lắc xốy 15 giây, ly tâm 10.000 vòng 15 phút Sau đó, hút lớp dung dịch phía lọc qua màng lọc 0,45 µm, tiêm sắc ký Các mẫu huyết tương trắng có pha ACV chuẩn huyết tương chó sau uống thuốc chiết theo quy trình tiến hành phân tích * Định lượng nồng độ ACV huyết tương chó: Mẫu huyết tương có chứa ACV sau chiết xuất định lượng phương pháp HPLC, tiến hành theo điều kiện khảo sát sau đây: - Cột sắc ký: C18; 250 x 4,6 mm; µm Nhiệt độ cột 400C - Pha động: methanol:dung dịch đệm pH 3,0 (tỷ lệ 8:92) (dung dịch đệm pH 3,0 pha sau: 0,43 g natri octansulfonic 1.000 ml nước, chỉnh pH 3,0 axít phosphoric) 95 Tạp chí y - dợc học quân số chuyên đề dƯợC-2016 - Tc dũng: 1,5 ml/phỳt - Detector: PDA, bước sóng 252 nm - Thể tích tiêm: 100 µl - Nhiệt độ autosampler: 40C Trước tiến hành đánh giá sinh khả dụng, thẩm định lại phương pháp theo hướng dẫn US-FDA [3] định lượng thuốc dịch sinh học * Xác định thông số dược động học: ∞ Với [ AUC ] , Cmax, MRT: sử dụng ‘‘khoảng tin cậy 90%’’ gọi phương pháp two-one-sided t-test Các thông số ∞ cần so sánh ([ AUC ] , Cmax, MRT) chế phẩm thử chế phẩm đối chiếu thu từ thiết kế chéo đôi, đơn liều chuyển qua dạng logarit tự nhiên đưa vào phân tích phương sai Khoảng tin cậy 90%CI tính theo cơng thức: CI = µT - µR ± t (0,1; n).(S.2/N)1/2 Với: - µT: giá trị trung bình thu từ mẫu thử chuyển sang logarit - µR: giá trị trung bình thu từ mẫu đối chiếu chuyển sang logarit - t (0,1; n): kết tra bảng student t-test với bậc tự n, mức ý nghĩa 0,1 - S: bậc hai bình phương sai số trung bình thu từ kết phân tích phương sai thiết kế chéo đôi đơn liều - N: tổng số động vật thí nghiệm - Tmax: so sánh theo phương pháp thống kê phi tham số (Wincoxon Signed Rank test) Hai chế phẩm coi tương đương sinh học CI nằm khoảng (0,8 1,25) Tmax khác khơng có ý nghĩa thống kê Xác định thơng số dược động học theo phương pháp không dựa vào mơ hình ngăn phần mềm WinNonlin 6.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Xác định nồng độ ACV huyết tương chó Tiến hành phân tích mẫu huyết tương chó nhóm (thuốc thử thuốc đối chiếu) theo phương pháp tủa protein axít percloric định lượng ACV phương pháp HPLC Xác định nồng độ ACV có mẫu dựa vào đường chuẩn tiến hành đồng thời ngày Bảng 1: Nồng độ ACV huyết tương chó sau uống viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax (n = 6, X ± SD) Thời gian (giờ) Nồng độ ACV huyết tương chó sau uống viên ACV KDSH (µg/ml) Thời gian (giờ) Nồng độ ACV huyết tương chó sau uống viên zovirax (µg/ml) 0 0 0,5 0,375 ± 0,83 0,5 0,651 ± 1,31 1,827 ± 2,08 2,450 ± 2,68 1,5 2,594 ± 2,57 1,5 4,242 ± 3,00 3,395 ± 3,28 6,618 ± 3,42 2,5 3,511 ± 2,70 2,5 7,243 ± 3,44 96 Tạp chí y - dợc học quân số chuyên đề dợC-2016 3,760 2,25 7,701 3,16 3,5 4,287 ± 1,87 3,5 7,957 ± 3,30 4,608 ± 1,75 - - 4,5 5,442 ± 0,62 4,5 7,319 ± 2,46 5,383 ± 0,59 - - 5,5 5,286 ± 1,16 - - 5,377 ± 0,89 5,097 ± 1,79 3,619 ± 1,33 3,067 ± 1,25 10 2,825 ± 1,36 10 1,522 ± 0,64 12 1,795 ± 0,89 12 0,801 ± 0,35 24 0,234 ± 0,12 24 0,081 ± 0,13 Nồng độ ACV huyết tương (µg/ml Viên nén KDSH Viên nén zovirax Hình 1: Đường cong nồng độ ACV - thời gian huyết tương chó sau uống viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax (n = 6) Phân tích dược động học so sánh sinh khả dụng viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén zovirax 200 mg * Xác định thông số dược động học: Từ kết định lượng nồng độ ACV huyết tương chó (bảng 1) phương pháp xác định thông số dược động học, xác định số thông số dược động học 97 Tạp chí y - dợc học quân số chuyên đề dƯợC-2016 Bng 2: Cỏc thụng s dc ng học chó sau uống viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax (n = 6) Thông số dược động học Viên ACV KDSH ( X ± SD) Viên zovirax ( X ± SD) Tmax (giờ) 4,25 ± 1,44 3,25 ± 1,17 Cmax (µg/ml) 6,501 ± 1,40 9,278 ± 2,31 λz (1/giờ) 0,2029 ± 0,07 2,1749 ± 0,42 AUC0-∞ (giờ.