Xây dựng quy trình multiplex PCR định týp gen VacA và CagA trên mẫu mô sinh thiết ung thư dạ dày

Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm xây dựng quy trình Multiplex PCR nhằm xác định nhanh đồng thời các týp gen vacA và cagA của helicobacter pylori từ mẫu mô sinh thiết ung thư dạ dày. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.

XÂY DỰNG QUY TRÌNH MULTIPLEX PCR ĐỊNH TÝP GEN vacA VÀ cagA TRÊN MẪU MÔ SINH THIẾT UNG THƯ DẠ DÀY Lê Thị Thanh Bình*, Trần Thiện Trung** TĨM TẮT Đặt vấn ñề: ung thư dày bệnh gây tử vong ñứng hàng thứ II giới sau ung thư phổi Helicobacter pylori (H pylori) ñược Viện Nghiên Cứu Ung Thư Quốc Tế xếp loại tác nhân loại I gây UTDD vào năm 1994 dựa hai protein gây độc VacA CagA Mục tiêu: xây dựng quy trình Multiplex PCR nhằm xác ñịnh nhanh ñồng thời týp gen vacA cagA Helicobacter pylori từ mẫu mô sinh thiết ung thư dày Phương pháp: đun mơ sinh thiết dung dịch đệm PBS, tối ưu chương trình nhiệt thành phản ứng cho quy trình Multiplex PCR, điện di, giải trình tự, đo độ nhạy quy trình, so sánh kết quy trình với hai tiêu chuẩn vàng CLOtest Chẩn đốn mơ bệnh học (Giải phẫu bệnh) Kết quả: xây dựng thành cơng quy trình có ñộ nhạy ñộ ñặc hiệu hoàn toàn phù hợp với kết CLOtest, chẩn đốn mơ bệnh, kết giải trình tự kết nghiên cứu tác giả nước Kết luận: quy trình đưa vào ứng dụng để xác định kiểu gen vacA cagA Helicobacter pylori bệnh nhân ung thư dày bệnh nhân bị viêm loét dày tá tràng ñể phân loại nhóm nguy cao nguy thấp Từ ñưa chiến lược tầm soát ñiều trị H pylori triệt để góp phần dự phòng UTDD Từ khóa: Helicobacter pylori, ung thư dày, quy trình Multiplex PCR ABSTRACT ESTABLISHING A MULTIPLEX PCR FOR GENOTYPING OF vagA AND cagA GENES OF HELICOBACTER PYLORI FROM GASTRIC CANCER BIOPSY SAMPLES Le Thi Thanh Binh, Tran Thien Trung Background: gastric cancer (stomach cancer) is the second most common cause of death worldwide behind cancer of the lung Helicobacter pylori has been as a class I carcinogen by the International Agency for Research on Cancer 1994 through VacA and CagA proteins Objective: establishing a multiplex PCR for identification of the vagA and the cagA genes of Helicobacter pylori from gastric cancer biopsies Methods: from 88 biopsy samples of 44 pattients with gastric cancer, boiling of biopsy samples in sterile PBS buffer, optimization of multiplex PCR cycling conditions and of Multiplex reaction components, centrifugation followed by PCR assay, sequencing PCR products, and comparing results of PCR with two gold standard CLOtest and histology * Bệnh viện Từ Dũ Liên hệ: Bs Lê Thị Thanh Bình- ĐT: 0909519398 Email: lebinh.genetic@gmail.com ** Đại học Y Dược TPHCM Results: process gains specificity and the sensittivity suiting the results of CLOtest, histology, sequencing, studying of authors in country and in the world Conclution: This Multiplex PCR assay could apply to determine vacA and cagA of H pylori from biopsy specimens of gastric cancer, gastritis or peptic ulcer patients to class