S PHN B V KH NNG SINH CHT KHNG SINH CA MT S CHNG X KHUN HIM THUC CHI MICROMONOSPORA PHN LP T T BN THNH PH NNG THE DISTRIBUTION AND THE ABILITY OF PRODUCING ANTIBIOTIC OF SOME RARE ACTYNOMYCETES STRAINS, BELONGING TO MICROMONOSPORA GENUS EXTRACTED FROM THE MUDDY SOIL IN DANANG CITY THU H - Vế CHU TUN Trng i hc S phm, i hc Nng TểM TT T 40 mu t bựn ca thnh ph Nng, ó phõn lp c 90 chng x khun him thuc chi Micromonospora, trong ú cú 37 chng cú hot tớnh khỏng sinh, v.v Tuyn chn c 4 chng N 1 , N 4 , N 6 v N 7 cú hot tớnh khỏng sinh mnh, to vũng khỏng khun, khỏng vi nm cao, cú th dựng sn xut dch khỏng sinh thụ, phũng v chng nm bnh do vi nm gõy ra mt s cõy trng v vt nuụi. ABSTRACT From 40 samples of muddy soil in Danang city, 90 rare Actynomycetes strains of Micromonospora genus have been extracted, of which 37 strains are antibiotic, etc Four strains N, N4, N6 and N7 are selected. They have the features of a strong antibiotic: creation of antibacterial cycles and high antimocrofungus. They can be used to produce raw antimyces liquid, to prevent and control diseases created by microfungus on some plants and animals. 1. ỷt vỏỳn õóử Trong nhổợng nm gỏửn õỏy, cuỡng vồùi sổỷ phaùt trióứn nọng nghióỷp, vióỷc sổớ duỷng caùc loaỷi thuọỳc hoaù hoỹc baớo vóỷ thổỷc vỏỷt phuỷc vuỷ saớn xuỏỳt nọng nghióỷp ngaỡy caỡng gia tng. Bón caỷnh caùc kóỳt quaớ õaợ õaỷt õổồỹc thỗ mỷt traùi cuớa vióỷc sổớ duỷng hoaù chỏỳt baớo vóỷ thổỷc vỏỷt laỡ khaù lồùn. où laỡ sổỷ aớnh hổồớng cuớa chuùng õóỳn caùc hóỷ sinh thaùi vaỡ taùc õọỹng xỏỳu õóỳn sổùc khoeớ con ngổồỡi, lồùn hồn nổợa laỡ taùc õọỹng õóỳn sổỷ phaùt trióứn bóửn vổợng trong nọng nghióỷp. Mọỹt sọỳ kóỳt quaớ nghión cổùu õaợ chổùng minh vai troỡ cuớa xaỷ khuỏứn trong vióỷc tọứng hồỹp caùc chỏỳt khaùng sinh khaùng khuỏứn rỏỳt tọỳt vaỡ an toaỡn vóử mọi trổồỡng sọỳng. Thaỡnh phọỳ aỡ Nụng coù hóỷ sinh thaùi õa daỷng, thuỏỷn lồỹi cho sổỷ phaùt trióứn cuớa caùc loaỡi vi sinh vỏỷt coù lồỹi. Baỡi baùo naỡy õóử cỏỷp õóỳn vióỷc nghión cổùu sổỷ phỏn bọỳ cuợng nhổ khaớ nng sinh khaùng sinh cuớa mọỹt sọỳ chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm, õổồỹc phỏn lỏỷp tổỡ õỏỳt buỡn ồớ Thaỡnh phọỳ aỡ Nụng. 2. ọỳi tổồỹng vaỡ phổồng phaùp nghión cổùu 2.1. ọỳi tổồỹng * Caùc chuớng xaỷ khuỏứn õổồỹc phỏn lỏỷp tổỡ 40 mỏựu õỏỳt buỡn cuớa thaỡnh phọỳ aỡ Nụng * Caùc chuớng vi sinh vỏỷt kióứm õởnh + Caùc chuớng vi khuỏứn kióứm õởnh - Bacillus subtilis ATCC 6633 - Staphylococcus aureus ATCC 1228 - Escherichia coli ATCC 1283 - Klebsiella pneumoniae - Sarcina lutea ATCC 9341 + Caùc chuớng nỏỳm kióứm õởnh - Aspergillus niger - Fusarium oxysporum - Candida albicans - Pirycularia oryzae 2.2. Phổồng phaùp nghión cổùu * Lỏỳy mỏựu õỏỳt vaỡ phỏn lỏỷp xaỷ khuỏứn theo phổồng phaùp cuớa Nguyóựn Thaỡnh aỷt [1], [2]. * Tuyóứn choỹn caùc chuớng xaỷ khuỏứn coù hoaỷt tờnh sinh chỏỳt khaùng sinh bũng phổồng phaùp thoới thaỷch cuớa Egorov [3]. 3. Kóỳt quaớ vaỡ thaớo luỏỷn 3.1. Sổỷ phỏn bọỳ cuớa xaỷ khuỏứn chi Micromonospora trong õỏỳt buỡn cuớa thaỡnh phọỳ aỡ Nụng * Tổỡ 40 mỏựu õỏỳt buỡn, chuùng tọi õaợ phỏn lỏỷp vaỡ thuỏửn khióỳt õổồỹc 90 chuớng xaỷ khuỏứn thuọỹc chi Micromonospora trón mọi trổồỡng Gause I. Tỏỳt caớ caùc chuớng xaỷ khuỏứn thuọỹc chi naỡy õóửu coù caùc õỷc õióứm chung nhổ sau: + ất hỗnh thaỡnh khuỏứn ty khờ sinh, chố coù khuỏứn ty cồ chỏỳt. + Maỡu sừc khuỏứn laỷc tổỡ vaỡng nhaỷt õóỳn da cam vaỡ chuyóứn thaỡnh nỏu, nỏu õoớ sau thồỡi gian 7 - 14 ngaỡy nuọi cỏỳy do hỗnh thaỡnh baỡo tổớ. + Caùc baỡo tổớ õồn moỹc rióng reợ phỏn bọỳ doỹc theo sồỹi cồ chỏỳt, khọng coù cuọỳng sinh baỡo tổớ hoỷc cuọỳng sinh baỡo tổớ ngừn. + Khuỏứn laỷc thổồỡng nhoớ, bóử mỷt nhụn hoỷc xuỡ xỗ. + Tỏỳt caớ caùc chuớng xaỷ khuỏứn phỏn lỏỷp õổồỹc phỏn bọỳ trong caùc loaỷi õỏỳt buỡn: buỡn ao, buỡn ruọỹng luùa, buỡn sọng, buỡn caùt. * Chụng täi â tiãún hnh kho sạt nhiãưu âåüt nhàòm xạc âënh sỉû phán bäú ca cạc chng xả khøn chi Micromonospora tải cạc máùu âáút bn thüc khu vỉûc thnh phäú  Nàơng. Mäùi láưn sỉí dủng 30 - 40 âéa petri chỉïa cạc mäi trỉåìng Gause I hồûc ISP - 4 våïi cạc âäü pha long dëch âáút khạc nhau. Kãút qu nghiãn cỉïu sỉû phán bäú ca cạc chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora âỉåüc trçnh by åí bng 1. Bng 1: Säú lỉåüng xả khøn hiãúm thüc chi Micromonospora trong cạc máùu âáút bn tải thnh phäú  Nàơng Nåi v thåìi gian láúy máùu Loải máùu Thm thỉûc váût pH X Säú lỉåüng. 