Bệnh động kinh là một bệnh lí thần kinh nghiêm trọng thường gặp, các hoạt động điện não bị rối loạn, gây ra các cơn co giật tái diễn, có hành vi bất thường và đôi khi mất ý thức. Hiện nay, trên thế giới ước tính có khoảng 50 triệu người động kinh. Tỉ lệ ước lượng trên dân số chung là 4-10/1000 người.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 XÁC ĐỊNH KIỂU GEN HLA-B*1502 Ở BÊNH NHÂN MỚI ĐƯỢC CHẨN ĐOÁN MẮC BỆNH ĐỘNG KINH Lương Bắc An*, Bùi Nguyễn Nhật Minh*, Nguyễn Thị Hà Giang*, Đỗ Thị Thanh Thủy* TÓM TẮT Mở đầu: Bệnh động kinh bệnh lí thần kinh nghiêm trọng thường gặp, hoạt động điện não bị rối loạn, gây co giật tái diễn, có hành vi bất thường ý thức Hiện nay, giới ước tính có khoảng 50 triệu người động kinh Tỉ lệ ước lượng dân số chung 4-10/1000 người Carbamazepine, loại thuốc điều trị chống co giật, sử dụng nhiều điều trị bệnh động kinh Carbamazepine gây phản ứng mẫn nghiêm trọng đe dọa tính mạng, bao gồm hội chứng Steven Johnson (SJS) hoại tử da gây độc (TEN) Nhiều nghiên cứu phát bệnh nhân gốc châu Á có mang kiểu gen HLA-B*1502 nguy phát triển hội chứng SIS/TEN điều trị với Carbamazepine cao Xác định kiểu gen HLA-B*1502 trước định sử dụng Carbamazepine nhằm giảm thiểu hội chứng SJS/TEN bệnh nhân sử dụng carbamazepine cần thiết Mục tiêu: Sử dụng kĩ thuật realtime PCR để phát kiểu gen HLA-B*1502 Phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang Mẫu máu bệnh nhân với chẩn đoán mắc bệnh động kinh lấy từ bệnh viện Đại học Y Dược Tp.HCM bệnh viện Ngoại Thần Kinh Quốc Tế Tiến hành ly trích DNA tồn bộ, phản ứng realtime PCR để phát kiểu gen HLA-B*1502 Kết quả: Trong tổng số 196 mẫu bệnh nhân nghiên cứu, tần số bệnh nhân mang allele HLA-B*1502 24,5 % (48/196) bệnh nhân không mang allele HLA-B*1502 75,5 % (148/196) Kết luận: Việt Nam nằm khu vực châu Á có tần suất mang kiểu allele HLA-B*1502 cao, kết nghiên cứu cho thấy 24,5% bệnh nhân có mang allele HLA-B*1502 Vì vậy, trước sử dụng thuốc carbamazepine điều trị bệnh động kinh, cần yêu cầu thực xét nghiệm HLA-B*1502 giúp bác sĩ lâm sàng có phương thức điều trị nhằm hạn chế hội chứng SJS/TEN Từ khóa: Realtime PCR, HLA-B*1502, Carbamazepine ABSTRACTS IDENTIFYING HLA-B*1502 IN PATIENTS WITH NEWLY DIAGNOSED EPILEPSY Luong Bac An*, Bui Nguyen Nhat Minh*, Nguyen Thi Ha Giang*, Do Thi Thanh Thuy* * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No - 2016: 100 - 104 Background: Epilepsy is a common serious neurological disease in which nerve cell activity is disturbed, causing recurrent seizures, periods of unusual behavior and sometimes loss of consciousness Recently, there are approximately 50 million people with epilepsy in the world The incidence of general population was about 410/1000 cases Carbamazepine, an anticonvulsant medication has used to treating epilepsy Carbamazepine can cause severe hypersensitivity reactions and threatening life, including Steven Johnson Syndrome (SJS) and toxic epidermal necrolysis (TEN) Many researchers found that Asian patients carrying the HLA-B*1502 have high risk of developing the syndrome SIS / TEN when treated with Carbamazepine Genotyping HLA-B*1502 before using Carbamazepine is necessary to reduce symptoms of SJS / TEN in patients Objective: Using real-time PCR to identify HLA-B*1502 genotypes * Trung tâm Y sinh học phân tử Đại học Y Dược Tp.Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: CN Lương Bắc An ĐT: 0933908241 100 Emailluongbacan1991@gmail.com Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Method: A cross-sectional descriptive study Whole blood samples were obtained from patients with newly diagnosed epilepsy (University Medical Center, Ho Chi Minh City, Vietnam and International Neurosurgery Hospital, Ho Chi Minh City, Vietnam) DNA total was extracted by GE kit, real-time PCR was carried out to detect the HLA-B*1502 Results: In this study with 196 samples, 48 (24.5%) were found to carry the HLA-B*1502 allele 148 (75.5%) were not found to carry the HLA-B*1502 allele Conclusion: The prevalence of carrying HLA-B*1502 is high in Asian population, especially in Vietnam The study show 24.5% patients carry the HLA-B*1502 The identification of patients carrying the HLA-B*1502 allele and the avoidance of carbamazepine therapy in these patients were strongly related with a decrease in the incidence of carbamazepine - induced SJS/TEN Key words: Real-time PCR, HLA-B*1502, carbamazepine dây thần kinh sinh ba, rối loạn lưỡng cực Đặc ĐẶT VẤN ĐỀ biệt carbamazepine lựa chọn điều Động kinh bệnh lý thần trị bệnh động kinh cục phức tạp trẻ kinh nghiêm trọng thường gặp Bệnhdo hoạt em Tác dụng thuốc ghi nhận động điện não bị rối loạn, gây co giật hiệu đáp ứng tốt Tuy nhiên, theo số tái diễn, có hành vi bất thường đơi ý nghiên cứu, bệnh nhân người châu Á thức Bệnh nhân có triệu chứng co giật khác (Trung Quốc, Thái Lan, Malaysia) điều trị Một số người đơi có biểu nhìn bệnh động kinh với phác đồ Carbamazepine chằm chằm vài giây, số khác liên có nguy cao phát triển hội chứng Steventục co giật tay chân Johnson (SJS) hoại tử da gây độc (TEN) Hiện nay, giới ước tính có 50 triệu Đây hội chứng dị ứng da người động kinh Tỉ lệ ước lượng dân số nghiêm trọng Triệu chứng SJS sốt cao, chung 4-10/1.000 người Ở nước có thu loét hốc tự nhiên, tổn thương da: bọng nhập thấp trung bình tỉ lệ cao hơn, nước, phồng rộp phát ban, kèm tổn 7-14/1.000 người Tổng thể, ước tính có 2,4 thương gan thận, thể nặng dễ dẫn đến tử triệu nguời chẩn đoán động kinh vong TEN có triệu chứng tương tự, năm Các nước có thu nhập cao, trường chí da bong tróc rộng tỉ lệ tử hợp ghi nhận năm 30-50/100.000 vong cao(3) Tỉ lệ tử vong SJS ước tính khoảng người, với nước thu nhập thấp tỉ lệ 5% TEN nghiêm trọng từ 25%-35% cao gấp lần(2) Tại Việt Nam, tỉ lệ mắc tổng số ca mắc phải(7) Tình trạng phát triển bệnh động kinh 0,07%, tỉ lệ phát bệnh hội chứng SJS sau sử dụng Carbamazepine 9,6/100.000 dân, tỉ lệ tử vong 1,9/100.000 hay xuất người châu Á nguyên nhân dân (1) Gần nửa số trường hợp bệnh