Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm so sánh chất lượng tinh trùng sau một số khoảng thời gian bảo quản lạnh sâu ở những mẫu tinh dịch nhược tinh đã lọc rửa và những mẫu không được lọc rửa trước bảo quản. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2012 SO SÁNH CHẤT LƢỢNG TINH TRÙNG SAU BẢO QUẢN LẠNH SÂU Ở NHỮNG MẪU NHƢỢC TINH ĐƢỢC LỌC RỬA VÀ KHÔNG ĐƢỢC LỌC RỬA TRƢỚC BẢO QUẢN Nguyễn Khang Sơn*; Phạm Thị Thu Thủy** TÓM TẮT So sánh chất lượng tinh trùng (TT) 30 mẫu tinh dịch nhược tinh theo tiêu chuẩn WHO (1999) (tỷ lệ TT di động a+b < 50%), mẫu chia thành phần để lọc rửa không lọc rửa, bảo quản lạnh (BQL) sâu 1, 10, 30 ngày Sử dụng tiêu nghiên cứu để đánh giá so sánh chất lượng TT trước sau BQL mẫu tinh dịch tươi mẫu tinh dịch lọc rửa Kết quả: sau BQL sâu, số chất lượng TT mẫu tinh dịch tươi cao có ý ngh a thống kê so với mẫu lọc rửa trước bảo quản, đ c biệt thể r mẫu tinh dịch có tỷ lệ TT di động tiến tới < 32% Việc lọc rửa trước bảo quản ảnh hưởng đến chất lượng TT sau BQL mẫu nhược tinh * Từ khoá: hược tinh; Lọc rửa tinh trùng; Bảo quản lạnh tinh trùng COMPARING THE QUALITY OF WASHED AND UNWASHED HUMAN ASTHENOSPERMIC SPERM CRYOPRESERVED SUMMARY The authors compared the quality of washed and unwashed human asthenospermic sperm cryopresered in 30 asthenospermic semen samples according to the standard of WHO (1999) (motility a+b under 50%) Each sample was divided into two aliquots for washed and unwashed spermatozoa All samples were cryopreserved in 1, 10 and 30 days Evaluating and comparing the quality of sperm before and after which is washed, the quality of sperm after which cryopresered between washed and unwashed semen samples Results showed that: The quality of sperm after washing was more significantly improved than before washing, the indexs of quality of sperm after cryopreservation in unwashed samples were significantly more than that in washed samples, especially in samples which had rate of progressive motility under 32% The washing sperm before cryopreservation effected on the quality of sperm post-cryopreservation The quality of cryopresered sperm in unwashed samples was better than that in washed samples * Key words: Asthenospermia; Sperm washing; Sperm cryopreservation ĐẶT VẤN ĐỀ ể đảm bảo thành công, trước th c biện pháp hỗ trợ sinh sản, bệnh nhân có TT di động k m (nhược tinh) cần B TT Sau B , TT phải đảm bảo n ng l c thụ tinh cho đ i em b kh e mạnh ể đảm bảo mẫu tinh dịch không bị tạp nhi m vi sinh vật, * Trường Đại học Y Hà Nội ** Trường Đại học Y Hải Phòng Phản biện khoa học: PGS TS Quản Hoàng Lâm PGS TS Nguyễn Đình Tảo 40 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QN SỰ SỐ 4-2012 HCV, HIV… lây nhi m ch o trình trữ lạnh nitơ l ng, số nghiên cứu khuyến cáo nên lọc rửa TT trước BQL Vấn đề đ t với mẫu nhược tinh, việc lọc rửa trước bảo quản th c s có mang lại hiệu tốt so với mẫu không lọc rửa hay không? Trư ng hợp nên định lọc rửa TT trước B ? Chúng th c đề tài với mục tiêu: So sánh chất lượng TT sau số khoảng thời gian BQL sâu mẫu tinh dịch nhược tinh lọc rửa mẫu không lọc rửa trước bảo quản - Xác định độ ly giải, độ quánh, màu sắc, thể tích, độ pH