Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá khả năng phát hiện nọc rắn Hổ mang trên lâm sàng của bộ kít phát hiện nhanh được nghiên cứu và chế tạo tại Việt Nam.
Tạp chí y - d-ợc học quân số 9-2017 NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG PHÁT HIỆN NỌC ĐỘC CỦA BỘ KÍT PHÁT HIỆN NHANH NỌC RẮN HỔ MANG TRÊN LÂM SÀNG Nguyễn Ngọc Tuấn*; Trịnh Thanh Hùng** Nguyễn Anh Tuấn*; Nguyễn Trung Nguyên*** TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá khả phát nọc rắn Hổ mang lâm sàng kít phát nhanh nghiên cứu chế tạo Việt Nam Đối tượng phương pháp: thử nghiệm kít phát nhanh 148 mẫu huyết thanh, 20 mẫu nước tiểu, 37 mẫu dịch vết cắn 113 bệnh nhân (BN) chẩn đoán xác định rắn Hổ mang cắn Kết quả: tỷ lệ xét nghiệm dương tính mẫu huyết 69,9%, dịch vết cắn 89,2% nước tiểu 60%, đa số mẫu xét nghiệm dương tính lấy 24 sau bị rắn cắn So sánh với xét nghiệm VDK Đài Loan mẫu dịch vết cắn, kít có độ phù hợp chẩn đốn cao với hệ số Kappa 0,84 Tương tự, mẫu huyết nước tiểu, hệ số Kappa 0,78 (phù hợp khá) 0,41 (phù hợp vừa) Khi so sánh với kết xét nghiệm ELISA, hệ số Kappa 0,71 (phù hợp khá) Với định sử dụng huyết kháng nọc rắn (HTKNR) hệ số Kappa 0,56 (phù hợp vừa) Kết luận: kít có khả phát nọc rắn Hổ mang mẫu bệnh phẩm, với mẫu lấy 24 sau bị rắn cắn cho tỷ lệ dương tính cao * Từ khóa: Nọc rắn; Naja atra; Kít phát nhanh Evaluation of the Efficiency of Cobra-Venom Detection Rapid Test on Clinic Summary Objectives: To evaluate the efficiency of the rapid tests developed in Vietnam, that detect cobra venom in clinical speciments Subjects and methods: We tested the rapid test kits with 148 serum samples, 20 urine samples, and 37 snake bite-fluid samples, taken from patients who had confirmed diagnoses of cobra-bite Results: The positive-diagnosis rates showed 69.9% in serum, 60% in urine and 89.2% in snake bite-fluid samples Most positive-diagnosis samples were collected within 24 hours after patients injured Compared to Taiwan VDK assays on snake bite-fluid samples, our kits showed high correlation rate of diagnosis with Kappa ratio 0.84 Similarly, the Kappa ratios in serum and urine samples showed 0.78 and 0.41, respectively When using anti-venom serum therapy, the Kappa ratio showed 0.56 (relatively accordant) Conclusions: The rapid-test kits showed high efficiency for successfully detecting cobra-venom in all samples (serum, urine and snake bite-fluid) collected within 24 hours after incidence * Keyworks: Snake venom; Naja atra; Rapid test * Học viện Quân y ** Bộ Khoa học Công nghệ *** Bệnh viện Bạch Mai Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Ngọc Tuấn (nguyenngoctuanmd@gmail.com) Ngày nhận bài: 13/07/2017; Ngày phản