Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu với mục tiêu xác định sự phân bố theo loài và mức độ nhạy cảm của các chủng nấm da ly trích từ vẩy da bệnh với ketoconazol (KTZ). Nghiên cứu tiến hành phân lập nấm da từ vẩy da bệnh, định danh bằng phương pháp sinh hóa và quan sát hình thể dưới kính hiển vi, xác định mức độ nhạy cảm của các chủng nấm phân lập với KTZ bằng phương pháp pha loãng theo CLSI-M38A.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT SỰ PHÂN BỐ VÀ MỨC ĐỘ ĐÁP ỨNG VỚI KETOCONAZOL CỦA MỘT SỐ CHỦNG NẤM DA LY TRÍCH TỪ BỆNH NHÂN - NĂM 2012 Nguyễn Vũ Giang Bắc*, Huỳnh Thể Hà*, Nguyễn Đinh Nga* TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Xác định phân bố theo loài mức độ nhạy cảm chủng nấm da ly trích từ vẩy da bệnh với ketoconazol (KTZ) Phương pháp nghiên cứu: Phân lập nấm da từ vẩy da bệnh, định danh phương pháp sinh hóa quan sát hình thể kính hiển vi Xác định mức độ nhạy cảm chủng nấm phân lập với KTZ phương pháp pha loãng theo CLSI-M38A Kết quả: Từ 82 mẫu da bệnh phân lập 64 chủng nấm da, có 76,56% chủng nấm thuộc loài Trichophyton rubrum Trichophyton tonsurans Các chủng nấm da phân lập có mức độ đáp ứng với KTZ mức độ sau: 64% chủng có MIC từ 1-4 µg/ml, 25% chủng có MIC từ 8-16 µg/ml 11% có MIC ≥ 32 µg/ml Kết luận: Phần lớn chủng nấm ly trích thuộc chi Trichophyton, số có khoảng 11% chủng cho giá trị MIC cao Từ khóa: nấm da, ketoconazol, MIC ABSTRACT STUDYING THE DISTRIBUTION AND THE SUSCEPTIBILITY OF DERMATOPHYTES ISOLATED FROM PATIENTS TO KETOCONAZOLE Nguyen Vu Giang Bac, Huynh The Ha, Nguyen Dinh Nga * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 261 - 263 Objective: studying the distribution and the susceptibility of dermatophytes isolated from patients to ketoconazole Method: Identify species and determine MIC by the dilution method according to the guideline of CLSIM38A with modification Result: 64 strains were isolated from 82 hair and skin of patients, 76,56% of strains are Trichophyton rubrum and Trichophyton tonsurans The susceptibility of isolated strains to KTZ is in range of MIC following: 1-4 µg/ml (64%); 8-16 µg/ml (25%) and more than 32 µg/ml (11%) Conclusion: Most of isolated dematophytes were belong to Trichophyton group and there was about 11% of strains showed in high MIC value Keywords: dermatophytes, MIC, ketoconazole ĐẶT VẤN ĐỀ Ketoconazol thuốc kháng nấm thuộc nhóm 5-imidazol thường sử dụng điều trị bệnh da vi nấm Do người dân thường mua tự sử dụng nên làm xuất nguy đề kháng với thuốc Ngồi ra, nay, có đề tài nước nghiên cứu vi nấm gây bệnh người * Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: DS Nguyễn Vũ Giang Bắc ĐT: 0934041225 Chuyên Đề Dược Học Email: giangbacnguyenvu@gmail.com 261 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 độ nhạy cảm chủng nấm với thuốc kháng nấm dùng Do đó, việc nghiên cứu phân bố chủng nấm da mức độ đáp ứng chủng ly trích từ lâm sàng với ketoconazol