Những tác động của Taxol lên việc bảo quản lạnh tế bào trứng bò trưởng thành bằng phương pháp thủy tinh hóa

Thí nghiệm được thiết kế để đánh giá hiệu quả của Taxol lên sự bảo quản lạnh tế bào trứng (TBT) bò trưởng thành MII bằng phương pháp thủy tinh hóa sử dụng cọng rạ làm vật mang. TBT ở bò thành thục (sau 22-24h nuôi) được thủy tinh hóa trong các giọt chất bảo quản lạnh có hoặc không có 1 µM Taxol (giọt 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol (EG), 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) trong 45 giây; giọt 2: TCM -199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene glycol (EG), 20% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0,5 M sucrose trong 25 giây) trong các cọng rạ (0,25 ml, I.M.V, Pháp). Sau rã đông, các TBT được tiếp tục nuôi ổn định thêm 2h và tiến hành đánh giá các chỉ tiêu về tỷ lệ TBT sống trên TBT đông lạnh; tỷ lệ TBT sống trên TBT thu hồi và tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân. Kết quả thu được: tỷ lệ TBT sống so với TBT đem đông lạnh và TBT sống so với TBT thu hồi ở mẫu có xử lý với Taxol là cao hơn so với mẫu đối chứng (không xử lý với Taxol) (62,74 ± 2,74% so với 59,81 ± 1,75% và 70,65 ± 2,44% so với 67,66 ± 2,12%, P < 0,05), tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân ở cả hai mẫu xử lý và không xử lý Taxol không có sự khác biệt (78,14 ± 4,01% so với 77,89 ± 2,13%, P > 0,05). Các kết quả thu được trong thí nghiệm này cho thấy Taxol giúp tăng tỷ lệ sống của TBT bò MII sau khi đông lạnh và giải đông, nhưng chưa có tác động rõ rệt lên việc hạn chế sự tổn thương nhân của quá trình bảo quản lạnh.

TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305 NHỮNG TÁC ĐỘNG CỦA TAXOL LÊN VIỆC BẢO QUẢN LẠNH TẾ BÀO TRỨNG BỊ TRƯỞNG THÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY TINH HĨA Nguyễn Thị Thương Huyền1,2, Nguyễn Thành Trung1, Nguyễn Vũ Hoàng Linh1, Lê Thành Long3, Hoàng Nghĩa Sơn3, Phan Kim Ngọc1 (1) Đại học Khoa học tự nhiên Hồ Chí Minh, (*)thuonghuyen78@yahoo.com (2) Đại học Sư Phạm Hồ Chí Minh (3) Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam TĨM TẮT: Thí nghiệm thiết kế để đánh giá hiệu Taxol lên bảo quản lạnh tế bào trứng (TBT) bò trưởng thành MII phương pháp thủy tinh hóa sử dụng cọng rạ làm vật mang TBT bò thành thục (sau 22-24h ni) thủy tinh hóa giọt chất bảo quản lạnh có khơng có µM Taxol (giọt 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol (EG), 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) 45 giây; giọt 2: TCM -199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene glycol (EG), 20% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0,5 M sucrose 25 giây) cọng rạ (0,25 ml, I.M.V, Pháp) Sau rã đông, TBT tiếp tục nuôi ổn định thêm 2h tiến hành đánh giá tiêu tỷ lệ TBT sống TBT đông lạnh; tỷ lệ TBT sống TBT thu hồi tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân Kết thu được: tỷ lệ TBT sống so với TBT đem đông lạnh TBT sống so với TBT thu hồi mẫu có xử lý với Taxol cao so với mẫu đối chứng (không xử lý với Taxol) (62,74 ± 2,74% so với 59,81 ± 1,75% 70,65 ± 2,44% so với 67,66 ± 2,12%, P < 0,05), tỷ lệ TBT không bị tổn thương nhân hai mẫu xử lý khơng xử lý Taxol khơng có khác biệt (78,14 ± 4,01% so với 77,89 ± 2,13%, P > 0,05) Các kết thu thí