Thiết lập qui trình nhân giống in vitro cây mai vàng (Ochna integerrima (Lour.) Merr.)

Ở Việt Nam, mai vàng là một loại cây cảnh phổ biến, có giá trị kinh tế cao. Qui trình vi nhân giống mai vàng từ đoạn cành và búp chồi, được thiết lập qua 4 bước chính. Môi trường MS bổ sung cả BA và NAA với nồng độ tương ứng 1,5mg/lvà 0,5mg/l thích hợp để tái sinh chồi mai in vitro từ mẫu ban đầu.

Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 28 Thiết lập qui trình nhân giống in vitro mai vàng (Ochna integerrima (Lour.) Merr.) Hồ Thị Cẩm Nguyên1, Phạm Ngọc Hà2, Nguyễn Thị Nhã1,* Đại học Nguyễn Tất Thành, 2Đại học Tơn Đức Thắng ntnha@ntt.edu.vn * Tóm tắt Ở Việt Nam, mai vàng loại cảnh phổ biến, có giá trị kinh tế cao Qui trình vi nhân giống mai vàng từ đoạn cành búp chồi, thiết lập qua bước Mơi trường MS bổ sung BA NAA với nồng độ tương ứng 1,5mg/lvà 0,5mg/l thích hợp để tái sinh chồi mai in vitro từ mẫu ban đầu Môi trường MS bổ sung 2mg/l kinetin 4mg/l BA nghiên cứu thích hợp để nhân số lượng chồi, đạt 3,4 chồi/mẫu, có tượng tạo cụm chồi từ mẫu búp chồi ban đầu Nghiên cứu cho thấy môi trường ½ MS thích hợp cho chồi mai vàng in vitro sinh trưởng, phát triển Nồng độ GA3 0,5 – 1mg/l nên sử dụng để kéo dài chồi trước đưa bầu giá thể gồm cát, đất, xơ dừa, trấu với tỉ lệ 30:50:10:10, cho tỉ lệ sống đến 70% ® 2019 Journal of Science and Technology - NTTU Đặt vấn đề Mai vàng thân gỗ trồng phổ biến Thái Lan, Việt Nam số nước Đơng Nam Á khác Cây có tuổi thọ 100 năm, trồng ngồi vườn, chăm sóc tốt, có đường kính lên đến 30cm cao khoảng 4m[1] Tại Việt Nam, mai vàng cảnh phổ biến miền Trung Nam Đặc biệt mai vàng biểu tượng mùa xuân, may mắn đầu năm, nên nhu cầu chơi mai ngày Tết lớn Mai vàng trở thành loại thương phẩm có giá trị kinh tế cao Các mai đẹp ưa chuộng cho dù giá thành đắt Nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền thị RAPD giống mai Việt Nam cho kết nhận diện 15 giống mai khác nhau[2], cho thấy phong phú chủng loại mai Những mai có đặc tính q (hương thơm, màu sắc hoa, số cánh hoa …) bị khai thác mức, trở thành mai hiếm, tiêu biểu mai vàng Yên Tử, Việt Nam Ngồi làm cảnh, mai vàng sử dụng làm dược liệu, thực phẩm, lấy gỗ… Hiện tại, mai bốn nhóm kiểng chủ lực thành phố Hồ Chí Minh[3] Vì thân gỗ, mai vàng sinh trưởng phát triển chậm, chủ yếu nhân giống phương pháp truyền thống, không đáp ứng đủ nhu cầu thị trường Phương pháp nhân giống hữu tính gieo hạt đơn giản trình thụ phấn tự nhiên làm thối hóa giống, khơng giữ đăc tính quí mong muốn Phương Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận 08.01.2019 Được duyệt 04.04.2019 Cơng bố 26.06.2019 Từ khóa mai vàng, vi nhân giống, thân gỗ pháp nhân giống vơ tính ghép cành, giâm cành hạn chế số lượng tạo độ đồng tuổi Phương pháp vi nhân giống nuôi cấy mô thực vật phổ biến, sử dụng phương pháp để vi nhân giống họ mai công bố số quốc gia phát triển mạnh khoa học kĩ thuật Trung Quốc, Ấn Độ, số lượng nghiên cứu hạn chế Các nhà khoa học Ấn Độ thành cơng tạo chồi mai tứ q (Ochna serrulata) in vitro môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) bổ sung 2,0mg/l benzyl adenine (BA) 0,25mg/l indol-3butyric acid (IBA); nuôi cấy chồi môi trường MS bổ sung 2% sucrose + 1,0mg/l IBA cho rễ hình thành nhiều phát triển mạnh nhất[4] Ở Trung Quốc, nghiên cứu tiến hành với đối tượng mai vàng (Ochna integerrima (Lour.)) nhằm tạo chồi phôi soma từ vật liệu chồi in vitro; kết cho thấy sử dụng thidiazuron (TDZ) nồng độ cao (10 – 15µM) cảm ứng phát sinh chồi bất định phôi soma từ mô in vitro; sử dụng TDZ nồng độ thấp (5µM) BA (5 – 15µM) làm phát sinh chồi bất định; nghiên cứu thành công việc tạo rễ in vitro, với môi trường MS bổ sung 0,5α – naphtalen acetic acid (NAA) + 8µM IBA + 0,1% than hoạt tính sau tháng[5] Tại Việt Nam, Trường Đại học Cần Thơ thành công việc nhân giống mai vàng in vitro nhằm phục vụ nghiên cứu ứng dụng lai tạo giống Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số Nghiên cứu sử dụng vật liệu thân chồi mai tuần tuổi để vô mẫu, kết tạo chồi mai in vitro với môi trường MS bổ sung BA (4mg/l) cho số chồi cao nhất, tạo rễ mơi trường ½ MS bổ sung NAA (6mg/l) cho rễ hình thành nhiều phát triển bình thường[6] Qua nghiên cứu cho thấy việc nhân giống in vitro mai vàng có tiềm ứng dụng cao, phạm vi nghiên cứu mức phòng thí nghiệm, cần tìm qui trình nhân giống có tính khả thi hơn, đưa sản xuất đại trà phục vụ cho nhu cầu thị trường phục vụ công tác bảo tồn giống mai quí Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu địa điểm nghiên cứu Cành mai vàng không non già, phát triển tốt, không bị sâu bệnh, thu Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam Các thí nghiệm nghiên cứu tiến hành Phòng thí nghiệm Sinh học phân tử Thực vật, Khoa Công nghệ sinh học Môi trường, Đại học Nguyễn Tất Thành 2.2 Tạo vật liệu in vitro từ mẫu mai vàng tự nhiên Trên cành mai vàng, cắt lấy đoạn cành chứa mắt ngủ chồi ngọn, sau cắt bỏ Mẫu cấy khử trùng cồn 70% phút, dung dịch sodium hypochlorite (NaClO) 1,25% 20 phút, cuối khử trùng dung dịch calcium hypochlorite (Ca(ClO)2) 8g/l 10 phút Mẫu cấy vào môi trường MS bổ sung 30g/l sucrose + 6,8g/l agar, pH môi trường 5,8 – 2.3 Tái sinh chồi mai vàng in vitro Mẫu vô trùng chuyển sang nuôi cấy môi trường MS bổ sung 30g/l sucrose + 6,8g/l agar + 0,5mg/l NAA 0,5 – 1,5mg/l BA nhằm xác định nồng độ BA thích hợp tái sinh chồi từ mẫu cấy ban đầu Sau tuần nuôi cấy, chồi phát sinh từ mẫu đoạn cành mẫu búp chồi ban đầu cấy chuyền sang môi trường tạo đa chồi mai 2.4 Nhân số lượng nuôi cấy chồi mai vàng in vitro Sử dụng môi trường MS bổ sung 30g/l sucrose + 6,8g/l agar + tỉ lệ nồng độ tổ hợp chất điều hòa sinh trưởng (ĐHST) gồm – 4mg/l kinetin – 4mg/l BA để kích thích tạo đa chồi từ mẫu cấy, nhằm nhân nhanh số lượng chồi mai vàng in vitro Sau tuần nuôi cấy, chồi cao 1cm (khoảng – đốt thân) tách riêng ni cấy mơi trường có nồng độ khống khác để chọn mơi trường thích hợp cho nuôi cấy chồi mai vàng in vitro Các cụm chồi non cấy chuyền sau tuần sang môi trường tái sinh mai ban đầu 2.5 Tạo hoàn chỉnh từ chồi mai vàng in vitro Sử dụng mơi trường thích hợp bổ sung nồng độ GA3 khác để chọn nồng độ phù hợp nuôi cấy chồi mai ngắn 0,5 – 1cm nhằm kéo dài thân chồi Đồng thời, khảo 29 sát ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ chồi mai dài 1cm 2.6 Đưa in vitro bầu Cây in vitro từ – 5cm tạo điều kiện thích nghi tuần trước cho bầu Các thành phần giá thể dùng cho bầu mai vàng bao gồm đất, cát, trấu, xơ dừa phối trộn theo nhiều tỉ lệ khác Đất sử dụng thí nghiệm đất giàu dinh dưỡng hãng Tribat® Tất bầu giữ ẩm cách đậy hũ nhựa suốt phủ lên bầu để nơi thoáng mát, tránh ánh nắng trực tiếp Cây tưới phun sương dung dịch khống ½ MS lỏng lần/ngày 2.7 Bố trí thí nghiệm xử lí số liệu Tất môi trường hấp khử trùng 1210C 18 phút Mẫu nuôi cấy điều kiện nhiệt độ 250C ± 1, chiếu sáng 16 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 2000lux Thí nghiệm tái sinh chồi, tạo đa chồi cấy mẫu/nghiệm thức, thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng GA3 đến khả kéo dài chồi NAA đến khả tạo rễ, cấy chồi/nghiệm thức, thí nghiệm lặp lại lần Thí nghiệm khảo sát mơi trường thích hợp giá thể thích hợp ni mai vàng ex vitro, bố trí cây/nghiệm thức, thí nghiệm lặp lại lần Các thí nghiệm bố trí theo phương pháp ngẫu nhiên đơn yếu tố Số liệu thí nghiệm thu thập tổng hợp phần mềm Microsoft Office Excel phân tích thống kê theo ANOVA trắc nghiệm phân hạng LSD (Leasst Significant Difference Test) phần mềm SAS 9.1 Kết thảo luận 3.1 Tái sinh chồi mai vàng in vitro Khi phối hợp với auxin cytokinin kích thích phân chia tế bào điều khiển phát sinh hình thái Chất ĐHST BA loại cytokinin có hiệu cao việc cảm ứng tạo chồi nhiều loài thực vật, kết hợp với NAA (α – naphtalen acetic acid) chất nhóm auxin, nghiên cứu thích hợp sử dụng ni cấy chồi[7] Điều thể qua kết thí nghiệm, tất nghiệm thức với nồng độ khác BA NAA có khả phát sinh chồi, nồng độ BA cao khả phát sinh chồi nhiều (Bảng 1) Mẫu đoạn thân ni cấy mơi trường có bổ sung 1,5mg/l BA + 0,5mg/l NAA đạt số lượng chồi cao (3,2 chồi, cao trung bình 2,4cm) So sánh với kết Mai Vũ Duy Lâm Ngọc Phương (2012), hệ số nhân chồi nghiên cứu đạt cao (3,2 so với 2,3), từ chứng minh việc sử dụng kết hợp loại chất ĐHST BA NAA cho kết tốt so với sử dụng BA Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 30 Bảng Ảnh hưởng BA đến khả phát sinh chồi mai vàng in vitro Bảng Ảnh hưởng chất ĐHST BA kinetin đến khả tạo đa chồi mai vàng in vitro Nồng độ Nồng độ Số lượng Chiều cao BA (mg/l) NAA (mg/l) chồi chồi 0,5 0,5 1,6c 1,7c Đoạn b 0,5 2,4 2,1b thân 1,5 0,5 3,2a 2,4a d 0,5 0,5 1,1 1,3d Chồi c 0,5 1,6 1,6c b 1,5 0,5 2,3 1,8c CV (%) 8,9 4,9 LSD0,01 0,5 0,2 *Trong cột, giá trị trung bình có chữ theo sau khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê Nồng độ kinetin (mg/l) 2 4 Mẫu Bản thân mẫu búp chồi mang đỉnh sinh trưởng với nhiều nách chưa phát sinh, nhiên mẫu non nên cần thời gian lâu để phát sinh nhiều chồi Vì thời điểm tuần nuôi cấy, chồi đoạn thân phát sinh nhiều cao so với chồi phát sinh từ búp chồi 3.2 Nhân số lượng nuôi cấy chồi mai vàng in vitro Đối với nuôi cấy chồi in vitro, kinetin không dùng phổ biến BA, dù vậy, kết Bảng cho thấy nồng độ kinetin có ảnh hưởng đến chồi mai vàng, dùng kinetin kết hợp với BA, đạt hệ số nhân chồi cao so với sử dụng BA kết hợp NAA thí nghiệm khảo