10 3 CFU/g Sån Tr (26/12/2000) (17/01/2000) Bn ao Bn rüng lụa Rong, bo Lụa, c 6, 5 6, 5 60 71 60.10 3 71.10 3 M Khã (24/01/2000) Bn cạt Rong 6, 0 30 30.10 3 Säng Hn (10/02/2000) Bn säng Rong, c 6, 0 65 65.10 3 Ho Khạnh (23/02/2000) Bn ao C, bo Nháût Bn 6, 5 60 50.10 3 Ho Cỉåìng (28/02/2000) Bn rüng lụa Lụa, c 5, 0 30 30.10 3 Ho Cáưm (28/02/2000) Bn rüng lụa Lụa, c 6, 5 60 60.10 3 Ho Th (18/03/2000) Bn ao Rong âi chäưn sen 6, 0 57 57.10 3 Ho Phạt (28/03/2000) Bn rüng lụa Lụa, c 6, 5 70 70.10 3 Kh Trung (28/03/2000) Bn cạt Rong 5, 5 32 32.10 3 Cáưu  (05/04/2001 6, 5 70 70.10 3 Bn säng, Bn rüng lụa C, rong, Lụa, c 6, 5 70 70.10 3 Chụ : CFU: Colony Forming Unit (Âån vë hçnh thnh khøn lảc) Kãút qu bng 1 cho tháúy: Säú lỉåüng xả khøn hiãúm chi Micromonospora âỉåüc phán láûp trong cạc máùu âáút bn khạc nhau thç khạc nhau. - Âáút bn rüng lụa åí Ho Phạt, Cáưu Â, Sån Tr l nhỉỵng nåi âáút cọ canh tạc, giu cháút dinh dỉåỵng, pH gáưn trung tênh (pH = 6,5), säú lỉåüng xả khøn trong 1 gam âáút bn cao nháút so våïi cạc máùu âáút khạc, trung bçnh âảt (70 - 71).10 3 CFU/gam âáút. Tuy nhiãn åí Ho Cỉåìng cng l máùu âáút bn rüng lụa, nhỉng pH ráút tháúp (pH = 5,0 - 5,5) nãn säú lỉåüng xả khøn hiãúm trong 1 gam âáút bn êt hån nhiãưu, âảt 30.10 3 CFU/ gam âáút. - Âáút bn ven säng Hn, Cáưu  l nåi giu cháút dinh dỉåỵng, ngưn nỉåïc lỉu thäng, pH tỉång âäúi thêch håüp (pH = 6,0 - 6,5), do âọ säú lỉåüng xả khøn hiãúm trong 1 gam âáút bn cng khạ cao: (65 - 70).10 3 CFU/gam âáút. - Âáút bn ao Ho Khạnh, Sån Tr v Ho Th cọ säú lỉåüng xả khøn trong 1 gam âáút bn êt hån, khong (57 - 60).10 3 CFU/gam âáút, do ngưn nỉåïc khäng lỉu thäng pH tháúp (pH = 5,5 - 6,0). - Âáút bn cạt åí M Khã, Kh Trung ngho dinh dỉåỵng, pH = 5,5-6,0. Säú lỉåüng xả khøn trong 1 gam âáút bn tháúp nháút trung bçnh tỉì (30 - 32).10 3 CFU/ gam âáút. So sạnh cạc kãút qu trãn våïi kãút qu nghiãn cỉïu ca Cao Vàn Thu v cäüng sỉû [6] phán láûp tỉì cạc máùu âáút bn Häư Táy, häư Trục Bảch, häư By Máùu, säng Ngỉu (H Näüi), säng Tråïi, säng Láưy (Qung Bçnh) trong 1 g âáút bn khong (47 2,2).10 3 CFU/gam âáút thç kãút qu phán láûp ca chụng täi tải cạc âiãøm thu máùu âáút bn rüng lụa åí Ho Phạt, Sån Tr, Cáưu  cọ säú lỉåüng xả khøn hiãúm chi Micromonospora/gam âáút bn cao hån mäüt êt. Nhỉng cạc máùu âáút bn åí M Khã, Kh Trung lải cọ säú lỉåüng tháúp hån. Qua trãn chụng täi nháûn tháúy sỉû phán bäú ca cạc chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora phủ thüc vo nhiãưu ngun nhán, trong âọ tênh cháút ca âáút cọ nh hỉåíng quút âënh âãún sỉû phán bäú ca chụng. Âáút mu måỵ cọ canh tạc, giu dinh dỉåỵng, pH trung tênh, ngưn nỉåïc lỉu thäng thç nåi âọ cọ khu hãû xả khøn ca chi Micromonospora phạt triãøn nhiãưu. Nháûn xẹt ny cng ph håüp våïi mäüt säú tạc gi khi nghiãn cỉïu åí cạc vng khạc tải Viãût Nam nhỉ Lã Mai Hỉång, (H Näüi) [4]; Biãưn Vàn Minh, (Hú) [5]; Cao Vàn Thu v cäüng sỉû (H Näüi) [6]. 