Đề tài được tiến hành nhằm thu được các kết quả sẽ là cơ sở định danh dược liệu, đồng thời góp phần chiết xuất các hợp chất tinh khiết dùng làm chất chuẩn để tiêu chuẩn hóa và tạo tiền đề cho những thử nghiệm dược lý sau này, hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu đại bi và các chế phẩm từ dược liệu này.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÂY ĐẠI BI BLUMEA BALSAMIFERA (L.) DC ASTERACEAE Trần Thị Thúy Quỳnh*, Nguyễn Thái Linh*, Nguyễn Thị Nghi Trung* TÓM TẮT Đặt vấn đề - Mục tiêu: Viêm mũi xoang bệnh phổ biến thách thức lớn vấn đề chăm sóc sức khỏe nhiều quốc gia Cây Đại bi từ lâu dân gian sử dụng vị thuốc trị viêm mũi xoang hữu hiệu Theo tài liệu nghiên cứu nay, đặc tính kháng viêm, cao chiết Đại bi có tác dụng chống ung thư tế bào ung thư gan, có tác dụng lên tế bào mỡ, hạ huyết áp, có khả điều trị bệnh gout Vì đề tài tiến hành nhằm thu kết sở định danh dược liệu, đồng thời góp phần chiết xuất hợp chất tinh khiết dùng làm chất chuẩn để tiêu chuẩn hóa tạo tiền đề cho thử nghiệm dược lý sau này, hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu Đại bi chế phẩm từ dược liệu Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Lá non Đại bi thu hái tỉnh Bến Tre tháng 03/2010 Dược liệu Đại bi mô tả đặc điểm hình thái thực vật, khảo sát đặc điểm vi học kính hiển vi Phân tích thành phần hóa học có dược liệu Đại bi phản ứng hóa học đặc trưng dựa theo tài liệu Rumani kỹ thuật sắc ký lớp mỏng Chiết xuất phân lập hợp chất có Cây Đại bi Kết quả: Đã thu thập tài liệu tham khảo liên quan đến Đại bi Đã xác định đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm vi học khảo sát sơ thành phần hóa học Cây Đại bi Chiết xuất mai hoa băng phiến từ dược liệu tươi Đại bi xác định thành phần mai hoa băng phiến Chiết xuất phân lập phân đoạn chứa flavonoid Phân lập hai chất tương đối tinh khiết Kết luận: Chúng tơi tìm điểm đặc trưng hình thái vi học giúp cho việc kiểm nghiệm mặt thực vật Đại bi Về mặt hóa học chúng tơi chiết xuất, phân tích thành phần có mai hoa băng phiến chiết xuất, phân lập hợp chất tương đối tinh khiết A, B Cấu trúc hai chất làm sáng tỏ nghiên cứu Từ khóa: Đại bi, Blumea balsamifera, camphor, borneol, flavonoid ABSTRACT STUDY OF BOTANY CHARACTERISTICS AND CHEMICAL COMPOSITION OF BLUMEA BALSAMIFERA (L.) DC ASTERACEAE Tran Thi Thuy Quynh, Nguyen Thai Linh, Nguyen Thi Nghi Trung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No – 2012 : 213 – 216 Background – Objectives: Rhino-sinusitis, a popular disease, is currently a major challenge for the health care problem in many countries “Dai bi” has long time been used with good results in folk medicine for sinusitis According to the present studies, in addition to anti-inflammatory properties, the plant extracts have anticancer effect in liver cancer cells, effect on fat cells, reduce blood pressure, possibly can be used in gout treatment, This study was carried out to establishing the database for plant identification, extracting the pure compounds in the direction of setting up standards of quality control of Blumea balsamifera (L.) DC and its * Khoa Y học cổ truyền - Đại học Y Dược Tp HCM Tác giả liên lạc: DS Trần Thị Thúy Quỳnh SĐT: 0973266958 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Email: thuyquynh31@yahoo.com.vn 213 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 preparations Materials and methods: The plants were collected in Ben tre province in March 2010 Botanical characteristics were described by observation Microscopic characteristics determined by microscopy method Analysis of chemical components by mean of chemical reaction and chromatography Components in plant were extracted and isolated Results: Botany characteristics, microscopic characteristics, chemical components were determined Camphora blumeae were isolated and identified Segments that contain flavonoids were extracted and isolated Two nearly pure substances were isolated from this plant With