Nghiên cứu điều chế hệ vi tự nhũ chứa Rosuvastatin

Rosuvastatin (RSV) là thuốc tổng hợp mới của nhóm statin dùng điều trị rối loạn lipid huyết, tăng cholesterol máu. Do thuộc nhóm II theo hệ thống phân loại sinh dược học nên RSV có tính tan kém, sinh khả dụng thấp (khoảng 20%).Trong số các phương pháp cải thiện tính tan và sinh khả dụng, với nhiều ưu điểm nổi trội, hệ vi tự nhũ (Self Emulsifying Drug Delivery System - SMEDDS) được chọn để nghiên cứu với mục tiêu thành lập công thức SMEDDS chứa RSV với tải lượng cao, ổn định, độ hòa tan, thấm cao và có triển vọng ứng dụng vào thực tiễn.

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ HỆ VI TỰ NHŨ CHỨA ROSUVASTATIN

Lê Thị Thương Thương * , Nguyễn Thiện Hải *

TÓM TẮT

Mục tiêu: Rosuvastatin (RSV) là thuốc tổng hợp mới của nhóm statin dùng điều trị rối loạn lipid huyết,

tăng cholesterol máu Do thuộc nhóm II theo hệ thống phân loại sinh dược học nên RSV có tính tan kém, sinh khả dụng thấp (khoảng 20%).Trong số các phương pháp cải thiện tính tan và sinh khả dụng, với nhiều ưu điểm nổi trội, hệ vi tự nhũ (Self Emulsifying Drug Delivery System - SMEDDS) được chọn để nghiên cứu với mục tiêu thành lập công thức SMEDDS chứa RSV với tải lượng cao, ổn định, độ hòa tan, thấm cao và có triển vọng ứng dụng vào thực tiễn

Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát độ tan của RSV trong các tá dược có khả năng tạo hệ vi tự nhũ Chọn

pha dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt dựa vào độ tan, khả năng nhũ hóa thông qua độ truyền qua (T%) Xây dựng giản đồ pha, chọn công thức tạo vi nhũ tương để khảo sát tỷ lệ tải 5 - 20% RSV và đánh giá về cảm quan, độ bền thế zeta và kích thước giọt Chọn các công thức có khả năng tải cao nhất và bền nhất, điều chế lặp lại Hệ cũng được đánh giá sơ bộ tính thấm qua ruột chuột nhắt cô lập và độ giải phóng hoạt chất (GPHC) so với viên đối chiếu Crestor ® (AstraZeneca) Hàm lượng RSV trong các thử nghiệm được định lượng bằng quang phổ UV-Vis ở bước

sóng 243 nm

Kết quả: Trong các pha dầu và chất đồng diện hoạt khảo sát, RSV tan tốt trong Capmul MCM và

Transcutol HP RSV tan trong các chất diện hoạt khảo sát SMEDDS RSV tạo thành gồm Capmul MCM, Cremophor RH40 và Transcutol HP (10 : 50 : 40), tải 15% RSV đạt các yêu cầu về cơ lý với kích thước giọt 12,94

nm, phân bố một đỉnh, thế zeta -15,5 mV Hệ SMEDDS RSV được bào chế thành công ở qui mô 200g cho khả năng thấm qua ruột chuột nhắt cô lập cao hơn khoảng 1,7 lần và có độ GPHC cao hơn viên đối chiếu Quy trình

định lượng RSV bằng phương pháp UV tại bước sóng 243 nm đạt yêu cầu qui trình phân tích

Kết luận: SMEDDS RSV đã được bào chế thành công ở qui mô 200 g Hệ đạt các chỉ tiêu cơ lý hóa, có độ

hòa tan cao Qui trình bào chế có tính lặp lại và có triển vọng áp dụng vào thực tiễn

Từ khóa: Hệ vi tự nhũ (SMEDDS), rosuvastatin, độ hòa tan cao, thấm qua ruột chuột cô lập

ABSTRACT

FORMULATION OF SELF-MICROEMULSIFYING DRUG DELIVERY

SYSTEM CONTAINING ROSUVASTATIN

Le Thi Thuong Thuong, Nguyen Thien Hai

* Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 607 – 617

Objectives: Rosuvastatin (RSV), a new drug of statin group, used in treatment of dyslipidemia, high

cholesterol in blood, has low water solubility and low bioavailability (20%) being a BCS class II agent Amongst methods used for improving the solubility and bioavalability, self-microemulsifying drug delivery system (SMEDDS) with significant potentials were chosen to formulate a stable SMEDDS RSV with high loading, high dissolution and can apply in practical

Methods: Solubility of RSV in several excipients that formed SMEDDS was determined Oils, surfactants

and co-surfactants were chosen depending on solubility, emulsifying ability via transmission (T%) Phase

Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Thiện Hải ĐT: 0905352679 Email: nthai@ump.edu.vn

diagrams were constructed The SMEDDS that formed clear microemulsions were loaded 5 – 20% RSV and evaluated the appearance, stability, zeta potential and droplet size The most stable SMEDDS RSV having highest drug loading was reprepared and investigated the preliminary permeation through excised mice intestine and the dissolution test that compared with the reference product, Crestor ® (AstraZeneca) UV method at 243 nm was used for determination of RSV in the experiments

Results: In the oils and cosurfactants screened, solubility of RSV was highest in Capmul MCM and

Transcutol HP RSV is soluble in the investigated surfactants The selected SMEDDS RSV was composed of Capmul MCM, Cremophor RH40 and Transcutol HP with the ratio (10 : 50 : 40), can load 15% RSV, met the properties of SMEDDS with droplet size average of 12,94 nm, gausian distribution, zeta potential of -15.5 mV SMEDDS RSV, prepared successfully in scale of 200 g, showed the permeability through excised mice intestine was higher about 1.7 times and the dissolution profile higher than that of the reference product The UV method for determination of RSV in the experiments met the requirements of a analytical procedure

Conclusion: The SMEDDS RSV was successfully prepared on a 200 g scale, met the physico-chemical

properties, has high dissolution The preparation has a repeat and can apply in practical

Key words: SMEDDS (Self Micro-Emulsifying Drug Delivery System), rosuvastatin, high dissolution,

permeability through excised mice intestine

ĐẶT VẤN ĐỀ

Hiện nay rối loạn lipid huyết là một bệnh

khá phổ biến, nó có thể gây nhiều biến chứng

nguy hiểm Bên cạnh việc điều trị bằng cách

thay đổi lối sống còn cần phải điều trị bằng

thuốc Nhiều nhóm thuốc dùng điều trị rối

loạn lipid huyết với nhiều cơ chế khác nhau

trong đó nhóm statin với simvastatin,

atorvastatin và rosuvastatin được dùng khá

phổ biến hiện nay Rosuvastatin (RSV) là

thuốc tổng hợp mới thuộc nhóm statin có hoạt

tính chống tăng lipid huyết Do RSV thuộc

nhóm II theo hệ thống phân loại sinh dược học

(Biopharmaceutical classification system -

BCS) nên khó tan và điều này dẫn đến sinh

khả dụng (SKD) của thuốc thấp, chỉ khoảng

20% sau khi uống(5) Việc nghiên cứu cải thiện

độ tan của RSV sẽ góp phần cải thiện sinh khả

dụng Có nhiều phương pháp cải thiện độ tan

của các dược chất nhóm II BCS nói chung và

của RSV nói riêng như tạo hệ phân tán rắn(9),

tạo phức bao với cyclodextrin và dẫn chất(1),

công nghệ nano(11), vi nhũ tương(8), hệ tự

nhũ,… trong đó hệ vi tự nhũ cho thấy có

nhiều ưu điểm như thành phần đơn giản, dễ

bào chế và nâng cỡ lô, áp dụng được cho cả

dược chất thuộc nhóm II và nhóm IV theo BCS

Ngoài ra có thể sử dụng cả dạng vi tự nhũ lỏng (đóng nang mềm, nang cứng) hoặc hóa rắn dạng hệ vi tự nhủ lỏng để đóng nang cứng hay dập viên Đây cũng là xu hướng của thế giới hiện nay trong việc nghiên cứu cải thiện

độ tan các dược chất nhóm II và nhóm IV theo BCS Nghiên cứu này được thực hiện nhằm mục tiêu tìm kiếm một công thức SMEDDS chứa rosuvastatin với hàm lượng cao, bền, ổn định, có độ hòa tan và độ thấm cao

ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nguyên vật liệu - trang thiết bị

Nguyên vật liệu

Rosuvastatin (Ấn độ – USP 39), Capryol 90, Transcutol HP, Transcutol P, Labrasol, Labrafac WL1349, Labrafil M1944CS, Labrafil 2125CS, Maisine 35-1, Plurol oleic CC497, Syloid FP244 (Gattefosse - Pháp), Cremophor RH40, Kolliphor HS15 (BASF - Đức), tween 20, tween 80 (Singapore), Florite R (Nhật) Các tá dược trên cùng dung môi, hóa chất cần thiết khác cho thí nghiệm đạt tiêu chuẩn dược dụng hay phân tích

Trang thiết bị

Bể đun cách thủy có bộ phận lắc (Grant - Anh), bể siêu âm (Sonorex RK 510H - Đức), máy

đo nano (Zetasizer Nano ZSP - Anh), máy ly tâm

(Eppendorf Minispin - Đức), máy quang phổ

UV-Vis (Shimadzu UV-1800 - Nhật), máy thử độ

hòa tan (Erweka - ĐỨC), Vortex (Labnet VX100 -

Mỹ), tủ đông (Toshiba - Nhật Bản), tủ lạnh

(Panasonic - Nhật Bản), tủ ủ ấm (Memmert -

Đức)

Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu bào chế hệ vi tự nhũ

(SMEDDS) nền

Khảo sát độ tan của rosuvastatin trong các tá dược

tiềm năng tạo hệ vi tự nhũ

Độ tan của RSV trong các tá dược tiềm năng

tạo hệ vi tự nhũ (pha dầu, chất diện hoạt, chất

đồng diện hoạt) được xác định bằng phương

pháp bão hòa từ đó làm cơ sở để lựa chọn các tá

dược tiềm năng cho điều chế hệ vi tự nhũ nền

(không chứa dược chất) – SMEDDS Cho một

lượng thừa RSV vào eppendorf có sẵn 1 ml từng

loại pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện

hoạt Vortex 5 phút, siêu âm 20 phút, cho vào

máy lắc ngang và lắc ở nhiệt độ phòng với tốc độ

100 vòng/phút trong 72 giờ Ly tâm tốc 5000

vòng/phút trong 20 phút, thu dịch, lọc qua màng

lọc 0,45 µm, pha loãng bằng methanol đến nồng

độ thích hợp và xác định độ tan của RSV trong

các tá dược khảo sát bằng phương pháp UV(10) ở

bước sóng 243 nm, mẫu trắng là tá dược khảo sát

pha loãng cùng điều kiện trong methanol

Khảo sát hệ tá dược dùng để điều chế SMEDDS nền

Sàng lọc pha dầu dựa vào độ tan của RSV

trong các pha dầu khảo sát Chất diện hoạt dựa

vào hiệu quả nhũ hóa của chất diện hoạt với pha

dầu và chất đồng diện hoạt dựa vào hiệu quả cải

thiện khả năng nhũ hóa của chất đồng diện hoạt

với pha dầu hơn khả năng hòa tan của chúng đối

với hoạt chất(2,6) Hiệu quả nhũ hóa được đánh

giá thông qua độ truyền qua (%T) Hệ tạo được

vi nhũ tương nếu độ truyền qua được đo ở bước

sóng 638,2 nm cao (> 99% )(2) Chất diện hoạt,

chất đồng diện hoạt có độ hòa tan hoạt chất cao

và %T cao sẽ được lựa chọn Cân 300 mg từng

chất diện hoạt khảo sát cho vào từng eppendorf

có sẵn 300 mg pha dầu được lựa chọn tương tự cân 100 mg từng chất đồng diện hoạt khảo sát cho vào từng eppendorf có sẵn 200 mg chất diện hoạt và 300mg pha dầu được chọn Các hỗn hợp khảo sát được đun cách thủy ở nhiệt độ 45 - 60oC trong 10 phút, vortex 2 phút Cân 50 mg từng hỗn hợp cho vào bình định mức 50 ml Bổ sung nước cất hai lần vừa đủ 50 ml, lắc kỹ, để ổn định

2 giờ Đo độ truyền qua (%T)

Xây dựng giản đồ pha

Pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt được chọn sẽ dùng để xây dựng giản đồ pha theo phương pháp pha loãng (100 lần trong nước cất) với tỷ lệ mỗi thành phần pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt từ 10% đến 80% (kl/kl) Mỗi bước nhảy là 10% Tổng tỷ lệ của ba thành phần luôn là 100%(4) Các hỗn hợp gồm pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt với

tỷ lệ khác nhau được cho vào eppendorf Sau đó, hỗn hợp đem đun cách thủy ở 45-60 °C trong 5 phút và vortex để được hỗn hợp đồng nhất Để yên trong 24 giờ Các hỗn hợp được pha loãng

100 lần với nước cất Để yên trong 12 giờ Nhũ tương hình thành được đánh giá theo cảm quan với 5 mức là nhũ tương trong suốt, trong mờ, đục mờ, đục, rất đục Vùng tạo được nhũ tương trong suốt và trong mờ là vùng tạo vi nhũ tương Các công thức (CT) với tỷ lệ pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt khác nhau nằm trong vùng tạo vi nhũ tương sẽ được chọn như là hệ vi

tự nhũ (SMEDDS) tiềm năng để thực hiện các nghiên cứu tiếp theo

Nghiên cứu bào chế hệ vi tự nhũ chứa rosuvastatin

Khảo sát khả năng tải rosuvastatin của SMEDDS tiềm năng

Các CT SMEDDS tiềm năng được chọn từ giản đồ pha với qui mô 0,5 – 1g sẽ được khảo sát khả năng tải RSV ở các tỷ lệ 5; 7,5; 10; 12,5; 15; 17,5 và 20% (kl/ kl) và đánh giá cảm quan khi pha chế, ly tâm (không có tủa hay tách pha) và pha loãng 100 lần trong nước cất tạo được vi nhũ tương Các CT đạt là những CT

tạo vi nhũ tương trong suốt hoặc trong mờ,

không đục, không tủa hoạt chất ngay sau khi

pha loãng và sau 12 giờ ở t0 phòng

Đánh giá các CT SMEDDS tải rosuvastatin tiềm năng

Độ ổn định trong các môi trường pH: Các CT

đạt trong thử nghiệm tải RSV sẽ được dùng để

đánh giá độ ổn định trong các môi trường pH

bằng cách pha loãng 100 lần trong các môi

trường pH 1,2; 4,5 và 6,8 Đánh giá bằng cảm

quan (yêu cầu phải trong suốt hoặc trong mờ,

không đục, không tủa hoạt chất ngay sau khi

pha loãng và sau 12 giờ pha loãng)

Độ bền nhiệt động: Các CT đạt ổn định trong

cả ba môi trường pH 1,2; 4,5 và 6,8 sẽ được lựa

chọn để đánh giá độ bền nhiệt động thực hiện

theo các chu kỳ nóng-lạnh (thực hiện 6 chu kỳ

giữa nhiệt độ 4 °C và 45 °C Lưu trữ ở mỗi nhiệt

độ không ít hơn 48 giờ), ly tâm (ở 3500

vòng/phút trong 30 phút) và chu kỳ đông-rã

đông khảo sát 3 chu kỳ đông-rã đông giữa nhiệt

độ -21 °C và +25 °C Lưu trữ ở mỗi nhiệt độ

không ít hơn 48 giờ) Đánh giá bằng cảm quan

CT đạt là công thức không có hiện tượng đục,

kết tủa hay tách pha Các CT đạt độ bền nhiệt

động và có khả năng tải hoạt chất cao nhất sẽ

được khảo sát tính lặp lại các thử nghiệm khả

năng tải hoạt chất, độ ổn định pH và độ bền

nhiệt động Mỗi thử nghiệm được lặp lại 3

lần Trong cả 3 lần thử nghiệm lặp lại đều

phải cho kết quả không khác với kết quả thử

nghiệm ban đầu

Độ truyền qua, sự phân bố kích thước giọt

và thế zeta: Các CT đạt độ bền nhiệt động và

có khả năng tải hoạt chất cao nhất sẽ được

chọn để xác định độ truyền qua, phân bố kích

thước giọt và thế zeta của vi nhũ tương hình

thành CT có sự phân bố kích thước giọt tốt

nhất nằm trong vùng nhỏ hơn 100 nm và có

thế zeta cao sẽ được lựa chọn

Xây dựng qui trình bào chế SMEDDS chứa rosuvastatin cỡ lô 200g

SMEDDS là một hệ đẳng hướng, đồng nhất nên thứ tự bào chế nói chung không ảnh hưởng nhiều đến tính chất hệ CT SMEDDS RSV đạt yêu cầu sẽ được pha chế theo qui trình từ nghiên cứu thực nghiệm

Sơ bộ đánh giá khả năng thấm và khả năng hòa tan của SMEDDS chứa rosuvastatin qua ruột chuột nhắt cô lập so với thuốc đối chiếu

Sơ bộ đánh giá khả năng thấm của SMEDDS RSV qua ruột chuột nhắt cô lập (7,12)

Chuột nhắt có khối lượng 20 – 25 g, nhịn ăn, chỉ uống nước trong 20 giờ được lựa chọn để nghiên cứu Một đoạn ruột tá tràng có chiều dài

6 -11cm được lấy và ngâm trong dung dịch lạnh KRPB (Krebs-Ringer Phosphate-Buffer,

pH 7.2), đoạn ruột sau khi loại bỏ màng nhầy sẽ được lộn ngược Một đầu của đoạn ruột được cột kín, sau đó cho vào bên trong ruột khoảng 2

ml dung dịch KRPB lạnh và cột kín đầu còn lại Đoạn ruột này sẽ được cho vào becher 100 ml chứa 50 ml dung dịch thuốc nghiên cứu có nồng độ 100 µg/ml (điều chế từ SMEDDS chứa RSV và thuốc đối chiếu Crestor®) trong dung dịch KRPB liên tục sục khí và duy trì nhiệt độ

37 ± 5 oC Sau 60 phút thu dịch bên trong ruột

và định lượng hàm lượng thuốc trong dịch bằng phương pháp UV-Vis Tính thấm tương đối của lô thử và lô thuốc đối chiếu được so sánh sau khi trừ đi sai số dương thu được từ lô trắng (lô chứng phương pháp) chỉ chứa dung dịch sinh lý KRPB Kết quả thống kê được đánh giá bằng phần mềm SPSS 22.0

Độ thấm tương đối của thuốc được tính bằng công thức: J (µg/cm2) =

C: Nồng độ thuốc (µg/ml) = [A (từng mẫu) – A (TB lô trắng) ] x

C chuẩn /A chuẩn A: Độ hấp thu (của các mẫu thuốc, trắng, chuẩn) V: Thể tích dịch thanh mạc (ml)