µg/ml) 54,5166 ± 11,28 52,3128 ± 13,22 AUC0-24 (giờ.µg/ml) 52,2472 ± 12,10 50,4573 ± 12,79 8,1323 ± 1,08 5,5641 ± 1,08 MRT (giờ) * Phân tích thống kê so sánh sinh khả dụng viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén zovirax: Từ kết xác định thông số dược động học thuốc thử thuốc đối chiếu, so sánh sinh khả dụng viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén zovirax Bảng 3: Phân tích phương sai với biến phụ thuộc: Bậc tự Tổng bình phương Trung bình bình phương F p Trình tự 0,1254 0,1254 1,7945 0,2514 Chó 0,2796 0,0699 2,4612 0,2022 Thuốc 0,0089 0,0089 0,3126 0,6059 Giai đoạn 0,0837 0,0837 2,9473 0,1612 Sai số 0,1136 0,0284 Trình tự 0,0162 0,0162 0,3925 0,5650 Chó 0,1648 0,0412 0,7996 0,5832 Thuốc 0,3637 0,3637 7,0586 0,0566 Giai đoạn 0,1603 0,1603 3,1112 0,1525 Sai số 0,2061 0,0515 Trình tự 0,0109 0,0109 0,1928 0,6833 Chó 0,2269 0,0567 4,6212 0,0837 Thuốc 0,4600 0,4600 37,4688 0,0036 Giai đoạn 0,0036 0,0036 0,2948 0,6160 Sai số 0,0491 0,0123 Nguồn biến thiên LnCmax LnMRT 98 , lnCmax lnMRT T¹p chÝ y - dợc học quân số chuyên đề dợC-2016 Bng 4: Các thơng số dùng phân tích khoảng tin cậy 90% giá trị trung bình ln[AUC0-∞], ln[Cmax] ln[MRT] viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax Số liệu ln[AUC0-∞] ln[Cmax] ln[MRT] µT 3,99851 1,87196 2,09584 µR 3,95724 2,22764 1,71634 µT - µR 0,04127 -0,35568 0,37950 Độ tự 4 t (0,1; 4) 2,132 2,132 2,132 0,0284 0,0515 0,0123 Căn bậc trung bình bình phương sai số * Phân tích phương sai xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số ln[AUC0-∞] viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax: Từ kết xác định giá trị trung bình bình phương bậc tự sai số, xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số ln[AUC0-∞] thuốc thử ln[AUC0-∞] thuốc đối chiếu Từ đó, tính giới hạn giới hạn giá trị ln[AUC0-∞] ACV viên nén ACV KDSH là: - Khoảng tin cậy 90% ln[AUC0-∞] = 0,04127 ± 2,132 x 0,0284 x 0,04127 ± 0,03496 2/6 = - Giới hạn CI1 = 0,00631; giới hạn CI2 = 0,07623 - CI ln[AUC0-∞] khoảng (0,00631 - 0,07623) - Antilogarit CI: 1,006 - 1,080 hay 100,6 - 108,0% Như vậy, khoảng tin cậy tỷ lệ giá trị [AUC0-∞] viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax nằm giới hạn khoảng từ 80 - 125% Do đó, hai giá trị [AUC0-∞] tương đương Nghĩa là, mức độ hấp thu ACV vào máu từ viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax không khác * Phân tích phương sai xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số ln[Cmax] viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax: Từ kết xác định giá trị trung bình bình phương bậc tự sai số, xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số ln[Cmax] thuốc thử ln[Cmax] thuốc đối chiếu Từ đó, tính giới hạn giới hạn giá trị ln[Cmax] ACV viên nén ACV KDSH là: - Khoảng tin cậy 90% ln[Cmax] = -0,35568 ± 2,132 x 0,0515 x 2/6 = -0,35568 ± 0,06339 - Giới hạn CI1 = -0,41907; giới hạn CI2 = -0,29229 - CI ln[Cmax] khoảng (-0,41907; -0,29229) - Antilogarit CI: 0,65766 - 0,74655 hay 65,766 - 74,655% Như vậy, khoảng tin cậy tỷ lệ giá trị [Cmax] viên nén ACV 200 mg KDSH 99 Tạp chí y - dợc học quân số chuyên đề dƯợC-2016 v viờn nộn zovirax nằm khoảng giới hạn từ 80 - 125% Do đó, hai giá trị [Cmax] khác * Phân tích phương sai xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số ln[MRT] viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax: Từ kết xác định giá trị trung bình bình phương bậc tự sai