Khảo sát thành phần hoá học cây đại bi (blumea balsamifera) họ cúc (asteraceae)

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Mô tả thực vật 1.1.3 Phân bố sinh thái 1.1.4 Tính vị cơng 1.2 Một số nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học 1.3 Hoạt tính ức chế enzym XO (Xanthine oxidase) 16 1.3.1 Enzym XO 16 1.3.2 Vai trò enzym XO bệnh gút bệnh lý khác 16 1.3.3 Triệu chứng bệnh gút 18 1.3.4 Điều trị bệnh gút 19 NGHIÊN CỨU 21 2.1 Giới thiệu chung 21 2.2 Biện luận kết 21 2.2.1 Khảo sát phổ hợp chất (1) 23 2.2.2 Khảo sát phổ hợp chất (2) 27 2.2.3 Khảo sát phổ hợp chất (3) 30 2.2.4 Khảo sát phổ hợp chất (4) 34 2.2.5 Khảo sát phổ hợp chất (5) 37 2.2.6 Khảo sát phổ hợp chất (6) 40 2.2.7 Khảo sát phổ hợp chất (7) 44 2.3 Kết thử hoạt tính enzym XO 47 2.3.1 Hoạt tính ức chế enzym XO mẫu cao thơ 47 2.3.2 Hoạt tính ức chế enzym XO phân đoạn từ cao EtOAc 48 2.3.3 Hoạt tính ức chế enzym XO phân đoạn từ cao CHCl3 49 2.3.4 Hoạt tính ức chế enzym XO hợp chất cô lập 50 THỰC NGHIỆM 53 3.1 Điều kiện thực nghiệm 53 3.2 Ly trích cao thơ 54 3.3 Q trình lập 56 3.3.1 Cao CHCl3 56 3.3.2 Cao EtOAc 58 3.4 Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym XO 60 3.4.1 Nguyên tắc 60 3.4.2 Chuẩn bị hóa chất 60 3.4.3 Chuẩn bị mẫu 62 3.4.4 IC50 cách xác định 62 KẾT LUẬN .64 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT s : Singlet, mũi đơn d : Doublet, mũi đôi dd : Doublet of doublet, mũi đôi đôi J : Coupling constant, số ghép spin SKC : Sắc ký cột NMR : Nuclear Magnetic Resonance (cộng hưởng từ hạt nhân) DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation BHA : Butylated hydroxyanisole BHT : Butylated hydroxytoluene DPPH : 2,2-Diphenyl-1- picryhydrazyl CHCl3 : Cloroform MeOH : Metanol DMSO : Dimetyl sulfoxid EtOAc : Etyl acetat ROIs : Reactive oxygen intermediates XO : Xanthine Oxidase I : Inhibitory (ức chế) IC50 : Inhibitory concentration (nồng độ ức chế 50%) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1- Thành phần hóa học đại bi 15 Bảng 2.1 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (1) dung môi DMSO-d6 25 Bảng 2.2 - So sánh phổ 13C-NMR hợp chất (1) dung môi DMSO-d6 hợp chất quercetin 3,7,3’- trimetyl eter dung môi DMSO-d6 26 Bảng 2.3 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (2) dung môi CDCl3 CD3OD 28 Bảng 2.4 - So sánh phổ 1H-NMR hợp chất (2) dung môi CDCl3 CD3OD hợp chất quercetin-3,3’,4’-trimetyl eter dung môi CCl4 C6D6 29 Bảng 2.5 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (3) dung môi DMSO-d6 32 Bảng 2.6 - So sánh phổ 1H-NMR 13 C-NMR hợp chất (3) dung môi DMSO-d6 hợp chất 5,7,3’,5’-tetrahydroxyflavanon dung môi DMSO-d6 33 Bảng 2.7 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (4) dung môi CDCl3 CD3OD 35 Bảng 2.8 - So sánh phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (4) dung môi CDCl3 CD3OD hợp chất dihydroquercetin-7,4’-dimetyl eter dung môi DMSO-d6 36 Bảng 2.9 - Số liệu phổ 1H-NMR (400 MHz), 13 C-NMR (100 MHz) tương quan HMBC hợp chất (5) dung môi DMSO-d6 38 Bảng 2.10 - So sánh phổ 13C-NMR hợp chất (5) dung môi DMSO-d6 hợp chất dihydroquercetin dung môi DMSO-d6 