Đề tài nhằm nghiên cứu phương pháp định lượng các saponin chính trong viên nang mềm Sâm Việt Nam (SVN) bằng phương pháp HPLC với detector CAD (Charged Aerosol Detector).
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CÁC SAPONIN CHÍNH TRONG VIÊN NANG MỀM SÂM VIỆT NAM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC-CAD Bùi Hồng Ngọc Vân Anh*, Nguyễn Trường Huy**, Huỳnh Trần Quốc Dũng***, Vũ Huỳnh Kim Long**, Nguyễn Minh Cang**, Vũ Duy Dũng****, Nguyễn Minh Đức*,** TÓMTẮT Mục tiêu: Đề tài nhằm nghiên cứu phương pháp định lượng saponin viên nang mềm Sâm Việt Nam (SVN) phương pháp HPLC với detector CAD (Charged Aerosol Detector) Phương pháp nghiên cứu: Quy trình định lượng đồng thời saponin gồm ginsenosid-Rb1 (G-Rb1), ginsenosid-Rd (G-Rd), ginsenosid-Rg1 (G-Rg1) majonosid -2 (M-R2) viên nang mềm SVN trải qua bước chiết xuất tinh chế saponin phân bố lỏng-lỏng với hệ dung mơi thích hợp, xử lý loại tạp chiết xuất cột pha rắn (SPE) trước phân tích định lượng hệ thống HPLC-CAD sử dụng cột C-18 với hệ gradient pha động gồm CH3CN-H2O Kết bàn luận:Qua thẩm định quy trình định lượng HPLC-CAD cho thấy có tuyến tính theo hàm logarith nồng độ chất định lượng diện tích đỉnh tương ứng với hệ số tương quan R2 ≥ 0,997 Khoảng tuyến tính G-Rb1 0,0015 – 0,0048 mg/ml, G-Rd 0,00125 – 0,004 mg/ml, G-Rg1 0,05 – 0,16 mg/ml M-R2 0,075 – 0,24 mg/ml, với hệ số tương quan 0,998; 0,998; 0,997và 0,997 Quy trình đạt yêu cầu độ lặp lại (RSD < 2%) độ khoảng 90 – 110% Kết luận: Phương pháp định lượng HPLC-CAD nghiên cứu ứng dụng để định lượng đồng thời saponin gồm G-Rb1, G-Rd, G-Rg1, M-R2 viên nang mềm SVN Từ khóa: Sâm Việt Nam, viên nang mềm, HPLC-CAD, ginsenosid, majonosid-R2 ABSTRACT SIMULTANEOUS QUANTITATIVE ANALYSIS OF MAJOR SAPONINS IN VIETNAMESE GINSENG SOFT CAPSULES BY HPLC-CAD Bui Hong Ngoc Van Anh, Nguyen Truong Huy, Huynh Tran Quoc Dung, Vu Huynh Kim Long, Nguyen Minh Cang, Vu Duy Dung, Nguyen Minh Duc * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 234-241 Objectives: This study is to develop a simultaneous quantitative analysis of majors saponin in VG soft capsules by HPLC-CAD Methods: A quantitative procedure was developed to determine the content of major saponins in VG soft capsules including ginsenoside-Rb1 (G-Rb1), ginsenosid-Rd (G-Rd), ginsenoside-Rg1 (G-Rg1) and majonoside-R2 (M-R2) Firstly, saponins in the capsules were extracted by liquid-liquid partition with suitable solvent mixtures and then the sample was purified by SPE before introducing to an HPLC-CAD system using a C18 column with a mobile phase of CH3CN-H2O in gradient mode * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Khoa Dược, Đại học Tơn Đức Thắng *** Bệnh viện Y học Cổ truyền Thành phố Hồ Chí Minh ****Trung tâm Ươm tạo Hỗ trợ Doanh nghiệp Khoa học Công nghệ Tác giả liên lạc: GS.TS Nguyễn Minh Đức ĐT: 0908 988 820 Email: nguyenminhduc@tdtu.edu.vn ** 234 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Results and discussion: Upon validation using ICH guidelines, the procedure showed to be reliable with good logarithmic linearity with R2 ≥ 0.997, high reproducibility (%RSD < 2%) and the recovery of saponins in the range of 90-110% Conclusion: The