KHẢO sát THÀNH PHẦN hóa học cây đại BI (BLUMEA BALSAMIFERA) họ cúc (ASTERACEAE)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN -o0o - NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY ĐẠI BI (BLUMEA BALSAMIFERA) HỌ CÚC (ASTERACEAE) Chuyên ngành: Hóa Lý Thuyết Hóa Lý Mã số: 604431 LUẬN VĂN THẠC SỸ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ THANH MAI Tp.Hồ Chí Minh – 2010 Con xin chân thành cảm ơn Bố, Mẹ sinh ra, nuôi nấng, dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi để theo đuổi hoàn thành khóa học Đặc biệt xin kính tặng thành cho Mẹ con, Mẹ giúp đỡ, lo lắng cho nhiều suốt thời gian học kể lúc làm, lập gia đình riêng Xin cảm ơn công ơn sinh thành nuôi dưỡng Bố Mẹ Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến hai cô hướng dẫn, Cô Nguyễn Thị Thanh Mai Cô Nguyễn Anh Thy tận tình dẫn, giúp đỡ em nhiều vật chất, tinh thần, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu cho em Xin chân thành cảm ơn Thầy Nguyễn Trung Nhân giúp đỡ, bảo, đóng góp nhiều ý kiến để hoàn thiện luận văn, cảm ơn Thầy cho em mượn dụng cụ suốt trình làm thực nghiệm Trong trình làm đề tài em nhận nhiều giúp đỡ Thầy Cô khoa hóa môn hóa lý Xin cảm ơn Thầy Tôn Thất Quang bảo kinh nghiệm giải phổ Cảm ơn Cô Hồ Thị Cẩm Hoài tạo nhiều điều kiện thuận lợi trình em làm thực nghiệm phòng Hóa Lý Hữu Cơ Xin gửi lời cảm ơn đến lãnh đạo trường CĐ GTVT III, nơi công tác, hỗ trợ mặt vật chất, cảm ơn thầy cô, đồng nghiệp khoa - sở tạo nhiều điều kiện thuận lợi thời gian, động viên ủng hộ tinh thần nhiều Cảm ơn em Nguyễn Xuân Hải, Vũ Năng An qua lại giúp đỡ suốt thời gian làm luận văn Xin cảm ơn em gái động viên, giúp đỡ chị nhiều.Và sau xin dành lời cảm ơn đến người Thầy, người bạn đời (giờ học xa) giúp tìm kiếm tài liệu có dẫn quý báu việc hoàn thành luận văn MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Mô tả thực vật 1.1.3 Phân bố sinh thái 1.1.4 Tính vị công 1.2 Một số nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học 1.3 Hoạt tính ức chế enzym XO (Xanthine oxidase) 16 1.3.1 Enzym XO 16 1.3.2 Vai trò enzym XO bệnh gút bệnh lý khác 16 1.3.3 Triệu chứng bệnh gút 18 1.3.4 Điều trị bệnh gút 19 NGHIÊN CỨU 21 2.1 Giới thiệu chung 21 2.2 Biện luận kết 21 2.2.1 Khảo sát phổ hợp chất (1) 23 2.2.2 Khảo sát phổ hợp chất (2) 27 2.2.3 Khảo sát phổ hợp chất (3) 30 2.2.4 Khảo sát phổ hợp chất (4) 34 2.2.5 Khảo sát phổ hợp chất (5) 37 2.2.6 Khảo sát phổ hợp chất (6) 40 2.2.7 Khảo sát phổ hợp chất (7) 44 2.3 Kết thử hoạt tính enzym XO 47 2.3.1 Hoạt tính ức chế enzym XO mẫu cao thô 47 2.3.2 Hoạt tính ức chế enzym XO phân đoạn từ cao EtOAc 48 2.3.3 Hoạt tính ức chế enzym XO phân đoạn từ cao CHCl3 49 2.3.4 Hoạt tính ức chế enzym XO hợp chất cô lập 50 THỰC NGHIỆM 53 3.1 Điều kiện thực nghiệm 53 3.2 Ly trích cao thô 54 3.3 Quá trình cô lập 56 3.3.1 Cao CHCl3 56 3.3.2 Cao EtOAc 58 3.4 Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym XO 60 3.4.1 Nguyên tắc 60 3.4.2 Chuẩn bị hóa chất 60 3.4.3 Chuẩn bị mẫu 62 3.4.4 IC50 cách xác định 62 KẾT LUẬN .64 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT s : Singlet, mũi đơn d : Doublet, mũi đôi dd : Doublet of doublet, mũi đôi đôi J : Coupling constant, số ghép spin SKC : Sắc ký cột NMR : Nuclear Magnetic Resonance (cộng hưởng từ hạt nhân) DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation BHA : Butylated hydroxyanisole BHT : Butylated hydroxytoluene DPPH : 2,2-Diphenyl-1- picryhydrazyl CHCl3 : Cloroform MeOH : Metanol DMSO : Dimetyl sulfoxid EtOAc : Etyl acetat ROIs : Reactive oxygen intermediates XO : Xanthine Oxidase I : Inhibitory (ức chế) IC50 : Inhibitory concentration (nồng độ ức chế 50%) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1- Thành phần hóa học đại bi 15 Bảng 2.1 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (1) dung môi DMSO-d6 25 Bảng 2.2 - So sánh phổ 13C-NMR hợp chất (1) dung môi DMSO-d6 hợp chất quercetin 3,7,3’- trimetyl eter dung môi DMSO-d6 26 Bảng 2.3 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (2) dung môi CDCl3 CD3OD 28 Bảng 2.4 - So sánh phổ 1H-NMR hợp chất (2) dung môi CDCl3 CD3OD hợp chất quercetin-3,3’,4’-trimetyl eter dung môi CCl4 C6D6 29 Bảng 2.5 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (3) dung môi DMSO-d6 32 Bảng 2.6 - So sánh phổ 1H-NMR 13 C-NMR hợp chất (3) dung môi DMSO-d6 hợp chất 5,7,3’,5’-tetrahydroxyflavanon dung môi DMSO-d6 33 Bảng 2.7 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (4) dung môi CDCl3 CD3OD 35 Bảng 2.8 - So sánh phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (4) dung môi CDCl3 CD3OD hợp chất dihydroquercetin-7,4’-dimetyl eter dung môi DMSO-d6 36 Bảng 2.9 - Số liệu phổ 1H-NMR (400 MHz), 13 C-NMR (100 MHz) tương quan HMBC hợp chất (5) dung môi DMSO-d6 38 Bảng 2.10 - So sánh phổ 13C-NMR hợp chất (5) dung môi DMSO-d6 hợp chất dihydroquercetin dung môi DMSO-d6 39 Bảng 2.11 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (6) dung môi CDCl3 CD3OD 42 Bảng 2.12 - So sánh phổ 1H-NMR 13 C-NMR hợp chất (6) dung môi CDCl3 CD3OD hợp chất (2R,3R)-4’-O-metyldihydroquercetin dung môi aceton - d6 43 Bảng 2.13 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (7) dung môi CDCl3 CD3OD 45 Bảng 2.14 - Kết hoạt tính ức chế enzym XO mẫu cao thô 47 Bảng 2.15 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO từ phân đoạn cao EtOAc 48 Bảng 2.16 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO từ phân đoạn cao CHCl3 49 Bảng 2.17 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO hợp chất (3), (4), (6) (7) 51 Bảng 2.18 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO hợp chất (6) (7) 51 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 - Cây đại bi Hình 1.2 - Hoa đại bi Hình 1.3 - Công thức cấu tạo cryptomeridiol Hình 1.4 - Công thức cấu tạo sesquiterpen Hình 1.5 - Công thức cấu tạo 5-hydroxy-7-metoxychromon Hình 1.6 - Công thức cấu tạo 5-hydroxy-3,7,3’,4’-tetrametoxyflavon Hình 1.7 - Công thức cấu tạo (2R,3R)-3,5,3’-trihydroxy-7,4’- dimetoxydihydroflavonol Hình 1.8 - Công thức cấu tạo 3-O-7’’-biluteolin Hình 1.9 - Công thức cấu tạo dihydroflavonol 11 Hình 1.10 - Công thức cấu tạo ester sesquiterpenoid 13 Hình 1.11- Các flavonoid cô lập từ đại bi giá trị IC50 chúng 14 Hình 1.12 - Công thức cấu tạo luteolin 14 Hình 1.13 - Tinh thể urat đóng khớp xương người mắc bệnh gút 19 Hình 1.14 - Tổn