nghiệm cho thấy Taxol giúp tăng tỷ lệ sống TBT bò MII sau đơng lạnh giải đơng, chưa có tác động rõ rệt lên việc hạn chế tổn thương nhân trình bảo quản lạnh Từ khóa: bảo quản lạnh, thủy tinh hóa, tế bào trứng bò, Taxol MỞ ĐẦU Phương pháp thủy tinh hóa thành cơng ứng dụng cơng nghệ bảo quản tế bào trứng (TBT) động vật có vú chuột, bò, người ngựa Tuy nhiên, việc bảo quản lạnh TBT gặp nhiều khó khăn Sự ổn định hệ thống khung tế bào suốt q trình thủy tinh hóa giúp cải thiện sống sót sau giải đơng phát triển Taxol chất làm ổn định cấu trúc vi ống Taxol ưu tiên kết hợp với protein thay đổi nhiều tiến trình tế bào thể người chuột Một tiến trình liên quan đến tương tác với vi ống Taxol tương tác với vi ống cách chuyên biệt so với colchicine vinca alkaloid Trong hợp chất làm giảm polyme hóa cấu trúc vi ống đẩy mạnh tháo xoắn vi ống Taxol làm tăng tỉ lệ polyme hóa việc giảm bớt tập trung vi ống cần cho polyme hóa [7] Taxol thêm vào dung dịch thủy tinh hóa để cải thiện phát triển sau giải đông TBT chưa trưởng thành người [5], TBT chuột trưởng thành [8] lợn [10] Gần đây, Shi et al (2006) [10] kết luận việc xử lý trước Taxol giảm tác hại gây q trình thủy tinh hóa đến cấu trúc thoi vơ sắc thời kì giảm phân, mà cải thiện phát triển TBT lợn sau thủy tinh hóa Hơn nữa, nhóm nghiên cứu Morato et al (2008) [7] việc xử lý với µM Taxol trước suốt q trình thủy tinh hóa giúp ổn định siêu cấu trúc vi ống định vị nhiễm sắc thể TBT bò Trước tình hình trên, nhóm nghiên cứu tiến hành khảo sát tác động Taxol lên thủy tinh hóa TBT bò ni trưởng thành điều kiện phòng thí nghiệm (in vitro) PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thu nhận ni chín trứng Buồng trứng bò thu nhận từ lò giết mổ, sau bảo quản dung dịch nước muối sinh lý (NaCl 0,9%) chứa 50 µg/ml Gentamycin chuyển vể phòng thí nghiệm khoảng 3h với nhiệt độ trì 3337oC Tại phòng thí nghiệm, buồng trứng 299 Nguyen Thi Thuong Huyen et al rửa lại dung dịch PBS chứa 50 µg/ml Gentamycin đồng thời cắt bỏ phần mỡ thừa Các TBT chọc hút từ nang có đường kính từ 3-6 mm đầu kim 18G Các TBT có từ lớp tế bào cumulus dày bao quanh chọn cho q trình ni thành thục (IVM-In vitro maturation) Các TBT chọn rửa hai lần dung dịch DBPS 0,1% penicillin/streptomycin hai lần mơi trường ni chín trứng (C3) gồm TCM-199 (M5017, sigma), 10% FBS (sigma), 5% FCS (sigma), 10 IU/ml hCG, 10 IU/ml EGF 0,2mM Natripyruvate Lấy khoảng 15-20 TBT đem ni vi giọt mơi trường ni chín trứng C3 (100 µl/giọt) tạo sẵn đĩa giếng có phủ dầu khống (ủ 38,5o C, 5% CO2, độ ẩm 100% vòng 2h trước sử dụng) tủ nuôi 38,5oC, 5% CO2, độ ẩm 100% khoảng 22-24h Sau thời gian nuôi thành thục, TBT đánh giá trưởng thành nhân trưởng thành tế bào chất 15 phút 38,5oC , 5% CO2, độ ẩm 100% trước thủy tinh hóa cọng rạ Ngồi ra, dung dịch thủy tinh hóa chứa µM Taxol Nhuộm PI (propidium iodide) đánh giá kết ni chín TBT Các TBT sau nuôi môi trường nuôi thành thục loại tế bào cumulus xung quanh, sử dụng pipette Pasteur kéo nhỏ đường kính khoảng 90-100 µm Các TBT loại tế bào cumulus cố định paraformaldehyde 4% (1% BSA, 100 mg/100 ml PVA) 40 phút, đặt tối 4oC Sau đó, rửa lại lần dung dịch PBS (1% BSA, 100 mg/100 ml PVA) ủ dung dịch Triton X-100 0,1% qua đêm Tiếp tục rửa lại lần dung dịch PBS (1% BSA, 100 mg/100 ml PVA) cho Triton X-100 nhuộm