Chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu ở những mẫu nhược tinh đã được lọc rửa

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu ở những mẫu tinh dịch nhược tinh đã được lọc rửa trước bảo quản. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.

TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 CHẤT LƢỢNG TINH TRÙNG SAU BẢO QUẢN LẠNH SÂU Ở NHỮNG MẪU NHƢỢC TINH ĐÃ ĐƢỢC LỌC RỬA Nguyễn Khang Sơn*; Phạm Thị Thu Thủy** TÓM TẮT Ðánh giá chất lượng tinh trùng 30 mẫu tinh dịch nhược tinh theo tiêu chuẩn WHO (1999) (tỷ lệ tinh trùng di động a+b 50%) sau bảo quản lạnh (BQL) lọc rửa, bảo quản lạnh sâu 1, 10, 30 ngày Sử dụng tiêu nghiên cứu để đánh giá so sánh chất lượng tinh trùng trước sau lọc rửa; trước sau bảo quản lạnh gi a nh m nghiên cứu t quả: việc lọc rửa đ cải thiện chất lượng tinh trùng r rệt nh ng mẫu nhược tinh uy nhiên, chất lượng tinh trùng sau BQL sâu giảm r rệt nh ng mẫu nhược tinh lọc rửa trước bảo quản hời gian BQL dài, chất lượng tinh trùng giảm * khoá: Lọc rửa tinh trùng; Bảo quản lạnh tinh trùng; Nhược tinh QUALITATIVE ASSESSMENT OF WASHED HUMANCRYOPRESERVED ASTHENOSPERMIC SPERM Summary Evaluate the quality of sperm after which washed asthenospermic human sperm cryopreserved in 30 asthenospermic semen samples according to the standard of WHO (1999) (motility a+b under 50%) Each sample washed spermatozoa All samples were cryopreserved in 1, 10 and 30 days Evaluating and comparing the quality of sperm before and after which is washed, pre-cryopreservation and post-cryopreservation between the groups Results: The quality of sperm after washing was more significantly improved than before washing Post-cryopreservation, the quality of sperm was significantly reduced time by time The qualitative sperm post-cryopreservation was significantly reduced in washed asthenospermic semen sample The quality of sperm washed reduced time by time * Key words: Sperm washing; Sperm cryopreservation; Asthenospermia ĐẶT VẤN ĐỀ iệc bảo quản lạnh mẫu tinh dịch nhược tinh (tinh trùng di động k m) trước th c k thu t thụ tinh nhân tạo ho c thụ tinh ống nghiệm v c n thi t S thành c ng việc BQL tinh trùng quy t định chất lượng tinh trùng ( ) sau bảo quản phải đảm bảo cho việc thụ tinh cho đời nh ng em b hồn tồn bình thường uy nhiên, q trình tr lạnh nitơ lỏng lu n tiềm ẩn nguy lây nhiễm ch o vi sinh v t (như HC , HI …), đ đ t nhu c u phải lọc rửa trước bảo quản lạnh uy nhiên, nh ng mẫu đ lọc rửa trước BQL, chất lượng sau bảo quản c thay đổi nhiều so với trước bảo quản hay kh ng, * Trường Đại học Y Hà Nội ** Trường Đại học Y Hải Phũng Phản biện khoa học: PGS TS Nguyễn Đình Tảo PGS TS Quản Hồng Lâm 47 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 đ c biệt với nh ng mẫu nhược tinh Chúng t i ti n hành nghiên cứu với mục tiêu: Ðánh giá chất lượng TT sau BQL sâu mẫu tinh dịch nhược tinh lọc rửa trước bảo quản select để lọc Ferticult để rửa TT theo qui trình thường quy [1, 3] * Bảo quản lạnh TT: M i trường BQL: Sperm