Nghiên cứu định lượng đồng thời paracetamol và diclofenac natri trong chế phẩm bằng HPLC

Bài báo này trình bày kết quả xây dựng quy trình phân tích paracetamol (PAR) và diclofenac natri (DS) bằng phương pháp HPLC. Kết quả nghiên cứu đã lựa chọn được điều kiện sắc ký: Cột sắc ký HiQ Sil C18 (250 x 4,6mm, 3µm), pha động gồm MeOH – đệm acetat pH 5,0 (80 : 20 v/v), tốc độ dòng: 0,7ml/phút và phát hiện ở bước sóng 281 nm.

NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ DICLOFENAC NATRI TRONG CHẾ PHẨM BẰNG HPLC NGUYỄN HỮU TIẾN - NGUYỄN VIẾT KHẨN Trường Đại học Y Dược - Đại học Huế PHẠM VIỆT TÝ Trường Đại học Sư phạm - Đại học Huế Tóm tắt: Trên thị trường dược phẩm xuất nhiều chế phẩm đa thành phần, có kết hợp paracetamol (PAR) diclofenac natri (DS) Điều đặt yêu cầu cần có quy trình phân tích xác đơn giản xác định hai hoạt chất Bài báo trình bày kết xây dựng quy trình phân tích paracetamol (PAR) diclofenac natri (DS) phương pháp HPLC Kết nghiên cứu lựa chọn điều kiện sắc ký: Cột sắc ký HiQ Sil C18 (250 x 4,6mm, 3µm), pha động gồm MeOH – đệm acetat pH 5,0 (80 : 20 v/v), tốc độ dòng: 0,7ml/phút phát bước sóng 281 nm Phương pháp có độ xác độ cao, quy trình sử dụng để định lượng nhanh paracetamol (PAR) diclofenac natri (DS) chế phẩm, dược phẩm Từ khóa: Paracetamol, Diclofenac natri, HPLC ĐẶT VẤN ĐỀ Paracetamol (N-(4-hydroxyphenyl) acetamide) thuốc giảm đau hạ sốt ưu tiên chọn lựa điều trị chứng đau nhẹ trung bình Diclofenac natri (Sodium [o-(2,6dichloroanilino) phenyl] acetate) dạng muối diclofenac, thuốc kháng viêm nonsteroid Trên thị trường xuất số chế phẩm kết hợp hai hoạt chất trên, định trường hợp viêm khớp hay đau xương… Tuy nhiên dược điển Việt Nam dược điển Mỹ 32 có chuyên luận định lượng riêng lẻ hoạt chất [1], [7] Một số báo công bố phương pháp định lượng đồng thời hai hoạt chất sắc ký lớp mỏng hiệu cao, sắc ký lỏng siêu tới hạn [2], [3], sắc ký lớp mỏng hiệu cao [4] hay phương pháp quang phổ UV-Vis [5] Vì vậy, chúng tơi xây dựng quy trình phân tích paracetamol (PAR) diclofenac natri (DS) phương pháp HPLC Quy trình ứng dụng phân tích đồng thời paracetamol (PAR) diclofenac natri (DS) loại thuốc viên nén sử dụng phổ biến MẪU PHÂN TÍCH, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu phân tích - Chế phẩm thử : chế phẩm viên nén bao phim có hàm lượng ghi nhãn 500mg Paracetamol 50 mg Diclofenac natri : viên Zengesic có số lơ 040613, hạn dùng Tạp chí Khoa học Giáo dục, Trường Đại học Sư phạm Huế ISSN 1859-1612, Số 03(39)/2016: tr 86-92 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ DICLOF 87 29/06/2015 công ty TNHH Stada viên Padinas có số lơ 1303, hạn dùng 10/06/2015 cơng ty Dược phẩm Trường Thọ 2.2 Hóa chất - dung môi - Chất chuẩn thứ cấp Paracetamol (PAR): hàm lượng 100,3%, độ ẩm 0,09%, SKS : 041323 trung tâm kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm, thực phẩm TT-Huế - Chất chuẩn thứ cấp Diclofenac natri (DS): hàm lượng 97,22%, độ ẩm 0,23%, SKS : 051107 trung tâm kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm, thực phẩm TT-Huế - Methanol (MeOH); Natri acetat, acid phosphoric, NaOH sử dụng nghiên cứu Merck, Đức 2.3 