động chủ yếu dân tộc châu Á có tần số mang kinh khơng có ngun nhân rõ ràng, số lại allele HLA-B*1502 cao Sự liên quan chẩn đoán di truyền, u não, chấn allele HLA-B*1502 phát triển hội chứng thương não tai nạn, đột quị, bệnh thần kinh SJS/TEN chứng minh(4).Việt Nam nằm (5) viêm màng não… Bệnh động kinh gây khu vực Đông Nam Á, nơi có tần số dân nguy hiểm người bệnh hoạt động lái số mang allele HLA-B*1502 cao, nghiên xe, bơi lội cứu cho thấy 13,5% dân số Việt Nam có mang kiểu allele HLA-B*1502(6) Vì vậy, chúng tơi Carbamazepine loại thuốc điều trị chống tiến hành nghiên cứu với mục tiêu xác co giật, sử dụng nhiều điều trị định kiểu gen HLA-B*1502 trước điều trị bệnh động kinh dùng làm thuốc giảm đau Thần kinh 101 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 carbamazepine cho bệnh nhân chẩn đoán động kinh nhằm giúp bác sĩ điều trị cân nhắc việc sử dụng thuốc, hạn chế hội chứng SJS-TEN xảy bệnh nhân ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Thiết kế thí nghiệm Mơ tả cắt ngang Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành đối tượng bệnh nhân chẩn đoán động kinh đến khám bệnh viện Đại học Y dược Tp HCM bệnh viện Ngoại Thần Kinh Quốc tế từ tháng 1-2015 đến tháng 8/2015 Phương pháp nghiên cứu Ly trích DNA từ mẫu máu tồn phần Mẫu máu toàn phần thu nhận chứa ống máu chống đơng có EDTA Khơng sử dụng chất chống đông heparin Mẫu tách chiết DNA với Kit GE theo hướng dẫn nhà sản xuất Xác định kiểu gen HLA-B*1502 Kiểu gen HLA-B*1502 xác định PG 1502 Detection Kit SYBR Green chất phát huỳnh quang sử dụng phát sản phẩm sau phản ứng khuếch đại Trình tự cặp mồi thiết kế nhà sản xuất Thành phần phản ứng theo hướng dẫn nhà sản xuất Hai phản ứng PCR tiến hành mẫu bệnh Phản ứng khuếch đại đặc hiệu cho kiểu gen HLAB*1502, phản ứng lại khuếch đại gen chứng nội G3PDH (internal control – IC) Gen chứng nội giúp xác nhận khả âm tính giả ức chế phản ứng PCR KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Chất lượng mẫu tách chiết DNA mẫu tách chiết từ mẫu máu toàn phần kit GE (Health Care) Độ tinh DNA đo máy đo quang phổ có giá trị OD260/280 nằm khoảng 1,7 đến 2,0 102 Giá trị Ct Mỗi mẫu bệnh nhân đánh giá giá trị Ct, giá trị Ct từ phản ứng khuếch đại kiểu gen HLA-B 1502 giá trị Ct từ phản ứng khuếch đại gen chứng nội (internal control – IC) Sự khác biệt hai giá trị Ct kết thí nghiệm tính theo cơng thức ΔCt = Ct HLA-B 1502 – Ct IC Bảng 1: Hướng dẫn đọc kết allele HLA-B*1502 ΔCt ≤ Ct HLA-B 1502 ≤ 35 IC Ct ≤ 27 ΔCt > Ct HLA-B 1502> 35 IC Ct > 27 Phản ứng PCR bị ức chế Nồng độ DNA thấp HLA-B*1502 dương tính HLA-B*1502 âm tính HLA-B*1502 âm tính Kiểm tra lại Bảng 2: Kết HLA-B*1502 Giới HLA-B*1502 HLA - B*1502 Tổng tính dương tính (N=48) âm tính (N=148) (N=196) Nam 25 (52,1%) 61 (41,2%) 86 (43,9%) Nữ 23 (47,9%) 87 (58,8%) 110 (56,1%) Nếu giá trị Ct IC nhỏ 27 giá trị ΔCt nhỏ 7, kết ghi nhận HLA-B 1502 dương tính Nếu giá trị Ct IC nhỏ 27 giá trịΔCt lớn 7, kết ghi nhận HLA-B 1502 âm tính Giá trị Ct HLA-B 1502 > 35 ghi nhận âm