sát phát sinh chồi (3,9 so với 3,2 chồi/mẫu) A B CV (%) Lsd0,05 Nồng độ BA (mg/l) 4 Số lượng chồi 1,7d 2,1d 3,4ab 2,7c 3,3b 3,9a Chiều cao chồi (cm) 2,4a 2,1b 1,7c 1,8c 1,5d 1,2e Số lượng 2,8e 3,5cd 4,3ab 3,8bc 3,1de 4,6a 7,6 0,5 5,1 0,2 5,6 0,5 *Trong cột, giá trị trung bình có chữ theo sau khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê Tác động cytokinin nồng độ cao giúp kích thích chồi bên từ nách phát triển, từ tăng số lượng chồi mẫu Vai trò cytokinin trường hợp hạn chế ưu chồi bên phát triển[7] Do đó, tất chồi in vitro có khả tạo đa chồi kết hợp loại cytokinin kinetin BA với nồng độ tương đối cao (2 – 4mg/l) Số lượng chồi tăng tăng nồng độ cytokinin, nhiên mức nồng độ kinetin 4mg/l kết hợp với 4mg/l BA cho kết số lượng chồi mẫu chồi ban đầu khơng sai khác có ý nghĩa, riêng mẫu búp chồi có tượng tạo cụm chồi cứng gồm nhiều búp chồi Do chọn tổ hợp kinetin BA với nồng độ 2mg/l 4mg/l thích hợp để tạo đa chồi C D Hình Tái sinh chồi tạo đa chồi mai vàng in vitro (A, B) - Chồi in vitro phát sinh từ mẫu đoạn cành búp chồi môi trường MS bổ sung 1,5mg/l BA + 0,5mg/l NAA (C, D) - Tạo đa chồi từ mẫu chồi in vitro mẫu búp chồi môi trường MS bổ sung 2mg/l kinetin + 4mg/l BA Cây mai thân gỗ với đặc tính sinh trưởng phát triển chậm so với lồi thân thảo, nên chúng thường đòi hỏi nhu cầu khoáng thấp để tăng trưởng, điều thể qua việc nuôi cấy chồi mơi trường ½ MS WPW cho kết tốt so với MS (Bảng 3) Mặc dù WPM (Woody Plant Medium) môi trường chuyên dụng cho nuôi cấy mô thân gỗ, nghiên cứu tái sinh thành công nhiều loại thân gỗ khác nhau, trường hợp nuôi cấy chồi mai vàng, lượng chất khống thích hợp tương ứng với ½ MS WPM có nồng độ khống tương đương Đại học Nguyễn Tất Thành với khoảng ¼ MS, với lượng vitamin B1 cao gấp 10 lần, lí chồi môi trường WPM sinh trưởng tốt so với ¼ MS (Bảng 3) Bảng Khả sinh trưởng, phát triển chồi mai in vitro số mơi trường thay đổi nồng độ khống Mơi Chiều cao chồi Chiều cao chồi Số rễ hình trường tuần (cm) tuần (cm) thành 16 tuần MS 1,74bc 1,99cd 2,33e a a ½ MS 2,28 3,29 9,99b ¼ MS 1,69cd 2,34bc 3,11de Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 31 WPM 1,80b 2,52b 6,00c d b ½ WPM 1,62 2,37 4,22d d d ½ MS 1,63 1,82 17,33a than CV (%) 3,13 8,68 9,23 LSD0,01 0,139 0,369 1,18 *Trong cột, giá trị trung bình có chữ theo sau khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê 0,7b 1,84b 0,8b b a 0,5 0,7 2,14 5,8a a a 1,7 2,14 4,2a 1,5 1,22ab 1,88b 0,4b ab ab 1,25 0,2b CV (%) 5,73 8,97 59,17 LSD0,05 0,63 0,237 1,780 *Trong cột, giá trị trung bình có chữ theo sau khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê Ở giai đoạn 16 tuần, chồi mai vàng có hình thành phát triển rễ, đặc biệt mơi trường ½ MS bổ sung 2g/l than hoạt tính với số rễ trung bình hình thành 17 rễ, rễ khỏe, màu nâu trắng Các chất khống đóng vai trò quan trọng tạo rễ, đặc biệt thực vật thuộc nhóm thân gỗ cần nồng độ khoáng thấp để rễ Qua bước khảo sát này, chọn mơi trường ½ MS làm mơi trường cho thí nghiệm 3.3 Tạo mai vàng in vitro hoàn chỉnh Những đoạn chồi mai in vitro sau tách khỏi cụm chồi thường có kích thước khác chồi in vitro