Thiết bị - Hệ thống HPLC – detector PDA Shimadzu 20AD, Nhật - Cân phân tích Mettler Toledo, Thụy Sĩ (d = 0,1mg), máy đo pH Oakton pH700 (Nhật) 2.4 Phương pháp nghiên cứu Chuẩn bị dung dịch: - Dung dịch chuẩn gốc DS: Cân xác khoảng 50 mg DS vào bình định mức 50 ml, hòa tan định mức đến vạch MeOH - Dung dịch chuẩn gốc PAR: Cân xác khoảng 50 mg PAR vào bình định mức 50 ml, hòa tan định mức đến vạch MeOH - Dung dịch chuẩn hỗn hợp : Từ dung dịch chuẩn gốc pha loãng pha động thành dung dịch chuẩn hỗn hợp chứa PAR nồng độ khoảng 100 µg/ml DS nồng độ khoảng 10 µg/ml - Dung dịch thử : Cân xác 20 viên chế phẩm thử, tính khối lượng trung bình viên Nghiền mịn, cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 100 mg PAR cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 60 ml MeOH, siêu âm 15 phút Thêm MeOH đến vạch, lắc Ly tâm Lấy xác 10 ml dịch cho vào bình định mức 100 ml, pha loãng pha động đến vừa đủ thể tích Lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký - Qua tham khảo tài liệu với điều kiện có phòng thí nghiệm, chúng tơi sử dụng cột HiQ Sil C18 (250 x 4,6mm, 3µm) nghiên cứu Nghiên cứu khảo sát nhiều dung môi pha động với tỷ lệ khác : MeOH, acetonitril, đệm acetat pH 7,0, đệm phosphat pH 5,0 Kết cho thấy với hệ dung môi MeOH – đệm acetat pH 5,0 pic hai hoạt chất sắc đẹp, cân đối Để lựa chọn tỷ lệ pha động cho thời gian phân tích hợp lý, nghiên cứu khảo sát tỷ lệ khác dung môi lựa chọn hệ pha động: MeOH – đệm acetat pH 5,0 (80 : 20 v/v) 88 NGUYỄN HỮU TIẾN cs - Để lựa chọn bước sóng định lượng thích hợp, chúng tơi phân tích phổ UV hai hoạt chất detector DAD Do DS chế phẩm có hàm lượng 1/10 so với PAR nên ưu tiên bước sóng cho đáp ứng cao DS Từ chúng tơi lựa chọn bước sóng 281nm làm bước sóng định lượng nghiên cứu Từ kết khảo sát trên, chọn điều kiện sắc ký tối ưu trình bày 3.2 Thẩm định phương pháp Tính tương thích hệ thống sắc ký Tính tương thích hệ thống sắc ký xác định tiến hành tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn PAR 95,94 µg/ml DS 10,96 µg/ml Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký trình bày bảng Bảng Khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký Thơng số sắc ký Thời gian lưu Diện tích peak Số đĩa lý thuyết PAR DS TB 3,739 5,167 RSD (%) 0,08 0,37 TB 1608209 179274,5 RSD (%) 0,35 0,06 TB 4963,2 7820,1 RSD (%) 0,76 0,88 Các số liệu thu cho thấy hệ thống sắc ký chọn lựa tương thích cho việc phân tích định lượng đồng thời PAR DS 3.3 Tính chọn lọc khoảng tuyến tính Tính chọn lọc Tiến hành sắc ký dung dịch mẫu trắng dung dịch chuẩn hỗn hợp Sắc ký đồ trình bày hình 1a, 1b NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ DICLOF 89 Hình Sắc ký đồ mẫu: a hỗn hợp chuẩn; b mẫu trắng;c định lượng viên ZENGESIC; d định lượng viên PADINAS Kết hình cho thấy sắc ký đồ mẫu trắng vị trí tương ứng thời gian lưu PAR DS (3,739 5,167 phút) khơng có píc Kiểm tra phổ UV detector PDA mẫu thêm chuẩn đánh giá độ tinh khiết píc (purity index) cho thấy píc có độ tinh khiết cao Do vậy, phương pháp có tính chọn lọc Khoảng nồng độ tuyến tính Từ dung dịch chuẩn gốc pha lỗng dung môi pha động thành dung dịch chuẩn thứ cấp có nồng độ xác khoảng 57,56 – 134,31 µg/ml PAR 6,58 – 15,34 µg/ml DS Tiến hành sắc ký, kết trình bày bảng hình Bảng Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính C (µg/ml) 57,56 A (mAU.s) 981330 1300031 1615148 1942169 2294077 r = 0,9995 C (µg/ml) 6,58 A (mAU.s) 109958 145241 PAR 76,75 8,77 95,94 115,13 134,319 y = 17029x -7265 10,96 13,15 15,34 y = 16532x + 238 179661 217199 255190 r2 = 0,9995 DS Hình Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ diện tích píc PAR DS 90 NGUYỄN HỮU TIẾN cs Kết cho thấy, khoảng nồng độ khảo sát có tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ với diện tích píc Độ xác Đánh giá độ xác phương pháp chế phẩm viên bao Zengesic Chuẩn bị dung dịch mẫu đánh giá độ xác chuẩn bị dung dịch thử tiến hành mẫu cân riêng biệt Kết trình bày bảng Bảng Kết đánh giá độ xác phương pháp STT Trung bình RSD % Khối lượng bột PAR (mg) S (mAu.s) 128,3 1610232 134,5 1679682 136,8 1677093 132,0 1621559 128,6 1599432 132,4 1639453 HL % 102,04 101,66 99,28 99,65 100,58 100,74 100,66 1,08 DS S (mAu.s) 154072 161616 169133 159900 160284 161436 HL % 99,96 100,17 102,54 100,61 103,19 101,57 101,34 1,30 Kết bảng cho thấy phương pháp có độ lặp lại cao với RSD nhỏ 2,0% Độ Độ xác định phương pháp thêm chuẩn Thêm xác lượng chuẩn PAR DS vào mẫu thử nghiền mịn có khối lượng tương ứng viên, lượng hoạt chất thêm vào tương ứng với 10% lượng hoạt chất viên (khoảng 50 mg PAR mg DS), 20% lượng hoạt chất viên (khoảng 100 mg PAR 10 mg DS) Mẫu thêm chuẩn lần Kết trình bày bảng Bảng Kết đánh giá độ phương pháp % tìm lại 98,43 DS Lượng thêm (mg) 5,3 % tìm lại 99,25 49,2 101,42 4,8 100,21 48,7 100,82 5,1 100,39 100,2 99,50 10 99,30 99,4 100,40 9,9 98,59 101,1 99,70 9,4 STT PAR Lượng thêm (mg) 51,1 TB 100,05 99,47 99,53 RSD (%) 1,06 0,67 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ DICLOF 91 Kết cho thấy phương pháp có độ tốt với tỷ lệ thu hồi xấp xỉ 100% * Nhận xét: Kết thẩm định tính chọn lọc, tính tương thích hệ thống, khoảng nồng độ tuyến tính, độ xác độ phương pháp cho thấy phương pháp sử dụng để định lượng đồng thời PAR DS chế phẩm thuốc đa thành phần chứa hai hoạt chất 3.4 Phân tích mẫu thực tế Tiến hành chuẩn bị mẫu dung dịch thử theo cách trình bày phần Lặp lại lần mẫu bột viên nén chế phẩm Song song chuẩn bị mẫu chuẩn hỗn hợp Tiến hành sắc ký Kết trình bày hình 1c, 1d bảng Bảng Kết định lượng PAR DS chế phẩm (n = 3) Mẫu ZENGESIC PADINAS Sai số so với hàm lượng ghi nhãn (%) (TB ±SD) PAR DS 100,31 ± 0,75 101,31 ± 0,48 98,83 ± 0,24 100,42 ± 0,63 Từ kết nghiên cứu cho thấy quy trình phân tích sử dụng để phân tích đồng thời PAR DS loại thuốc viên nén đa thành phần KẾT LUẬN Phương pháp HPLC định lượng đồng thời PAR DS xây dựng thẩm định đạt tiêu chuẩn theo hướng dẫn ASEAN thẩm định quy trình phân tích Phương pháp có độ chọn lọc cao, mức độ tuyến tính nồng độ diện tích píc chặt chẽ, độ xác độ cao Phương pháp ứng dụng để định lượng đồng thời PAR DS viên nén chứa hai hoạt chất TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] [3] [4] [5] Bộ Y tế (2009) Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội Maulikkumar R Amin1 et