high risk and low risk groups From the results, clinicals could establish a strategy for screening and eradicating absolutely H pylori to prevent gastric cancer Keywords: Helicobacter pylori, Gastric cancer, multiplex PCR ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư dày (UTDD) dạng ung thư phổ biến gây tử vong ñứng hàng thứ II giới sau ung thư phổi Ung thư dày phát triển chậm qua nhiều năm, tỷ lệ sống sót thấp nguyên nhân phần lớn bệnh thường ñược chẩn ñoán muộn nên khả ñiều trị triệt ñể thấp giai đoạn sớm có khơng có triệu chứng ñặc hiệu Theo thống kê dịch tễ học kết cơng trình nghiên cứu nay, nhiễm Helicobacter pylori (H pylori) ñược xem nguyên nhân quan trọng dẫn ñến UTDD dựa hai protein gây độc H pylori CagA VacA Hai vùng gen mã hóa cho hai protein hai vùng gen đa hình tạo nên chủng H pylori có độc lực khác Theo Xiang cs (1995), H pylori ñược chia thành týp: týp bao gồm chủng H pylori có độc lực mang kiểu gen s1m1cagA+, s1m2cagA+ ; týp gồm chủng H pylori khơng có độc lực mang kiểu gen s2m2cagA- [17] Từ tính độc lực khác dẫn ñến mức ñộ bệnh khác dày - tá tràng viêm dày, loét dày tá tràng ung thư dày Như thấy việc tầm sốt điều trị triệt để H pylori biện pháp dự phòng cho ung thư dày Phương pháp sinh học phân tử phương pháp giúp xác định xác kiểu gen H pylori thuộc nhóm nguy cao hay nguy thấp gây UTDD Chúng xây dựng quy trình Multiplex PCR với mục tiêu xác ñịnh nhanh ñồng thời týp gene vacA cagA H pylori phản ứng từ mẫu sinh thiết bệnh nhân bị ung thư dày cho xác hiệu kinh tế VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Chọn mẫu bệnh phẩm : mẫu mơ sinh thiết dày lấy kỹ thuật nội soi từ 44 bệnh nhân bị ung thư dày vị trí mơ lành mơ bệnh hang vị dày làm lúc xét nghiệm chẩn đốn H pylori : CLO test (test urease), Chẩn đốn mơ học (giải phẫu bệnh) chẩn đốn PCR Nguồn thu mẫu : bệnh viện Đại học Y Dược TPHCM Trữ mơ nhiệt độ – 200C Mồi: sử dụng cặp mồi ñặc hiệu H pylori CAGA, Va1 VAG từ cơng trình nghiên cứu Yamaoka cs (1999), Cover cs (1994) Atherton cs (1995); cặp mồi chứng nội hGSTP từ cơng trình Menegon cs (1998) Kiểm tra tính khơng bắt cặp bổ sung ñộ ñặc hiệu cặp mồi phần mềm chuyên dụng Các cặp mồi tổng hợp từ cơng ty IDT (Hoa Kỳ) [1,5,10,18] Chứng nội dương tính chứng minh khâu tách chiết khuếch đại độ nhạy khơng bị ức chế [16] DNA mẫu mơ : thu nhận từ mẫu mơ đun dung dịch đệm PBS vơ trùng Các vật liệu hóa chất khác: thang 100 bp Marker (Bio - Rad), Taq DNA polymerase (Bio - Rad) kèm theo dNTPs, PCR buffer, MgCl2, H2O khử ion hãng; PBS vơ trùng; hóa chất dùng cho điện di cơng ty Khoa Thương cung cấp Quy trình Multiplex PCR : khuếch đại đồng thời nhiều cặp mồi phản ứng Nguyên tắc chuẩn hóa quy trình: (1) chọn chu trình nhiệt cho PCR mồi đơn phù hợp với cặp mồi ñể làm sở cho việc chuẩn hóa quy trình PCR mồi đa Chu trình áp dụng loại máy luân nhiệt; (2) sử dụng cặp mồi nồng ñộ bước đầu tiên, sau dựa vào kết phản ứng cho biết bước cần phải ñiều chỉnh nồng ñộ mồi tham số khác nào; (3) tối ưu thành phần phản ứng thành phần