result showed the developed HPLC-CAD method can be used for simultaneous quantitative analysis of major saponins in VG soft capsules including G-Rb1, G-Rd, G-Rg1, M-R2 Key words: Vietnamese gingseng, soft gelatin capsule, HPLC-CAD, ginsenoside, majonoside-R2 MỞ ĐẦU chất lượng trình bảo quản lưu hành Sâm Việt Nam (SVN), gọi Sâm Ngọc Linh, Sâm Khu 5…, có tên khoa học Panax vietnamensis Ha et Grushv, họ Araliaceae, loài thuộc chi Panax tìm thấy Việt Nam năm 1973 vùng núi Ngọc Linh thuộc tỉnh Kon Tum Trải qua 40 năm, nhiều nghiên cứu hóa học dược lý tiến hành SVN giúp khẳng định giá trị loài sâm quý đất nước ta Về thành phần hóa học, hàm lượng saponin toàn phần SVN cao (10-15%) bao gồm saponin thường gặp Nhân sâm thuộc nhóm protopanaxadiol (G-Rb1, G-Rb2, G-Rd …) protopanaxatriol (G-Rg1, G-Re …) Đặc biệt, SVN chứa saponin nhóm ocotillol có majonoside R2 với hàm lượng vượt trội (>5%) so với loài Panax khác(4-6) Các nghiên cứu dược lý cho thấy SVN có tác dụng tăng lực, chống stress, điều hòa miễn dịch, bảo vệ gan, kháng ung thư in vitro…(2,7-9) không thuận lợi sử dụng, Việc nghiên Nhân sâm (Panax ginseng CA Meyer), Rb1 (99,17%), G-Rd (94,48%); G-Rg1 (96,43%); vị thuốc bổ tiếng y học phương đông, M-R2 (98,86%) Ban Nghiên cứu Khoa sản xuất nhiều dạng chế phẩm học Thư viện Khoa Dược, Đại học Y Dược phong phú cao lỏng, cao khô, viên nén, TP Hồ Chí Minh cung cấp viên nang, sâm tẩm mật ong, trà hòa tan, nước Hóa chất, dung mơi cứu bào chế dạng dùng từ SVN mặt giúp nâng cao giá trị hiệu SVN mặt khác đặt câu hỏi vấn đề kiểm sốt chất lượng Vì vậy, mục tiêu đề tài nghiên cứu quy trình định lượng đồng thời saponin viên nang mềm SVN đáng tin cậy để kiểm tra đảm bảo chất lượng chế phẩm NGUYÊNVẬTLIỆU-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Nguyên vật liệu: Nguyên liệu nghiên cứu Viên nang mềm SVN Trung tâm Ươm tạo Hỗ trợ Doanh nghiệp KH & CN, Bộ Khoa học Công nghê sản xuất Chất chuẩn đối chiếu Các chất chuẩn đối chiếu sử dụng gồm G- uống bổ dưỡng, tăng lực … Trong đó, Methanol, acetonitril (J.T Baker, Mỹ, xác định sản phẩm quốc gia có HPLC-grade) Nước cất lần sản xuất từ giá trị cao SVN lưu hành hệ thống cất nước lần Aquatron, đạt tiêu thị trường chủ yếu dạng dược liệu chuẩn HPLC Các dung môi dùng xử lý tươi, dược liệu khô dùng dạng bào mẫu đạt tiêu chuẩn phân tích chế truyền thống thuốc sắc rượu Trang thiết bị thuốc Việc hạn chế giá trị làm thuốc Hệ thống HPLC Thermo Ultimate 3000 với SVN dạng dùng khó kiểm sốt đầu dò CAD (Thermo Scientific, Mỹ) cột sắc liều lượng hoạt chất, không đảm bảo ký Shim-pack GISK C18 (150 x 4,6 mm, 5μm) Chuyên Đề Dược 235 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Phương pháp nghiên cứu Xây dựng thẩm định quy trình định lượng saponin Sâm Việt Nam phương pháp HPLC-CAD Khảo sát quy trình tách hoạt chất khỏi dịch đóng nang phương pháp lắc phân bố với dung môi hữu cơ(3): Cân 20 viên nang mềm SVN, xác định khối lượng trung bình Cân xác lượng dịch viên tương ứng với khối lượng viên (400 mg) vào becher 50 ml Thêm 10 ml dung môi I (hexan – methanol – nước, 4:3:2, lớp trên) vào becher chứa dịch nang, siêu âm từ đến phút 25 – 30 oC, gạn dịch vào bình lắn gạn Thêm 10 ml dung môi II (hexan – methanol – nước, 4:3:2, lớp dưới) vào phần cắn lại becher, siêu âm từ đến phút 25 – 30 oC, gạn dịch vào bình lắng gạn Lặp lại bước lần Lắc dịch bình lắng gạn (~ 60 ml), để yên đến phân tách hoàn toàn Lấy lớp bên vào chén sứ, đến cắn, hòa tan cắn ml methanol 100% Lặp lại trình chiết lỏng lỏng dịch chiết kiểm tra sắc ký lớp mỏng (SKLM) với hỗn hợp chất chuẩn để đối chiếu silica gel F254, khai triển với hệ dung môi CHCl3 - MeOH - H2O (65:35:10, lớp dưới), phát dung dịch acid sulfuric 10% ethanol, sấy 105 oC đến màu Tinh chế mẫu qua cột SPE (Solid Phase Extraction) Dịch chiết sau lắc phân bố, tách hoạt Tiến hành thu thập dịch sau: dịch viên nang mềm SVN trước qua cột SPE, dịch nang sau qua cột SPE, dịch loại tạp methanol 10%, dịch methanol 100% rửa giải saponin dịch methanol rửa cột Các dịch sau kiểm tra SKLM Định lượng hoạt chất HPLC với đầu dò CAD 10 μl dịch chiết sau xử lý bơm vào hệ thống HPLC-CAD sử dụng cột Shimpack GISK C18 (150 x 4,6 mm, 5μm), tốc độ dòng ml/phút với pha động bao gồm acetonitril (A) nước (B) theo chương trình rửa giải gradient Bảng Bảng 1: Chương trình rửa giải gradient định lượng dịch nang SVN Thời gian (phút) → 17 17 → 23 23 → 26 26 → 40 40 → 50 50 → 65 65 → 66 66 → 76 Acetonitril (%) 19,5 → 25 25 → 29 29 → 29 29 → 40 40 → 70 70 → 70 70 → 19,5 19,5 → 19,5 Nước (%) 80,5 → 75 75 → 71 71 → 71 71 → 60 60 → 30 30 → 30 30 → 80,5 80,5 → 80,5 Thẩm định quy trình định lượng Phương pháp HPLC-CAD đánh giá theo hướng dẫn ICH bao gồm tiêu tính tương thích hệ thống, độ đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại độ đúng(1) Kiểm nghiệm viên nang mềm thành phẩm phương pháp sắc ký Mẫu cột SPE loại tạp với ml - Định tính: Sử dụng phương pháp SKLM, yêu cầu sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu có giá trị Rf tương đương với Rf vết chất chuẩn Sử dụng mỏng silica gel F254, với hệ dung môi CHCl3 - MeOH - H2O (65:35:10, lớp dưới), màu dung dịch H2SO4 10% ethanol, sấy 105 oC đến màu MeOH 10% rửa giải với ml MeOH 100% Dung dịch chuẩn: Hòa mg chuẩn G- vào bình định mức 10 ml Cột SPE sau rửa Rb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2 ml MeOH giải rửa với ml MeOH 100% để làm chuẩn chất hỗn dịch dầu gộp chung vào chén sứ, cho bay 45 – 50 oC đến cắn Hòa tan cắn ml methanol 10%, siêu âm từ đến phút 25 – 30 oC Dịch sau siêu âm nạp lên cột SPE C18 hoạt hóa ml MeOH 100% cân với ml MeOH 10% 236 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Dung dịch thử: Hòa 50 mg dịch nang với 0,5 ml dung dịch butanol bão hòa nước, thêm 0,5 ml nước vào hỗn hợp trên, lắc đều, để yên chờ dung dịch tách lớp hoàn toàn Lấy lớp bên để chấm sắc ký trên) dung môi II (hexan – methanol – - Định lượng: Áp dụng quy trình HPLCCAD xây dựng thẩm định để định lượng hàm lượng saponin viên nang mềm M-R2 chiết hoàn toàn Dịch chiết KẾTQUẢ sắc ký đồ HPLC so sánh với dung dịch Xây dựng thẩm định quy trình định lượng saponin viên nang mềm SVN phương pháp HPLC-CAD Kết khảo sát chiết xuất saponin từ dịch nang Dịch nang chiết lỏng-lỏng với dung nước, : : 2, lớp dưới) Kiểm tra dịch chiết SKLM cho thấy sau lần lắc phân bố, saponin G-Rb1, G-Rd, G-Rg1 lần thứ khơng vết mỏng (Hình 1) khơng pic sapomim chuẩn (Hình 2) Do áp dụng quy trình tách hoạt chất