cần phải đạt chiều cao đủ tiêu chuẩn chuyển sang giai đoạn tạo hồn chỉnh, GA3 sử dụng để khảo sát kéo dài chồi in vitro Gibberellin phổ biến GA3 chất kích thích kéo dài lóng, đốt sinh trưởng cây, giúp phá vỡ trạng thái lùn di truyền cây[8] Khả kéo dài chồi GA3 thể rõ sau tuần ni cấy, tăng trưởng trung bình đạt từ 1,38 – 1,64cm/8 tuần, nhiên, số lượng đốt thân gần khơng thay đổi Có thể giải thích chế tác động gibberellin chủ yếu kích thích đặc trưng lên pha giãn tế bào theo chiều dọc không thúc đẩy phân chia tế bào auxin cytokinin Nhìn chung mai vàng in vitro, GA3 nồng độ 0,5 – 1mg/l có tác dụng kích thích kéo dài chồi, nồng độ cao (1,5 – 2mg/l), GA3 gây nên tượng vàng rụng Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng NAA (nồng độ 0,5 – 2mg/l) đến việc tạo rễ chồi mai mơi trường ½ MS sau tuần theo dõi ghi nhận NAA khơng có tác dụng kích thích hình thành rễ (khơng đưa liệu nghiên cứu này) Tuy nhiên, cần ni cấy mơi trường ½ MS có bổ sung thêm 2mg/l than hoạt tính, sau tuần ni cấy chồi mai in vitro tạo rễ với số lượng nhiều (Bảng 3) Điều cho thấy khả rễ chồi mai in vitro khơng hồn tồn phụ thuốc vào chất ĐHST, mà bị tác động nồng độ khoáng, tuổi chồi, điều kiện khác số lần cấy chuyền Bảng Khả kéo dài chồi mai vàng in vitro GA3 Nồng độ GA3 (mg/l) A Chiều cao chồi (cm) Sau Sau tuần tuần Số rễ Sau Sau tuần tuần B C D Hình Tạo mai vàng in vitro hoàn chỉnh (A)– Cụm chồi mai vàng in vitro - Chồi mai vàng in vitro (B)- Cây mai vàng hoàn chỉnh in vitro - Cây mai vàng ex vitro sau bầu tuần 3.4 Đưa in vitro bầu Đối với thân gỗ, cảm ứng tạo rễ khó, rễ tạo thành thường rễ giả, nghĩa rụng chuyển qua điều kiện ex vitro Do đó, ex vitro cần phải có giai đoạn chuyển tiếp để thích nghi với điều kiện độ ẩm, dinh dưỡng giả lập tương tự môi trường in vitro Việc đậy hũ nhựa suốt có lỗ thống khí lên mai giúp giữ độ ẩm cao cho vừa cho ánh sáng qua, thích hợp để bảo vệ ex vitro Bảng Tỉ lệ sống chồi mai vàng ex vitro số loại giá thể Thành phần giá thể Tỉ lệ Tỉ lệ sống Cát + đất + xơ dừa + trấu 35:35:15:15 66,7 Cát + đất + xơ dừa + trấu 30:50:10:10 77,8 Cát + đất + xơ dừa + trấu 50:30:10:10 44,4 100 33,3 50:50 44,4 Đất Cát + đất Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 32 Cát đất gây độ chặt cho giá thể, tưới nước lâu ngày dễ bị nén chặt xuống gây bí rễ Xơ dừa cám trấu có độ rời cao, tạo độ xốp, thống khí cho rễ, nhiên lại có khả giữ lại chất dinh dưỡng, cần phối hợp loại nguyên liệu Nghiên cứu cho thấy mai vàng ex vitro thích hợp với loại giá thể có độ thống trung bình, với thành phần giá thể cát + đất + xơ dừa + trấu có tỉ lệ 30:50:10:10 phù hợp để cây, đạt tỉ lệ sống 70% (Bảng 5) Kết luận Thiết lập qui trình vi nhân giống mai vàng đó: Mơi trường MS có bổ sung BA 1,5mg/l NAA 0,5mg/l thích hợp để tái sinh chồi mai in vitro từ mẫu ban đầu Nhân số lượng chồi mai mơi trường MS có bổ sung 2mg/l kinetin mg/l BA Sử dụng mơi trường ½ MS bổ sung 2mg/l than hoạt tính để tạo rễ cho chồi mai vàng in vitro Sử dụng GA3 với nồng độ 0,5 – 1mg/l mơi trường ½ MS để phát triển in vitro hoàn chỉnh Cây ex vitro tạo điều kiện thích nghi giá thể chứa