tính Phản ứng PCR bị ức chế nồng độ DNA thấp giá trị Ct IC lớn 27 Các mẫu cần kiểm tra lại Kết chứng dương chứng âm tương tự Đối với chứng dương, giá trị Ct IC ≤ 27 ΔCt ≤ Giá trị Ct chứng âm không ghi nhận lớn 35 Nghiên cứu thu nhận 196 mẫu bệnh nhân, 48 (24,5%)trường hợp có mang allele HLA-B*1502 Có 148 (75,5%) trường hợp khơng mang allele HLA-B*1502 Phân tích kết nghiên cứu, thấy tần số allele HLAB*1502 (24,5%) cao so với nước khu vực lân cận Trung Quốc (5-15%), Malaysia (1215%), Thái Lan (8-27%)(4,8) Ở nước Nhật Bản, Hàn Quốc Sri Lanka tỉ lệ thấp Ngược Chuyên Đề Nội Khoa II Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 lại, dân tộc da trắng châu Phi hầu không mang allele HLA-B*1502 Nhiều nghiên cứu phát bệnh nhân có gốc người Trung Hoa có mang kiểu gen HLA-B*1502 cao, nên tăng nguy phát triển hội chứng SIS/TEN điều trị với Carbamazepine (4, 8) Sự biến động tỉ lệ HLA-B 1502 đáng ý Trong khu vực châu Á, Hong Kong, Thái Lan, Malaysia phần Philipine có 15% dân số mang kiểu allele HLA-B*1502 dương tính, so với 10% dân số Đài Loan Tuy nhiên, có 4% dân số phía bắc Trung Quốc mang kiểu gen (3) Tại Nam Á, bao gồm Ấn Độ, tỉ lệ trung bình kiểu allele HLA-B*1502 dao động từ 2-4% dân số, cao số nhóm dân tộc Tần số allele HLA-B*1502 diện 1% dân số Nhật Bản Hàn Quốc Đặc biệt, phần lớn allele HLA-B*1502 không xuất người da trắng, người Mỹ gốc Phi, Tây Ban Nha, người Mỹ địa(8) Cơ chế gây hội chứng Steven-Johnson sử dụng carbamazepine chưa nghiên cứu rõ Theo số nghiên cứu, Carbamazepine chuyển hóa thành dạng có hoạt tính sinh học khơng gây độc cho tế bào, nhiên số enzyme tham gia vào q trình chuyển hóa bị thiếu, dẫn tới tạo số hoạt chất trung gian gây độc Carbamazepine chuyển thành dạng có hoạt tính sinh học gồm: Carbamazepine 10,11- epoxide, 3-hydroxy carbamazepine, 2hydroxy carbamazepine carbamazepine 2,3epoxide nhờ enzyme cytochrome P450 gan Hầu hết phản ứng epoxides khử độc thành dạng dihydrodiol không độc nhờ vi lạp thể epoxide hydrolase (EPHX1) gan tạo thành liên hợp glutathione glutathione transferase Dị ứng da thuốc kích hoạt carbamazepine Các tế bào gây độc T-CD8 trung gian xuất hội chứng SJS Nhiều chứng cho thấy dị ứng da thuốc liên quan yếu tố phức hợp tương thích mơ (MHC) phụ thuộc trình diện chế chuyển hóa với tế bào T hoạt hóa Thần kinh Nghiên cứu Y học Các allele HLA-B khởi động đáp ứng miễn dịch cách trình diện kháng nguyên nội bào cho tế bào T gây độc, kết dẫn tới tăng sinh tế bào T gây độc Nhiều thuốc sử dụng điều trị động kinh co giật (carbamazepine, phenytoin, henobarbital) gây hội chứng SJS/TENđã ghi nhận Ngoài ra, allele HLA-B*1502 ghi nhận nhóm nhỏ bệnh nhân sử dụng thuốc lamotrigine phenytoin gây hội chứng SIS/TEN Nhiều biến thể allele HLA-B ghi nhận liên quan hội chứng SJS/TEN Ví dụ, HLA-B*5701 phản ứng mẫn dùng abacavir, HLAB*5801 allopurinol HLA-B*1513 với phenytoin(8) Tuy nhiên, tỉ lệ tần số allele HLA-B*1502 chưa biết rõ nhiều vùng địa lí nhóm dân tộc Việt Nam Với nghiên cứu cho thấy 13,5% dân số Việt