39 Bảng 2.11 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (6) dung môi CDCl3 CD3OD 42 Bảng 2.12 - So sánh phổ 1H-NMR 13 C-NMR hợp chất (6) dung môi CDCl3 CD3OD hợp chất (2R,3R)-4’-O-metyldihydroquercetin dung môi aceton - d6 43 Bảng 2.13 - Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz), 13 C-NMR (125 MHz) tương quan HMBC hợp chất (7) dung môi CDCl3 CD3OD 45 Bảng 2.14 - Kết hoạt tính ức chế enzym XO mẫu cao thô 47 Bảng 2.15 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO từ phân đoạn cao EtOAc 48 Bảng 2.16 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO từ phân đoạn cao CHCl3 49 Bảng 2.17 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO hợp chất (3), (4), (6) (7) 51 Bảng 2.18 - Kết thử hoạt tính ức chế enzym XO hợp chất (6) (7) 51 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 - Cây đại bi Hình 1.2 - Hoa đại bi Hình 1.3 - Cơng thức cấu tạo cryptomeridiol Hình 1.4 - Cơng thức cấu tạo sesquiterpen Hình 1.5 - Công thức cấu tạo 5-hydroxy-7-metoxychromon Hình 1.6 - Cơng thức cấu tạo 5-hydroxy-3,7,3’,4’-tetrametoxyflavon Hình 1.7 - Cơng thức cấu tạo (2R,3R)-3,5,3’-trihydroxy-7,4’- dimetoxydihydroflavonol Hình 1.8 - Cơng thức cấu tạo 3-O-7’’-biluteolin Hình 1.9 - Công thức cấu tạo dihydroflavonol 11 Hình 1.10 - Cơng thức cấu tạo ester sesquiterpenoid 13 Hình 1.11- Các flavonoid cô lập từ đại bi giá trị IC50 chúng 14 Hình 1.12 - Công thức cấu tạo luteolin 14 Hình 1.13 - Tinh thể urat đóng khớp xương người mắc bệnh gút 19 Hình 1.14 - Tổn thương tay người mắc bệnh gút 19 Hình 2.1 - Cơng thức cấu tạo hợp chất (1) 23 Hình 2.2 - Một số tương quan HMBC hợp chất (1) 24 Hình 2.3 - Công thức cấu tạo hợp chất (2) 27 Hình 2.4 - Một số tương quan HMBC hợp chất (2) 28 Hình 2.5 - Cơng thức cấu tạo hợp chất (3) 30 Hình 2.6 - Hóa học lập thể C-2 C-3 hợp chất (3) 31 Hình 2.7 - Một số tương quan HMBC hợp chất (3) 32 Hình 2.8 - Cơng thức cấu tạo hợp chất (4) 34 Hình 2.9 - Một số tương quan HMBC hợp chất (4) 35 Hình 2.10 - Cơng thức cấu tạo hợp chất (5) 37 Hình 2.11 - Một số tương quan HMBC hợp chất (5) 38 Hình 2.12 - Cơng thức cấu tạo hợp chất (6) 40 Hình 2.13 - Hóa học lập thể C-2 C-3 hợp chất (6) 41 Hình 2.14 - Một số tương quan HMBC hợp chất (6) 41 Hình 2.15 - Cơng thức cấu tạo hợp chất (7) 44 Hình 2.16 - Hóa học lập thể C-2 C-3 hợp chất (7) 45 Hình 2.17- Một số tương quan HMBC hợp chất (7) 46 Hình 2.18 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ cao 47 Hình 2.19 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ phân đoạn F2, F3, F4, F5 F6 từ cao EtOAc 49 Hình 2.20 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ phân đoạn F2, F3 F4 từ cao CHCl3 50 Hình 2.21 - Đồ thị biểu diễn phần trăm ức chế (%I) enzym XO theo nồng độ hợp chất (3), (4), (6) (7) 52 Hình 3.1 - Phản ứng tạo acid uric 60 Hình 3.2 - Cơng thức cấu tạo allopurinol 62 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 - Q trình oxy hóa hypoxanthine xanthine xúc tác XO 16 Sơ đồ 1.2 - Tác nhân oxy hóa trung gian (ROIs) cơng lên phân tử sinh học 17 Sơ đồ 3.1 - Quy trình ly trích cao từ đại bi 55 Sơ đồ 3.2 - Quy trình lập hợp chất (1) (2) từ cao