1. Trang chủ
  2. » Thể loại khác

Nghiên cứu định lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

7 145 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 7
Dung lượng 603,78 KB

Nội dung

Bài viết nghiên cứu định lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao nhằm góp phần tiêu chuẩn hóa chất lượng sản phẩm, cũng như xây dựng công thức bào chế.

Trang 1

75

Nghiên cứu định lượng BERBERIN CHLORID trong

“viên nén đại tràng 105” bằng phương pháp

sắc ký lỏng hiệu năng cao

Hồ Cảnh Hậu*; Hoàng Văn Thêm*; Nguyễn Thị Lan Hương*

Nguyễn Văn Thuận**; Nguyễn Cẩm Vân***; Nguyễn Tuấn Quang***

Tóm tắt

Mục tiêu: xây dựng phương pháp định lượng berbein chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Đối tượng và phương pháp: “Viên nén đại tràng 105”

do Bệnh viện Quân y 105 sản xuất được tiến hành phân tích trên hệ thống HPLC với cột: RP18 (150 x 4,6 mm, 5 µm), bước sóng 345 nm, tốc độ dòng 1,2 ml/phút, thể tích tiêm 20 µl, pha

động là hỗn hợp methanol-acetonitril-dung dịch axít phosphoric 0,1% (5:3:3) Kết quả: phương

pháp xây dựng đảm bảo tính đặc hiệu, tính tương thích, tính tuyến tính, độ đúng và độ lặp lại Giới hạn phát hiện của berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” là 0,02 µg/ml Áp dụng xác định hàm lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” là 37,65 ± 1,02 (mg/viên)

Kết luận: phương pháp xây dựng đảm bảo yêu cầu và có thể được dùng để định lượng

berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105”

* Từ khóa: Berberin chlorid; “Viên nén đại tràng 105”; Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Quantitative Study on Berberin Chloride in “Vien nen dai trang 105”

by High Performace Liquid Chromatography

Summary

Objective: To establish the quantitative methodology measuring the amount of berberin chloride in “Vien nen dai trang 105” by high performance liquid chromatography (HPLC) Subjects and methodology: “Vien nen dai trang 105” produced by 105 Hospital is analysed using the HPLC system with a column of RP18 (150 x 4.6 mm, 5 µm), the wave length of 345 nm, the flow rate water of 1.2 ml/min, injection volume: 20 µl, a mixture of methanol- acetonitrile-acide

phosphoric 0.1% with ratio (5:3:3) as mobile phase Results: This methodology ensures the

specificity, compatibility, linearity, preciseness and repeatability The limitation of berberin chlorid in “Vien nen dai trang 105” found is 0.02 µg/ml As a result, the amount of berberin

chlorid measured in “Vien nen dai trang 105” is 37.65 ± 1.02 (mg/pill) Conclusion: The methodology

meets all the requirements and can be used to measure the amount of berberin chlorid in “Vien

nen dai trang 105”

* Key words: Berberin chlorid; “Vien nen dai trang 105”; High performance liquid chromatography

* Bệnh viện Quân y 105

** Bệnh viện Quân y 7

*** Học viện Quân y

Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Tuấn Quang (drquang2000@yahoo.com)

Ngày nhận bài: 24/12/2014; Ngày phản biện đánh giá bài báo: 12/01/2015

Ngày bài báo được đăng: 26/01/2015

Trang 2

77

Đặt vấn đề

“Viên nén đại tràng 105” là đề tài đang

được Bệnh viện Quân y 105, Tổng cục

Hậu cần nghiên cứu phát triển từ bài

thuốc y học cổ truyền để điều trị viêm đại

tràng cấp và mạn tính rất có hiệu quả

Thành phần của “Viên nén đại tràng 105”

có sự kết hợp của các dược liệu và hoạt

chất từ dược liệu như Hoàng đằng, cao Bồ

giác, berberin chlorid…, trong đó, berberin

chlorid chiếm tỷ lệ khá cao và được coi là

thành phần chính của dược phẩm Berberin

chlorid được chiết xuất từ các dược liệu

như Vàng đắng, Hoàng liên,… [1, 2, 5],

có tác dụng ức chế đối với vi khuẩn

Shigella, Bacillus cholerae, Staphylococus

aureus …, tác dụng chống vi khuẩn tả Vibrio

cholerae, tác dụng với lỵ amip Đặc biệt,

dùng berberin điều trị nhiễm khuẩn đường

ruột không ảnh hưởng đến sự phát triển

của hệ vi khuẩn có ích ở ruột [3, 9]