Nam có mang kiểu allele HLA-B*1502, nên Việt Nam nước có nguy cao bị hội chứng SJS/TEN điều trị với Carbamazepine(6) Nghiên cứu thấy tần suất allele cao (24,9%) tương đương với nước Asian nghiên cứu bệnh viện Bạch Mai (8,9) Vì vậy, bệnh nhân mắc bệnh động kinh nên tầm soát kiểu allele HLA-B*1502 trước cân nhắc sử dụng thuốc carbamazepine Thời gian trung bình biểu hội chứng SJS/TEN sử dụng carbamazepine từ 25-90 ngày Bệnh nhân điều trị với carbamazepine tháng mà khơng có biểu di ứng khơng cần thực xét nghiệm HLA-B*1502 mà tiếp tục sử dụng thuốc (8) KẾT LUẬN Nghiên cứu bước đầu xác định 24,5% dân số có mang allele HLA-B*1502 Đây tỉ lệ cao so với nước khu vực châu Á Để giảm tỉ lệ tử vong tỉ lệ mắc bệnh liên quan tới sử dụng thuốc Carbamazepine điều trị động kinh, bệnh nhân nên xét nghiệm xác định kiểu HLA-B*1502 trước điều trị bệnh 103 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 TÀI LIỆU THAM KHẢO 104 Brent FP, McLeod HL (2008), "Carbamazepine, HLA-B* 1502 and risk of Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis: US FDA recommendations" Chen P, et all (2011), "Carbamazepine-induced toxic effects and HLA-B* 1502 screening in Taiwan", New England Journal of Medicine 364(12), pp 1126-1133 Chung WH, et all (2004), "Medical genetics: a marker for Stevens–Johnson syndrome", Nature 428(6982), pp 486486 Hoa B, et all (2008), "HLA-A,-B,-C,-DRB1 and-DQB1 alleles and haplotypes in the Kinh population in Vietnam", Tissue Antigens 71(2), pp 127-134 Hung SI, et all (2006), "Genetic susceptibility to carbamazepine-induced cutaneous adverse drug reactions", Pharmacogenetics and genomics 16(4), pp 297306 Lê Dương Hữu, al et (2008), "Tình hình quản lí bệnh động kinh huyện Châu Thành tỉnh Tiền Giang", Tạp chí Y Học TP HCM 12(1), pp 315 Lim KS, PatrickK, Tan CT (2008), "Association of HLA-B* 1502 allele and carbamazepine-induced severe adverse cutaneous drug reaction among Asians, a review", Neurology Asia 13(6), pp 15-21 NinaBP, et al (2009), "The descriptive epidemiology of epilepsy—a review", Epilepsy research 85(1), pp 31-45 Van Nguyen Dinh, et all (2015), "HLA-B* 1502 and carbamazepine-induced severe cutaneous adverse drug reactions in Vietnamese", Asia Pacific Allergy 5(2), pp 68 Ngày nhận báo: 20/11/2015 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/11/2015 Ngày báo đăng: 15/02/2016 Chuyên Đề Nội Khoa II ... HLA-B*1502 Đây tỉ lệ cao so với nước khu vực châu Á Để giảm tỉ lệ tử vong tỉ lệ mắc bệnh liên quan tới sử dụng thuốc Carbamazepine điều trị động kinh, bệnh nhân nên xét nghiệm xác định kiểu HLA-B*1502. .. đơng heparin Mẫu tách chiết DNA với Kit GE theo hướng dẫn nhà sản xuất Xác định kiểu gen HLA-B*1502 Kiểu gen HLA-B*1502 xác định PG 1502 Detection Kit SYBR Green chất phát huỳnh quang sử dụng phát... Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành đối tượng bệnh nhân chẩn đoán động kinh đến khám bệnh viện Đại học Y dược Tp HCM bệnh viện Ngoại Thần Kinh Quốc tế từ tháng 1-2015 đến tháng 8/2015 Phương