thương tay người mắc bệnh gút 19 Hình 2.1 - Công thức cấu tạo hợp chất (1) 23 Hình 2.2 - Một số tương quan HMBC hợp chất (1) 24 Hình 2.3 - Công thức cấu tạo hợp chất (2) 27 Hình 2.4 - Một số tương quan HMBC hợp chất (2) 28 Hình 2.5 - Công thức cấu tạo hợp chất (3) 30 Hình 2.6 - Hóa học lập thể C-2 C-3 hợp chất (3) 31 Hình 2.7 - Một số tương quan HMBC hợp chất (3) 32 Hình 2.8 - Công thức cấu tạo hợp chất (4) 34 Hình 2.9 - Một số tương quan HMBC hợp chất (4) 35 Hình 2.10 - Công thức cấu tạo hợp chất (5) 37 Hình 2.11 - Một số tương quan HMBC hợp chất (5) 38 Hình 2.12 - Công thức cấu tạo hợp chất (6) 40 Hình 2.13 - Hóa học lập thể C-2 C-3 hợp chất (6) 41 Hình 2.14 - Một số tương quan HMBC hợp chất (6) 41 Hình 2.15 - Công thức cấu tạo hợp chất (7) 44 Hình 2.16 - Hóa học lập thể C-2 C-3 hợp chất (7) 45 Hình 2.17- Một số tương quan HMBC hợp chất (7) 46 Hình 2.18 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ cao 47 Hình 2.19 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ phân đoạn F2, F3, F4, F5 F6 từ cao EtOAc 49 Hình 2.20 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ phân đoạn F2, F3 F4 từ cao CHCl3 50 Hình 2.21 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ hợp chất (3), (4), (6) (7) 52 Hình 3.1 - Phản ứng tạo acid uric 60 Hình 3.2 - Công thức cấu tạo allopurinol 62 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 - Quá trình oxy hóa hypoxanthine xanthine xúc tác XO 16 Sơ đồ 1.2 - Tác nhân oxy hóa trung gian (ROIs) công lên phân tử sinh học 17 Sơ đồ 3.1 - Quy trình ly trích cao từ đại bi 55 Sơ đồ 3.2 - Quy trình cô lập hợp chất (1) (2) từ cao CHCl3 57 Sơ đồ 3.3 - Quy trình cô lập hợp chất (4 ) từ cao CHCl3 58 Sơ đồ 3.4 - Quy trình cô lập hợp chất (3), (6), (7) từ cao EtOAc 59 Sơ đồ 3.5 - Quy trình cô lập hợp chất (5) từ cao EtOAc 59 Sơ đồ 3.6 - Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym XO 61 Phụ lục 31- Phổ HMBC hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 30 - Phổ HSQC hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 27 - Phổ 1H-NMR hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 29 - Phổ 13C DEPT hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 28 - Phổ 13C-NMR hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 36 - Phổ HMBC hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 35 - Phổ HSQC hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 34 - Phổ 13C DEPT hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 33 - Phổ 13C-NMR hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 32 - Phổ 1H-NMR hợp chất (7) CDCl3-CD3OD ... sâu nước 26 Khảo sát thành phần hóa học đại bi (Blumea balsamifera), họ cúc (Asteraceae) NGHIÊN CỨU 2.1 Giới thiệu chung Trong luận văn tiến hành khảo sát thành phần hóa học đại bi thu hái Đà... nhà khoa học không ngừng khảo sát nghiên cứu thành phần hoá học nguồn tài nguyên thiên nhiên quý giá này, nhằm tìm tòi phát tính ứng dụng y học Cây đại bi (Blumea balsamifera) từ lâu bi t đến... Quercetin-3,3’,4’-trimetyl eter (2) 21 GVHD: TS Nguyễn Thị Thanh Mai Khảo sát thành phần hóa học đại bi (Blumea balsamifera), họ cúc (Asteraceae) OH OH OCH3 3' 3' 4' HO O 10 1' 5' OH H3CO O 10 5 OH