Nghiên cứu tối ưu hóa quy trình và bước đầu áp dụng quy trình để xác định kiểu gen cyp2c19 trên bệnh nhân đặt stent động mạch vành qua da

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI - - LÊ THỊ NHIÊN NGHIÊN CỨU TỐI ƢU HÓA QUY TRÌNH VÀ BƢỚC ĐẦU ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN CYP2C19 TRÊN BỆNH NHÂN ĐẶT STENT ĐỘNG MẠCH VÀNH QUA DA LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI - - LÊ THỊ NHIÊN NGHIÊN CỨU TỐI ƢU HÓA QUY TRÌNH VÀ BƢỚC ĐẦU ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN CYP2C19 TRÊN BỆNH NHÂN ĐẶT STENT ĐỘNG MẠCH VÀNH QUA DA LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ 60720405 Người hướng dẫn khoa học: TS Dƣơng Thị Ly Hƣơng TS Vũ Thị Thơm HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực hoàn thành luận văn này, nhận nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ tận tình từ thầy cô, gia đình bạn bè Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: TS Dương Thị Ly Hương Trưởng phòng khoa học công nghệ hợp tác quốc tế, Phó Chủ nhiệm môn Dược lý Dược lâm sàng, Khoa Y Dược- Đại học quốc gia Hà Nội; TS Vũ Thị Thơm Phó chủ nhiệm môn Y - Dược học sở, Khoa Y – Dược, Đại học quốc gia Hà Nội thầy cô trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận văn Đồng thời xin gửi lời cảm ơn chân thành đến đề tài nghiên cứu khoa học cấp Đại học Quốc gia: “Nghiên cứu ảnh hưởng đa hình gen CYP2C19 tới điều trị chống ngưng tập tiểu cầu người bệnh sau đặt stent động mạch vành qua da” cung cấp nguồn kinh phí giúp thực luận văn Tôi xin gửi lời cám ơn đến: Ths Phạm Thị Hồng Nhung cán công tác Khoa Y dược- Đại học quốc gia Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu toàn thể cán Trường đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện để lĩnh hội kiến thức quý giá ngành Dược suốt thời gian học tập, nghiên cứu trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè sát cánh, động viên hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cám ơn! Hà Nội, ngày 25 tháng 03 năm 2016 Học viên Lê Thị Nhiên MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Phần 1: TỔNG QUAN 1.1 Dƣợc lý di truyền khái niệm liên quan 1.2 Tổng quan CYP2C19 1.2.1 Đại cương CYP2C19 1.2.2 Một số alen liên quan đến chuyển hóa thuốc gen CYP2C19 có ý nghĩa lâm sàng 1.2.2.1.Alen mã hóa cho enzym CYP2C19 có chức bình thường: 1.2.2.2 Các alen mã hóa cho enzym giảm hoạt tính 1.2.2.3 Alen mã hóa cho enzym có hoạt tính tăng 1.2.3 Các nghiên cứu gen mã hóa enzym CYP2C19 người Việt Nam 1.2.4 Mối liên quan đa hình CYP2C19 với đáp ứng điều trị thuốc chống ngưng tập tiểu cầu bệnh nhân can thiệp động mạch vành qua da 1.2.5 Các nghiên cứu ảnh hưởng tính đa hình gen CYP2C19 lên tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu clopidogrel 11 1.3 Các phƣơng pháp phân tích gen 13 Phần 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.1.1.Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 19 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 19 2.2 Nguyên liệu phƣơng tiện nghiên cứu: 19 2.2.1 Hóa chất 19 2.2.2 Thiết bị 20 2.2.3 Dụng cụ 20 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Chọn mẫu nghiên cứu 20 2.3.2 Phương pháp tiến hành 21 2.3.2.1 Quy trình xét nghiệm gen 21 2.3.2.2 Xét nghiệm gen CYP2C19 mẫu máu thu 29 2.3.3 Xử lý phân tích số liệu 29 2.3.4 Đạo đức nghiên cứu 29 PHẦN 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 Kết tối ƣu hóa quy trình xét nghiệm gen CYP2C19 30 3.2 Kết xét nghiệm gen CYP2C19 46 Phần 4: BÀN LUẬN 49 4.1 Về tối ƣu hóa quy trình xác định gen CYP2C19 49 4.2 Về đa hình gen CYP2C19 53 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Chữviếttắt ACS ASCPT Chữviếtđầyđủ Acute Coronary syndrome (Hội chứng mạch vành cấp) American Society for Clinical Pharmacology and Therapeutics (Hội dược lý lâm sàng điều trị Hoa Kỳ) Bp ddNTP Dideoxynucleotide triphosphate DHPLC Denaturing high performance liquid chromatography (Sắc kí Base pair (Cặp bazơ nitơ) lỏng cao áp biến tính) DNA Deoxyribonucleic acid (Axit deoxyribonucleic) dNTP Deoxynucleotide triphosphate EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid(Axit ethylene diamine tetraacetic) EM Extensive metabolizer (Chuyển hóa bình thường) 10 IM Intermediate metabolizer (Chuyển hóa trung gian) 11 PCI Percutaneous Coronary Intervention (đặt stent động mạch vành qua da) 12 PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) 13 PM Poor Metabolizer (Chuyển hóa kém) 14 RLFP Restriction fragment length polymorphism (Đa hình độ dài đoạn cắt giới hạn) 15 SNP Single Nucleotide Polymorphism (Đa hình đơn nucleotide) 16 TAE Tris base, acetic acid and EDTA 17 TC Tiểu cầu 18 UM Ultrarapid metabolizer (chuyển hóa nhanh) DANH MỤC BẢNG STT Ký hiệu Tên bảng Bảng 1.1 Bảng 1.2 Bảng 2.1 Thành phần phản ứng PCR – giải trình tự 28 Bảng 3.1 Kết đo quang mẫu DNA tổng số 30 Bảng 3.2 Thành phần phản ứng PCR cho cặp mồi 31 Bảng 3.3 Nhiệt độ gắn mồi cho cặp mồi 31 Bảng 3.4 Pha loãng nồng độ mồi cho phản ứng PCR 35 Bảng 3.5 Thành phần phản ứng PCR 35 Bảng 3.6 Pha loãng nồng độ DNA khuôn 37 10 Bảng 3.7 Thành phần phản ứng PCR 37 11 Bảng 3.8 Thành phần phản ứng PCR 38 12 Bảng 3.9 Thành phần phản ứng PCR 38 13 Bảng 3.10 Chuẩn bị hỗn hợp phản ứng PCR 42 14 Bảng 3.11 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 42 15 Bảng 3.12 Chuẩn bị gel agarose 43 16 Bảng 3.13 Thành phần phản ứng PCR – giải trình tự 44 17 Bảng 3.14 Kết xét nghiệm gen CYP2C19 08 bệnh nhân 47 25 allen xác định gen CYP2C19 Cập nhật hướng dẫn PCI 2007 dùng thuốc chống ngưng tập tiểu cầu Trang 11 DANH MỤC HÌNH STT Ký hiệu Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Tên hình Mô tả single nucleotide polymorphyms (SNP) Vị trí alen gen CYP2C19, hộp đen biểu thị exon gen Chuyển hóa clopidogrel thể Khuyến cáo ASCPT sử dụng thuốc chống ngưng tập tiểu cầu dựa kiểu gen CYP2C19 12 14 Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 31 Hình 3.1 Điện di DNA tổng số gel Agarose 0.7% 34 Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi Trang Hình 3.2 cặp mồi CYP2C19 *2 F/R M marker; ĐC (-)/(+): đối 36 chứng âm, đối chứng dương Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi Hình 3.3 cặp mồi CYP2C19 *2 F1/R1 M marker; ĐC (-)/(+): đối 36 chứng âm, đối chứng dương Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi Hình 3.4 cặp mồi CYP2C19 *3 F/R M marker; ĐC (-)/(+): đối 37 chứng âm, đối chứng dương Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi Hình 3.5 cặp mồi CYP2C19 *17 F1/R2 M marker; ĐC (-)/(+): 