al (2012) “Stability Indicating HPLC Method for Simultaneous Determination of Diclofenac Potassium, Paracetamol and Methocarbamol”, American Journal of PharmTech Research, 2(6), pp 690-701 Suvarna T Patil, M Sundaresan, Indravadan C Bhoir, A.M Bhagwat (1998) “Packed column supercritical fluid chromatographic separation and estimation of acetaminophen, diclofenac sodium and methocarbamol in pharmaceutical dosage forms”, Talanta, 3(10), pp 3-10 Smita J Pawar et al (2009) “HPTLC estimation of Paracetamol, Diclofenac Sodium and Chlorzoxazone in Tablet dosage form”, Asian J Research Chem., 2(3),pp 306-309 Rajesh Sharma, Geetam Pathodiya, Ganesh Prasad Mishra, Jitendra Sainy (2010) “Spectrophotometric Methods for Simultaneous Estimation of Paracetamol and Diclofenac Sodium in Combined Dosage Form by Application of Hydrotropic Solubilization”, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2(12), pp 821-826 92 NGUYỄN HỮU TIẾN cs [6] [7] Ekram M Hassan, Mohamed S Mahrous and Ruba N.Shdeed (2011) “Spectrophotometric determination of the active components of a ternary mixture containing Chlorpheniramine maleate, Diclofenac sodium and Paracetamol”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical sciences, 7(6), pp 1-9 The United States Pharmacopoiea 32 (2009) “Acetaminophen Tablets”, “Diclofenac Sodium”, pp 1391, 2124 Title: SIMULTANEOUS DETERMINATION OF PARACETAMOL AND DICLOFENAC SODIUM IN TABLETS BY HPLC Abstract: Nowadays, there are a lot of pharmaceutical products on markets containing paracetamol (PAR) and diclofenac sodium (DS) Therefore, it is necessary to develop an analytical method to determine these active ingredients simultaneously and efficiently In this paper, we report an HPLC method for determination PAR and DS in tablets The HPLC conditions were optimized as follow: HiQ Sil C18 (250 x 4.6mm, 3µm); mobile phase: MeOH – acetate buffer at pH 5.0 (80 : 20 v/v), flow rate at 0.7 ml/min; UV detection at 281 nm It was proved that the method was accurate, precise and vert sensitive for determination PAR and DS in tablets Keywords: Paracetamol, diclofenac sodium, HPLC ThS NGUYỄN HỮU TIẾN Khoa Dược, Đại học Y Dược, Đại học Huế ĐT: 0982 071 801, Email: huutien.pharm181@gmail.com ThS NGUYỄN VIẾT KHẨN Khoa Dược, Đại học Y Dược, Đại học Huế ĐT: 0905 140 382, Email: nvietkhan@gmail.com ThS PHẠM VIỆT TÝ Khoa Hóa học, Đại học Sư phạm, Đại học Huế ĐT: 0982 429 271, Email: asapphuvinh@gmail.com (Ngày nhận bài: 17/02/2016; Hoàn thành phản biện: 14/6/2016; Ngày nhận đăng: 12/8/2016) ... Từ kết nghiên cứu cho thấy quy trình phân tích sử dụng để phân tích đồng thời PAR DS loại thuốc viên nén đa thành phần KẾT LUẬN Phương pháp HPLC định lượng đồng thời PAR DS xây dựng thẩm định đạt... 99,4 100,40 9,9 98,59 101,1 99,70 9,4 STT PAR Lượng thêm (mg) 51,1 TB 100,05 99,47 99,53 RSD (%) 1,06 0,67 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ DICLOF 91 Kết cho thấy phương pháp có độ...NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ DICLOF 87 29/06/2015 công ty TNHH Stada viên Padinas có số lơ 1303, hạn dùng 10/06/2015 cơng ty Dược phẩm Trường Thọ 2.2 Hóa