cát, đất, xơ dừa, trấu với tỉ lệ 30:50:10:10 cho tỉ lệ sống cao nhất, đạt 78% Tài liệu tham khảo Việt Chương (2007), Kỹ thuật trồng mai, Nhà xuất Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Nhã Phan Minh Đạt (12/2017), Đánh giá đa dạng di truyền giống mai vàng (Ochna integerrima) thị RAPD, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn Ủy ban Nhân dân Thành phố Hồ Chí Minh (2016), Quyết định phê duyệt chương trình phát triển hoa kiểng địa bàn thành phố giai đoạn 2016 – 2020 Goel M K., V Malik, S Kumar and C M Govil (2008), In vitro Microproppagation in Ochna Serrulata Advances in Plant Sciences, 21(1) pp 19 – 21 Ma G , J Lu, J T Silva, X Zhang and J Zhao (2010), Shoot organogenesis and somatic embryo genesis from leaf and shoot explants of Ochna integerrima (Lour) Plant Cell Tiss Organ Cult, 104: pp 157 - 162 Mai Vũ Duy, Lâm Ngọc Phương (2012), Hiệu chất điều hòa sinh trưởng BA, NAA IBA tạo chồi rễ mai vàng (Ochna integerrima (Lour.)Merr.) in vitro Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 24a tr 70 – 77 Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thuỷ Tiên (2002), Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại Học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lí thực vật ứng dụng, Nhà xuất Giáo dục Process of the micropropagation of Ochna integerrima (Lour.)Merr Ho Thi Cam Nguyen1, Pham Ngoc Ha2, Nguyen Thi Nha1,* Faculty of Biotechnology and Environment, Nguyen Tat Thanh University Ton Duc Thang University * ntnha@ntt.edu.vn Abstract Ochna integerrima (Lour.) Merr is a popular ornamental plant which has high economic value in Viet Nam The process of in vitro propagation of Ochna integerrima (Lour.) Merr using stem segments and shoot buds was established with four steps On medium containing 1.5mg/l BA and 0.5mg/l NAA, shoots proliferated from stem segments have the best count and height of shoots Medium contain 2mg/l kinetin and 4mg/l BA was the most suitable for propagation of Ochna integerrima’s shoots (3.4 shoots/specimen) and found that clusters of shoot were created from shoot buds The best medium for growing and developing of shoots was ½ MS The concentration of 0.5 – 1mg/l GA3 should be added to the culture medium to extend the shoots Then ex vitro Ochna integerrima (Lour.) Merr were grown in a combination of soil, sand, coir and rice hush with the proportion of 30:50:10:10, achieving the survival rate of 70% Keywords Ochna integerrima, micropropagation, woody plant Đại học Nguyễn Tất Thành ... chỉnh (A)– Cụm chồi mai vàng in vitro - Chồi mai vàng in vitro (B)- Cây mai vàng hoàn chỉnh in vitro - Cây mai vàng ex vitro sau bầu tuần 3.4 Đưa in vitro bầu Đối với thân gỗ, cảm ứng tạo rễ khó,... chồi mai vàng in vitro GA3 Nồng độ GA3 (mg/l) A Chiều cao chồi (cm) Sau Sau tuần tuần Số rễ Sau Sau tuần tuần B C D Hình Tạo mai vàng in vitro hoàn chỉnh (A)– Cụm chồi mai vàng in vitro - Chồi mai. .. phù hợp để cây, đạt tỉ lệ sống 70% (Bảng 5) Kết luận Thiết lập qui trình vi nhân giống mai vàng đó: Mơi trường MS có bổ sung BA 1,5mg/l NAA 0,5mg/l thích hợp để tái sinh chồi mai in vitro từ mẫu