cần thiết để đưa hướng dẫn sử dụng thuốc an toàn hợp lý ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu 82 mẫu da từ bệnh nhân đến khám Bệnh viện Da Liễu từ tháng 03/2012 đến tháng 06/2012 Chất kháng nấm: ketoconazole chất chuẩn đối chiếu (Himedia), hàm lượng 99,63% Môi trường thử nghiệm: Sabouraud dextrose agar (Merck) Phương pháp nghiên cứu Định danh nấm da3,9 Vẩy da lấy từ bệnh nhân nhuộm lactophenol coton blue quan sát trực tiếp kính hiển vi quang học (x40), phải thấy sợi nấm bào tử đốt tế bào vẩy da Sau đó, vẩy da cấy thạch Sabouraud có kháng sinh, ủ nhiệt độ phòng từ 10-20 ngày Chọn khóm mang đặc điểm nấm da, nhuộm với lactophenol coton blue quan sát kính hiển vi Những khóm nấm cho đặc điểm vi học nấm da (đặc điểm sợi nấm, bào tử đính lớn, bào tử đính nhỏ) khiết định danh chuyển sang màu hồng tím phản ứng urea dương tính, mơi trường màu cam phản ứng urea âm tính Xác định mức độ đáp ứng nấm da với ketoconazol1 Nồng độ tối thiểu ức chế phát triển vi nấm (MIC) xác đinh phương pháp pha loãng theo hướng dẫn CLSIM38A môi trường sabouraud lỏng Kết xác định mắt thường sau ngày ủ nhiệt độ phòng KẾT QUẢ Kết định danh nấm da Từ 82 mẫu bệnh phẩm da tóc bệnh nhân đến khám bệnh viện Da liễu TPHCM dương tính soi tươi có 64 mẫu cho khóm mọc mơi trường SDA, từ đó, ly trích 64 chủng nấm da chủng Mỗi mẫu da ly trích chủng nấm da, đó, khơng có nhiễm nhiều chủng bệnh nhân Kết định danh sau” tPhân bố loài nấm phân lập định danh trình bày hình Trong có 49 chủng định danh Trichophyton rubrum/Trichophyton tonsurans hai lồi có đặc điểm hình thái sinh hóa giống nên khó phân biệt phương pháp cổ điển Nấm da định danh phương pháp sau: - Cấy ba điểm thạch sabouraud, ủ nhiệt độ phòng, sau ngày quan sát tốc độ phát triển mơ tả đặc điểm khóm nấm - Khảo sát khả tốc độ phát triển nấm da 37 oC - Phản ứng xuyên tóc: Khảo sát khả xuyên tóc vi nấm cho vi nấm tiếp xúc với tóc 14 ngày - Phản ứng urea: Vi nấm cấy thạch urea có bổ sung 4% glucose Sau ngày quan sát đổi màu môi trường Nếu môi trường 262 Hình 1: Sự phân bố chủng nấm da Mức độ đáp ứng nấm da với ketoconazol Kết bảng cho thấy 35% chủng nấm da khảo sát có MIC dịch chuyển vùng Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 cao so với nghiên cứu Hoog cs năm 20003 từ 32 lần trở lên Điều chứng tỏ quần thể có xuất chủng nhạy với ketoconazol Bảng 1: Mức độ đáp ứng chủng nấm da với KTZ Số chủng nấm da MIC (µ µg/ml) 32-64 (10,94%) 8-16 16 (25%) 1-4 41 (64,06%) Tổng số nấm thử 64 – 64 Khoảng MIC (µg/ml) Khoảng MIC (G.S de Hoog – 2000) 3: 0,06 – Bảng 2: Mức độ nhạy cảm theo loài với KTZ Khoảng MIC chủng nấm da ly trích khảo sát từ 1-64 µg/ml, tập trung chủ yếu khoảng 2-16 µg/ml So với khảo sát năm 2009, chủng nấm da có MIC khoảng MIC từ 0,06-32 µg/ml tập trung chủ yếu khoảng 0,125-4 µg/ml Giá trị MIC ketoconazol gia tăng quần thể nấm da khảo sát cho thấy cần có khuyến cáo cần thiết việc sử dụng ketoconazol hợp lý, liều đủ thời gian