S: Diện bề mặt niêm mạc (cm 2) = chiều dài x đường kính

x π

So sánh khả năng GPHC của SMEDDS

rosuvastatin so với viên đối chiếu Crestor ®

SMEDDS chứa 10 mg RSV được đóng nang

cứng số 0 Tiến hành thử độ GPHC, sử dụng

thiết bị cánh khuấy, tốc độ 50 vòng/phút Môi

trường là 900 ml dung dịch pH 1,2; pH 4,5 và pH 6,8, nhiệt độ 37 ± 0.5°C Rút 5 ml mẫu sau 10, 20,

30, 45 và 60 phút, lọc qua màng 0,45 µm, bù môi trường trương ứng(3) Định lượng RSV trong dịch lọc bằng phương pháp UV(10)

KẾT QUẢ

Nghiên cứu bào chế hệ vi tự nhũ (SMEDDS) nền

Khảo sát độ tan của rosuvastatin trong các tá dược tiềm năng tạo hệ vi tự nhũ (Hình 1)

Hình 1: Kết quả độ tan của RSV trong các tá dược khảo sát của hệ SMEDDS

Kết quả khảo sát độ tan của RSV trong pha

dầu (Hình 1) cho thấy Capmul MCM có khả

năng hòa tan RSV cao nhất (38,75 mg/ml) nên

được chọn làm pha dầu để khảo sát hệ tá dược

tiềm năng Tương tự, các chất diện hoạt có khả

năng hòa tan rosuvastatin từ cao đến thấp lần

lượt là tween 80, tween 20, Labrasol,

Cremophor RH40 Việc lựa chọn chất diện

hoạt phụ thuộc chính vào khả năng nhũ hóa

và cả khả năng hòa tan hoạt chất của chúng

trong hệ tự nhũ Với các chất đồng diện hoạt,

độ tan của RSV từ cao đến thấp lần lượt là

Transcutol HP, Transcutol P, Kolliphor HS15,

Lauroglycol 90 Việc lựa chọn cũng tương tự

như chất diện hoạt

Khảo sát hệ tá dược dùng để điều chế

SMEDDS nền

Sàng lọc pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng

diện hoạt

Bảng 1: Độ truyền qua (T%) giữa các chất diện hoạt

khảo sát với pha dầu capmul MCM, chất đồng diện hoạt khảo sát với pha dầu capmul MCM và chất diện hoạt Cremophore RH40

Chất diện hoạt (T%) Chất đồng diện

hoạt

(T%)

Kết quả độ truyền qua (T%) giữa các chất diện hoạt khảo sát với pha dầu được chọn là Capmul MCM và chất đồng diện hoạt khảo sát với pha dầu Capmul MCM và chất diện hoạt được chọn trình bày ở Bảng 1 cho thấy Cremophor RH40 có

%T cao nhất (99,44 %) nên được chọn làm chất diện hoạt trong khi với chất đồng diện hoạt, độ truyền qua khác nhau không có ý nghĩa và Transcutol HP được chọn do khả năng hòa tan cao hoạt chất hơn các chất đồng diện hoạt còn lại

Xây dựng giản đồ pha

Hình 2: Giản đồ pha của hệ Capmul MCM, Cremophor RH40, Transcutol HP

Giản đồ pha với pha dầu là Capmul MCM,

chất diện hoạt là Cremophor RH40 và chất

đồng diện hoạt là Transcutol HP được xây

dựng bằng phương pháp pha loãng với nước

cất được trình bày trong Hình 2 cho thấy với

tỷ lệ Capmul MCM 10% đều cho nhũ tương

trong suốt khi pha loãng với nước cất ở bất kỳ

tỷ lệ Cremophor RH40 và Transcutol HP nào

từ 10 - 80% Tỉ lệ Capmul MCM là 20% cho

nhũ tương trong suốt khi pha loãng với nước

cất ở tỷ lệ Cremophor RH40 từ 40 - 80% và

Transcutol HP từ 10 - 40%, cho nhũ tương

trong mờ khi pha loãng với nước cất ở tỷ lệ

Cremophor RH40 từ 20 - 30% và Transcutol

HP từ 50 - 60% Với tỉ lệ Capmul MCM là 30 -

40% khi pha loãng với nước cất có thể cho nhũ

tương trong suốt, trong mờ hay nhũ tương

đục còn tùy vào tỉ lệ Cremophor RH40 và

Transcutol HP Khi tỉ lệ Capmul MCM tăng

lên 50% thì không còn cho nhũ tương trong

suốt hay trong mờ khi pha loãng với nước cất

mà đều cho nhũ tương đục mờ hoặc nhũ tương đục hay nhũ tương rất đục Những công thức với tỉ lệ Capmul MCM, Cremophor RH40 và Transcutol HP tạo được vi nhũ tương (trong suốt hoặc trong mờ) khi pha loãng với nước cất sẽ được lựa chọn cho các thử nghiệm tiếp theo

