Xác định các tác nhân vi sinh gây viêm phổi cộng đồng ở bệnh nhân COPD phải nhập viện được thực hiện bằng phương pháp nuôi cấy vi sinh truyền thống và phương pháp multiplex real-time PCR, qua đó phân tích các kết quả thu nhận được.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 TÁC NHÂN VI SINH GÂY VIÊM PHỔI CỘNG ĐỒNG Ở BỆNH NHÂN COPD PHẢI NHẬP VIỆN Lý Khánh Vân*, Phạm Hùng Vân** TÓM TẮT Tổng quan: Do hạn chế khó vượt qua kỹ thuật ni cấy mẫu đàm nên chưa có cơng trình nghiên cứu Việt Nam cho biết phổ tác nhân vi sinh gây viêm phổi cộng đồng bệnh nhân COPD phải nhập viện Chính việc áp dụng kỹ thuật multiplex real-time PCR để tìm hiểu phổ tác nhân vi sinh cần thiết Mục tiêu: Xác định tác nhân vi sinh gây viêm phổi cộng đồng bệnh nhân COPD phải nhập viện thực phương pháp nuôi cấy vi sinh truyền thống phương pháp multiplex real-time PCR, qua phân tích kết thu nhận Đối tượng phương pháp: Đây nghiên cứu đa trung tâm thực đối tượng bệnh nhân viêm phổi cộng đồng có kèm COPD phải nhập viện Phương pháp nghiên cứu sử dụng phương pháp nuôi cấy truyền thống phương pháp multiplex real-time PCR để phát tác nhân vi sinh gây bệnh diện mẫu đàm hay dịch rửa khí phế quản lấy từ bệnh nhân sau đưa vào nghiên cứu Kết quả: Có 126 bệnh nhân nhiễm khuẩn đợt cấp COPD đưa vào nghiên cứu Kết kỹ thuật multiplex real-time PCR cho thấy có đến 69% trường hợp phát tác nhân vi sinh gây bệnh với S pneumoniae H influenzae có tỷ lệ cao (41,3% 22,2%), A baumannii (11,1%), K pneumoniae (7,9%) P aeruginosa (7,1%) Ngoài có tác nhân khác phát với tỷ lệ thấp Kết nuôi cấy, không kể trường hợp phân lập S viridans, tỷ lệ phát tác nhân vi sinh gây bệnh 43,7% (55/126), thấp phương pháp multiplex real-time PCR, cao K pneumoniae (7,9%), P aeruginosa (11,9%), A baumannii (7,9%) E coli (3,2%) Không có trường hợp phân lập S pneumoniae có 2,4% phân lập H influenzae Kết luận: Kết nuôi cấy, không kể trường hợp phân lập S viridans, tỷ lệ phát tác nhân vi sinh gây bệnh 43,7% (55/126), thấp phương pháp multiplex real-time PCR 69% với tỷ lệ cao K pneumoniae (41,3%), H influenzae (22,2%) Khơng có trường hợp phân lập S pneumoniae có 2,4% phân lập H influenzae ni cấy Từ khóa: Tác nhân vi sinh gây viêm phổi cộng đồng; kỹ thuật real-time PCR ABSTRACT PATHOGENS CAUSING HOSPITALIZED COMMUNITY ACQUIRED PNEUMONIA IN COPD PATIENTS Ly Khanh Van, Pham Hung Van * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 2- 2018: 210 - 215 Backgrounds: Due to the limitations that are difficult to overcome today in the culture of the sputum, almost no study in Vietnam has shown the spectrum of the pathogens causing hospitalized community-acquired pneumonia Therefore, the use of multiplex real-time PCR is essential to help break these limitations down Aims: Define community-acquired pneumonia microbial pathogens by both traditional microbial cultures and multiplex real-time PCR methods *Khoa Y- Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Lý Khánh Vân ĐT: 0918874488 210 ** Công ty Nam Khoa Biotek Email: khanhvan1003@yahoo.com Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Objects and methods: This is a multicentre study conducted on the COPD patients hospitalized with community-acquired pneumonia The method of the study was to use the traditional microbiological culture and multiplex real-time PCR to detect microbial pathogens presented in the sputum or bronchial lavage fluid taken from patients immediately after delivery to the study Results: A total of 126 patients with CAP+COPD was included in the study Multiplex real-time PCR results showed that up to 69% of the cases were found the bacterial pathogens in which S pneumoniae and H influenzae had the highest rates (41.3% and 22.2%), followed by K pneumoniae (7.9%), A baumannii (11.11%), and P aeruginosa (7.14%) The others were also detected with the lower rates About the culture results, regardless of the isolation of the streptococci, the