38 đối chứng âm, đối chứng dương Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nhiệt độ gắn mồi 10 Hình 3.6 cặp mồi CYP2C19 *17F1/R1; M Maker, 59 -62-64 lần 38 lượt nhiệt độ thử Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nồng độ mồi 11 Hình 3.7 CYP2C19*2F/R, Tm=59oC; 17-29-49.A, B, C: mẫu 17, 29, 49 với nồng độ A, B, C 39 Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nồng độ mồi 12 Hình 3.8 CYP2C19*3, Tm=68oC; 17-29-49.A, B, C: mẫu 17, 29, 40 49 với nồng độ A, B, C 13 Hình 3.9 Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu nồng độ mồi CYP2C19*17, Tm=59oC, ĐC-: đối chứng âm 40 Kết điện di sản phẩm PCR tối ưu lượng DNA khuôn; 14 Hình 3.10 2-17.1, 2, 3, 4, 5:mồi * *17 với nồng độ DNA 41 khuôn tương ứng 15 Hình 3.11 Kết điện di sản phẩm PCR test lại quy trình tối ưu cho allen *2 *17; mẫu 05 06; ĐC(-): đối chứng âm 42 Kết điện di sản phẩm PCR test lại quy trình tối ưu 16 Hình 3.12 cho allen *3; mẫu 02 05; M: marker; ĐC(-): đối chứng 43 âm 17 Hình 3.13 Sơ đồ công đoạn quy trình 44 ĐẶT VẤN ĐỀ Cytochrome P450 2C19 (CYP2C19) enzym thuộc siêu họ cytochrom P450, tham gia vào trình chuyển hóa chất ngoại lai, bao gồm thuốc kháng tiểu cầu clopidogrel, thuốc chống động kinh mephenytoin, omeprazol, diazepam số loại thuốc an thần [38, 39] Khả chuyển hóa CYP2C19 phân loại sau: chuyển hóa siêu nhanh (Ultrarapid metabolizer - UM), chuyển hóa bình thường (Extensive metabolizer - EM), chuyển hóa trung gian (Intermediate metabolizer - IM), chuyển hóa (Poor Metabolizer - PM) [37] Điều dẫn đến có khác phản ứng chuyển hóa thuốc đáp ứng cá thể Đặt stent động mạch vành qua da kỹ thuật can thiệp tim mạch tích cực Lần triển khai áp dụng vào năm 1984 Brazil số nước khác, đến kỹ thuật mở rộng nhiều nước giúp nhiều bệnh nhân có bệnh mạch vành, nhồi máu tim cải thiện đáng kể biến chứng tử vong tim mạch Tại Việt Nam, phương pháp bắt đầu áp dụng thành công Viện Tim mạch Việt Nam vào năm 1996 Tuy nhiên, sau đặt stent có tỷ lệ đáng kể bệnh nhân bị tái hẹp mảng xơ vữa phát triển vào lòng stent Do đó, việc điều trị trì thuốc chống kết tập tiểu cầu liệu pháp bắt buộc bệnh nhân đặt stent động mạch vành [17] Asprin clopidogrel thuốc chống kết tập tiểu cầu định để dự phòng huyết khối biến cố tim mạch khác cho người bệnh sau can thiệp stent mạch vành[16] Clopidgrel tiền thuốc chưa có tác dụng, sau trình chuyển hóa CYP2C19 gan, clopidogrel chuyển hóa thành chất có tác dụng chống kết tập tiểu cầu, ngăn ngừa cục máu đông giảm hình thành huyết khối Ở người có kiểu gen CYP2C19 chuyển hóa bình thường siêu nhanh, sử dụng liều clopidogrel 75mg/ngày, dùng hàng ngày với thời gian tối ưu năm làm giảm đáng kể biến cố tim mạch [16, 27] Tuy nhiên, người có kiểu gen CYP2C19 chuyển 05 Chuyển hóa *1/*1 GG GG clopidogrel bình thường CC 06 Chuyển hóa *1/*2 GA GG Clopidogrel trung gian CC 07 Chuyển hóa *1/*2 GA trung gian CC GG clopidogrel 08 *1/*1 Chuyển hóa clopidogrel GG CC GG bình thường Nhận xét: Trong số 08 mẫu máu phân tích gen, có 04 mẫu có kiểu gen *1/*1 04 mẫu có kiểu gen *1/*2 Như vậy, xuất alen giảm chuyển hóa clopidogrel bệnh nhân tham gia nghiên cứu 48 Phần BÀN LUẬN 4.1 Về tối ƣu hóa quy trình xác định gen CYP2C19 Đề tài sử dụng phương pháp giải trình tự theo nguyên lý Sanger