3.2. Xạc âënh t lãû cạc chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora sinh cháút khạng sinh * Tỉì 90 chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora phán láûp âỉåüc, chụng täi tiãún hnh ni cáúy trãn mäi trỉåìng Gause II, åí nhiãût âäü 28 - 30 o C, thåìi gian 7 - 14 ngy. Sau âọ hoảt tênh khạng sinh âỉåüc xạc âënh bàòng phỉång phạp khäúi thảch våïi 4 loải vi sinh váût kiãøm âënh. Kãút qu âỉåüc trçnh by åí bng 2. Baớng 2: Tố lóỷ caùc chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora coù hoaỷt tờnh khaùng sinh Sọỳ chuớng ổùc chóỳ vi khuỏứn Tọứng sọỳ chuớng phỏn lỏỷp Sọỳ chuớng coù hoaỷt tờnh khaùng sinh Gram dổồng Gram ỏm Sọỳ chuớng ổùc chóỳ vi nỏỳm 90 37 28 20 14 100% 41,11 31,11 22,22 15,55 Kóỳt quaớ baớng 2 cho thỏỳy coù 37/90 chuớng coù hoaỷt tờnh khaùng sinh chióỳm tố lóỷ 41,11%, trong õoù 28/90 chuớng khaùng õổồỹc vi khuỏứn Gram dổồng chióỳm tố lóỷ cao nhỏỳt - 31,11%, sọỳ chuớng khaùng vi khuỏứn Gram ỏm laỡ 20/90 chuớng chióỳm tố lóỷ thỏỳp hồn - 22,22%, thỏỳp nhỏỳt laỡ sọỳ chuớng ổùc chóỳ vi khuỏứn 14/90 chuớng chióỳm tố lóỷ - 15,55%, khi so saùnh caùc kóỳt quaớ trón vồùi kóỳt quaớ cuớa Bióửn Vn Minh (Huóỳ) [5], Cao Vn Thu (Haỡ Nọỹi) [6] thỗ caùc tố lóỷ trón coù thỏỳp hồn mọỹt ờt. 3.3. Tuyóứn choỹn caùc chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora coù hoaỷt tờnh khaùng sinh maỷnh * 37 chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora õổồỹc nuọi cỏỳy trón mọi trổồỡng Gause II ồớ nhióỷt õọỹ 28 - 30 o C, sau 7 - 14 ngaỡy hoaỷt tờnh khaùng sinh õổồỹc thổớ bũng phổồng phaùp khuóỳch taùn trón mọi trổồỡng thaỷch vồùi 9 vi sinh vỏỷt kióứm õởnh. Kóỳt quaớ õổồỹc trỗnh baỡy trong baớng 3. Baớng 3: Hoaỷt tờnh khaùng sinh cuớa 37 chuớng Micromonospora Kờch thổồùc voỡng vọ khuỏứn (D - d, mm) Hoaỷt tờnh khaùng sinh E.coli ATCC 1283 K.pneumoniac S.lutea ATCC 9341 B.subtitus ATCC 6633 S. aureus ATCC 1228 F.oxysporeem A.niger P.oryzae C.albicans Sọỳ chuớng 9 6 7 14 12 7 7 6 4 Tố lóỷ % 24,3 2 16,2 1 18,9 