lại ñược giữ cố ñịnh Thành phần mix PCR mồi ñơn ban ñầu: Taq DNA polymerase (1U/25µl); cặp mồi (0,2 µM); MgCl2 (1,5 mM); dNTPs (200 µM/mỗi loại); dung dịch đệm (1X); dH20; DNA khn (5µl) Chương trình nhiệt PCR mồi ñơn ban ñầu: (1) Nhiệt ñộ : nhiệt ñộ biến tính 95 C, nhiệt ñộ lai 520C nhiệt ñộ kéo dài 720C; (2) Chu kỳ nhiệt: chu kỳ ñầu tiên 950C 3phút 30 giây; 35 chu kỳ tiếp theo, chu kỳ gồm : 940C 20 giây, 620C 40 giây, 720C 40 giây; (3) chu kỳ cuối 720C phút Điện di sản phẩm PCR gel agarose 3% với 3µl thang DNA 100bp, 5µl dd nạp mẫu 1X, 9µl sản phẩm PCR, µl ethidium bromide (10mg/ml), hiệu ñiện U= 100Volt 35 - 40 phút Đánh giá ñộ nhạy quy trình: dựa mẫu sinh thiết biết chắn dương tính, đo nồng độ DNA dung dịch, pha lỗng theo log số 10 với nồng độ 100, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 sau xác ñịnh nồng ñộ DNA tối thiểu phản ứng PCR phát H pylori Đánh giá ñộ ñặc hiệu sản phẩm PCR [16]: gửi giải trình tự sản phẩm PCR bệnh nhân CTY Macrogen (Hàn Quốc) Kết ñược giải theo cặp mồi xuôi ngược Đọc kết trình tự cơng cụ Blast NCBI So sánh hiệu chẩn đốn quy trình với kết hai tiêu chuẩn vàng CLO test Chẩn đốn mơ bệnh học [13] KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Khảo sát vị trí mơ Kết khảo sát sơ diện H pylori 32 mẫu bệnh phẩm từ bệnh nhân có kết CLOtest dương tính cho thấy tỷ lệ H pylori dương tính mô lành cao mô bệnh (mô lành 87,5 % mô bệnh 75,0 %) Kết phù hợp với nguyên lý Mobley cs (2001) [15] tính bám dính xâm thực H pylori nhận ñịnh El - Zimaity (2000) [6], Tang YL cs (2005) [14], Chey WD, Wong BCY (2007) [4] Nguyễn Ngọc Huyền (2009) [12] cách chẩn đốn diện H pylori mẫu mơ sinh thiết Vì chúng tơi định chọn mẫu vị trí mơ lành ñể tiếp tục cho quy trình nghiên cứu Hình 1: Kết khảo sát diện H.pylori vị trí mơ lành mơ bệnh có kết CLO test dương tính Sử dụng cặp mồi CAGA để khảo sát Ký hiệu mẫu: 1,2: mơ bệnh; 3,4 : mô lành; cagA 349 bp Khảo sát nồng độ mồi chương trình nhiệt (mẩu DNA ñược dùng tối ưu mẫu ñã ñược giải trình tự có kết hồn tồn đặc hiệu với H pylori) Tiêu chí để chúng tơi khảo sát nhiệt ñộ lai nhiệt ñộ phải phù hợp với cặp mồi H pylori cặp mồi chứng nội hGSTP cho cặp mồi ñạt hiệu khuếch ñại cao phản ứng PCR Đầu tiên chúng tơi khảo sát chương trình nhiệt PCR cặp mồi trước, sau lấy kết vừa khảo sát làm sở để chuẩn hóa chương trình nhiệt cho quy trình Multiplex PCR cặp mồi Chúng tơi đưa nhiều chương trình (khác nhiệt ñộ lai, số chu kỳ luân nhiệt, thời gian biến tính, thời gian lai thời gian kéo dài) Chúng tơi điều chỉnh nhiệt nồng độ mồi theo nhiệt độ lai Cuối chúng tơi tìm chương trình nhiệt chuẩn cho quy trình Multiplex PCR ((hình 2,3) với nhiệt độ lai 620C, nồng độ cặp mồi : VAG 0,2 µM; CAGA 0,2 µM; VA1 0,5 µM; hGSTP 0,4 µM Hình : Kết khảo sát nồng ñộ mồi với nhiệt ñộ lai 610C, 620C, 630C, 650C cho cặp mồi VAG, VA1, CAGA hGSTP bệnh nhân hệ thống Multiplex PCR cặp mồi.; Nồng ñộ hai cặp mồi VAG CAGA 0,2 µM/ cặp mồi; Nồng ñộ hai cặp mồi VA1(s1/s2) hGSTP 0,4 µM / cặp mồi; Mũi tên : vạch band khơng đặc