số, xác định khoảng tin cậy 90% tỷ số ln[MRT] thuốc thử ln[MRT] thuốc đối chiếu Từ đó, tính giới hạn giới hạn giá trị ln[MRT] ACV viên nén ACV KDSH là: - Khoảng tin cậy 90% ln[MRT] = Bảng 5: Kết so sánh giá trị Tmax thuốc kiểm định phi tham số Wilcoxon Người tình nguyện Tmax (giờ) Chênh lệch Thứ tự (+) Viên ACV KDSH Viên zovirax (+) 2,5 0,5 3,5 1,5 5,5 4,5 5,5 4,5 4,5 1,5 Tổng (-) (-) 3 18 Với giả thuyết: 2/6 = 0,37950 ± 0,01514 - HO: Tmax viên nén ACV KDSH với viên nén zovirax - Giới hạn CI1 = 0,36436; giới hạn CI2 = 0,39464 - HA: Tmax viên nén ACV KDSH với viên nén zovirax không giống - CI ln[MRT] khoảng (0,36436; 0,39464) Kết cho thấy: T (+) = 21; T (-) = Ttt = Tmin = - Antilogarit CI: 1,430 - 1,484 hay 143,0 - 148,4% Tra bảng Wilcoxon T0,05 (6) = Ttt > T0,05 Như vậy, Tmax viên nén ACV KDSH với viên nén zovirax giống có ý nghĩa thống kê 0,37950 ± 2,132 x 0,0123 x Như vậy, khoảng tin cậy tỷ lệ giá trị [MRT] viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax nằm khoảng giới hạn từ 80 - 125% Do đó, hai giá trị [MRT] khác * Kết so sánh Tmax viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén zovirax: So sánh khác thời gian để đạt nồng độ ACV cực đại (Tmax) viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén zovirax theo phương pháp thống kê phi tham số (theo Wilcoxon Signed-Rank test) 100 Kết xác định nồng độ thuốc huyết tương chó cho thấy khác biệt loại thuốc: viên nén KDSH đạt Cmax (6,501 µg/ml) thấp viên nén zovirax (9,280 µg/ml), thời gian đạt Cmax thuốc KDSH (4,25 giờ) lâu thuốc Zovirax (3,25 giờ) thời gian lưu trung bình thuốc KDSH (8,1323 giờ) cao hẳn thuốc zovirax (5,6541 giờ) Điều thể xu hướng giải phóng kéo dài viờn KDSH Tỏc dng Tạp chí y - dợc học quân số chuyên đề dợC-2016 kộo di ca thuc KDSH thể chỗ: thời gian trì nồng độ có tác dụng (> 1,7 µg/ml) thuốc KDSH dài hơn, đến thứ 12 tác dụng (nồng độ huyết tương 1,795 µg/ml) Trong đó, thuốc zovirax đến thứ 10, nồng độ thấp 1,7 µg/ml Sinh khả dụng tương đối viên ACV KDSH so với viên zovirax với độ tin cậy 90% 100,6 - 108,0% động học từ viên nén ACV KDSH thể rõ tính chất đặc trưng cho chế phẩm KDSH đường tiêu hóa KẾT LUẬN U.S Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research Guildance for Industry-Bioanalytical Method Validation 2003 Đã tiến hành đánh giá sinh khả dụng xác định số thông số dược động học viên nén ACV KDSH tự bào chế chó thực nghiệm, kết cho thấy: giá trị AUC0-∞, Tmax viên nén ACV KDSH tương đương, giá trị Cmax MRT khơng tương đương với viên zovirax đối chiếu Các thông số dược TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế Dược thư Quốc gia Việt Nam Nhà xuất Y học 2009, tr.36-40 Dhaliwal S, Jain S, Singh HP, Tiwary AK Mucoadhesive microspheres for gastroretentive delivery of ACV: In vitro and in vivo evaluation AAPS J 2008, 10 (2), pp.322-330 U.S Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research Bioavailability and bioequivalence studies for oral administered drug products General Considerations 2003 101 ... sánh sinh khả dụng viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén zovirax: Từ kết xác định thông số dược động học thuốc thử thuốc đối chiếu, so sánh sinh khả dụng viên nén ACV 200 mg KDSH với viên nén. .. Viên nén KDSH Viên nén zovirax Hình 1: Đường cong nồng độ ACV - thời gian huyết tương chó sau uống viên nén ACV 200 mg KDSH viên nén zovirax (n = 6) Phân tích dược động học so sánh sinh khả dụng. .. Validation 2003 Đã tiến hành đánh giá sinh khả dụng xác định số thông số dược động học viên nén ACV KDSH tự bào chế chó thực nghiệm, kết cho thấy: giá trị AUC0-∞, Tmax viên nén ACV KDSH tương đương, giá