the current literature we not have enough data to determine the structures of the two substances The structure of these two substances will be clarified in further studies Conclusion: The morphological and microscopic features of Blumea balsamifera (L.) DC were determined Two nearly pure compounds A, B were isolated Their structures will be clarified in further studies Keywords: Blumea balsamifera, camphor, borneol, flavonoid Dược liệu thu hái non, rửa ĐẶT VẤN ĐỀ sạch, cắt thành đoạn ngắn, phơi âm can đến khô Viêm mũi xoang bệnh phổ biến xay thành bột thô dùng để nghiên cứu hóa thách thức lớn đối học (thử tinh khiết, phân tích sơ thành phần với vấn đề chăm sóc sức khỏe nhiều quốc hóa thực vật, chiết xuất, phân lập hợp chất) gia Cây Đại bi từ lâu dân gian sử Phần thân, tươi dùng để khảo sát vi học dụng vị thuốc trị viêm mũi xoang chiết xuất mai hoa băng phiến hữu hiệu Theo tài liệu nghiên cứu Dung mơi, hóa chất: ethanol 96% cơng nay, ngồi đặc tính kháng viêm, cao chiết nghiệp, cloroform, ethyl acetat, n-hexan, ether Đại bi có tác dụng chống ung thư tế bào ethylic, methanol, aceton, loại AR Trung ung thư gan, có tác dụng lên tế bào mỡ, tác Quốc sản xuất Một số hóa chất, thuốc thử khác dụng kháng viêm có tác dụng hạ huyết áp, dùng phòng thí nghiệm dược liệu học có khả điều trị bệnh gout(4, 5) Vì Trang thiết bị nghiên cứu tiến hành thực đề tài: “Khảo sát thực vật học thành phần hóa học Đại bi (Blumea balsamifera)” với nội dung sau: - Khảo sát mặt thực vật học Đại bi - Phân tích sơ thành phần hóa thực vật Đại bi - Chiết xuất mai hoa băng phiến phân lập số hợp chất tinh khiết từ Đại bi ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng Nguyên liệu Đại bi thu hái tỉnh Bến Tre tháng 03/2010 214 Bình ngấm kiệt Máy quay Rotavapor R210 (Buchii) kèm sinh hàn tự động RW2025G Bộ chưng cất tinh dầu Clavenger Tủ sấy, bếp cách thuỷ (Memmert) Cân phân tích BP 221S; cân xác định độ ẩm MA 45 (Sartorius) Kính hiển vi quang học CX-21 (Olympus) Bản mỏng silica gel F254 tráng sẵn nhôm (Merck) Silica gel cỡ hạt vừa Ф 0,03-0,063 mm cỡ hạt mịn Ф 0,015-0,04 mm Merck Bình sắc ký, cột sắc ký thủy tinh dụng cụ thơng dụng khác phòng thí nghiệm Phổ GC/MS thực Trung tâm dịch vụ phân tích thí nghiệm, Sở Khoa học cơng nghệ thành phố Hồ Chí Minh, Số Nguyễn Văn Thủ, Quận 1, TP Hồ Chí Minh Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học Phương pháp thực nghiệm KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Phương pháp khảo sát thực vật học Mô tả định danh: Dựa vào hình dạng bên ngồi mẫu khô mẫu tươi đồng thời sử dụng tài liệu mơ tả hình thái thực vật cây(3) để làm đối chiếu sơ xác định loài cần khảo sát Thực vật học Vi học: Mẫu chọn để nghiên cứu tiêu biểu cho dược liệu, mẫu không lấy non hay già Chuẩn bị mẫu theo Dược điển Việt Nam IV (phụ lục 12.18) (2) Cắt vi phẫu thân, Đại bi lưỡi lam nhuộm phương pháp nhuộm kép carmin-lục iod Quan sát kính hiển vi vật kính 5X, 10X, 40X chụp lại trực tiếp qua thị kính máy ảnh kỹ thuật số Soi bột: Dược liệu cắt nhỏ, sấy 5060 C đến khô, xay thành bột mịn, rây qua rây cỡ 32 Bột dược liệu quan sát môi trường nước vật kính 10X, 40X Các cấu tử tìm thấy chụp trực tiếp qua thị kính máy ảnh kỹ thuật số o Phương pháp khảo sát hóa học - Thử tinh khiết dược liệu theo DĐVN IV Xác định độ ẩm, độ tro, định lưcợng chất chiết dược liệu - Định tính sơ phản ứng hóa học: Dựa vào giáo trình thực tập Dược liệu môn Dược liệu Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh (1) - Chiết xuất mai hoa băng phiến từ dược liệu tươi chưng cất tinh dầu Clavenger Xác định thành phần mai hoa băng phiến GC/MS - Chiết xuất phân lập hợp chất tinh khiết: Tiến hành chiết xuất cao toàn phần từ dược liệu Cao toàn phần lắc phân bố lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực khác Phân lập flavonoid sắc ký cột với hệ dung môi thăm dò sắc ký lớp mỏng Tinh chế chất phân lập kết tinh lại với dung môi phù hợp Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Đặc điểm hình