detection rate of pathogens was 43.7%, lower than that of multiplex real-time PCR, in which the highest were K pneumoniae (7.0%), P aeruginosa (11.9%), A baumannii (7.9%) and E coli (3.2%); No case of S pneumoniae was isolated and only 2.4% of H influenzae was isolated Conclusions: The culture results, regardless of the isolation of the streptococci, the detection rate of pathogens was 43.7%, lower than that of multiplex real-time PCR (69%), in which the highest were K pneumoniae (41.3%), H influenzae (22.2%); No case of S pneumoniae was isolated and only 2.4% of H influenzae was isolated in traditional microbiological culture Key words: Pathogens causing community acquired pneumonia; real-time PCR technique có độ nhạy cao đồng thời có độ đặc hiệu TỔNG QUAN khơng khác ni cấy(10) Nhiễm khuẩn hô hấp phải nhập viện, Mục tiêu nghiên cứu bệnh nhân COPD gánh nặng Xác định tác nhân vi sinh gây bệnh cho y tế(7,8) Do đa số bệnh nhân sử diện mẫu đàm tin cậy lấy từ bệnh nhân dụng kháng sinh trước nên vi khuẩn gây bị nhiễm khuẩn cấp tính đường hơ hấp bệnh dù sống dịch lót biểu bệnh nhân COPD phải nhập bệnh viện kỹ mô phế nang mẫu đàm (bệnh thuật nuôi cấy truyền thống phối hợp kỹ thuật phẩm chủ yếu để khảo sát) vi khuẩn real time PCR chết Ngồi có ngun nhân chủ quan phòng thí nghiệm làm cho khả cấy vi khuẩn gây bệnh giảm đi, là: phòng thí nghiệm vi sinh khơng có mơi trường thích hợp để phân lập vi khuẩn chủ yếu gây bệnh thường gặp lại khó ni cấy; mẫu bệnh phẩm khơng cấy để tăng hội cấy vi khuẩn gây bệnh; không đánh giá độ tin cậy mẫu đàm để loại bỏ mẫu đàm mà nhầy nhớt vùng hầu họng; cuối cách chọn vi khuẩn gây bệnh mọc mặt thạch phân lập Chính vậy, để phát phổ tác nhân vi sinh thật gây nhiễm khuẩn hô hấp bệnh nhân COPD phải nhập bệnh viện, xét nghiệm vi sinh truyền thống ni cấy thiết phải sử dụng kỹ thuật real-time PCR kỹ thuật Chuyên Đề Nội Khoa ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đây nghiên cứu tiến cứu mô tả cắt ngang đối tượng bệnh nhân COPD bị nhiễm khuẩn cấp tính đường hô hấp phải nhập viện để điều trị khoa hô hấp bệnh viện Chợ Rẫy (CR), khoa hô hấp bệnh viện Phạm Ngọc Thạch (PNT), khoa hô hấp bệnh viện Nhân Dân Gia Định (NDGĐ) khoa hô hấp bệnh viện Đa Khoa Trung Ương Cần Thơ (CT) Các bệnh viện chọn bệnh viện có phòng thí nghiệm vi sinh có khả qui trình chuẩn khảo sát ni cấy mẫu bệnh phẩm đàm hay chứa đàm Thời gian nghiên cứu từ 5/2016 đến cuối 12/2016 Đối tượng nhận vào bao gồm bệnh nhân COPD chẩn đoán viêm phổi cộng đồng cấp tính (CAP/COPD) phải nhập viện Tiêu chuẩn xác định bệnh nhân viêm 211 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 phổi cộng đồng phải nhập viện là(4,6): (i) có tình trạng nhiễm khuẩn tồn thân sốt, mệt mỏi, chán ăn; (ii) có triệu chứng hô hấp ho, nặng ngực, khạc đàm, khó thở; (iii) có triệu chứng thực thể khám phổi ran nổ, tiếng thở phế quản, hội chứng đông đặc phổi, hội chứng ba giảm; (iv) bệnh cảnh xuất cấp tính khoảng 4-10 ngày khơng giải thích cho bệnh lý khác; (v) X quang ngực có hình ảnh thâm nhiễm thích hợp khơng giải thích cho bệnh lý khác biết trước ung thư, lao; (vi) CRP >50mg/L Tiêu chuẩn chẩn đoán COPD có hai điều kiện sau: (i) chẩn đoán quản lý điều trị sở chun khoa hơ hấp có đo chức hô hấp; (ii) 40 tuổi, hút thuốc từ 20 gói-năm trở lên, có triệu chứng hơ hấp mạn tính (ho, khó thở, khạc đàm) và/hoặc có sử dụng thuốc dãn phế quản dạng hít thường xuyên Kèm theo hai tiêu chuẩn X quang ngực khơng có hình ảnh bất thường khác nguyên nhân triệu chứng hô hấp mạn tính Tiêu chuẩn để chẩn đốn đợt cấp nhiễm khuẩn bệnh nhân COPD nghiên cứu (i) có triệu chứng xuất gồm tăng khó thở, tăng lượng đàm tăng đàm mủ có triệu chứng kể tăng đàm mủ(16); (ii) CRP >15 mg/L(9) Khơng đưa vào nghiên cứu bệnh nhân chẩn đoán viêm phổi bệnh viện, lao phổi hay có nguyên nhân khác viêm phổi tạo hình thâm nhiễm X quang phổi Mẫu đánh giá tin cậy để ni cấy có >25 bạch cầu đa nhân trung tính/quang trường