khỏi dịch đóng nang viên nang mềm Sâm Việt Nam phương pháp lắc phân bố trình bày với lần lắc phân bố với dung môi II (hexan– methanol–nước, : : 2, lớp dưới) môi I (hexan – methanol – nước, : : 2, lớp Hình 1: Sắc đồ SKLM kiểm tra quy trình tách saponin khỏi hỗn dịch nang thuốc HHC: Hỗn hợp chuẩn Lần 1, lần 2, lần 3, lần 4, lần 5: dịch chiết phân bố thu lần chiết thứ 1, 2, 3, 4, Chuyên Đề Dược 237 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Hình 2: Sắc ký đồ HPLC kiểm tra qúa trình chiết tách hoạt chất khỏi hỗn dịch dầu A Sắc ký đồ hỗn hợp chất chuẩn B Sắc ký đồ dịch nang thuốc xử lý lần kể trình nạp mẫu, loại tạp Kết khảo sát xử lý mẫu qua cột SPE rửa giải hoàn tồn khỏi cột Do áp Kết khảo sát trình xử lý mẫu qua dụng quy trình xử lý mẫu qua cột SPE trình cột SPE trình bày Hình Với bày để tinh chế mẫu trước định lượng phương pháp áp dụng, saponin G-Rb1, HPLC G-Rd, G-Rg1, M-R2 khơng bị hao hụt đáng Hình 3: Sắc ký lớp mỏng kiểm tra quy trình xử lý mẫu qua cột SPE HHC: Hỗn hợp chuẩn 1: Dịch chiết VNM trước qua cột 2: Dịch VNM sau qua cột 3: Dung dịch methanol 10% loại tạp 4: Dung dịch methanol 100% rửa giải saponin 5: Dung dịch methanol 100% rửa cột 238 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Thẩm định quy trình định lượng HPLC-CAD Tính tương thích hệ thống Bảng 2: Kết khảo sát tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn nồng độ 100% (n = 6) Diện tích Thời gian Hệ số bất pic lưu đối (RSD%) (RSD%) trung bình (Astb) GRb1 G-Rd GRg1 M-R2 Số đĩa lý thuyết trung bình (Ntb) 1,47 0,14 0,91 326710.83 1,63 0,15 0,91 387944,33 1,73 0,89 0,86 30493,50 1,62 0,71 0,85 31407,50 Hỗn hợp chuẩn G-Rb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2 nồng độ 100% bơm liên tiếp lần vào hệ thống HPLC-CAD và% RSD diện tích đỉnh, thời gian lưu, hệ số bất đối số đĩa lý thuyết trình bày Bảng Nghiên cứu Y học Giá trị RSD thơng số khảo sát gồm diện tích pic, thời gian lưu < 2%, hệ số bất đối 0,8 < As < 1,5, số đĩa lý thuyết N >1000 chứng tỏ quy trình có tính tương thích hệ thống (Bảng 2) Tính đặc hiệu Tiến hành sắc ký mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn Kết cho thấy: mẫu thử có pic tương ứng thời gian lưu với mẫu chuẩn mẫu trắng khơng có pic trùng với pic G-Rb1, G-Rd, G-Rg1 MR2 mẫu chuẩn Khi thêm chất chuẩn vào mẩu thử, diện tích đỉnh tương ứng với chất chuẩn mẫu thử tăng lên (Hình 4) Do đó, quy trình phân tích đạt tính đặc hiệu Hình 4: Sắc ký đồ HPLC khảo sát tính đặc hiệu phương pháp định lượng A: Mẫu trắng B: Mẫu chuẩn C: Mẫu thử D: Mẫu thử thêm chuẩn saponin theo hàm logarith thập Tính tuyến tính phân với hệ số tương quan 0,997 Vì Giai mẫu gồm nồng độ chuẩn quy trình đạt tính tuyến tính định G-Rb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2 bơm vào lượng saponin viên nang hệ thống HPLC Bảng cho thấy có mềm SVN tương quan nồng độ (x) diện tích đỉnh (y) Chuyên Đề Dược 239 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Bảng 3: Kết khảo sát tính tuyến tính phương pháp định lượng Saponin Phương trình hồi quy R Khoảng tuyến tính (mg/ml) G-Rb1 G-Rd G-Rg1 M-R2 logy = 0,9036logx + 1,3596 logy = 0,9135logx + 1,3135 logy = 0,8673logx + 1,1979 logy = 0,8545logx + 1,2345 0,998 0,998 0,997 0,997 