Việc nghiên cứu định lượng berberin

chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” góp

phần tiêu chuẩn hóa chất lượng sản

phẩm, cũng như xây dựng công thức bào

chế Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên

cứu định lượng berberin trong “Viên nén

đại tràng 105” bằng phương pháp sắc ký

lỏng hiệu năng cao

Nguyên liệu, thiết bị và phương pháp

nghiên cứu

1 Nguyên liệu và thiết bị

xuất tại Bệnh viện Quân y 105, Tổng cục

Hậu cần

phosphoric 0,1%, nước cất đạt tiêu chuẩn

cho HPLC; chất chuẩn berberin chlorid

(Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương, 99%); các hóa chất dung môi khác đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích

Shimadzu 10 Avp (Nhật Bản) gồm hệ bơm

4 kênh dung môi, autosampler, detector UV, cột RP18 (150 x 4,6 mm, 5 µm) và bảo vệ cột cùng loại

- Dụng cụ: cân phân tích Sartorius (độ chính xác 0,1 mg) và các dụng cụ thí nghiệm khác

2 Phương pháp nghiên cứu

- Điều kiện sắc ký:

+ Cột: RP18 (150 x 4,6 mm, 5 µm) + Bước sóng phát hiện: 345 nm + Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút

+ Thể tích tiêm: 20 µl

+ Pha động: hỗn hợp methanol-acetonitril- dung dịch axít phosphoric 0,1% (5:3:3), thêm vào mỗi 100 ml hỗn hợp 0,1 g natri lauryl sulfat (TT) [4, 8, 9]

- Phương pháp xử lý mẫu:

+ Mẫu chuẩn: dung dịch chuẩn được pha bằng cách hòa tan berberin chlorid chuẩn trong pha động để có nồng độ 30 µg/ml, lọc qua màng 0,45 µm thu được dung dịch thử

+ Mẫu thử: cân chính lượng bột viên tương đương khoảng 15 mg berberin chlorid vào bình định mức 50 ml, hòa tan

và pha loãng vừa đủ bằng pha động (dung dịch A) Hút chính xác 3 ml dung dịch A, pha loãng vừa đủ thành 25 ml với pha động, lọc qua màng 0,45 µm Dịch lọc dùng để tiêm mẫu

+ Mẫu trắng: pha động, lọc qua màng lọc 0,45 µm

Trang 3

78

- Thẩm định phương pháp: với các tiêu

chí về tính đặc hiệu, tính tương thích, tính

tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại, giới hạn

phát hiện [4, 7]

KÕt qu¶ nghiªn cøu vµ bµn luËn

1 Tính đặc hiệu

Tiến hành chạy sắc ký mẫu chuẩn,

mẫu thử và mẫu trắng Kết quả trên sắc

ký đồ (SKĐ) cho thấy: mẫu thử cho pic có

thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu

của mẫu chuẩn berberin chlorid; pic của

berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng

105” ở mẫu thử rõ ràng, cân đối, tách

hoàn toàn khỏi pic tạp Đồng thời, mẫu

trắng không thấy xuất hiện pic có thời

gian lưu tương ứng với mẫu chuẩn và

mẫu thử (hình 2, hình 3 và hình 4)

Minutes

0.0000

0.0025

0.0050

0.0075

0.0100

Hình 1: SKĐ đánh giá tính đặc hiệu của

mẫu trắng

Minutes

0.0

0.1

0.2

0.3

Hình 2: SKĐ đánh giá tính đặc hiệu của

mẫu chuẩn berberin chlorid

Minutes

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4

Hình 3: SKĐ đánh giá tính đặc hiệu của

mẫu thử

2 Tính tương thích

Tiến hành tiêm lặp lại 6 lần dung dịch mẫu chuẩn berberin chlorid có nồng độ khoảng 30 µg/ml vào hệ thống sắc ký

Bảng 1: Tính tương thích của hệ thống

sắc ký

(phót)

DiÖn tÝch pic (µAU*s)

Độ lệch chuẩn tương đối của thời gian lưu và diện tích pic berberin chlorid lần lượt là 0,05% và 0,28% Như vậy, phương pháp phân tích hoàn toàn phù hợp với hệ thống sắc ký

Trang 4

79

3 Tính tuyến tính

Pha một dãy các dung dịch chuẩn trong

pha động có nồng độ berberin chlorid từ

5 - 60 µg/ml Tiến hành sắc ký các dung

dịch theo điều kiện sắc ký đã nêu, lặp lại

thí nghiệm 3 lần

Bảng 2: Kết quả khảo sát tính tuyến

tính

Phương trình hồi quy: y = 93990x - 26295

Hệ số tương quan: r = 0,9995

Hình 4: Đồ thị khảo sát sự tương quan

tuyến tính giữa nồng độ và diện tích

pic berberin chlorid

Trong khoảng nồng độ khảo sát có sự

tương quan tuyến tính chặt chẽ giữa

nồng độ berberin chlorid và diện tích pic với hệ số tương quan r ≈ 1

4 Khảo sát độ đúng của phương pháp

Tiến hành bằng phương pháp thêm chuẩn vào mẫu trắng để thu được các dung dịch mẫu tự tạo có nồng độ 20, 30,