Nghiên cứu bào chế hệ vi tự nhũ chứa rosuvastatin

Khảo sát khả năng tải rosuvastatin của SMEDDS tiềm năng

Kết quả khả năng tải RSV ở các tỉ lệ khác nhau 5 - 20% (kl/kl) của các CT SMEDDS tiềm năng được trình bày lần lượt trong Bảng 2 cho thấy ở tỉ lệ tải 5%, các CT F4, F5, F6, F7, F8, F11, F12, F13, F14, F17 đều trong suốt đồng nhất sau thử nghiệm ly tâm và tạo được vi nhũ tương trong suốt hay trong

mờ bền vững sau 12 giờ khi pha loãng với

nước cất Các CT này sẽ được thực hiện thử

nghiệm tải 7,5% Khi tải 7,5%, các CT đều

đạt trừ F15 Tải tiếp với 10% và 12,5%, F4,

F5, F6, F7, F8, F12, F13, F14, F17 đạt và tiếp

tục tăng tải lên 15% và 17,5% có bảy CT đạt

yêu cầu gồm F4, F5, F6, F7, F12, F13, F14 Tỉ

lệ tải 20%, chỉ có F4, F5 và F13 đạt yêu cầu

Các CT đạt tỷ lệ tải từ 12,5 – 20% được đánh

giá độ bền ở thử nghiệm tiếp

Đánh giá các công thức SMEDDS tải

rosuvastatin tiềm năng

Độ ổn định trong các môi trường pH

Kết quả độ ổn định sau khi pha loãng trong 3

môi trường pH 1,2; pH 4,5 và pH 6,8 của các CT

SMEDDS tải RSV (12,5 – 20%) tiềm năng trình

bày trong Bảng 3 cho thấy với tỷ lệ tải 12,5% có 3

CT đạt là F4, F5 và F12 trong khi ở tỷ lệ tải 15%

thì 2 CT F4 và F5 đạt yêu cầu 5 CT này bền trong

cả 3 môi trường pH 1,2 pH 4,5 và pH 6,8 do tạo được vi nhũ tương trong suốt hoặc trong mờ và

ổn định sau 12 giờ pha loãng nên được chọn để đánh giá độ bền nhiệt động

Độ bền nhiệt động

Kết quả độ bền nhiệt động của 5 CT khảo sát được trình bày trong Bảng 4 cho thấy cả 5 CT đều ổn định CT F4 và F5 với tỷ lệ tải 15% sẽ được lựa chọn khảo sát tính lặp lại trước khi thực hiện các thử nghiệm tiếp theo về độ truyền

qua, sự phân bố kích thước giọt và thế zeta Kết

quả thực nghiệm các khảo sát này trình bày trong Bảng 5 cho thấy có sự lặp lại và CT F4 - 15% là CT tốt nhất sẽ được chọn để đánh giá tính thấm, độ hòa tan so với thuốc đối chiếu

Bảng 2: Kết quả khảo sát khả năng tải RSV ở các tỷ lệ 5; 7,5; 10; 12,5; 15; 17,5 và 20% của các CT

SMEDDS (Capmul MCM - Cremophor RH40 - Transcutol HP) tiềm năng từ F1đến F20

CT

(tỷ lệ

phối hợp) *

Tỷ lệ tải rosuvastatin (%) của các CT SMEDDS khảo sát

LT PL LT PL LT PL LT PL LT PL LT PL LT PL

LT: Ly tâm, PL: pha loãng; T: Tủa; t: Trong; Đ: Đục; đn: đồng nhất; -: Không thực hiện; * (Capmul MCM: Cremophore RH40: Transcutol HP)

Bảng 3: Độ ổn định sau khi pha loãng trong các môi trường pH 1,2; pH 4,5; và pH 6,8 của các CT

SMEDDS chứa RSV với tỷ lệ tải 12,5; 15; 17,5 và 20%

CT

Tỷ lệ tải RSV (%) của các CT SMEDDS khảo sát

Đ: đục; t: trong; -: không thực hiện do không đạt điều kiện pha loãng trong nước

Bảng 4: Độ bền nhiệt động của các CT SMEDDS tiềm năng khảo sát

Công thức Chu kỳ nóng - lạnh Ly tâm Chu kỳ đông - rã đông

Bảng 5: Kết quả lặp lại thử nghiệm tải hoạt chất, độ ổn định trong các môi trường pH, độ bền nhiệt động,