có cải biến để tiến hành phân tích SNP *2, *3 *17 Trong ddNTP không đánh dấu phóng xạ mà đánh dấu chất huỳnh quang có màu khác cho loại ddNTP Máy giải trình tự tự động bao gồm thành phần như: hệ mao quản, hệ chiếu sáng laser, hệ nhận xử lý tín hiệu Các vạch điện di mao quản phát sáng qua chùm tia sáng laser Hệ thống nhận diện tín hiệu màu ghi lại mã hóa thành nucleotid A, T, C, G Hiện nay, giải trình tự xu phát triển ứng dụng cao nhiều lĩnh vực nghiên cứu khác giải trình tự để định danh, định type vi khuẩn, virus, nhận dạng cá thể, nhận dạng loài, xác định đột biến gen, ứng dụng sản xuất vaccine, điều trị đích ung thư Quy trình phân tích gen CYP2C19 tiến hành theo bước sau: tách chiết DNA tổng số, khuếch đại đoạn gen chứa SNP, giải trình tự, phân tích kết Trong đó, sau bước có tiến hành kiểm tra chất lượng sản phẩm thu phương pháp điện di gel agarose đo quang Bước để thực quy trình phân tích kiểu gen CYP2C19 tách chiết DNA từ mẫu máu bệnh nhân can thiệp mạch vành sử dụng kit E.Z.N.A blood DNA Mini Ưu điểm phương pháp không chứa hóa chất độc hại phenol, chloroform; dễ dàng nhanh chóng phân lập DNA đồng thời từ nhiều mẫu Sau tách DNA tổng số, sản phẩm kiểm tra chất lượng phương pháp điện di gel agarose 0,7%, cho kết tốt với băng điện di sáng, rõ băng phụ Ngoài ra, sản phẩm tách chiết DNA tiến hành đo quang phổ hấp thụ bước sóng 260 280 nm nhằm xác định độ tinh mẫu định lượng DNA thu Kết cho thấy mẫu có số A260/280 khoảng từ 1,8 – 2,0 chứng tỏ mẫu không bị nhiễm nhiều protein hay ARN Kết tách chiết DNA ổn định có tính lặp lại cao, sản phẩm DNA tổng số đạt yêu cầu 49 độ tinh sạch, sử dụng để khuếch đại đoạn gen chứa SNP quan tâm phương pháp PCR Tuy nhiên, nồng độ DNA biến thiên đa dạng mẫu, vậy, trình thực PCR, tối ưu nồng độ DNA khuôn điều cần thiết Bước đề tài tiến hành PCR khuếch đại đoạn gen chứa SNP *2, *3 *17 PCR nhân đoạn gen muốn giải trình tự thành hang tỷ hoàn toàn giống hệt sản phẩm khuếch đại đưa vào giải trình tự trực tiếp mà không cần chèn vào plasmid giải trình tự Sự phát minh kỹ thuật nhân DNA ống nghiệm PCR giúp cho việc cải tiến phản ứng giải trình tự hiệu trước trở nên hiệu nhờ áp dụng enzym polymerase giải trình tự bền với nhiệt độ để phản ứng giải trình tự thực qua chu kỳ nhiệt giống hệt PCR Tuy nhiên, điều kiện phòng thí nghiệm khác nhau, cần thiết phải tối ưu hóa quy trình trước tiến hành phân tích gen Trong tối ưu quy trình phân tích kiểu gen, tối ưu quy trình PCR bước then chốt dẫn đến thành công phương pháp.Chất lượng sản phẩm PCR phụ thuộc vào nhiều yếu tố:nồng độ thành phần tham gia phản ứng, điều kiện chu trình nhiệt phụ thuộc vào mồi thiết kế độ dài đoạn DNA PCR Vì đề tài tiến hành phản ứng nhằm tìm điều kiện tối ưu cho phản ứng PCR.Sản phẩm PCR kiểm tra chất lượng phương pháp điện di, thông dụng điện di gel agarose.Sản phẩm PCR thông thường sử dụng từ 1/10-1/5 tổng thể tích điện di Tùy theo chiều dài sản phẩm mà chọn nồng độ gel thích hợp, thường dao động từ 0,8-3%, sản phẩm thông thường sử dụng từ 1/10-1/5 tổng thể tích điện di Đề tài sử dụng agarose 1% đủ để phân tích tốt phân đoạn DNA có chiều dài từ 500-4000 đôi base [19].Thí nghiệm PCR có sử dụng đối chứng âm cho kết âm tính chứng tỏ sản phẩm PCR hoàn toàn tinh sạch, không