Đang tải... (xem toàn văn)
Bài giảng Nghiên cứu sinh khả dụng của viên nén Capecitabine 500 mg trên chó bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS do TS. Chử Văn Mến trình bày các nội dung chính sau: Xây dựng và thẩm định được phương pháp định lượng Capecitabine trong huyết tương chó bằng sắc ký lỏng khối phổ; Đánh giá được tương đương sinh học viên nén chứa capecitabine trên chó thực nghiệm. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm nội dung chi tiết.
HỘI NGHỊ NỘI KHOA TỒN QUỐC LẦN THỨ XII NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG CỦA VIÊN NÉN CAPECITABINE 500 MG TRÊN CHĨ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ LC/MS/MS 8000 VTB1 LTB1 6000 4000 2000 Plasma concentration (ng/mL) 0 10 12 Time (h) TS. Chử Văn Mến Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học ĐẶT VẤN ĐỀ Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học ĐẶT VẤN ĐỀ Ưu điểm của phương pháp LC/MS/MS • • • Độ nhạy cao thích hợp phân tích thuốc trong huyết tương Thời gian phân tích ngắn so với các phương pháp khác Phân tích được đồng thời nhiều chất, cho độ đặc hiệu, độ chính xác cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học ĐẶT VẤN ĐỀ Đề tài “Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng của viên nén bao phim chứa capecitabine” với các mục tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định được phương pháp định lượng Capecitabine trong huyết tương chó bằng sắc ký lỏng khối phổ 2. Đánh giá được tương đương sinh học viên nén chứa capecitabine trên chó thực nghiêm ̣ Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học HỘI NGHỊ NỘI KHOA TOÀN QUỐC LẦN THỨ XII NGUYÊN VẬT LIỆU & PHƯƠNG PHÁP Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học VẬT LIỆU & THIẾT BỊ Thi ết Bịẩn: Capecitabine chuẩn •• Ch ất chu VẬT LIỆU & THIẾT BỊ Động vật thí nghiệm, thuốc thử, thuốc đối chứng • Động vật thí nghiệm: chó giống đực, khỏe mạnh, cân năng 10 12 kg, ̣ • Mẫu trắng: Huyết tương chó, • Thuốc thử (T): viên nén Capecitabine 500 mg; do Cơng ty CP Dược TTB Y tế Bình Định ( BIDIPHAR) sản xuất, • Thuốc đối chứng (R): viên nén bao phim Xeloda chứa Capecitabine 500 mg ( Roche, Thụy Sỹ) Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG • Khảo sát điều kiện sắc kí và khối phổ Xác định các thơng số tối ưu cho MS/MS Xác định các điều kiện sắc kí • Khảo sát quy trình xử lí mẫu Tủa protein Kiềm hóa huyết tương Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2. THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG • Tính tương thích của hệ thống • Tính chọn lọc đặc hiệu • Đường chuẩn và khoảng tuyến tính • Giới hạn định lượng dưới (LOQ) • Độ đúng độ chính xác • Tỷ lệ thu hồi • Độ ổn định Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3. ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC Chó thực nghiệm Giai đoạn 1 Giai đoạn 2 Nhóm 1 Thuốc thử T Thuốc đối chiếu R Nhóm 2 Thuốc đối chiếu R Thuốc thử T Xác định thơng số DĐH Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN SỰ PHÙ HỢP CỦA HỆ THỐNG SẮC KÝ AS STT TB CV (%) IS Tỷ Đáp ứng lệAS/IS Rt Đáp ứng Rt 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 2659435 2663505 2679414 2662085 2651727 2663414 2663263 0,81 0,81 0,81 0,81 0,81 0,81 0,81 2118422 2050961 2039668 2075831 2050238 2062857 2066330 1,255 1,299 1,314 1,282 1,293 1,291 1,289 0,3 1,4 1,5 Tính tương thích cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ CHỌN LỌC ĐẶC HIỆU Capecitabine Tỷ lệ STT Blank/ Blank LLOQ Blank LLOQ 169 28678 1566 36604 675 33302 150 31610 129 37901 100 30500 Đạt ( 352.18 2.414e+007 Felodipin 0.81 2163493 100 % 0.20 Chọn lọc đặc hiệu cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG DƯỚI (LLOQ) ZE Smooth(Mn,1x2) MRM of channels,ES+ 360.05 > 244.02 2.608e+004 Capecitabin 0.65 2051 100 % ZE Smooth(Mn,1x2) MRM of channels,ES+ 384.1 > 352.18 2.084e+007 Felodipin 0.81 1807559 100 % 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 Đạt yêu cầu ở nồng độ 20 ng/ml Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐƯỜNG CHUẨN Nồng độ Độ chính xác (% so với nồng độ lý thuyết) CC1 CC2 CC3 CC4 CC5 SC1 SC2 SC3 SC4 SC5 SC6 SC7 SC8 100,4 98,0 102,2 97,1 105,5 102,4 98,4 96,0 100,3 96,4 105,5 98,1 103,9 105,4 99,2 91,2 99,2 101,9 100,4 99,1 100,7 100,9 102,2 95,5 102,2 94,1 96,6 105,2 109,6 102,1 94,3 95,9 98,3 105,4 96,3 102,4 99,9 101,3 105,4 90,9 Kết luận Đạ t Đạ t Đạ t Đạ t Đạ t Độ chính xác cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ ĐÚNG VÀ ĐỘ CHÍNH XÁC TRONG NGÀY M ẫu NC (%) LLOQ (20 ng/mL) 19,9 ± 8,1 LQC(60 ng/mL) 65,3 ±13,9 Độ đúng(%) 100,2 ±8,0 108,9 ±13,9 MQC (2500 ng/mL) 2278,0 ±7,2 91,1 ±7,2 HQC (4000 ng/mL) 3728,7 ±3,0 93,2 ±3,0 Độ đúng, độ chính xác cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ NHIỄ M CHÉ O (CARRYOVER) Độ nhiễm chéo Đạt/ Không Độ nhiễm chéo Đạt/ Không SST của AS (%) đạt của IS (%) đạt 1,59 5,03 3,11 1,82 1,03 1,44 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt 0,03 0,02 0,03 0,03 0,02 0,03 Không bị nhiễm chéo Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Ỷ LỆ THU HỒI LQC STT Nền Huyết mẫu tương 117712 57276 116558 65040 129929 55932 123044 62706 115343 57783 TB 120517 59747 CV (%) 5,0 6,6 (%) 90,1 Trung bình (%) MQC Huyết Nền mẫu tương 5131660 2413374 4029828 2398583 6163489 2681405 4571135 2439185 5114416 2675348 5002106 2521579 15,8 5,7 91,7 HQC Huyết Nền mẫu tương 7639520 3723857 7486843 4468645 7751463 4419254 7849912 4036143 7574336 4613783 7660415 4252336 1,9 8,6 100,9 94,2 Tỷ lệ thu hồi cao IS Huyết tương 2859490 1682482 2649467 1747210 3030079 1698576 2696481 1690586 2979224 1699737 2842948 1703718 5,9 1,5 109,0* Nền mẫu KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ẢNH HƯỞNG CỦA NỀN MẪU STT MFAS LQC HQC 0,571 0,769 0,567 0,782 0,628 0,799 0,541 0,916 0,564 1,085 0,433 1,209 Trung bình MFIS LQC HQC 0,993 0,868 0,928 0,882 0,904 0,904 0,846 0,966 0,860 1,123 0,844 1,156 CV (%) Ảnh hưởng thấp Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học MFAS/MFIS LQC HQC 0,575 0,819 0,611 0,849 0,694 0,878 0,639 0,893 0,656 1,011 0,513 1,134 0,615 0,931 10,5 12,8 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ ỔN ĐỊNH AS (30 µg/mL) IS (5 µg/mL) STT Ban đầu (0h) Sau 5(h) Ban đầu (0h) Sau 5(h) 220818 30,013 31,757 31,549 220818 30,660 31,238 31,645 220818 4,756 4,760 4,731 220818 4,916 4,918 4,920 Trung bình 31,106 31,181 4,749 4,918 CV (%) 3,1 1,6 0,327 0,040 Độ lệch (%) 0,2 3,6 Kết luận Đạ t Đạ t Độ ổn định cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 8000 VTB1 LTB1 6000 Tương đương 4000 2000 Plasma concentration 0 10 12 Time (h) Đường cong nồng độ thuốc trung bình theo thời gian của 24 cá thể chó sau khi uống thuốc thử T và thuốc chứng R Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN CÁC THƠNG SỐ DĐH CỦA CAPECITABINE Cmax ± SD AUC024 ± SD AUC0∞ ± SD Tmax ± SD Nhóm (ng/ml) (ng,h/ml) (ng,h/ml) (giờ) 6209,90 ± 2553,31 12632,40 ± 3851,64 12632,55 ± 3851,64 1,69 ± 0,29 Thử Chứng 6033,20 ± 1960,53 12066,87 ± 3992,88 12067,00± 3992,96 1,63 ± 0,30 Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN SO SÁNH THÔNG SỐ DĐH CỦA CAPECITABINE Kết quả Thông số Giới hạn chấp nhận Cmax 80,00% 125,00% Tmax 80,00% 125,00% 94,70% 112,02% 97,08% 106,26% AUC0∞ 80,00% 125,00% 96,72% 105,28% Tương đương theo DĐVN V Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học KẾT LUẬN • Đã xây dựng được phương pháp định lượng Capecitabine trong huyết tương chó bằng phương pháp LC/MS/MS • Giá trị Cmax, AUC0∞ của thuốc thử và thuốc chứng tương đương nhau theo hướng dẫn của DĐVN V, giá trị Tmax khác nhau khơng có ý nghĩa thống kê Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học Ứng dụng phương pháp để đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học của các chế phẩm có chứa Capecitabine Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học ... Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương? ?sinh? ?học ĐẶT VẤN ĐỀ Đề tài ? ?Nghiên? ?cứu? ?đánh giá? ?sinh? ?khả? ?dụng? ?của ? ?viên? ?nén? ?bao phim chứa? ?capecitabine? ?? với các mục tiêu: 1. Xây dựng và thẩm định được phương? ? pháp? ? định lượng Capecitabine? ?trong huyết tương? ?chó? ?bằng? ?sắc? ?ký? ?lỏng? ?khối? ?phổ. .. Capecitabine? ?trong huyết tương? ?chó? ?bằng? ?sắc? ?ký? ?lỏng? ?khối? ?phổ 2. Đánh giá được tương đương sinh? ? học viên? ? nén? ? chứa capecitabine? ?trên? ?chó thực nghiêm ̣ Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương? ?sinh? ?học... Thuốc đối chứng (R):? ?viên? ?nén? ?bao phim Xeloda chứa Capecitabine? ?500? ?mg? ?( Roche, Thụy Sỹ) Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương? ?sinh? ?học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1. XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG • Khảo sát điều kiện? ?sắc? ?kí và? ?khối? ?phổ