tinh dịch - Ðánh giá mật độ TT (triệu TT/ml) tỷ lệ di động (% loại a, b, c, d) - Ðánh giá hình thái vi thể TT * Kỹ thuật chuẩn bị TT: Mỗi mẫu tinh dịch chia làm phần: + Phần không lọc rửa (A): 1,5 ml tinh dịch, chuẩn bị để BQL + Phần lọc rửa (B): 1,5 ml tinh dịch, lọc rửa phương pháp gradient nồng độ; sử dụng silselect để lọc ferticult để rửa TT [1, 2, 3] * Bảo quản lạnh TT: I TNG V PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Ðối tƣợng cỡ mẫu 30 mẫu tinh dịch ngư i có kết tinh dịch đồ nhược tinh theo tiêu chuẩn WHO (1999) (tỷ lệ TT di động a+b < 50%) Các mẫu tinh dịch lọc rửa B sâu nitơ l ng Phƣơng pháp nghiên cứu ghiên cứu can thiệp, đánh giá trước - sau * Xử lý số liệu: theo phần mềm SPSS 16.0 Kiểm định t-test gh p c p test phi tham số ghiên cứu th c Labo Bảo quản Mô, Trư ng Ðại học Y Hà ội, từ tháng - 2011 đến 10 - 2011 Kỹ thuật tiêu nghiên cứu * Xét nghiệm tinh dịch: ánh giá mẫu tinh dịch số theo tiêu chuẩn WHO (1999) tham khảo tiêu chuẩn WHO (2010) Môi trư ng BQL: Sperm Freeze (FertiPro, Bỉ); tỷ lệ: 0,7 ml/1 ml tinh dịch Chia phần tinh dịch A B thành phần nhau, B nitơ l ng Các mẫu rã đông th i điểm: ngày, 10 ngày 30 ngày Hạ nhiệt mẫu cổ bình nitơ l ng, theo kinh nghiêm Labo Bảo quản Mô, Trư ng Ðại học Y Hà ội: từ 25oC đến -10oC phút, -10oC đến -120oC 20 phút, -120oC đến -196oC phút * Các biến số nghiên cứu: - Các số x t nghiệm tinh dịch đồ - Chỉ số CSF (chỉ số sống lạnh - cryosurvival factor) TT di động = (% TT di động sau BQL: % TT di động trước BQL) 100% - Chỉ số CSF TT di động tiến tới = (% TT di động tiến tới sau B : % TT di động tiến tới trước BQL) 100% - Tỷ lệ TT hình thái bình thư ng trước sau BQL So sánh số cách bảo quản: TT tươi TT sau lọc rửa 42 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2012 Chất lượng TT sau B KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU mẫu tươi mẫu lọc rửa trước B * Sau BQL ngày: Bảng 1: So sánh số chất lượng TT sau B nhóm lọc rửa trước B HÓM GHIÊ CỨU ngày nhóm khơng lọc rửa MẪU KHƠNG LỌC RỬA MẪU LỌC RỬA p CÁC CHỈ SỐ (%) ( X ± SD) ( X ± SD) CSF TT di động 28,33 ± 10,65 24,20 ± 13,90 < 0,05 CSF TT di động tiến tới (a+b) 14,77 ± 7,57 11,67 ± 9,77 < 0,05 Tỷ lệ TT hình thái bình thư ng 10,53 ± 4,18 11,87 ± 4,85 > 0,05 * Sau BQL 10 ngày: Bảng 2: So sánh số chất lượng TT sau B nhóm lọc rửa trước B HÓM GHIÊ CỨU 10 ngày nhóm khơng lọc rửa MẪU KHƠ G ỌC RỬA MẪU LỌC RỬA ( X ± SD) ( X ± SD) p CSF TT di động 22,33 ± 11,12 17,80 ± 11,25 < 0,01 CSF TT di động tiến tới (a+b) 10,43 ± 7,13 8,50 ± 7,24 < 0,05 Tỷ lệ TT hình thái bình thư ng 8,30 ± 3,64 9,50 ± 4,08 > 0,05 CÁC CHỈ SỐ (%) * Sau BQL 30 ngày: Bảng 3: So sánh số chất lượng TT sau B nhóm lọc rửa trước B HĨM GHIÊ CỨU 30 ngày nhóm khơng lọc rửa MẪU KHƠ G ỌC RỬA MẪU LỌC RỬA CÁC CHỈ SỐ (%) ( X ± SD) ( X ± SD) CSF TT di động 17,0 ± 10,32 12,77 ± 9,23 < 0,01 CSF TT di động tiến tới (a+b) 7,77 ± 6,54 5,80 ± 5,53 < 0,05 Tỷ lệ TT hình thái bình thư ng 6,73 ± 3,14 7,47 ± 3,71 > 0,05 p Sau B ngày, 10 ngày 30 ngày, số CSF TT di động, CSF TT di động tiến tới mẫu khơng lọc rửa cao có ý ngh a thống kê so với mẫu lọc rửa trước BQL Tỷ lệ TT có hình thái bình thư ng di n biến ngược lại, khác biệt ý ngh a thống kê 42 