Freeze (FertiPro, Bỉ); tỷ lệ: 0,7 ml/1 ml tinh dịch ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Ðối tƣợng nghiên cứu Chia mẫu tinh dịch thành ph n để BQL nitơ lỏng Các mẫu r đ ng thời điểm: ngày, 10 ngày 30 mẫu tinh dịch người c k t tinh dịch đồ nhược tinh theo tiêu chuẩn WHO 1999 (tỷ lệ tinh trùng di động a+b 50%) Các mẫu lọc rửa BQL sâu theo quy trình Labo Bảo quản m , rường Ðại học Y Hà Nội 30 ngày Hạ nhiệt mẫu cổ bình nitơ lỏng, theo kinh nghiƯm Labo Bảo quản m , rường Ðại học Y Hà Nội [1] * Các biến số nghiên cứu: Phƣơng pháp nghiên cứu - Các số x t nghiệm tinh dịch đồ Nghiên cứu can thiệp, đánh giá trước sau can thiệp Số liệu xử lý theo ph n mềm SPSS 16.0, kiểm định t-test Nghiên cứu th c tạ Labo Bảo quản m , rường Ðại học Y Hà Nội từ tháng 2011 đ n 10 - 2011 Kỹ thuật tiêu nghiên cứu * Xét nghiệm tinh dịch: ánh giá mẫu tinh dịch số số theo tiêu chuẩn WHO (1999) [7] - Chỉ số CSF (chỉ số sống lạnh - cryosurvival factor) /ml) tỷ di động sau BQL: di động trước BQL)  100% % - Chỉ số CSF di động ti n tới = (% di động ti n tới sau BQL: % di động ti n tới trước BQL)  100% - ỷ lệ c hình thái vi thể bình thường So sánh số trước sau bảo quản - Xác định độ ly giải, độ quánh, màu sắc, thể tích, độ pH tinh dịch - Ðánh giá m t độ TT (triệu lệ di động (% loại a, b, c, d) di động = (% KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Chất lƣợng mẫu TT sau lọc rửa Hình ảnh vi thể mẫu TT sau lọc rửa - Ðánh giá hình thái vi thể TT cho thấy việc lọc rửa đ loại bỏ ph n * Kỹ thuật chuẩn bị TT: lớn t Lọc rửa mẫu tinh dịch (1,5 ml) theo phương pháp thang nồng độ; sử dụng Sil bào tr n, mảnh v t bào tinh tương Các số chất lượng TT sau lọc rửa c ng c s cải thiện r rệt 49 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 Bảng 1: So sánh số số chất lượng TT trước sau lọc rửa THỜI IỂM TRƯỚC RỬA ( X ± SD) SAU RỬA ( X ± SD) p M t độ (triệu/ml) 73,63 ± 37,07 32,47 ± 26,37 < 0,001 Di động (%) 49,10 ± 8,14 86,37 ± 9,83 < 0,001 Di động ti n tới (a+b) (%) 36,90 ± 7,80 68,83 ± 13,03 < 0,001 11,07 ± 4,40 18,80 ± 6,63 < 0,001 CHỈ SỐ CHẤT LƯỢNG TT ỷ lệ hình thái bình thường (%) M t độ sau lọc rửa giảm nhiều so với trước lọc rửa Các số khác sau lọc rửa tăng c ý nghĩa thống kê so với trước lọc rửa Ảnh hƣởng BQL sâu mẫu nhƣợc tinh đƣợc lọc rửa * Khả di động TT sau BQL mẫu nhược tinh lọc rửa: Bảng 2: So sánh tỷ lệ (%) 10 ngày, 30 ngày di động di động ti n tới trước sau BQL ngày, THỜI IỂM NGHIÊN CỨU CÁC CHỈ SỐ di động (%) TT di động ti n tới (%) SAU BQL TRƯỚC BQL ngày 10 ngày 30 ngày ( X ± SD) 86,37 ± 9,83 24,2 ± 13,90 17,8 ± 11,25 12,7 ± 9,23 p (so với trước BQL) - < 0,001 < 0,001 < 0,001 ( X ± SD) 68,8 ± 13,03 11,67 ± 9,77 8,50 ± 7,24 5,53 ± 4,23 p (so với trước BQL) - < 0,001 < 0,001 < 0,001 * Biến đổi hình thái vi thể TT sau BQL: Bảng 3: So sánh tỷ lệ (%) 10 ngày, 30 ngày THỜI IỂM NGHIÊN CỨU TỶ LỆ (%) CÓ HÌNH HÁI BÌNH p THƯỜNG ( X ± SD) (với trước BQL) 18,80 ± 6,63 - ngày 11,87 ± 4,85 < 0,001 10 ngày 9,50 ± 4,08 < 0,001 30 ngày 7,47 ± 3,71 < 0,001 