PI nồng độ 30 µg/ml 30 phút nhiệt độ phòng Rửa TBT nhuộm lần PBS (1% BSA, 100 mg/100 ml PVA) cố định lên lame Các TBT trưởng thành bắt màu đỏ thuốc nhuộm PI vùng nhân thể cực thứ quan sát kính hiển vi huỳnh quang bước sóng 535 nm Lấy cọng rạ chứa TBT khỏi bình nitơ lỏng, để khơng khí giây, nhúng vào nước ấm 33-35oC, dùng bơng gòn tẩm cồn lau cọng rạ, dùng kéo cắt đầu, sau cắt đầu lại, chuyển TBT vào đĩa nhựa Φ35 trống Dùng mouth pipette ống mao quản thủy tinh hút TBT từ đĩa Φ35 chuyển qua môi trường RĐ1 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS + 0,25 M Sucrose) khoảng 1,5 phút nhiệt độ phòng Chuyển tiếp TBT sang môi trường RĐ2 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS + 0,15M Sucrose), giữ khoảng 1,5 phút nhiệt độ phòng Chuyển tiếp TBT qua mơi trường RĐ3 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS), giữ phút nhiệt độ phòng Tiếp tục chuyển TBT vào mơi trường nuôi trứng C3 , sau khoảng phút nhiệt độ phòng, chuyển vào tủ ni khoảng 2h để giúp TBT hồi phục hồn tồn Đơng lạnh giải đông Tiền xử lý TBT nuôi thành thục với Taxol (Sigma) Sau nuôi thành thục (22-24h), TBT loại bỏ lớp tế bào cumulus pipette Pasteur, sau xử lý với µM Taxol (Sigma) 300 Thủy tinh hóa Sau tiền xử lý với dung dịch Taxol, TBT chuyển vào đĩa nhựa Φ35 chứa môi trường C3 (giữ TBT chuẩn bị cho đơng lạnh) Sau chuyển TBT đĩa vào vi giọt VS1 (TCM-199 + 10% FBS + 5% FCS + 10% DMSO + 10% EG + µM Taxol) giữ cân 45 giây, chuyển TBT sang mơi trường thủy tinh hóa vi giọt VS2 (TCM199 + 10% FBS + 5% FCS + 20% DMSO + 20% EG + 0,5M Sucrose + µM Taxol) 25 giây, cuối chuyển TBT vào cọng rạ vòng 25 giây, hàn đầu cọng rạ máy ép nhựa sau đưa thẳng cọng rạ chứa TBT vào bình nitơ lỏng để bảo quản Rã đông Đánh giá sống chết TBT sau đông lạnh giải đông Đánh giá sống chết TBT quan sát hình thái TBT sống có tế bào chất đồng đều, màu sáng, màng suốt nhìn rõ, dễ quan sát; TBT chết có tế bào chất màu đen, không co lại hay phân mảnh bên Đồng thời tiến hành nhuộm PI theo quy trình nhuộm để đánh giá tổn thương nhân: TBT TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305 bị tổn thương nhân có đặc điểm nhân bắt màu với thuốc nhuộm PI nhân bị phân mảnh với điểm bắt màu đỏ nằm phân tán; TBT có nhân khơng bị tổn thương vùng nhân bắt màu đỏ sáng đồng thuốc nhuộm PI Phương pháp xử lý số liệu Tất số liệu nghiên cứu xử lý phần mềm Excel phiên 2003 độ tin cậy 95% Dùng hàm Descriptive Statistic, tTest Two-Sample Assuming Equal Variances KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Kết nuôi thành thục TBT Các TBT sau nuôi, đánh giá theo độ giãn nở cumulus xuất thể cực thứ I (hình 1) Kết thể bảng Bảng Kết nuôi thành thục tế bào trứng Số lần thí nghiệm Số TBT ni 586 Tỷ lệ (%) TBT trưởng thành (n) 82,07 ± 1,77 (481) P > 0,05 Số TBT đánh giá Tỷ lệ (%) MII (n) 232 81,06 ± 2,34 (188) a b c d Hình Tế bào trứng trước sau nuôi (x20) a TBT chọn để nuôi; b TBT trưởng thành qua giãn lớp cumulus; c TBT trưởng thành, xuất thể cực thứ nhất; d TBT không trưởng thành chết Qua đợt thí nghiệm, tổng số TBT ni 586, có 481 TBT đạt đến giai đoạn trưởng thành theo độ giãn nở cumulus với tỷ lệ 82,07 ± 1,77% Trong số TBT cho thành thục dựa vào độ giãn nở cumulus, lấy 232 TBT đem đánh giá (loại bỏ lớp cumulus) có 188 TBT xuất thể cực thứ nhất, chiếm