0,0015 – 0,048 0,00125 – 0,04 0,005 – 0,16 0,0075 – 0,24 Độ lặp lại Sáu mẫu thử chuẩn bị bơm vào hệ thống HPLC Kết phân tích độ lặp lại lần mẫu thử trình bày Bảng cho thấy quy trình có độ lặp lại cao với giá trị% RSD lần định lượng ≤ 3,5%, chứng tỏ quy trình có tính lặp lại phù hợp để định lượng hợp chất tự nhiên chế phẩm Bảng 4: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng mẫu chuẩn (n = 6) Mẫu TB SD % RSD G-Rb1 (%) 0,31 0,01 3,23 G-Rd (%) 0,23 0,004 1,74 G-Rg1 (%) 0,90 0,01 1,11 LOD (mg/ml) 0,00048 0,0004 0,00128 0,0016 LOQ (mg/ml) 0,0012 0,0008 0,0032 0,0032 Kết kiểm nghiệm viên nang mềm SVN thành phẩm Định tính Tiến hành SKLM, kết Hình cho thấy sắc ký đồ dung dịch saponin (G-Rb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2) viên nang mềm SVN có vết màu có giá trị Rf tương đương với Rf vết chất chuẩn Như viên thành phẩm lô thử nghiệm đạt tiêu định tính M-R2 (%) 1,65 0,02 1,21 Độ Tiến hành định lượng mẫu thử thêm chuẩn nồng độ 80%, 100%, 120% nồng độ mẫu thử Kết Bảng cho thấy quy trình có độ phục hồi khoảng 90,08 – 97,35%, RSD ≤ 2,79% Vậy quy trình đạt yêu cầu độ Bảng 5: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng thêm mẫu chuẩn nồng độ 80%, 100%, 120% Saponin G-Rb1 G-Rd G-Rg1 M-R2 Khoảng độ (%) 90,19 – 95,99 90,81 – 93,76 90,08 – 95,08 90,30 – 97,35 Độ phục hồi trung bình (%) 93,21 92,07 91,91 93,03 RSD (%) 2,14 1,00 2,33 2,79 Kết luận: Quy trình định lượng saponin HPLC-CAD đáng tin cậy để ứng dụng kiểm nghiệm viên nang mểm SVN 240 Hình 5: Sắc đồ SKLM định tính nang mềm SVN Định lượng Quy trình định lượng sau thẩm định áp dụng để định lượng saponin G-Rb , G-Rd, G-Rg1 M-R2 viên nang mềm SVN Kết trình bày Bảng Mỗi viên nang mềm Sâm Việt Nam 400 mg có chứa 12,38 ± 0,134 mg tổng cộng saponin (chiếm 3,09%/ viên), hàm lượng G-Rb1 1,26 ± 0,017 mg (chiếm 0,32%/ viên), G-Rd 0,92 ± 0,010 mg (chiếm 0,23%/ viên), G-Rg1 3,63 ± 0,055 mg (chiếm 0,91%/ viên) M-R2 6,57 ± 0,061 mg (chiếm 1,64%/ viên) RSD saponin định lượng tổng saponin định lượng < 2% Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Bảng 6: Kết định lượng saponin viên nang mềm SVN (n = 3) Hàm lượng viên STT TB SD %RSD G-Rb1 % 0,31 0,32 0,32 0,32 0,005 1,82 G-Rd mg 1,24 1,27 1,27 1,26 0,017 1,37 % 0,23 0,23 0,23 0,23 0,000 0,00 mg 0,92 0,91 0,93 0,92 0,010 1,09 BÀNLUẬN Đề tài nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng saponin (G-Rb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2) viên nang mềm SVN trải qua bước chiết xuất phân bố saponin từ dịch nang mềm, tinh chế mẫu SPE trước định lượng phương pháp HPLC với detector CAD Phương pháp HPLC-CAD xây dựng thẩm định theo hướng dẫn ICH tính tương thích hệ thống, độ đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại độ chứng tỏ đáng tin cậy Đặc biệt, detector CAD lần áp dụng vào định lượng saponin SVN chứng minh khả phát định lượng tốt saponin nhóm occotillol khơng có nhóm nối đơi phân tử, tiêu biểu M-R2, xem hoạt chất SVN G-Rg1 % 0,9 0,9 0,92 0,91 0,011 1,27 KẾTLUẬN Quy trình định lượng saponin (GRb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2) viên nang mềm SVN phương pháp HPLC-CAD chứng tỏ tính xác đáng tin cậy, ứng dụng để định lượng đồng thời saponin viên naang