1 37,83 32,43 18,91 18,91 16,21 10,80 Kóỳt quaớ ồớ baớng 3 cho thỏỳy khaớ nng sinh chỏỳt khaùng sinh, khaùng caùc vi khuỏứn Gram dổồng laỡ maỷnh nhỏỳt (khaùng B.subtitis chióỳm 37,83%, khaùng S.aureus chióỳm 32,43%). Khaớ nng khaùng caùc vi khuỏứn Gram vaỡ vi nỏỳm thỏỳp hồn (Khaùng E.coli chióỳm 24, 32%, khaùng S.lutea chióỳm - 18,91%, khaùng K.pneumoniae chióỳm - 16,21%, khaùng F.oxysporum vaỡ A.niger chióỳm 18,91%, khaùng P.oryzae chióỳm 16,21%), khaùng C.albicans chióỳm 10,80%. Nóỳu so saùnh caùc kóỳt quaớ trón vồùi kóỳt quaớ nghión cổùu cuớa Bióửn Vn Minh (Huóỳ) [5], Cao Vn Thu vaỡ cọỹng sổỷ (Haỡ Nọỹi) [6], õaợ cho thỏỳy sọỳ chuớng coù khaớ nng khaùng vi khuỏứn Gram dổồng cao hồn, khaùng vi khuỏứn Gram ỏm thỏỳp hồn, coỡn khaớ nng khaùng vi nỏỳm gỏửn tổồng õổồng. * Trong sọỳ 37 chuớng Micromonospora coù hoaỷt tờnh khaùng sinh õổồỹc phỏn lỏỷp tổỡ caùc mỏựu õỏỳt buỡn ồớ thaỡnh phọỳ aỡ Nụng, qua sồ tuyóứn chuùng tọi choỹn ra õổồỹc 7 chuớng coù khaớ nng khaùng vồùi ờt nhỏỳt 4 loaỷi vi sinh vỏỷt kióứm õởnh, taỷm õổồỹc kờ hióỷu laỡ: N 1 , N 2 , N 3 , N 4 , N 5 , N 6 vaỡ N 7 . Kóỳt quaớ õổồỹc trỗnh baỡy trong baớng 4 sau õỏy: Baớng 4: Hoaỷt tờnh khaùng sinh cuớa 7 chuớng xaỷ khuỏứn chi Micromonospora Kờch thổồùc voỡng vọ khuỏứn (D - d, mm) Kờ hióỷu E.coli ATCC 1283 K.pneumoniac S.lutea ATCC 9341 B.subtitus ATCC 6633 S. aureus ATCC 1228 F.oxysporeem A.niger P.oryzae C.albicans N 1 17 18 20 19 5 N 2 19 18 19 16 N 3 18 19 20 17 N 4 18 16 19 20 17 16 6 N 5 18 17 18 19 17 N 6 17 18 19 20 17 18 8 N 7 16 15 18 19 18 17 7 Kóỳt quaớ ồớ baớng 4 cho thỏỳy coù 04 chuớng N 1 , N 2 , N 6 vaỡ N 7 coù khaớ nng khaùng õổồỹc caùc vi khuỏứn Gram ỏm, vi khuỏứn Gram dổồng vaỡ nỏỳm, taỷo voỡng vọ khuỏứn rỏỳt tọỳt cho caùc nghión cổùu hoaỷt tờnh khaùng sinh cuớa xaỷ khuỏứn hióỳm coù ồớ thaỡnh phọỳ aỡ Nụng. 4. Kóỳt luỏỷn 4.1. Tổỡ 40 mỏựu õỏỳt buỡn cuớa thaỡnh phọỳ aỡ Nụng, õaợ phỏn lỏỷp õổồỹc 90 chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora. Sọỳ lổồỹng xaỷ khuỏứn trong 1 gam õỏỳt ồớ caùc mỏựu õỏỳt khaùc nhau laỡ khaùc nhau. Caùc mỏựu õỏỳt buỡn ruọỹng luùa ồớ Hoaỡ Phaùt, Cỏửu oớ, Sồn Traỡ coù sọỳ lổồỹng xaỷ khuỏứn hióỳm trong 1 gam õỏỳt cao nhỏỳt so vồùi caùc mỏựu õỏỳt nhổ buỡn ao, buỡn caùt ồớ Hoaỡ Khaùnh, Hoaỡ Thoỹ, Myợ Khó vaỡ Khuó Trung, thaỡnh phọỳ aỡ Nụng. 4.2. Trong 90 chuớng xaỷ khuỏứn phỏn lỏỷp õổồỹc, coù 37 chuớng coù hoaỷt tờnh khaùng sinh vồùi ờt nhỏỳt mọỹt trong sọỳ caùc vi sinh vỏỷt kióứm õởnh chióỳm 41,11%. 