thái Đại bi thân cỏ, cao 1-2 m, thân có nhiều khía rãnh chạy dọc, có mang nhiều cành, nhiều lơng Lá: mọc so le, hình bầu dục, mũi mác, mặt có lơng màu xanh thẫm, mặt trắng nhạt, mép gần nguyên hay xẻ thành cưa Cụm hoa màu vàng, mọc thành chùy ngủ kẽ hay đầu cành Quả bế, có cành dài 1mm mang chùm lông đỉnh Đặc điểm vi học Vi phẫu thân: Mặt cắt ngang vi phẫu có hình tròn Lơng che chở đa bào, lơng tiết đầu đa bào, chân ngắn đa bào 2-3 lớp mơ dày góc nằm tế bào biểu bì Mơ mềm vỏ đều, 4-5 lớp tế bào, rải rác mô mềm vỏ ống tiết tinh dầu Hệ thống dẫn tạo thành vòng liên tục, libe ngồi, gỗ Bao quanh hệ thống dẫn tế bào hóa mô cứng Vi phẫu lá: Cuống lá: Cong lồi mặt dưới, mặt phẳng có tai nhỏ hai bên Biểu bì lớp tế bào hình chữ nhật hay tròn khơng đều, lớp cutin cưa mỏng, lỗ khí rải rác, nhiều lơng che chở lơng tiết đa bào có cấu trúc giống thân Mơ dày góc biểu bì nhiều biểu bì dưới, 3-7 lớp tế bào hình đa giác, kích thước khơng Tế bào libe hình đa giác nhỏ, xếp lộn xộn thành đám Mạch gỗ hình tròn đa giác gần tròn, kích thước khơng đều, xếp lộn xộn xen kẽ với tế bào mô mềm Gân giữa: Mặt lồi cao đỉnh, mặt phình tròn thắt hai bên phiến lá, đơi có gờ lồi phụ Tế bào biểu bì hình bầu dục hay chữ nhật kích thước khơng đều, lớp cutin cưa, lỗ khí rải rác Tế bào mơ mềm khuyết to gấp 3-5 tế bào biểu bì Mạch gỗ tròn hay đa 215 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ Số * 2012 Nghiên cứu Y học giác Libe gồm 5-8 lớp tế bào hình đa giác, kích thước nhỏ, xếp lộn xộn Phiến lá: Biểu bì tế bào hình bầu dục kích thước khơng đều; biểu bì tế bào nhỏ biểu bì gấp nhiều lần Cả biểu bì có lỗ khí , nhiều lơng che chở lông tiết đa bào Mô mềm giậu ăn sâu vào phần gân Tế bào mô mềm khuyết hình đa giác gần tròn xếp tạo khuyết rộng nối từ mơ mềm giậu đến biểu bì Mảnh bần Mạch xoắn Hình 2: Đặc điểm bột dược liệu Đại bi Hóa học Độ ẩm dược liệu 11,87 %Tro tồn phần 11,5 %Tro khơng tan acid hydrocloric 2,63 %Hàm lượng chất chiết dược liệu Đại bi theo phương pháp chiết nguội với dung mơi ethanol 96% 10,02 % Qua định tính sơ cho thấy Đại bi chứa flavonoid, tinh dầu, triterpenoid, coumarin, tannin, saponin, chất khử, hợp chất polyuronic Chiết xuất mai hoa băng phiến Vi phẫu thân Lông che chở đa bào Lơng tiết tinh dầu Hình 1: Vi phẫu thân Đại bi Đặc điểm bột dược liệu Bột thân màu lục xám, mùi thơm Thành phần gồm: mảnh bần, mảnh mạch chấm đồng tiền, mạch xoắn, mạch vạch Dược liệu Đại bi tươi rửa sạch, cắt nhỏ, cho vào hệ thống chiết tinh dầu cất kéo theo nước (Bộ Clavenger) Tinh dầu Đại bi bay ngưng tụ dạng rắn thành ống sinh hàn Kết thu chất bột rắn màu trắng có mùi thơm gọi mai hoa băng phiến Bột hút ẩm gửi mẫu phân tích thành phần tinh dầu sắc kí khí GC/MS Trung tâm dịch vụ phân tích thí nghiệm, Sở Khoa học cơng nghệ thành phố Hồ Chí Minh, Số Nguyễn Văn Thủ, Quận 1, TP Hồ Chí Minh Kết cho thấy mai hoa băng phiến chiết xuất từ Đại bi có thành phần Camphor Borneol với tỷ lệ phần trăm sau: No Mạch vạch Mạch chấm đồng tiền Scan 637 672 Name Camphor Borneol % 76,04 23,96 Chiết xuất phân lập hợp chất Dược liệu (3kg) chiết xuất phương pháp ngấm kiệt cổ điển với cồn 70% Dịch cồn (20 l) cô thu hồi dung môi để cao nước lỏng (5 l) Cao bảo quản tủ lạnh Khi để lạnh chất nhầy, diệp lục lắng đọng nằm đáy 216 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền ... liệu học có khả điều trị bệnh gout(4, 5) Vì Trang thiết bị nghiên cứu chúng tơi tiến hành thực đề tài: Khảo sát thực vật học thành phần hóa học Đại bi (Blumea balsamifera) ” với nội dung sau: - Khảo. .. với nội dung sau: - Khảo sát mặt thực vật học Đại bi - Phân tích sơ thành phần hóa thực vật Đại bi - Chiết xuất mai hoa băng phiến phân lập số hợp chất tinh khiết từ Đại bi ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP... Y học Phương pháp thực nghiệm KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Phương pháp khảo sát thực vật học Mơ tả định danh: Dựa vào hình dạng bên ngồi mẫu khơ mẫu tươi đồng thời sử dụng tài liệu mơ tả hình thái thực