mềm SVN TÀILIỆUTHAMKHẢO ICH Harmonised Tripartite Guideline (2005), Validation of analytical procedures: text and methodology Q2 (R1), International Conference on Harmonization, Geneva, Switzerland Konoshima T, Takasaki M, et al (1998), "Anti-tumorpromoting activity of majonoside-R2 from Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv, (I)", Biol Pharm Bull, 21(8): pp.834-838 Chuyên Đề Dược mg 3,6 3,59 3,69 3,63 0,055 1,52 M-R2 % 1,64 1,63 1,66 1,64 0,015 0,93 mg 6,56 6,52 6,64 6,57 0,061 0,93 Tổng hàm lượng saponin viên % mg 3,08 12,32 3,07 12,28 3,13 12,53 3,09 12,38 0,032 0,134 1,04 1,09 Li W, Fitzloff JF(2002), "HPLC determination of ginsenosides content in ginseng dietary supplements using ultraviolet detection", Journal of liquid chromatography & related technologies, 25 (16), pp.2485-2500 Nguyen Minh Duc, Nguyen Thoi Nham, Kasai R, Ito A, Yamasaki K, Osamu Tanaka O (1993), "Saponins from Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv, Collected in central Vietnam, I,", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 41(11): pp.2010-2014 Nguyen Minh Duc, Nguyen Thoi Nham, Kasai R, Ito A, Yamasaki K, Tanaka O (1994), "Saponins from Vietnamese Ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv, Collected in central Vietnam, II,", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 42(1): pp.115-122 Nguyen Minh Duc, Nguyen Thoi Nham, Kasai R, Ito A, Yamasaki K, Tanaka O (1994), "Saponins from Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis Ha et Grushv, collected in central Vietnam, III,", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 42(3): pp.634-640 Nguyen Thi Thu Huong, Matsumoto K, Yamasaki K, Nguyen Minh Duc, Nguyen Thoi Nham, Watanabe H (1995), "Crude sponin extracted from Vietnamese ginseng and its major constituent majonoside-R2 attenuate the psychological stress-and foot-shock stress-induced antinociception in mice", Pharmacology Biochemistry and Behavior, 52(2): pp.427-432 Nguyen Thi Thu Huong, Matsumoto K, Yamasaki K, Nguyen Minh Duc, Nguyen Thoi Nham Watanabe H (1996), "Effects of majonoside-R2 on pentobarbital sleep and gastric lesion in psychologically stressed mice", Pharmacology Biochemistry and Behavior, 53(4): pp.957-963 Tran Le Quan, I, Ketut Adnyana, Yasuhiro Tezuka, Takema Nagaoka, Tran Kim Qui, Shigetoshi Kadota (2001), "Triterpene Saponins from Vietnamese Ginseng (Panax vietnamensis) and Their Hepatocytoprotective Activity", Journal of Natural Products, 64(4): pp.456-461 Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 241 ... chất lượng Vì vậy, mục tiêu đề tài nghiên cứu quy trình định lượng đồng thời saponin viên nang mềm SVN đáng tin cậy để kiểm tra đảm bảo chất lượng chế phẩm NGUYÊNVẬTLIỆU-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Nguyên... thẩm định quy trình định lượng saponin Sâm Việt Nam phương pháp HPLC-CAD Khảo sát quy trình tách hoạt chất khỏi dịch đóng nang phương pháp lắc phân bố với dung môi hữu cơ(3): Cân 20 viên nang mềm. .. KẾTLUẬN Quy trình định lượng saponin (GRb1, G-Rd, G-Rg1 M-R2) viên nang mềm SVN phương pháp HPLC-CAD chứng tỏ tính xác đáng tin cậy, ứng dụng để định lượng đồng thời saponin viên naang mềm SVN TÀILIỆUTHAMKHẢO