bị nhiễm DNA ngoại lai.Kích thước băng cần phải phù hợp với kích thước lý thuyết theo trình tự niêm yết Ngân hàng gen quốc tế Các băng DNA từ sản phẩm PCR gọn, sáng đặc hiệu (chỉ xuất băng nhất) tiêu chuẩn cho sản phẩm PCR có chất lượng tốt hoàn toàn tinh sạch, sử dụng cho thí nghiệm 50 Đầu tiên, đề tài tiến hành tối ưu nhiệt độ gắn mồi Mồi thiết kế theo phần mềm Perl Primer Mồi giúp xác định đoạn DNA cần khuếch đại Mồi đoạn ngắn, sợi DNA nhân tạo – không 50 (thường 18-25) nucleotids (vì DNA thường sợi đôi, chiều dài xác định số lượng cặp base (bp); chiều dài sợi đơn DNA đo base hay nucleotids) phù hợp cách xác điểm bắt đầu kết thúc DNA cần khuếch đại Nó gắn chặt với DNA mẫu điểm khởi đầu kết thúc, nơi mà DNA-polymerase nối bắt đầu trình tổng hợp sợi DNA mới.Chúng lựa chọn nhiệt độ gắn mồi 59°C với *2, *17 68°C với *3 với điều kiện kết băng điện di sáng rõ băng phụ Quy trình PCR tiến hành với chu trình nhiệt sau: nhiệt độ tiền biến tính 98°C/3phút; 35 chu kỳ (nhiệt độ biến tính 98°C/10 giây, nhiệt độ gắn mồi 59 68°C/30 giây, nhiệt độ kéo dài chuỗi DNA 72°C/30 giây); 72°C/5 phút Chu trình nhiệt tương tự với nhiều công trình công bố, nhiên, điều kiện cụ thể lại đa dạng phụ thuộc vào điều kiện thí nghiệm phòng xét nghiệm Ví dụ, Rehman cộng sự, 2015 dùng nhiệt độ tiền biến tính 96oC, phút, 35 chu kỳ x (nhiệt độ biến tính 96oC/15 giây; nhiệt độ gắn mồi 55oC/15 giây nhiệt độ kéo dài chuỗi DNA 72oC/1 phút) [34] Hay Wei Yq cộng (năm 2015) sử dụng chu trình nhiệt sau nghiên cứu mình: 94°C /5phút; 35 chu kỳ (nhiệt độ biến tính 94°C/30 giây, nhiệt độ gắn mồi 56°C/30 giây, nhiệt độ kéo dài chuỗi DNA 72°C/20 giây); 72°C/5 phút [46] Ở đây,ta nhận thấy nhiệt độ tiền biến tính biến tính cao thời gian gia nhiệt thấp để đảm bảo DNA-polymerase hoạt động tốt; số lượng chu kỳ gia nhiệt phổ biến khoảng 35 chu kỳ phù hợp với số lượng thành phần tham gia phản ứng [46] Năm 2015 nhóm nghiên cứu Guigao Lin (Trung Quốc) công bố kết nghiên cứu thú vị tạp chí uy tín Plos one để so sánh độ xác tính hiệu dịch vụ xét nghiệm gen CYP2C19 62 phòng xét nghiệm sử dụng 13 phương pháp phân tích kiểu gen khác [15] Theo báo này, 62 phòng xét nghiệm, có 57 phòng mức độ xác xét nghiệm kiểu gen CYP2C19 đạt tới 51 100%, phòng đạt 90% phòng đạt mức độ xác [...]... sống người bệnh, chúng tôi thực hiện đề tài: Nghiên cứu tối ưu hóa quy trình và bước đầu áp dụng quy trình để xác định kiểu gen CYP2C19 trên bệnh nhân đặt stent động mạch vành qua da Đề tài được tiến hành với 2 mục tiêu sau: 1 Tối ưu hóa quy trình xác định kiểu gen CYP2C19 2 Áp dụng quy trình để xác định kiểu gen CYP2C19 trên một số bệnh nhân đặt stent động mạch vành qua da 2 Phần 1 TỔNG QUAN 1.1 Dƣợc... Nội hoặc phòng can thiệp tim mạch Viện Tim mạch Việt Nam Máu được lấy từ tĩnh mạch bệnh nhân đặt stent động mạch vành qua da đến khám và điều trị ở Viện Tim mạch Việt Nam và Trung tâm Tim mạch bệnh viện Đại học Y Hà Nội 2.3.2 Phương pháp tiến hành 2.3.2.1 Quy trình xét nghiệm gen Đề tài áp dụng phương pháp giải trình tự dựa trên nguyên lý của Sanger Tiến hành tối ưu hóa quy trình PCR với các điều kiện:... tiểu cầu ở bệnh nhân can thiệp động mạch vành qua da Từ năm 1977, đặt stent động mạch vành qua da (Percutaneous Coronary Intervention) được