CHCl3 57 Sơ đồ 3.3 - Quy trình lập hợp chất (4 ) từ cao CHCl3 58 Sơ đồ 3.4 - Quy trình lập hợp chất (3), (6), (7) từ cao EtOAc 59 Sơ đồ 3.5 - Quy trình lập hợp chất (5) từ cao EtOAc 59 Sơ đồ 3.6 - Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym XO 61 Khảo sát thành phần hóa học đại bi (Blumea balsamifera), họ cúc (Asteraceae) TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật 1.1.1 Tên gọi Đại bi có tên khoa học Blumea balsamifera (L.) DC, thuộc họ Cúc (Asteraceae) Ở Việt Nam, đại bi cịn có nhiều tên khác tùy thuộc vào vùng miền: băng phiến, hoa mai băng phiến, mai phiến, long não hương, mai hoa não, đại ngải, ngải phiến, từ bi xanh, từ bi (miền Nam), bỏ nạt, co nát (Thái), phặc phà (Tày) Ở nước ngoài, đại bi biết đến với tên: Sambong (Philippin), Ngai-comphor (Anh), camphrée (Pháp) [1-3, 28] 1.1.2 Mô tả thực vật Đại bi nhỏ, cao từ 1-2 m, thân có khía rãnh phân cành Lá mọc so le, phiến hình bầu dục, dài 8-30 cm, rộng 3-6 cm, gân chằng chịt thành mạng lưới rõ hai mặt lá, mặt có màu lục sẫm có lơng, mặt có màu trắng nhạt có lơng nhạt Mép gần nguyên hay xẻ thành cưa gốc thường có 2, hay thùy nhỏ phiến bị xẻ q sâu (hình 1.1) Vị ta thấy mùi thơm dễ chịu băng phiến.[1-3] Cụm hoa gồm nhiều đầu màu vàng, hoa có nhiều lông tơ, họp thành ngù kẽ đầu cành, đầu có đường kính 8-10 mm, có cuống ngắn, bắc xếp thành nhiều hàng, không nhau, đầu có nhiều hoa xung quanh, phần hoa lưỡng tính, mào lơng có màu gỉ sắt, tràng hoa hình ống có răng, tràng hoa lưỡng tính gần có hình trụ, răng, nhị, bầu hình trụ, có lơng (hình 1.2)[1-3] Quả bế, có chùm lơng đỉnh Tồn có lông trắng mềm thơm long não [1-3] Mùa hoa vào tháng 3-5 [1-3] HVCH: Nguyễn Thị Mai Hương GVHD: TS Nguyễn Thị Thanh Mai Khảo sát thành phần hóa học đại bi (Blumea balsamifera), họ cúc (Asteraceae) Hình 1.1 - Cây đại bi HVCH: Nguyễn Thị Mai Hương GVHD: TS Nguyễn Thị Thanh Mai Phụ lục 31- Phổ HMBC hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 30 - Phổ HSQC hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 27 - Phổ 1H-NMR hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 29 - Phổ 13C DEPT hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 28 - Phổ 13C-NMR hợp chất (6) CDCl3-CD3OD Phụ lục 36 - Phổ HMBC hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 35 - Phổ HSQC hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 34 - Phổ 13C DEPT hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 33 - Phổ 13C-NMR hợp chất (7) CDCl3-CD3OD Phụ lục 32 - Phổ 1H-NMR hợp chất (7) CDCl3-CD3OD ... Mai Khảo sát thành phần hóa học đại bi (Blumea balsamifera), họ cúc (Asteraceae) Hình 1.1 - Cây đại bi HVCH: Nguyễn Thị Mai Hương GVHD: TS Nguyễn Thị Thanh Mai Khảo sát thành phần hóa học đại bi. .. bi (Blumea balsamifera), họ cúc (Asteraceae) Năm 2009, thành phần hóa học đại bi nhà khoa học Bangladesh phân tích cho kết bảng 1.1.[8] Bảng 1.1- Thành phần hóa học đại bi STT Thành phần hóa học. .. khoa học thuộc trường đại học dược trường đại học hóa Malaysia tiến hành khảo sát thành HVCH: Nguyễn Thị Mai Hương GVHD: TS Nguyễn Thị Thanh Mai Khảo sát thành phần hóa học đại bi (Blumea balsamifera),