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2012 So sánh chất lƣợng TT sau BQL mẫu tƣơi mẫu đƣợc lọc rửa theo chất lƣợng mẫu tinh dịch ban đầu * So sánh áp dụng với mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới < 32%: Bảng 4: So sánh số chất lượng TT sau B mẫu tươi mẫu lọc rửa theo chất lượng mẫu tinh dịch ban đầu, với mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới < 32% HĨM GHIÊ CỨU MẪU KHƠ G ỌC RỬA MẪU LỌC RỬA M (min-max) M (min-max) p CÁC CHỈ SỐ (%) ngày 10 ngày 30 10 ngày 30 ngày CSF TT di động 29 (17 - 38) 18 (11 - 29) 10 (4 - 22) 16 (5 - 25) (3 - 15) (1 - 14) < 0,01 CSF TT di động tiến tới 10 (6 - 17) (2 - 14) (2 - 8) (1 - 10) (0 - 9) (0 - 3) < 0,01 Tỷ lệ TT hình thái bình thư ng (5 - 10) (5 - 9) (4 - 7) (5 - 12) (5 - 10) (4 - 8) > 0,05 (M: giá trị trung vị) * So sánh áp dụng với mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới từ 32 - 50%: Bảng 5: So sánh số chất lượng TT sau B mẫu tươi mẫu lọc rửa theo chất lượng mẫu tinh dịch ban đầu với mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới từ 32 - 50% HĨM GHIÊ CỨU MẪU KHƠ G ỌC RỬA M (min-max) MẪU LỌC RỬA M (min-max) p CÁC CHỈ SỐ (%) ngày 10 ngày 30 10 ngày 30 ngày CSF TT di động 29 (21 - 37) 22 (15 - 33) 20 (10 - 23) 27 (17 - 42) 20 (13 - 31) 15 (10 - 22) > 0,05 CSF TT di động tiến tới 15 (12 - 20) 10 (6 - 16) (4 - 15) 15 (6 - 22) (5 - 18) (2 - 13) > 0,05 Tỷ lệ TT hình thái bình thư ng 10 (7 - 14) (6 - 12) (5 - 10) 14 (10 - 18) 10 (7 - 13) (6 - 11) < 0,05 (M: giá trị trung vị) 43 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2012 BÀN LUẬN Về số chất lƣợng TT sau BQL mẫu tƣơi mẫu đƣợc lọc rửa Ở nghiên cứu này, đưa mốc giá trị TT di động tiến tới ( ) 32% để phân nhóm đối tượng nghiên cứu, 32% ngưỡng giá trị WHO (2010) sử dụng để phân loại mẫu tinh dịch bình thư ng mẫu nhược tinh (trong WHO - 1999 lấy giá trị ngưỡng 50%) Kết nghiên cứu cho thấy, TT giảm tỷ lệ di động theo th i gian bảo quản mẫu không lọc rửa mẫu lọc rửa Th i gian bảo quản dài, chất lượng TT giảm Ở khoảng th i gian bảo quản, tỷ lệ di động TT giảm có ý ngh a thống kê Trong nghiên cứu này, sau BQL, tỷ lệ TT hình thái bình thư ng mẫu tươi thấp mẫu lọc rửa trước bảo quản hưng s khác biệt khơng có ý ngh a thống kê (bảng 3) hận x t khác guy n s hương Thảo Tiên (2007) khác tiêu chuẩn chọn mẫu cỡ mẫu nghiên cứu Về nh hƣởng c a vi c lọc rửa trƣ c BQL s u đối v i TT M c dù tác giả thống khẳng định, việc lọc rửa TT trước B giúp hạn chế tạp nhi m lây ch o trình trữ lạnh Tuy nhiên, hiệu phương pháp BQL mẫu TT lọc rửa nhiều tranh luận chưa thống [3, 5, 6, 7] Một số tác giả nhận định, viÖc chất So sánh số CSF TT di động CSF TT di động tiến tới sau bảo quản mẫu tươi mẫu lọc rửa, bước đầu nhận thấy, số mẫu tươi cao mẫu lọc rửa th i gian bảo quản, đ c biệt mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới ( ) < 32% S khác biệt có ý ngh a thống kê (bảng 4) So sánh riêng mẫu nhược tinh nhẹ (mẫu có tỷ lệ TT di động tiến tới từ 32 - 50%) thấy s khác biệt ý ngh a thống kê (bảng 5) Kết phù hợp với nghiên cứu Donnelly ET (2001) [5], Saritha KR (2001) [6], Sharma RK (1996) [7] bảo vệ t hư vậy, đánh giá tỷ lệ di động TT sau B lần khẳng định chắn thêm