rước BQL Sau BQL c hình thái vi thể bình thường trước sau BQL ngày, ỷ lệ di động, TT di động ti n tới c hình thái bình thường sau bảo quản tất khoảng thời gian bảo quản giảm c ý nghĩa thống kê so với trước bảo quản Các tỷ lệ c giá trị trung bình thấp sau bảo quản 30 ngày cao sau bảo quản ngày 50 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 Ảnh hƣởng thời gian BQL đến chất lƣợng mẫu nhƣợc tinh đƣợc lọc rửa Bảng 4: So sánh số chất lượng TT (%) sau thời gian BQL ngày, 10 ngày, 30 ngày THỜI GIAN BQL NGÀY ( X ± SD) (I) CÁC CHỈ SỐ 10 NGÀY 30 NGÀY ( X ± SD) (II) ( X ± SD) (III) p pI/II < 0,01 CSF di động (%) 24,20 ± 13,9 17,80 ± 11,25 12,77 ± 9,23 pI/III < 0,001 pII/III < 0,001 pI/II < 0,01 CSF di động ti n tới (%) 11,67 ± 9,77 8,50 ± 7,24 5,80 ± 5,53 pI,III < 0,001 pII/III < 0,001 ỷ lệ c thường (%) hình thái bình pI/II < 0,01 11,87 ± 4,85 9,50 ± 4,08 7,47 ± 3,71 pI/III < 0,001 pII/III < 0,001 Ở nh ng mẫu nhược tinh đ lọc rửa, sau bảo quản lạnh từ - 30 ngày, số chất lượng CFS di động, CFS di động ti n tới tỷ lệ c hình thái bình thường giảm d n theo thời gian bảo quản BÀN LUẬN Kỹ thuật lọc rửa đông lạnh TT iệc lọc rửa trước BQL giúp làm giảm thiểu nguy tạp nhiễm lây ch o trình tr lạnh [3, 4, 8] rong nghiên cứu này, chúng t i sử dụng k thu t lọc rửa thang nồng độ, phương pháp c hiệu mẫu bất thường iệc lọc rửa đ giúp loại bỏ ph n lớn mảnh v t bào, tinh tương nhiều bất thường Do đ , sau lọc rửa, m t độ giảm, tỷ lệ di động hình thái bình thường tăng lên đáng kể (bảng 1) t phù hợp với nh n định nhiều tác giả [1, 2, 3] M i trường Sperm Freeze sử dụng m i trường BQL, sử dụng rộng r i trung tâm hỗ trợ sinh sản, hiệu tính tiện lợi n [1, 4] Phương pháp hạ nhiệt độ theo kinh nghiệm, từ cổ bình nitơ lỏng c sử dụng đ u d cảm nhiệt quy trình đơn giản, rẻ tiền, c thể áp dụng n y t mà bảo đảm tốc độ hạ nhiệt theo ý muốn Khả di động TT sau BQL rong nghiên cứu này, khoảng thời gian bảo quản, tỷ lệ di động tỷ lệ di động ti n tới thấp r rệt so với trước bảo quản (bảng 2, 3, 4) K t phù hợp với báo cáo nhiều tác giả [1, 5, 8] Do tác động trình đ ng lạnh, khả di động TT giảm đương nhiên uy nhiên, mong muốn tác giả c tỷ lệ di động cao c thể sau BQL Hiệp hội Ngân 51 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 hàng M Hoa ỳ đ đưa tiêu chuẩn đánh giá s thành c ng việc BQL sâu người bình thường là: số CFS di động đạt ≥ 50% [6] Nghiên cứu chúng t i th c nh ng mẫu nhược tinh đ lọc rửa, cho thấy, sau bảo quản, số CSF di động số CSF di động ti n tới giảm nhiều (p < 0,001) chưa đạt đ n 50% (bảng 2, 3, 4) Chúng t i c n thấy giảm tỷ lệ di động TT bảo quản theo thời gian mẫu đ lọc rửa Thời gian bảo quản dài, chất lượng giảm Ở khoảng thời gian bảo quản, tỷ lệ di động giảm c ý nghĩa thống kê heo k t nghiên cứu nhiều tác giả ti n hành mẫu bình thường: thời gian bảo quản lạnh kh ng ảnh hưởng đáng kể lên tỷ lệ di động [2, 8] Nghiên cứu Nguyễn Phương hảo iên (2007) thấy, tỷ lệ di động sau bảo quản ngày ngày kh ng c s khác biệt r rệt; sau bảo quản 30 ngày, tỷ lệ di động TT giảm c ý nghĩa thống kê [1] t các tác giả khác với nghiªn cøu chúng t i c thể đối tượng nghiên cứu nh ng mẫu nhược tinh, sức bền k m, nên khả chịu lạnh c ng giảm uy nhiên, để c k t lu n xác, c n c nghiên cứu ti p theo với c mẫu lớn Biến đổi hình thái vi thể TT sau BQL Nghiên cứu s bi n đổi hình thái sau BQL, Esteves (2007), Nguyễn Phương hảo iên (2007) cho bi t: sau BQL, tỷ lệ c hình thái vi thể bình thường giảm c ý nghĩa thống kê so với trước BQL [1, 5] t chúng t i tương t : sau thời gian BQL ngày, tỷ lệ hình thái bình thường đ giảm 37% so với trước BQL (bảng 3) Hình thái vi thể bất thường sau BQL nghiên cứu chủ y u bất thường đ u, cổ tỷ lệ nhỏ bất thường phối hợp KẾT LUẬN Chất lượng sau BQL sâu nh ng mẫu tinh dịch nhược tinh đ lọc rửa giảm c ý nghĩa thống kê so với trước BQL hời gian BQL dài ngày, chất lượng giảm TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Phương Thảo Tiên ánh giá chất lượng sau BQL sâu nh ng mẫu TT người đ lọc rửa Lu n văn hạc s Y học rường ại học Y Hà Nội 2007 Chen Y, Liu RZ Cryopreservation of spermatozoa Human Reproduction 2007, 13 (8), pp.734-738 Counsel M, Bellinge R, Burton P Vitality of oligozoospermic semen samples is improved by both swim-up and density gradient centrifugation before cryopreservation Journal of Assited Reproduction and Genetics 2004, 21 (5), pp.137142 Donnelly Eilish T, Mc Clure N, Lewis Sheena E.M Cryopreservation of human semen and prepared sperm: effects on motility parameters and DNA integrity Fertility and Sterility 2001, 76 (5), pp.892- 900 Esteves S.C, Spaine D.M, Cedenho A.P Effects of pentoxifylline treatment before freezing on motility, viability and acrosome status of poor quality human spermatozoa cryopreservation by the liquid nitrogen vapor method Braz J Med Biol Res 2007, 40 (7), pp.985-992 51 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 Sherman J.K Cryopreservation of human semen CRC Handbook of the Laboratory Diagnosis and Treatment of Infertility 1999, pp.229-258 World Health Organisation WHO laboratory manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interation Fourth edition Cambridge University Press 1999, 34 Yogev L, Kleiman SE, Shabtai E Longterm cryostorage of sperm in a human sperm bank does not damage progressive motility concentration Human Reproduction 2010, 25 (5), pp.1027-1030 50 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2012 51 ... với nh ng mẫu nhược tinh Chúng t i ti n hành nghiên cứu với mục tiêu: Ðánh giá chất lượng TT sau BQL sâu mẫu tinh dịch nhược tinh lọc rửa trước bảo quản select để lọc Ferticult để rửa TT theo... NGHIÊN CỨU Chất lƣợng mẫu TT sau lọc rửa Hình ảnh vi thể mẫu TT sau lọc rửa - Ðánh giá hình thái vi thể TT cho thấy việc lọc rửa đ loại bỏ ph n * Kỹ thuật chuẩn bị TT: lớn t Lọc rửa mẫu tinh dịch... CHỈ SỐ CHẤT LƯỢNG TT ỷ lệ hình thái bình thường (%) M t độ sau lọc rửa giảm nhiều so với trước lọc rửa Các số khác sau lọc rửa tăng c ý nghĩa thống kê so với trước lọc rửa Ảnh hƣởng BQL sâu mẫu