biện đánh giá báo: 09/11/2017 Ngày báo đăng: 21/11/2017 39 Tạp chí y - d-ợc học quân số 9-2017 ĐẶT VẤN ĐỀ Xác định xác nọc độc lồi rắn thể nạn nhân rắn cắn có ý nghĩa thực tiễn quan trọng, vừa giúp sơ cấp cứu cách, vừa định hướng lựa chọn loại HTKNR đơn đặc hiệu sử dụng, đem lại hiệu điều trị cao an toàn cho nạn nhân Nhiều xét nghiệm miễn dịch nghiên cứu áp dụng phát nọc rắn độc như: khuếch tán miễn dịch, điện di miễn dịch, miễn dịch huỳnh quang, phản ứng ngưng kết, miễn dịch phóng xạ, miễn dịch gắn enzym (ELISA)… Tuy nhiên, xét ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu 148 mẫu huyết thanh, 20 mẫu nước tiểu, 37 mẫu dịch vết cắn 113 BN chẩn đoán xác định rắn Hổ mang cắn nhập viện Trung tâm Chống độc, Bệnh viện Bạch Mai Thời gian từ tháng đến 12 - 2014 Vật liệu nghiên cứu Kít phát nhanh kít ELISA định lượng nọc rắn Hổ mang Bộ môn Miễn dịch, Học viện Quân y nghiên cứu chế tạo nghiệm có thời gian tiến hành lâu, khơng đảm bảo cho xét nghiệm cấp Phƣơng pháp nghiên cứu cứu Trong nghiên cứu trước, chúng - Thử nghiệm kít phát nhanh nọc tơi phát triển xét nghiệm phát nhanh nọc rắn dựa nguyên lý sắc ký miễn dịch (Immonochromatography assay) [2] Xét nghiệm có độ nhạy tốt, có khả phát nọc rắn Hổ mang chuẩn pha dung dịch đệm ng/ml, pha huyết nước tiểu 10 ng/ml Tuy nhiên, xét nghiệm phát triển để ứng dụng lâm sàng nên cần có nghiên cứu đánh giá khả phát nọc độc rắn Hổ mang có mẫu bệnh phẩm lâm sàng, rắn Hổ mang mẫu bệnh phẩm - Định lượng nọc rắn phương pháp ELISA sandwich - So sánh độ phù hợp chẩn đoán kít với kết xét nghiệm ELISA xét nghiệm VDK Đài Loan hệ số Kappa Chỉ định sử dụng HTKNR gồm mức: phù hợp (hệ số Kappa từ - 0,2), phù hợp (hệ số Kappa từ 0,21 - 0,4), phù hợp vừa (hệ số Kappa từ 0,4 - 0,6), phù hợp (hệ số Kappa từ trước áp dụng xét nghiệm 0,61 - 0,8) phù hợp cao (hệ số Kappa sở y tế Vì vậy, tiến hành từ 0,81 - 1) nghiên cứu: “Đánh giá khả phát * Phương pháp xử lý số liệu: theo nọc độc kít phát nhanh nọc phương pháp thống kê y học phần rắn Hổ mang lâm sàng” mềm SPSS 22.0 40 Tạp chí y - d-ợc học quân sè 9-2017 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Kết phát nọc rắn Hổ mang lâm sàng Biểu đồ 1: Nồng độ nọc rắn huyết BN lúc nhập viện (n = 35) Kết định lượng nọc rắn huyết 35 BN lúc nhập viện (được lựa chọn ngẫu nhiên 113 BN) cho thấy nồng độ nọc rắn có dải nồng độ từ 2,81 159,12 ng/ml; 50% trường hợp có nồng độ nọc rắn nằm khoảng từ 8,21 - 58,28 ng/ml Kết có độ dao động thấp so sánh với kết định lượng nọc rắn Hổ mang nghiên cứu Dong Zong Hung CS [4] Tuy nhiên, với nồng độ nọc rắn định lượng đa phần < 50 ng/ml, kết có tương đồng với nghiên cứu Andrew Churchman (2010) [6] George E Allen (2012) [7] Với dải nồng độ trên, mẫu bệnh phẩm sử dụng để đánh giá khả phát nọc rắn kít phát nhanh Bảng 1: Kết phát nọc rắn mẫu bệnh phẩm theo thời gian nhập viện Bệnh phẩm Huyết (n = 113) Dịch vết cắn (n = 37) Nước tiểu (n = 20) Thời gian (*) - - 24 Sau 24 Tổng Âm tính 18 8 34 Dương tính 38 39 79 % dương tính 67,85% 82,98% 20% 69,9% Âm tính Dương tính 23 10 33 % dương tính 95,83% 76,92% 89,2% Kết Âm tính Dương tính 12 % dương tính 53,33% 80% 60% (*: Thời gian từ BN bị rắn cắn lấy mẫu xét nghiệm) 41 T¹p chí y - d-ợc học quân số 9-2017 T lệ xét nghiệm dương tính mẫu huyết 69,3%, dịch vết cắn 89,2% nước tiểu 60% Trong đó, tỷ lệ xét nghiệm dương tính mẫu huyết thanh, dịch vết cắn nước tiểu đầu 67,85%, 82,98% 20% Sau 24 kể từ bị rắn cắn, kít phát nọc rắn huyết trường hợp So sánh độ phù hợp chẩn đốn kít với kết xét nghiệm VDK Đài Loan, định sử dụng HTKNR xét nghiệm ELISA Để kiểm tra độ phù hợp chẩn đốn kít, chúng tơi so sánh với kết xét nghiệm VDK Đài Loan Bảng 2: Kết xét nghiệm kít so với xét nghiệm VDK Đài Loan bệnh phẩm huyết (n = 41) Xét nghiệm VDK Dƣơng tính Âm tính Tổng Dương tính 31 33 Âm tính 32 41 Bộ kít Tổng Kappa = 0,78 So sánh kết xét nghiệm kít với kết xét nghiệm VDK Đài Loan mẫu bệnh phẩm huyết thanh, hai xét nghiệm cho kết với độ phù hợp (Kappa = 0,78) Bảng 3: Kết xét nghiệm kít so với xét nghiệm VDK Đài Loan bệnh phẩm dịch vết cắn (n = 35) Xét nghiệm VDK Dƣơng tính Âm tính Tổng Dương tính 31 31 Âm tính 32 35 Bộ kít Tổng Kappa = 0,84 So sánh kết xét nghiệm kít với kết xét nghiệm VDK Đài Loan mẫu bệnh phẩm dịch vết cắn, hai xét nghiệm cho kết với độ phù hợp cao (Kappa = 0,84) 42 Tạp chí y - d-ợc học quân số 9-2017 Bảng 4: Kết xét nghiệm kít so với xét nghiệm VDK Đài Loan bệnh phẩm nước tiểu (n = 13) Xét nghiệm VDK Dƣơng tính Âm tính Tổng Dương tính 6 Âm tính 10 13 Bộ kít Tổng Kappa = 0,41 So sánh với kết xét nghiệm kít với kết xét nghiệm VDK Đài Loan mẫu bệnh phẩm huyết thanh, hai xét nghiệm cho kết với độ phù hợp vừa (Kappa = 0,41) Bảng 5: Kết xét nghiệm kít định sử dụng HTKNR Bệnh phẩm Huyết HTKNR Có sử dụng Khơng sử dụng Dương tính 75 79 Âm tính 15 19 34 Tổng 90 23 113 Bộ kít Tổng (n = 113) Kappa = 0,56 Mặc dù kít chúng tơi phát triển xét nghiệm VDK Đài Loan có nguyên lý, nhiên kháng thể sử dụng kít khác với Đài Loan, kháng thể IgG từ ngựa hấp phụ miễn dịch với nọc rắn Hổ chúa, Đài Loan kháng thể IgY từ vịt không qua hấp phụ miễn dịch [6] Số trường hợp dương tính có định sử dụng HTKNR 75/79 (94,93%), số trường hợp âm tính có định HTKNR 15/34 (44,12%) Kết xét nghiệm kít với định sử dụng HTKNR có độ phù hợp vừa (Kappa = 0,56) Có thể thấy kết thử nghiệm kít phát nhanh nọc rắn mẫu bệnh phẩm BN bị rắn Hổ mang cắn có độ phù hợp khác so sánh với kết xét nghiệm