hiệu Hình : Kết khảo sát nồng ñộ mồi với nhiệt ñộ lai 610C, 620C cho cặp mồi VAG, VA1, CAGA hGSTP bệnh nhân hệ thống Multiplex PCR Nồng ñộ hai cặp mồi VAG CAGA 0,2 µM/ cặp mồi; Nồng ñộ cặp mồi VA1 0,5 µM hGSTP 0,4 µM Tối ưu thành phần phản ứng Khảo sát nồng độ Taq DNA polymerase Hình : Khảo sát nồng ñộ Taq DNA polymerase bệnh nhân với nồng ñộ 1U, 2U, 2,5U 3U Kết cho thấy Taq DNA polymerase với nồng ñộ 2U cho phản ứng tối ưu phù hợp với nồng ñộ Taq DNA polymerase thành phần mix multi PCR chúng tơi đưa phù hợp với kết nghiên cứu trước ñây [2,8,9] Như vậy, nồng ñộ Taq DNA polymerase chuẩn 2U Khảo sát số MgCl2 /dNTPs Đây số quan trọng quy trình, định hoạt tính Taq DNA polymerase Ion Mg2+ cofactor Taq DNA polymerase Mg2+ tự gắn vào Taq DNA polymerase giúp Taq pol gắn vào DNA khn, vào mồi, vừa gắn vào dNTPs ñể thực tổng hợp Điều giải thích tăng nồng độ dNTP lên cao, ức chế nhanh phản ứng PCR tăng nồng ñộ MgCl2 lên cao thường tạo hiệu dương tính Tuy nhiên nồng độ MgCl2 q cao ức chế hoạt tính Taq polymerase, làm giảm số lượng sản phẩm mong muốn Giữ nguyên nồng ñộ thành phần khác mix PCR, thay ñổi nồng ñộ MgCl2 dNTPs Kết (hình 6) cho thấy, MgCl2 nồng ñộ 3,5 mM dNTPs nồng ñộ 400 µM cho kết sản phẩm PCR ñặc hiệu, rõ, ñẹp ổn ñịnh so với nồng ñộ khác Kết phù hợp với kết nghiên cứu tác giả Newton CR cs (1997), Grunenwald H (2003) [7,11]; Henegariu O (1997) [9]; Zangenberg G cs (1999) [19] Hình : Kết khảo sát nồng độ MgCl2 với Hình : Kết khảo sát nồng nồng ñộ 1,5mM, 2mM, 2,5mM, 3mM, 3,5mM, ñộ dNTPs với nồng ñộ 200 10,8mM, 20mM µM, 400 µM 800 µM; Mũi tên ñen: băng khơng đặc hiệu Khảo sát nồng độ dung dịch ñệm chất hỗ trợ phản ứng DMSO 5% Nồng ñộ dung dịch ñệm chuẩn cho phản ứng PCR mồi ñơn phụ thuộc vào loại enzyme DNA polymerase sử dụng Đối với Taq polymerase, nồng ñộ ñệm thường 1X (50 mM KCl; 10 mM Tris - HCl pH 8,3 50 mM KCl; 0,001% gelatin) (Cetus buffer) Trong hệ thống multiplex PCR, nồng độ đệm tăng lên 1,6X (Chamberlain cs, 1988) lên ñến 2X (Henegarin cs, 1997) ñể làm tăng hiệu hoạt động Taq polymerase Hình : Kết khảo sát nồng ñộ dung dịch ñệm với giá trị 1X; 1,6X; 2X DMSO 5% Nồng ñộ ñệm hiệu nhiều sử dụng chất hỗ trợ phản ứng DMSO, glycerol, BSA,…[3,8] Kết (hình 7) cho thấy, nồng độ 1X cho kết tốt quy trình chúng tơi Điều cho thấy nồng độ muối dung dịch ñệm ñã ñủ cho phản ứng khuếch ñại hiệu Vai trò DMSO khảo sát khơng làm thay ñổi kết phản ứng Khảo sát ñộ nhạy Theo kết (hình 8): (1) Ngưỡng DNA khn cho chứng nội H pylori thấp mà quy trình phát 10-3 tương đương lượng DNA khn 3,21 ng Đây ñộ nhạy cao Theo Grunenwald (2003), DNA khuôn cần cho phản ứng Multiplex PCR từ - 2500 ng [7] Theo Zangenberg G cs (1999) lượng DNA gen người làm khuôn cần cho phản ứng Multiplex PCR tối ưu từ 10 - 100 ng [19] Hình 8: Khảo sát ñộ nhạy phản ứng với nồng ñộ pha loãng 100, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 Khảo sát ñộ ñặc hiệu sản phẩm PCR Kết giải trình tự, sau phân tích cơng cụ BLAST Ngân hàng liệu gen quốc gia Mỹ NCBI cho thấy sản phẩm hồn tồn