nhằm tránh kháng thuốc vi nấm chế phẩm thông dụng TÀI LIỆU THAM KHẢO Số chủng nấm đáp ứng với KTZ khoảng MIC(µg/ml) 1-4 8-16 32-64 T.rubrum/T.tonsurans 39 T.mentagrophytes M canis 0 M gypseum 0 M audouinii 0 Trichophyton sp 1 Tổng cộng 41 16 Các chủng nấm da cho MIC cao từ 32-64 µg/ml phân bố loài, đặc biệt T mentagrophytes Microsporum,có thể lồi lây nhiễm từ thú từ đất Chủng nấm BÀN LUẬN So với khảo sát năm 2009 nhóm tác giả , khảo sát chủng nấm da có phân bố chi nấm da thường gây bệnh cho người Trichophyton Microsporum, khảo sát năm 2009 ly trích nhóm Trichophyton Chi Trichophyton chi nấm gây bệnh chiếm ưu (95,31%), kết phù hợp với khảo sát năm 2009 cơng trình khảo sát chủng vi nấm gây bệnh số nước có điều kiện tương tự Việt Nam (từ 75 – 93%)4 Clinical and laboratory standards institute (2002), CLSI - M38 A da Silva Barros ME, de Assis Santos D and Hamdan JS, (2007), “Evaluation of susceptibility of Trichophyton mentagrophytes and Trichophyton rubrum clinical isolates to antifungal drugs using a modified CLSI microdilution method (M38A)”, Journal of Medical Microbiology, 56: 514-518 de Hoog GS et al, (2000), Atlas of Clinical Fungi, Universitat Rovira i Virgili Reus Ellabib MS, Khalifa ZM (2001), “Dermatophytes and other fungi associated with skin mycoses in Tripoli, Libya”, Annals of Saudi Medicine, 21: 193-195 Madhavi S, et al (2011), “Mycological study of Dermatophytosis in rural population”, Scholars Research Library, (3):88-93 Nguyễn Vũ Giang Bắc, Nguyễn Thu Gương, Nguyễn Đinh Nga, (2012), “Khảo sát mức độ đáp ứng số chủng nấm da ly trích từ bệnh nhân với ketoconazol”, Y học TP HCM, 16: 90-92 Yazdanparast SA and Barton RC, (2006), “Arthroconidia production in Trichophyton rubrum and a new ex vivo model of onychomycosis”, Journal of Medical Microbiology, 55:15771581 Sumit K, Shirikara MP, Shalini SM (2012), “Trichophyton rubrum: The Commonest Isolate from Dermatophytosis”, Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, (1):101-105 Venkatesan G, Ranjit Singh AJA, Murugesan A G (2007), “Trichophyton rubrum- the predominant etiological agent in human dermatophytoses in Chennai, India”, African Journal of Microbiology Research :9-12 Ngày nhận báo: 11.12.2012 Ngày phản biện nhận xét báo: 23.12.2012 Ngày báo đăng: Chuyên Đề Dược Học Nghiên cứu Y học 10.03.2014 263 ... Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 độ nhạy cảm chủng nấm với thuốc kháng nấm dùng Do đó, việc nghiên cứu phân bố chủng nấm da mức độ đáp ứng chủng ly trích từ lâm sàng với ketoconazol cần thiết... chủng nấm da chủng Mỗi mẫu da ly trích chủng nấm da, đó, khơng có nhiễm nhiều chủng bệnh nhân Kết định danh sau” tPhân bố loài nấm phân lập định danh trình bày hình Trong có 49 chủng định danh... 1: Sự phân bố chủng nấm da Mức độ đáp ứng nấm da với ketoconazol Kết bảng cho thấy 35% chủng nấm da khảo sát có MIC dịch chuyển vùng Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số