coi là một chiến lược điều trị tái thông mạch máu hiệu quả ở bệnh mạch vành (bao gồm: cơn đau thắt ngực ổn định, cơn đau thắt ngực không ổn định và nhồi máu cơ tim) So với điều trị nội khoa, can thiệp động mạch vành đã làm giảm tỷ lệ biến chứng ở bệnh nhân nhồi... trước khi chỉ định dùng clopidogrel [30] Để làm được điều đó, mỗi phòng thí nghiệm cần phải tối ưu hóa được quy trình, ổn định các điều kiện thí nghiệm trước khi áp dụng quy trình một cách thường quy Với mong muốn đưa ra được quy trình xác định kiểu gen CYP2C19, góp phần nâng cao hiệu quả điều trị chống ngưng tập tiểu cầu ở người bệnh sau đặt stent động mạch vành qua da, giảm biến chứng và nâng cao chất... PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 2.1.1.Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân Tất cả các bệnh nhân sau đặt stent động mạch vành qua da, tình trạng ổn định 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu Địa điểm lấy mẫu: - Viện Tim mạch Việt Nam - Trung tâm Tim mạch bệnh viện Đại học Y Hà Nội Địa điểm nghiên cứu: Bộ môn Y dược học cơ sở, khoa Y dược, Đại học Quốc gia Hà Nội 2.2 Nguyên liệu và phƣơng tiện nghiên cứu: 2.2.1... ngực và cải thiện chất lượng cuộc sống ở bệnh nhân đau thắt ngực ổn định [3, 30] Tuy nhiên, người bệnh đặt stent động mạch vành có tỷ lệ huyết khối cao Huyết khối trong stent ở người bệnh sau can thiệp đặt stent mạch vành là biến chứng nặng, có tỷ lệ tử vong cao Chính vì thế, việc dùng thuốc ức chế ngưng tập tiểu cầu là chỉ định bắt buộc đối với mọi người bệnh sau can thiệp đặt stent động mạch vành. .. đưa ra khuyến cáo sử dụng thuốc chống ngưng tập tiểu cầuclopidogrel cho bệnh nhân đặt stent động mạch vành qua da dựa trên kiểu gen CYP2C19 như sau [31]: Cân nhắc điều trị chống ngưng tập tiểu cầu với clopidogrel cho bệnh nhân ACS/PCI Kết quả kiểu gen CYP2C19 chuyển hóa siêu nhanh(*1/*17,*17 /*17) chuyển hóa trung gian (*1/*2, *1/*3, *2/*17) chuyển hóa bình thường (*1/*1) chuyển hóa kém (*2/*2, *2/*3,... Thermo 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Chọn mẫu nghiên cứu Phương pháp chọn mẫu thuận tiện được sử dụng trong nghiên cứu này.Nhóm nghiên cứu lựa chọn liên tiếp các bệnh nhân tại hai bệnh viện, đồng ý tham gia nghiên cứutrong thời gian từ tháng 10/2015 – tháng 3/2016 20 Bệnh nhân được lựa chọn hàng ngày dựa theo danh sách bệnh nhân dự kiến can thiệp trong ngày tại trung tâm Tim mạch bệnh viện Đại học... 1535 bệnh nhân đã được can thiệp mạch vành qua da trong thời gian nằm viện cho thấy nguy cơ mắc các biến cố tim mạch nặng trên các bệnh nhân này tăng gấp 3 lần so với nhóm không mang alen mã hóa enzym CYP2C19 giảm hoạt tính (p = 0,005) [40] Nghiên cứu ELEVATE-TIMI 56 là một nghiên cứu đa trung tâm, ngẫu nhiên, mù đôi tiến hành trên 333 bệnh nhân tim mạch tại 32 điểm từ tháng 10/2010 đến tháng 9/2011 Nghiên. .. CYP2C19 trên người Việt Nam Nghiên cứu của Lee Sang Seop và cộng sự (năm 2007) trên 165 người Việt Nam và 377 người Hàn Quốc khỏe mạnh cho thấy tần số phân bố của các alen CYP2C19* 1, *2 và *3 ở người Việt Nam lần lượt là 69%, 24% và 5% Tần số kiểu gen chuyển hóa kém (*2/*2; *2/*3; *3/*3 ở người Việt Nam lần lượt là 4,2%; 2,4% và 0,6%) Không có sự khác biệt về tần số alen và tần số kiểu gen chuyển hóa