4.3. Tổỡ 37 chuớng xaỷ khuỏứn coù hoaỷt tờnh khaùng sinh, õaợ tuyóứn choỹn õổồỹc 7 chuớng coù hoaỷt tờnh khaùng sinh, khaùng õổồỹc ờt nhỏỳt vồùi 4 vi sinh vỏỷt kióứm õởnh. Trong õoù coù 4 chuớng N 1 , N 4 , N 6 vaỡ N 7 coù khaớ nng khaùng õổồỹc caớ vi khuỏứn Gram ỏm, vi khuỏứn Gram dổồng vaỡ Nỏỳm, taỷo voỡng khaùng khuỏứn, khaùng nỏỳm cao. Coù thóứ duỡng caùc chuớng tuyóứn choỹn coù hoaỷt tờnh khaùng sinh maỷnh naỡy nghión cổùu sỏu hồn nhũm taỷo ra dởch khaùng sinh thọ hổợu hióỷu phoỡng vaỡ chọỳng bóỷnh vi nỏỳm cho mọỹt sọỳ loaỷi cỏy trọửng vaỡ vỏỷt nuọi taỷi thaỡnh phọỳ aỡ Nụng. TAèI LIU THAM KHAO [1] Nguyóựn Lỏn Duợng, Phaỷm Vn Ty, Dổồng ổùc Tióỳn, Mọỹt sọỳ phổồng phaùp nghión cổùu vi sinh hoỹc tỏỷp II, Nxb Khoa hoỹc vaỡ Kyợ thuỏỷt, Haỡ Nọỹi, 1972, tr.70 75. [2] Nguyóựn Thaỡnh aỷt, Cồ sồớ sinh hoỹc vi sinh vỏỷt, Nxb Giaùo duỷc, Haỡ Nọỹi, 1999. [3] Egorov N.X, Thổỷc tỏỷp vi sinh hoỹc, (Ngổồỡi dởch: Nguyóựn Lỏn Duợng), Nxb Mir Matxcồva, Nxb Khoa hoỹc vaỡ Kyợ thuỏỷt, Haỡ Nọỹi, 1983. [4] Ló Mai Hổồng, Nghión cổùu xaỷ khuỏứn sinh chỏỳt khaùng sinh phỏn lỏỷp ồớ Haỡ Nọỹi vaỡ vuỡng phuỷ cỏỷn, Luỏỷn aùn Tióỳn sộ Sinh hoỹc, 1993, tr. 48 52. [5] Bióửn Vn Minh, Nghión cổùu khaớ nng sinh chỏỳt khaùng sinh cuớa mọỹt sọỳ chuớng xaỷ khuỏứn phỏn lỏỷp tổỡ õỏỳt Bỗnh Trở Thión, Luỏỷn aùn Tióỳn sộ Sinh hoỹc, 2000, tr. 7 32. [6] Cao Vn Thu, Chu Thở Lọỹc, Lổồng ổùc Tuỏỳn, Goùp phỏửn nghión cổùu mọỹt sọỳ loaỡi Micromonospora sinh tọứng hồỹp chỏỳt khaùng sinh tổỡ buỡn, buỡn caùt Vióỷt Nam, Taỷp chờ Dổồỹc hoỹc sọỳ 5, 1993, tr. 3 6. . Minh, (Hú) [5]; Cao Vàn Thu v cäüng sỉû (H Näüi) [6]. 3.2. Xạc âënh t lãû cạc chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora sinh cháút khạng sinh * Tỉì 90 chng xả khøn hiãúm chi Micromonospora phán. E.coli chi ỳm 24, 32%, khaùng S.lutea chi ỳm - 18,91%, khaùng K.pneumoniae chi ỳm - 16,21%, khaùng F.oxysporum vaỡ A.niger chi ỳm 18,91%, khaùng P.oryzae chi ỳm 16,21%), khaùng C.albicans chi ỳm. ờt. 3.3. Tuyóứn choỹn caùc chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora coù hoaỷt tờnh khaùng sinh maỷnh * 37 chuớng xaỷ khuỏứn hióỳm chi Micromonospora õổồỹc nuọi cỏỳy trón mọi trổồỡng Gause