độ truyền qua, phân bố kích thước giọt và thế zeta của CT F4 -15% và F5 – 15%

Khả năng tải

hoạt chất

Độ ổn định trong các môi

trường đệm

Độ bền nhiệt động

Xây dựng qui trình bào chế SMEDDS

rosuvastatin cỡ lô 200 g của CT F4 – 15%

Qui trình điều chế như sau: Cân lần lượt

Capmul MCM (17,4 g), Cremophore RH 40 (87,0

g) và Transcutol HP (69,6 g) cho vào lọ thủy tinh,

vortex 1 – 2 phút thu SMEDDS nền đồng nhất

Cân rosuvastatin calcium (26,0 g) cho tiếp vào

SMEDDS nền, vortex 2 – 3 phút, siêu âm 30 phút

thu SMEDDS RSV đồng nhất Kiểm tra sản

phẩm tạo thành Các tính chất của SMEDDS RSV

cỡ lô 200 g không thay đổi so với khi điều chế với lượng nhỏ chứng tỏ quy trình điều chế SMEDDS RSV có thể nâng cỡ lô dễ dàng, thực chất chỉ là hòa tan đơn giản

Sử dụng phương pháp UV để định lượng RSV trong SMEDD RSV lô 200 g Kết quả cho thấy hàm lượng TB RSV calcium là 14,88% ± 0,14

so với lý thuyết là 15%

Qui trình định lượng RSV bằng phương

pháp UV tại bước sóng λmax 243 nm đã được

thẩm định với kết quả đạt yêu cầu của một

quy trình phân tích (không trình bày dữ liệu)

Sơ bộ đánh giá khả năng thấm và khả năng

GPHC của SMEDDS rosuvastatin qua ruột

chuột nhắt cô lập so với thuốc đối chiếu

Sơ bộ đánh giá khả năng thấm của SMEDDS

rosuvastatin qua ruột chuột nhắt cô lập

Kết quả thử nghiệm độ thấm qua ruột

chuột nhắt cô lập của hệ SMEDDS chứa

RSV 10% (dạng acid) được thể hiện trong

Bảng 6

Dữ liệu thu thập được xử lý thống kê

bằng phần mềm SPSS 22.0 Dùng phép

phân tích kiểm chuẩn Kolomogorow –

Smirnow, các số liệu đều thuộc phân phối

chuẩn và kết quả được biểu diễn dưới dạng

M ± SEM So sánh giá trị TB giữa các lô

bằng phân tích One-way ANOVA với phép kiểm LDS hoặc Dunnett´s T3 để so sánh sự khác biệt giữa lô Với các số liệu không phân phối chuẩn, phân tích thống kê bằng test Kruskal Wallis và Mann – Whitney U test để so sánh kết quả giữa các lô Sự khác

biệt giữa các lô có ý nghĩa khi p < 0,05 Kết

quả cho thấy độ hấp thu lô trắng và lô thử

khác nhau có ý nghĩa thống kê (p < 0,001)

Độ hấp thu lô trắng và lô chứng khác nhau

có ý nghĩa thống kê (p = 0,003) Độ thấm

giữa lô thử và lô chứng khác nhau có ý

nghĩa thống kê (p = 0,021) Độ thấm tương

đối của thuốc thử và thuốc chứng lần lượt

là 7,31 ± 0,84 µg/cm2 và 4,27 ± 0,81 µg/cm2 Như vậy, lô thử và lô chứng có độ hấp thu tăng rõ rệt so với lô trắng Độ thấm của lô thử tăng rõ rệt so với lô chứng và cao hơn

gấp 1,709 lần

Bảng 6: Kết quả nghiên cứu thử nghiệm độ thấm qua tá tràng chuột nhắt cô lập

TT S ruột (cm

2

0,40

8,74 ± 0,27

8,63 ± 0,25

1,39 ± 0,07

1,29 ± 0,07

1,31 ± 0,06

5,85 ± 0,15 5,46 ± 0,19

4,63 ± 0,13 7,31 ± 0,84 4,27 ± 0,81

(*): độ hấp thu đã nhân với độ pha loãng; LT: Lô thử, LC: Lô chứng, Ltr: Lô trắng

Đánh giá độ GPHC của SMEDDS

rosuvastatin so với viên đối chiếu

Kết quả GPHC của SMEDDS RSV trong

các môi trường pH khác nhau so với viên

đối chiếu được trình bày trong Bảng 7 cho

thấy khả năng GPHC của SMEDDS RSV cao

hơn viên đối chiếu Viên nang cứng chứa

SMEDDS RSV sau 10 phút gần như phóng thích 100% hoạt chất trong khi với viên đối chiếu sau 60 phút mới phóng thích khoảng 90% Kết quả này cùng với khả năng thấm cao, hệ SMEDDS RSV cho thấy có nhiều triển vọng ứng dụng vào thực tiễn trong việc cải thiện sinh khả dụng của RSV

Bảng 7: Kết quả GPHC SMEDDS RSV và viên đối chiếu trong các môi trường pH

(%) RSV phóng thích (n = 6)