40 µg/ml, mỗi nồng độ tiến hành trên 3 thí nghiệm riêng biệt Tiến hành định lượng lại lượng chuẩn trong các mẫu trên, từ đó tính toán được % thu hồi

Bảng 3: Kết quả khảo sát độ đúng của

phương pháp

Nồng độ ban đầu (àg/ml)

100,

2

100,

6

101,

2

100,

5

Phương pháp có độ thu hồi berberin chlorid từ 98,2 - 101,2% (nằm trong giới hạn 98 -102%) với RSD là 1,07% (nằm

Đường hồi quy tuyến tính giữa diện tích pic của

Berberin clorid và nồng độ

y = 93990x - 26295

0

1000000

2000000

3000000

4000000

5000000

6000000

Nồng độ (µg/ml)

Đường hồi quy tuyến tinh giữa diện tích pic của

berberin chlorid và nồng độ

Trang 5

80

trong giới hạn < 2%) Do đó, phương

pháp đạt yêu cầu về độ đúng

5 Độ lặp lại

Độ lặp lại của phương pháp được xác định trên 6 mẫu thử khác nhau theo các điều kiện sắc ký đã nêu

Bảng 4: Kết quả đánh giá độ lặp lại của phương pháp (n = 6)

Hàm lượng berberin

Hàm lượng berberin chlorid trung bình = 15,01 (mg); RSD = 0,87

Hàm lượng berberin chlorid trong mẫu thử trung bình = 15,01 (mg), định lượng lặp lại với n = 6 cho RSD% = 0,87% chứng tỏ phương pháp có độ lặp lại tốt

6 Giới hạn phát hiện (LOD)

Pha loãng dần dung dịch chuẩn, tiêm vào hệ thống sắc ký Tại nồng độ berberin chlorid khoảng 0,02 µg/ml thì trên sắc ký đồ, pic của berberin chlorid thu được vẫn cân đối, riêng biệt Tỷ số S/N là 6 Như vậy, giá trị 0,02 µg/ml đáp ứng được yêu cầu là giới hạn phát hiện của phương pháp

M in u te s

- 0 0 0 0 2

- 0 0 0 0 1

0 0 0 0 0

0 0 0 0 1

0 0 0 0 2

Hình 6: Sắc ký đồ của berberin chlorid tại LOD

7 Kết quả định lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105”

Trang 6

80

Từ phương pháp đã xây dựng, chúng tôi tiến hành xác định hàm lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” Kết quả cho thấy: hàm lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” là 37,65 ± 1,02 (mg/viên) (n = 6)

Kết luận

Đã xây dựng được phương pháp định

lượng berberin chlorid trong “Viên nén đại

tràng 105” bằng phương pháp HPLC

Phương pháp xây dựng có tính đặc hiệu

và tính tương thích cao với hệ thống sắc

ký, độ đúng và độ lặp lại đảm bảo yêu

cầu phân tích, giới hạn phát hiện của

berberin chlorid trong “Viên nén đại tràng

105” là 0,02 µg/ml Hàm lượng berberin

chlorid trong “Viên nén đại tràng 105” là

37,65 ± 1,02 (mg/viên)

TÀI LIệU THAM KHảO

1 Đỗ Huy Bích và CS Cây thuốc và động

vật làm thuốc ở Việt Nam Tập II Nhà xuất

bản Khoa học và Kỹ thuật 2004, tr.1051-1054

2 Bộ Y tế Bài giảng Dược liệu Tập 2

Nhà xuất bản Y học 2007, tr.96-98,102-104.

3 Bộ Y tế Dược điển Việt Nam IV Nhà

xuất bản Y học 2009, tr.91-92

4 Nguyễn Minh Đức Sắc ký lỏng hiệu

năng cao và một số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu và hợp chất tự nhiên Nhà xuất bản Y học Thành phố Hồ Chí Minh 2006, tr.138,148-149

5 Đỗ Tất Lợi Cây thuốc và vị thuốc Việt Nam

Nhà xuất bản Y học 1999, tr.195

6 Web Cây thuốc quý 2007 Berberin www cây thuốc quý.info.vn

7 ICH Validation of analytical procedures:

text and methodology Q2R1 2005

8 Pharmacopoeia of the People’s Republic

of China 2005, Vol III, pp.94-96

9 Tarte P S., Shedharkar G R Force

degradation study of berberine chloride by using stability indicating HPLC method Int J PharmTech Res 2004, 6 (5) pp.1490-1500.

Trang 7

80

Ngày đăng: 20/01/2020, 00:13

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w