tỷ lệ 81,06 ± 2,34% So sánh hai tỷ lệ cho thấy, khơng có khác biệt mặt thống kê (P > 0,05) Như vậy, kết đánh 301 Nguyen Thi Thuong Huyen et al giá tỷ lệ đạt thành thục TBT theo độ giãn nở cumulus theo quan sát thể cực tương đương Hiện phòng thí nghiệm giới đạt tỷ lệ TBT bò đạt thành thục từ 70-90% Kết thí nghiệm tương đối cao chấp nhận Kết đông lạnh, giải đông Những TBT sau IVM bảo quản phương pháp thủy tinh hóa tối thiểu 48 giờ, sau giải đơng, đánh giá sống chết cách quan sát hình thái kính hiển vi Những TBT cho sống theo hình thái sau giải đông đem khảo sát tổn thương nhân phương pháp nhuộm PI Trên hình ảnh nhuộm, nhân ngun vẹn vùng có hình hoa thị, sáng thường nhỏ thể cực (hình 2) Nếu nhân bị tổn thương có hình ảnh đốm sáng nằm rải rác khơng có nhân (hình 3) x40 x40 Hình TBT có nhân khơng tổn thương Hình TBT có nhân tổn thương Mũi tên màu trắng vùng nhân, mũi tên màu xanh thể cực thứ Tiến hành so sánh tiêu (CT) sau giải đông sau: tỷ lệ thu hồi (CT1 - tiêu 1); Tỷ lệ TBT sống so với tổng số TBT đem đông lạnh (CT2); tỷ lệ TBT sống so với tổng số TBT thu hồi (CT3); tỷ lệ TBT có nhân không bị tổn thương (CT4) Kết thể bảng Bảng So sánh kết đông lạnh giải đơng lơ thí nghiệm xử lý Taxol lơ đối chứng Lơ thí nghiệm Số TBT đông lạnh (n) Không xử lý Taxol 249 Xử lý Taxol 188 Mức ý nghĩa Tỷ lệ (%) tiêu so sánh TC1 TC2 TC3 TC4 88,43 ± 2,04 (220 TBT) 88,80 ± 1,91 (167 TBT) P > 0,05 59,81 ± 1,75 (149 TBT) 62,74 ± 2,74 (118 TBT) P < 0,05 67,66 ± 2,12 (149 TBT) 70,65 ± 2,44 (118 TBT) P < 0,05 77,89 ± 2,13 (116 TBT) 78,14 ± 4,01 (92 TBT) P > 0,05 Kết bảng cho thấy, tỷ lệ thu hồi TBT sau giải đơng lơ thí nghiệm lơ đối chứng tương đương đạt khoảng 88% (P > 0,05) Điều cho phép khẳng định sau đông lạnh, khả thu hồi lại số lượng tế bào trứng cao Kết đạt 302 lơ thí nghiệm lơ đối chứng điều tất yếu, lơ bảo quản phương pháp thủy tinh hóa cọng rạ hở quy trình Kết khẳng định thêm kỹ thuật thực thí nghiệm lơ khơng có khác biệt nhau, khơng TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305 gây ảnh hưởng đến kết chung tiêu khác hai lơ thí nghiệm Tuy nhiên, khoảng 12% lượng TBT bị thất q trình thu hồi Qua q trình thực thí nghiệm, nhận thấy rằng, lượng TBT bị chủ yếu giai đoạn giải đông: lấy cọng rạ khỏi bình nitơ lỏng, số cọng rạ thường bị nổ thay đổi nhiệt độ áp suất cách đột ngột, lúc toàn TBT cọng rạ khơng thể thu hồi Ngồi ra, chuyển TBT vào môi trường giải đông thường có tượng bọt khí tạo nhiều Chính yếu tố làm cản trở phần việc tìm thu nhận TBT Đây khó khăn mặt kỹ thuật cần phải khắc phục Tỷ lệ trung bình TBT sống so với tổng số TBT đem đơng lạnh thí nghiệm đạt 62,74 ± 2,74% (mẫu đối chứng 59,81 ± 1,75%), khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) Điều chứng tỏ lơ thí nghiệm khơng xử lý Taxol cho kết tỷ lệ sống theo hình thái thấp so với nhóm có xử lý Taxol Kết chứng tỏ Taxol có tác động lên khả sống TBT trình bảo quản lạnh Nhưng xét tỷ lệ TBT sống so với TBT thu hồi sau giải đông cho kết 70,65 ± 2,44% so với mẫu đối chứng 67,66 ± 2,12% (P < 0,05) Điều có nghĩa lô không xử lý Taxol cho tỷ lệ sống sau giải đông thấp so với lô có xử lý trước với Taxol Kết lần chứng tỏ Taxol có tác động lên khả sống TBT bò q trình bảo quản lạnh Kết phù hợp với nghiên cứu Morato et al (2008) [7] cho rằng, Taxol có khả