Môi

trường

pH

BÀN LUẬN

Rosuvastatin là hoạt chất thuộc nhóm II BCS

nên có độ tan và sinh khả dụng thấp (khoảng

20%) Trong nghiên cứu này, SMEDDS được

ứng dụng để cải thiện độ tan, cải thiện sinh khả

dụng của RSV Với SMEDDS RSV, yêu cầu đặt ra

là hệ phải tải được lượng dược chất với tỷ lệ cao,

bền trong các môi trường pH, bền về nhiệt động,

có độ truyền qua, kích thước giọt và thế zeta đạt

yêu cầu của hệ tự nhũ Kết quả thực nghiệm cho

thấy hệ có thể tải được từ 12,5% đến 20% RSV

Tuy nhiên khi khảo sát độ ổn định sau khi pha

loãng trong 3 môi trường pH 1,2; 4,5; và 6,8 của

các CT SMEDDS tải RSV (12,5 – 20%) tiềm năng

(Bảng 3) cho thấy với môi trường pH 1,2 chỉ các

CT F4; F5 và F12 (cùng tải 12,5%), F4 và F5 (cùng

tải 15%) đạt yêu cầu do tạo được vi nhũ tương

trong suốt hoặc trong mờ và ổn định sau12 giờ

pha loãng Ở môi trường pH 4,5 hầu hết các CT

đều đạt yêu cầu ngoại trừ các CT F14 với cả 3 tỷ

lệ tải hoạt chất (12,5; 15 và 17,5%) và CT F17

(12,5%) không đạt Tương tự môi trường pH 6,8

hầu hết các CT đều đạt ngoại trừ các CT F4, F5

và F13 cùng tải 20% hoạt chất Sự khác biệt về độ

ổn định SMEDDS RSV trong các môi trường pH

khảo sát là do RSV có độ tan tăng dần theo pH

nên với tỷ lệ tải cao, trong môi trường pH cao thì

hệ sẽ bền hơn môi trường pH thấp do hoạt chất

tan được phần nào, ít gây tủa CT F4 - 15% và CT

F5 – 15% là 2 CT SMEDDS tốt nhất tải được 15%

RSV (kl/kl), bền trong cả 3 môi trường pH Cả 2

CT này có kích thước giọt (12,94 và 13,03 nm) và

thế zeta (-15,5 và -14,8 mV) tương tự nhau tuy

nhiên chỉ số PDI của CT F4 – 15% là 0,093 khá

nhỏ so với CT F5 – 15% (0,194) nên CT F4 – 15%

được chọn Ngoài ra, tỷ lệ tải 15% là một tỷ lệ tải

cao đối với SMEDDS nói chung (thường từ 1 –

8%) cho thấy CT này có nhiều thuận lợi trong việc đóng nang mềm (sử dụng lượng SMEDDS RSV nhỏ) hoặc dễ hóa rắn do sử dụng lượng tá dược thấm hút ít, thuận tiện cho đóng nang cứng, dập viên để ứng dụng cho các dạng bào chế rắn chứa RSV có độ hòa tan cao Hệ SMEDDS RSV bền, đạt các chỉ tiêu cơ lý theo yêu cầu Qui trình bào chế đơn giản, dễ dàng nâng cỡ lô do chỉ là hòa tan đơn giản

và đặc biệt là khả năng thấm qua ruột chuột

cô lập cao hơn thuốc đối chiếu 1,7 lần cùng với khả năng hòa tan nhanh cho thấy có triển vọng hấp thu nhanh, cải thiện sinh khả dụng, có thể giảm liều như các nghiên cứu

về ưu điểm của SMEDDS đã được công bố

và nhiều triển vọng ứng dụng vào thực tiễn

KẾT LUẬN

SMEDDS RSV đã được xây dựng và bào chế thành công ở qui mô 200 g Hệ bền, đạt các chỉ tiêu cơ lý hóa theo yêu cầu SMEDDS, có độ thấm qua ruột chuột cô lập và độ hòa tan cao so với viên đối chiếu Qui trình bào chế có tính lặp lại

và có triển vọng áp dụng vào thực tiễn

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Akbari BV, Valaki BP, Maradiya VH, et al (2011),

“Enhancement of Solubilityand Dissolution Rate of Rosuvastatin Calcium by Complexation with Β-Cyclodextrin”,

International Journal of Pharmaceutical & Biological Archives, 2 (1),

pp 511-520

2 Date AA, Nagarsenker MS (2007), “Design and evaluation of self nano emulsifying drug delivery systems for cefpodoxime

proxetil”, Int J of Pharmaceutics, 329, pp 166-172

3 Farzana H, Chinmoy KS, Sanjida A, et al (2017), “Cost Effective Formulation Development of Rosuvastatin in Compared to Innovator Brand & Evaluation of

Interchangeability Via In-vitro Bio-equivalence Study”, World

Journal of Pharmaceutical Research, 6 (15), pp 72-86

4 Heba FS, Rasha MK, Abdel KAH, et al (2018), “Preparation and optimization of tablets containing a Self Nano-emulsifying

Drug Delivery System loaded with Rosuvastatin”, Journal of

LiposomeResearch, 28 (2), pp 1-27