nhận định Donnelly ET khả n ng đề kháng tốt với tượng sốc lạnh mẫu tươi so với mẫu lọc rửa Các số CSF di động, CSF di động tiến tới 44 nhiên tinh dịch q trình lọc rửa làm giảm khả n ng chống sốc lạnh TT, từ dẫn đến giảm chất lượng TT sau BQL [5, 6] Nghiên cứu Saritha K CS (2001) cho thấy tỷ lệ di động TT sau bảo quản mẫu TT lọc rửa giảm đáng kể so với mẫu tươi Donnelly ET CS (2001) khẳng định s AD nguyên vẹn sau rã đơng mẫu TT tươi cao có ý ngh a thống kê so với mẫu lọc rửa [5] ghiên cứu mẫu nhược tinh thu kết tương t sau B mẫu tươi (không lọc rửa) cao có ý ngh a thống kê so với mẫu lọc rửa (bảng 3) S khác biệt đ c biệt r mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới < 32% (bảng 4) TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2012 Từ nghiên cứu cho thấy, chất lượng TT sau BQL mẫu nhược tinh lọc rửa không tốt so với mẫu tươi không lọc rửa hương pháp lại phức tạp, tốn k m TT bị ảnh hưởng s ly tâm Do đó, theo chúng tơi, với mẫu tinh dịch nhược tinh, việc lọc rửa trước bảo quản nên th c trư ng hợp có nguy lây nhi m cao Tuy nhiên, nghiên cứu bước đầu Từ định hướng này, cần có nghiên cứu tiếp, cỡ mẫu lớn KẾT LUẬN Vi c lọc rửa trƣ c b o qu n nh hƣởng đến chất lƣợng TT sau BQL mẫu nhƣợc tinh Chất lượng TT sau BQL mẫu tinh dịch nhược tinh không lọc rửa tốt so với mẫu lọc rửa trước BQL TÀI LIỆU THAM KHẢO Ðào Thị Thuý Phượng ghiên cứu đánh giá phương pháp lọc rửa TT: bơi lên bậc thang nồng độ Luận v n Thạc sỹ Y học Trư ng Ðại học Y Hà ội 2004 Nguyễn Phương Thảo Tiên ánh giá chất lượng TT sau B sâu mẫu TT ngư i lọc rửa uận v n Thạc sỹ Y học Trư ng ại học Y Hà ội 2007 Allamaneni SR, Agarwal Ashok, Rama Sreedhar et al Comparative study on density gradients and swim-up preparation techniques utilizing neat and cryopreserved spermatozoa Asian J Androl 2005, (1), pp.86-92 Counsel M, Bellinge R, Burton P Vitality of oligozoospermic semen samples is improved by both swim-up and density gradient centrifugation before cryopreservation Journal of Assited Reproduction and Genetics 2004, 21 (5), pp.137142 Donnelly ET, Mc Clure N, Lewis Sheena EM Cryopreservation of human semen and prepared sperm: effects on motility parameters and DNA integrity Fertility and Sterility 2001, 76 (5), pp.892900 Saritha KR, Ariff Bongso Comparative evaluation of fresh and washed human sperm cryopreserved in vapor and liquid phases of liquid nitrogen Journal of Andrology 2001, 22 (5), pp.857-862 Sharma RK, Agarwal A Sperm quality improvement in cryopreserved human semen J Urol 1996, 156 (3), pp.1008-1012 45 ... hợp nên định lọc rửa TT trước B ? Chúng th c đề tài với mục tiêu: So sánh chất lượng TT sau số khoảng thời gian BQL sâu mẫu tinh dịch nhược tinh lọc rửa mẫu không lọc rửa trước bảo quản - Xác định... * So sánh áp dụng với mẫu nhược tinh có tỷ lệ TT di động tiến tới từ 32 - 50%: Bảng 5: So sánh số chất lượng TT sau B mẫu tươi mẫu lọc rửa theo chất lượng mẫu tinh dịch ban đầu với mẫu nhược tinh. .. Chất lượng TT sau B KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU mẫu tươi mẫu lọc rửa trước B * Sau BQL ngày: Bảng 1: So sánh số chất lượng TT sau B nhóm lọc rửa trước B HĨM GHIÊ CỨU ngày nhóm khơng lọc rửa MẪU KHƠNG LỌC