làm ổn định khung TBT, giảm thiểu tổn thương nâng cao khả phát triển TBT đơng lạnh Kết có phần cao kết Martino et al (1996, 34%) [6] Như vậy, tỷ lệ TBT sống sau giải đơng quan sát hình thái nghiên cứu chấp nhận Tuy nhiên, kết thấp nhiều so với kết 83,7%, Booth et al (1999) công bố [1]; 86% Andras Dinnyes et al (2000) [3]; 89,1% Morato et al (2008) [7] đặc biệt Chian et al (2004) [2] thu tỷ lệ TBT bò sống sau giải đông đạt 92% Tỷ lệ nhân không tổn thương theo đánh giá qua hình thái hình ảnh nhuộm nhân đạt 78,14 ± 4,01% (mẫu đối chứng 77,89 ± 2,13%) Kết cao Saunders Parks (1999; 31%) [9]; Morato et al (2008; 46,6%) [7] Tuy nhiên, kết thấp Eroglu et al (1998; 86%) [4] Tỷ lệ TBT bò có nhân khơng bị tổn thương lơ thí nghiệm khơng có khác biệt mặt thống kê (P > 0,05) Tức tổn thương nhân TBT bò sau bảo quản lạnh nhóm khơng xử lý Taxol nhóm xử lý Taxol tương đương Kết chứng tỏ chưa thấy hiệu Taxol việc hạn chế tổn thương nhân TBT bò q trình bảo quản phương pháp thủy tinh hóa cọng rạ Tuy nhiên, kết nghiên cứu nhóm tác giả Morato et al (2008) [7] lại cho rằng, TBT bò xử lý với Taxol trước đem bảo quản phương pháp thủy tinh hóa đạt tỷ lệ cấu trúc bình thường thoi vơ sắc, vi ống, nhiễm sắc thể tương đương với TBT tươi Như vậy, kết thí nghiệm chưa thấy vai trò Taxol nhân TBT Điều giải thích việc khảo sát tổn thương nhân chủ yếu thơng qua hình ảnh chụp kính hiển vi huỳnh quang, dựa vào độ phát sáng thuốc nhuộm Vì vậy, kỹ thuật nhuộm chưa thật chuẩn xác nên chưa cho kết rõ ràng Đây yếu tố cần khắc phục Hiện nay, nước chưa có cơng trình cơng bố tổn thương nhân q trình bảo quản lạnh phương pháp thủy tinh hóa KẾT LUẬN Kết thí nghiệm chúng tơi cho thấy, Taxol có tác dụng lên tỷ lệ sống TBT bò trưởng thành thành thục sau bảo quản lạnh, chưa thấy tác dụng Taxol lên việc hạn chế tổn thương nhân Vì cần khảo sát phương pháp đánh giá tổn thương nhân TBT bò sau bảo quản lạnh phương pháp nhuộm khác để có kết luận xác vai trò hóa chất TÀI LIỆU THAM KHẢO Booth P.J., G Vajta, A Hoj, P Holm, H Jacobsen, T Greve, and H Callesen, 1999 303 Nguyen Thi Thuong Huyen et al Full-term development of nuclear transfer calves produced from open-pulled straw (OPS) vitrified cytoplasts: work in progress Theriogenology, 51(5): 999-1006 Chian R.C., M Kuwayama, L Tan, J Tan, O Kato, and T Nagai, 2004 High survival rate of bovine oocytes matured in vitro following vitrification J Reprod Dev., 50(6): 685-696 Dinnyes A., Y Dai, S Jiang, and X Yang, 2000 High developmental rates of vitrified bovine oocytes following parthenogenetic activation, in vitro fertilization, and somatic cell nuclear transfer Biol Reprod., 63(2): 513-518 Eroglu A., M Toner, L Leykin, and T.L Toth, 1998 Cytoskeleton and polyploidy after maturation and fertilization of cryopreserved germinal vesicle-stage mouse oocytes J Assist Reprod Genet, 15(7): 447454 Fuchinoue K., N Fukunaga, S Chiba, Y Nakajo, A Yagi, and K Kyono, 2004 Freezing of human immature oocytes using cryoloops with Taxol in the vitrification solution J Assist Reprod Genet, 21(8): 307309 Martino A., N Songsasen, S P Leibo, 1996 Development into blastocysts of bovine oocytes cryopreserved by ultra-rapid cooling Biol Reprod, 54(5): 1059-1069 Morato R., R., D Izquierdo, J.L Albarracin, B Anguita, M.J Palomo, A.R