đặc hiệu với vi khuẩn Helicobacter pylori Áp dụng quy trình 44 bệnh nhân - Hiệu chẩn đốn quy trình: Tình trạng H pylori Ung thư (n = 44) CLO test CĐMBH PCR + 33 18 28 - 11 26 16 Sự hợp lý kết hợp ñộ nhạy cao CLO test ñộ ñặc hiệu cao Chẩn đốn mơ học thể kết phương pháp PCR sau: kết PCR dương tính tất mẫu có kết CLO test dương tính; PCR âm tính tất mẫu có kết chẩn đốn mơ bệnh học âm tính; mẫu có kết CLO test âm tính mẫu có kết PCR Chẩn đốn mơ học âm tính Vì vậy, nghiên cứu chúng tơi thiết nghĩ dùng kết chẩn đốn mơ bệnh học để kiểm tra âm tính giả PCR, độ nhạy CLO test để kiểm tra kết dương tính giả PCR CLO test Chẩn đốn mơ học "tiêu chuẩn vàng" để kiểm tra tính hiệu phương pháp chẩn đốn KẾT LUẬN Chúng tơi xây dựng thành cơng quy trình Multiplex PCR cặp mồi bao gồm: (1) CAGA F/R nhân phân ñoạn gen cagA (349bp) ; (2) VA1 F/R nhân phân ñoạn gen vacA s1 (259 bp), vacA s2 (286 bp); (3) VAG F/R nhân phân ñoạn gen vacA m1 (567 bp), vacA m2 (642 bp); cặp mồi chứng nội hGSTP nhân phân ñoạn gen hGSTP (192 bp) từ mẫu mô sinh thiết vị trí mơ lành xử lý đun mơ PBS Đây quy trình nghiên cứu Việt Nam mẫu mơ sinh thiết để phát trực tiếp kiểu gen vacA cagA Helicobacter pylori với độ nhạy quy trình 10-3 tương ứng với 3,21ng DNA khn Chưong trình nhiệt quy trình : (1) Nhiệt độ : nhiệt độ biến tính 950C, nhiệt ñộ lai 620C nhiệt ñộ kéo dài 720C; (2) Chu kỳ nhiệt: chu kỳ ñầu tiên 950C 3phút 30 giây; 35 chu kỳ tiếp theo, chu kỳ gồm : 940C 20 giây, 620C 40 giây, 720C 40 giây; chu kỳ cuối 720C phút Thành phần mix PCR: Taq DNA polymerase (2U/25µl); VA1 F/R 0,5 µM; VAG F/R : 0,2 µM; CAGA F/R : 0,2 µM; hGSTP : 0,4 µM; MgCl2 : 3,5 mM; dNTPs : 400 µM/mỗi loại; dung dịch đệm : 1X; dH20; DNA khn : 5µl Quy trình khơng sử dụng hóa chất làm tan mơ tách chiết DNA ñã giảm chi phí thời gian xử lý mẫu nhiều so với phương pháp tách chiết truyền thống Có thể ứng dụng quy trình vào việc tầm soát kiểu gen nguy cao Helicobacter pylori gây UTDD, giúp phát sớm UTDD, làm giảm tỷ lệ tử vong cho bệnh gây cho người bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Atherton JC, Cao P, Peek RM, et al (1995) Mosaicism in vacuolating cytotoxin alleles of Helicobacter pylori Association of specific vacA types with cytotoxin production and peptic ulceration J Biol Chem 270: 17771 - 17777 Chamberlain J S, Chamberlain J R 1994 The Polymerase Chain Reaction (Mullis K, Ferré F, Gibbs R A, Eds.) Chapter Optimization of Mutiplex PCR Birkhauser, Boston Chamberlain JS, Gibbs RA, Ranier JE, Nguyên PN, Caskey CT 1988 Deletion screening of the Duchenne muscular dystrophy locus via multiplex DNA amplification Nucleic Ac Res 16 : 11141 - 11156 Chey WD, Wong BCY (2007) American College of Gastroenterology Guideline on the Management of Helicobacter pylori Infection Am J Gastroenterol 102:1808-1825 Cover TL, Tummuru MKR, Cao P, Tompson SA, and Blaser MJ (1994) Divergence of genetic sequences for the vacuolating cytotoxin among Helicobacter pylori strains J Biol Chem 269:10566-10573 El-Zimaity HM (2000) Accurate diagnosis of Helicobacter pylori with biopsy Gastroenterol Clin N Am 29: 863-869 Grunenwald H (2003) Chapter 20 Optimization of Polymerase Chain Reactions Methods in Molecular Biology, PCR Protocol, Second Edition (Bartlett JMS, Stirling D) Vol 226 : 89 99 Humana Press, USA Henegariu O, Heerema NA, Dlouhy SR, Vance GH, Vogt PH (1997) Multiplex PCR : Critical Parameters and Step - by - step Protocol BioTechniques 23 : 504 - 511 Henegariu O (1997) PCR and Multiplex PCR guide Yale University, USA 10 Menegon A, Board PG, Blackburn AC., et al (1998) Parkinson's disease, pesticides, and glutathione transferasep polymorphisms Lancet 352 (9137): 1344-1346 11 Newton CR, Graham A (1997) PCR Second edition BIOS Scientific UK 12 Nguyễn Ngọc Huyền (2009) Tình hình nhiễm Helicobacter pylori bệnh nhân ung thư dày Hội Nghị Khoa Học Công Nghệ Tuổi Trẻ Các Trường Đại Học Y Dược Việt Nam lần thứ XIII 13 Ogata SK, Kawakami E, Reis FPS 2002 Evaluation of invasive methods to diagnosis Helicobacter pylori infection in children and adolescents with dyspepsia invasive methods to diagnosis Helicobacter pylori infection Medicina, Ribeirao Petro 35: 24 - 29 14 Tang YL, Gan RL, Dong BH, Jiang RC, Tang RJ (2005) Detection and locaiton of Helicobacter pylori in human gastric carcinomas World J Gastrenterol 11(9): 1387 - 1391 15 Testerman TL, McGee DJ, and Mobley HLT (2001) Chapter 34 Adherence and Colonization Part VI Bacterial Virulence and Pathogenic Mechanisms Helicobacter pylori : Physiology and Genetics (Harry L.T Mobley, George L Mendz, and Stuart L Hazell) 16 The World Organisation for Animal Health (OIE) Terrestrial Manual 2008 17 Xiang Z, Censini S, Bayeli PF, et al (1995) Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors in 43 strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that CagA is not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin Infect Immun 63: 94 - 98 18 Yamaoka Y, Kodama T, et al (1999) Relationship between Helicobacter pylori iceA, cagA, and vacA status and clinical outcome: studies in Four different countries J Clin Microbiol 37: 2274 - 2279 19 Zangenberg G., Saiki R K., Reynolds R (1999) Chapter Multiplex PCR : Optimization guidelines PCR applications : protocols for functional genomics (Innis M A., Sninsky J J., Gelfand D H.) Academic Press, USA ... Chúng xây dựng quy trình Multiplex PCR với mục tiêu xác định nhanh đồng thời týp gene vacA cagA H pylori phản ứng từ mẫu sinh thiết bệnh nhân bị ung thư dày cho xác hiệu kinh tế VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG... Helicobacter pylori, Gastric cancer, multiplex PCR ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư dày (UTDD) dạng ung thư phổ biến gây tử vong ñứng hàng thứ II giới sau ung thư phổi Ung thư dày phát triển chậm qua nhiều năm,... kiểu gen s1m 1cagA+ , s1m 2cagA+ ; týp gồm chủng H pylori khơng có độc lực mang kiểu gen s2m 2cagA- [17] Từ tính độc lực khác dẫn đến mức ñộ bệnh khác dày - tá tràng viêm dày, loét dày tá tràng ung thư