Đài Loan định sử dụng HTKNR mức độ khác Các trường hợp có định sử dụng HTKNR thường có triệu chứng đau hoại tử, nhiên số BN nhập viện muộn, nọc rắn máu giảm bị đào thải gắn vào thụ thể quan đích nên xét nghiệm âm tính giả Ngồi ra, số BN sơ cứu chích rạch nặn máu nên triệu chứng nhiễm trùng bị nhầm lẫn với hoại tử tổ chức nọc độc 43 Tạp chí y - d-ợc học quân số 9-2017 KẾT LUẬN Qua thử nghiệm thấy kít có khả phát nọc rắn Hổ mang mẫu bệnh phẩm (dịch vết cắn, huyết thanh, nước tiểu) BN bị rắn cắn Tuy nhiên, để có kết chẩn đốn xác cần kết hợp kết xét nghiệm mẫu bệnh phẩm 24 đầu với triệu chứng lâm sàng, có hay không bắt rắn gây tai nạn Coulter A.R, Harris, R.D, Sutherland S.K Clinical laboratory: enzyme immunoassay for the rapid clinical identification of snake venom The Medical Journal of Australia 1980, (9), pp.433-435 Hung D.Z, Ming-Yi Liau, Shoei-Yn Lin Shiau The clinical significance of venom detection in patients of cobra snake bite Toxicon 2003, 41, pp.409-415 Hung D Z, Lin J.H, Mo J.F, Huang C.F, Liau M.Y Rapid diagnosis of Naja atra snake bites Clinical Toxicology 2014, 52 (3), pp.187-191 Nguyễn Kim Sơn Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng điều trị BN bị số rắn độc cạn cắn thuộc họ rắn Hổ (Elapidae) miền Bắc Việt Nam Luận án Tiến sỹ Y học Trường Đại học Y Hà Nội 2008 Andrew Churchman, Margaret A O’Leary, Nicholas A Buckley et al Clinical effects of red - bellied black snake (Pseudechis porphyriacus) envenoming and correlation with venom concentration: Autralian snake bite project (ASP-11) Bites and Stings 2010, 193, pp.696700 Nguyễn Ngọc Tuấn, Nguyễn Đặng Dũng, Nguyễn Trung Nguyên, Lê Xuân Hải Nghiên cứu chế tạo xét nghiệm sắc ký miễn dịch phát nhanh nọc rắn Hổ mang Naja atra Tạp chí Y Dược lâm sàng 108 2016, 3, tr.138-143 George E Allen, Simon G A Brown, Nicholas A Buckley et al Clinical effects and antivenom dosing in Brown snake (Pseudonaja spp.) Envenoming - Australian snake bite project (ASP) Brown Snake Envenoming and Antivenom Dose 2012, (12), pp.1- TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 ... có khả phát nọc rắn Hổ mang chuẩn pha dung dịch đệm ng/ml, pha huyết nước tiểu 10 ng/ml Tuy nhiên, xét nghiệm phát triển để ứng dụng lâm sàng nên cần có nghiên cứu đánh giá khả phát nọc độc rắn. .. vậy, tiến hành từ 0,81 - 1) nghiên cứu: Đánh giá khả phát * Phương pháp xử lý số liệu: theo nọc độc kít phát nhanh nọc phương pháp thống kê y học phần rắn Hổ mang lâm sàng mềm SPSS 22.0 40 Tạp... đảm bảo cho xét nghiệm cấp Phƣơng pháp nghiên cứu cứu Trong nghiên cứu trước, chúng - Thử nghiệm kít phát nhanh nọc tơi phát triển xét nghiệm phát nhanh nọc rắn dựa nguyên lý sắc ký miễn dịch (Immonochromatography