Jimenez-Macedo, M.T Paramio, and T Mogas, 2008 Effects of pre-treating in vitro-matured bovine oocytes with the cytoskeleton stabilizing agent taxol prior to vitrification Mol Reprod Dev, 75(1): 191201 Park S.E., H.M Chung, K.Y Cha, W.S Hwang, E.S Lee, and J.M Lim, 2001 Cryopreservation of ICR mouse oocytes: improved post-thawed preimplantation development after vitrification using Taxol, a cytoskeleton stabilizer Fertil Steril, 75(6): p 1177-84 Saunders K M., J E Parks, 1999 Effects of cryopreservation procedures on the cytology and fertilization rate of in vitromatured bovine oocytes Biol Reprod, 61(1): 178-187 10 Shi W.Q., S.E Zhu, D Zhang, W.H Wang, G.L Tang, Y.P Hou, and S.J Tian, 2006 Improved development by Taxol pretreatment after vitrification of in vitro matured porcine oocytes Reproduction, 131(4): 795-804 EFFECTS OF TAXOL ON IN-VITRO MATURED BOVINE OOCYTE VITRIFICATION Nguyễn Thị Thương Huyền1, 2, Nguyễn Thành Trung1 , Nguyễn Vũ Hoàng Linh1, Lê Thành Long3, Hoàng Nghĩa Sơn3, Phan Kim Ngọc1 (1) (2) Ho Chi Minh city University of Science Ho Chi Minh city University of Pedagogy (3) Intistute of Tropical Biology, VAST SUMMARY The experiment was designed to assess the effectiveness of Taxol on cryopreserving bovine MII oocytes using straws as the carrier system for vitrification Bovine matured oocytes were vitrified in droplets of cryoprotectants with or without µM Taxol (droplet 1: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 10% ethylene glycol (EG), 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) for 45s; droplet 2: TCM-199, 10% FBS, 5% FCS, 20% ethylene glycol (EG), 20% dimethyl sulfoxide (DMSO), 0.5 M sucrose for 25s) on straws After thawing, the oocytes were cultured in IVM medium in hours and oocytes were assessed by ratio of survival oocytes (SO) to 304 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 299-305 vitrified oocytes (VO); survival oocytes (SO) to colected oocytes (CO) and the proportion of normal nuclear oocytes (NNO) The results showed that the ratio of SO to VO and SO to CO in Taxol groups were slightly higher (62.74 ± 2.74% vs 59.81 ± 1.75% and 70.65 ± 2.44% vs 67.66 ± 2.12%, P < 0.05); the ratio of NNO in both taxol-pretreatment groups and non-taxol-pretreatment groups (control) had no significant difference (78.14 ± 4.01% vs 77.89 ± 2.13%, P > 0.05) The results of this experiment indicated that taxol pretreatment affects the survival ratio of vitrified bovine oocytes but there was no significant evidence on preventing abnormal nuclear oocytes Keywords: Bovine oocyte, Taxol, cryopreservation, in vitro maturation, vitrification Ngày nhận bài: 21-6-2012 305 ... trình bảo quản lạnh phương pháp thủy tinh hóa KẾT LUẬN Kết thí nghiệm chúng tơi cho thấy, Taxol có tác dụng lên tỷ lệ sống TBT bò trưởng thành thành thục sau bảo quản lạnh, chưa thấy tác dụng Taxol. .. hiệu Taxol việc hạn chế tổn thương nhân TBT bò q trình bảo quản phương pháp thủy tinh hóa cọng rạ Tuy nhiên, kết nghiên cứu nhóm tác giả Morato et al (2008) [7] lại cho rằng, TBT bò xử lý với Taxol. .. thành thục, TBT đánh giá trưởng thành nhân trưởng thành tế bào chất 15 phút 38,5oC , 5% CO2, độ ẩm 100% trước thủy tinh hóa cọng rạ Ngồi ra, dung dịch thủy tinh hóa chứa µM Taxol Nhuộm PI (propidium