Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) là một loại dược liệu quý trong y học cổ truyền Việt Nam. Nghiên cứu được tiến hành nhằm xây dựng quy trình nhân giống cây Giảo cổ lam với mục đích bảo tồn và phát triển loài dược liệu quý này. Mẫu lá non và đốt thân cây giảo cổ lam in vitro được làm nguyên liệu cho các thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng đến sự nhân giống. Mẫu lá non được cắt và nuôi cấy trên môi trường MS (môi trường Murashige và Skoog) với TDZ (thidiazuron) từ 0,1 tới 1mg/L. Cụm chồi Giảo cổ lam được tạo thành cao nhất trên môi trường MS + TDZ 0,7 mg/L, với 74,67% mẫu cảm ứng với 12,89 chồi/mẫu sau 10 tuần nuôi cấy. Mẫu đốt thân được nuôi cấy trên môi trường MS với BA (6-benzyl adenine) từ 0,3 tới 1,5 mg/L và IBA (indole-3-butyric acid) 0,5 mg/L). Sau 6 tuần nuôi cấy trên môi trường MS + BA 1 mg/L + IBA 0,5 mg/L, 83,33% mẫu đoạn thân cảm ứng tạo cụm chồi với 7,39 chồi/mẫu. So sánh môi trường đốt thân với sự kết hợp BA (0,3-5 mg/L) và NAA (1-naphthaleneacetic acid) 0,2 mg/L sau 4 tuần nuôi cấy, hệ số nhân nhanh chồi tốt nhất đạt 3,67 lần trên môi trường MS + BA 1,5 mg/L + NAA 0,2 mg/L khi so với MS +BA 1,0 mg/L +IBA 0,5 mg/L. Môi trường thích hợp để cảm ứng tạo rễ là MS + 0,5 mg/L IBA với tỷ lệ chồi tạo rễ đạt 97,33%, số rễ trung bình đạt 5,29 rễ/chồi sau 4 tuần. Trên giá thể hữu cơ phối trộn 70% xơ dừa và 30% phân bò ủ hoai cho tỷ lệ cây sống cao đạt tới 91,33%, cây sinh trưởng và phát triển tốt trong giai đoạn vườn ươm.
84 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Study on in vitro propagation of Giao co lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) Trinh L D Ho∗ , Vi T T Nguyen, & Kim T A Phan Anh Dao Science Technology Agriculture Joint Stock Company, Ho Chi Minh City, Vietnam ARTICLE INFO ABSTRACT Giao co lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) is a traditional medicine plant and endangered species in Vietnam The research was carried out to establish the plant propagation for the purpose Received: March 17, 2018 of conserving and exploting this endangered medicinal herbs.The Revised: April 27, 2018 young leaf and nodes of Giao co lam in vitro were used as explants Accepted: May 15, 2018 in the study to evaluate the factors influencing the multiplication Young leaf explants were excised and cultured in MS medium with TDZ from 0.1 to mg/L After 10 weeks of culture, new shoots came out from their explants and the MS medium containing TDZ 0,7 mg/L gave the highest shoots (12.89 shoots/explant) with the Keywords average percentage of 74.67% When nodal explants were cultured on MS supplemented with BA at a concentration of 0.3 Gynostemma pentaphyllium Thunb to 1.5 mg/L and IBA 0.5 mg/L After weeks of culture, explants on MS medium supplemented with BA mg/L and IBA MS medium 0,5 mg/L gave the highest shoots (7.39 shoots/explant) and their Multishoots average percentage was 83.33% In comparison to the nodal exPropagation plant medium in combination with BA (0.5 to mg/L) and NAA 0.2 mg/L for weeks of culture, the best rapid shoot multiplication score was 3.67 times with MS + BA 1.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L as compared to MS + BA 1.0 mg/L + IBA 0.5 mg/L Suitable medium for rooting was MS + 0.5 mg/L IBA with root ∗ Corresponding author shoots at 97.33%, average roots at 5.29 roots/shoot after weeks On organic substrat, 70% coconut fiber and 30% composted cow Ho Le Diem Trinh manure gave the highest survival rate of 91.33% The plants grew Email: hoahuongduong03@gmail.com and developed well during the nursery stage Research Paper Cited as: Ho, T L D, Nguyen, V T T, & Phan, K T A (2018) Study on in vitro propagation of Giao co lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) The Journal of Agriculture and Development 17(5), 84-92 Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) www.jad.hcmuaf.edu.vn 85 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) Hồ Lê Diễm Trinh∗ , Nguyễn Thị Tường Vi & Phan Thị Á Kim Công Ty Cổ Phần Khoa Học Cơng Nghệ Nơng Nghiệp Anh Đào, TP Hồ Chí Minh THƠNG TIN BÀI BÁO TĨM TẮT Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) loại dược liệu quý y học cổ truyền Việt Nam Nghiên cứu tiến hành nhằm xây dựng quy trình nhân giống Giảo cổ lam với Ngày nhận: 17/03/2018 mục đích bảo tồn phát triển loài dược liệu quý Mẫu non Ngày chỉnh sửa: 27/04/2018 đốt thân giảo cổ lam in vitro làm nguyên liệu cho Ngày chấp nhận: 15/05/2018 thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng đến nhân giống Mẫu non cắt nuôi cấy môi trường MS (môi trường Murashige Skoog) với TDZ (thidiazuron) từ 0,1 tới 1mg/L Cụm chồi Giảo cổ lam tạo thành cao môi trường MS + TDZ 0,7 Từ khóa mg/L, với 74,67% mẫu cảm ứng với 12,89 chồi/mẫu sau 10 tuần nuôi cấy Mẫu đốt thân nuôi cấy môi trường MS với BA Cụm chồi (6-benzyl adenine) từ 0,3 tới 1,5 mg/L IBA (indole-3-butyric Giảo cổ lam acid) 0,5 mg/L) Sau tuần nuôi cấy môi trường MS + BA mg/L + IBA 0,5 mg/L, 83,33% mẫu đoạn thân cảm ứng tạo Môi trường MS cụm chồi với 7,39 chồi/mẫu So sánh môi trường đốt thân với Nhân chồi kết hợp BA (0,3-5 mg/L) NAA (1-naphthaleneacetic acid) 0,2 mg/L sau tuần nuôi cấy, hệ số nhân nhanh chồi tốt đạt 3,67 lần môi trường MS + BA 1,5 mg/L + NAA 0,2 mg/L so với MS +BA 1,0 mg/L +IBA 0,5 mg/L Mơi trường thích hợp để cảm ứng tạo rễ MS + 0,5 mg/L IBA với tỷ lệ chồi tạo ∗ Tác giả liên hệ rễ đạt 97,33%, số rễ trung bình đạt 5,29 rễ/chồi sau tuần Trên giá thể hữu phối trộn 70% xơ dừa 30% phân bò ủ hoai cho Hồ Lê Diễm Trinh tỷ lệ sống cao đạt tới 91,33%, sinh trưởng phát triển Email: hoahuongduong03@gmail.com tốt giai đoạn vườn ươm Bài báo khoa học Đặt Vấn Đề Cùng với phát triển ngày cao xã hội, xu hướng sử dụng dược liệu có nguồn gốc tự nhiên ngày ưu tiên Nhiều dược liệu có nguồn gốc từ thực vật sử dụng rộng rãi nguồn cung cấp loại thuốc chữa bệnh thực phẩm chức cho đại đa số người dân giới (Pradhan & ctv., 2015) Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) lồi dược liệu có giá trị phù hợp với nhiều tiểu vùng khí hậu nước đặc biệt Quảng Nam Trong thân Giảo cổ lam chứa 100 loại saponin, nhiều flavonoid thành phần hóa học khác amino acid, vitamin nguyên tố vi lượng Zn, Fe, Se, Giảo cổ lam tiếng với khả kháng oxy www.jad.hcmuaf.edu.vn hóa, giúp thể tăng khả chống lại stress, làm lành vết thương, tăng cường sức khỏe, làm tan huyết khối, giúp ổn định huyết áp, phòng chống tai biến tim, mạch, não, (Mishra & Joshi, 2011; Vo, 2012) Theo kết điều tra cho thấy, vùng núi Quảng Nam, Giảo cổ lam mọc tự nhiên với diện tích khoảng 20 ha, phổ biến khu vực rừng nguyên sinh xã Trà Linh, Trà Cang Trà Nam (huyện Nam Trà My), nơi có độ che phủ từ 50% trở lên, hầu hết độ cao từ 1000 m trở lên so với mặt nước biển Hiện nay, Giảo cổ lam chủ yếu nhân giống hạt giâm cành, hệ số nhân giống không cao, chất lượng giống khơng đồng Để có lượng giống lớn, đồng hình thái ổn định mặt di truyền phục vụ cho sản xuất cần áp dụng cơng nghệ sinh học, đặc biệt nhân Tạp chí Nông nghiệp Phát triển 17(5) 86 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh giống in vitro Nghiên cứu thực nhằm thiết lập quy trình nhân giống in vitro Giảo cổ lam lá, khâu vào mẫu, nhân giống huấn luyện vườn ươm để thu giống in vitro có chất lượng tốt 2.5 Tạo rễ in vitro Vật Liệu Phương Pháp Nghiên Cứu 2.6 Huấn luyện vườn ươm 2.1 Vật liệu nghiên cứu Sau 30 ngày nuôi cấy môi trường cảm ứng tạo rễ, hoàn chỉnh chuyển giá thể khác Một số nghiên cứu cho thấy, in vitro thích nghi giá thể xơ dừa giai đoạn vườn ươm (Tran & ctv., 2009) nên khảo sát giá thể với thành phần xơ dừa có bổ sung thêm số thành phần hữu khác Cụ thể: 1/ xơ dừa: cát (7:3), 2/ xơ dừa: đất (7: 3), 3/ xơ dừa: trấu (7:3), 4/ xơ dừa: phân bò hoai (7:3) để khảo sát khả thích nghi điều kiện vườn ươm Cây đặt nhà lưới, che phủ nylon lưới đen có khả cản ánh sáng 70% Tưới nước giữ ẩm lần/ngày Cây Giảo cổ lam sinh trưởng tốt thu thập vùng núi xã Trà Nam, huyện Nam Trà My, tỉnh Quảng Nam từ độ cao 1.000 m trở lên so với mặt nước biển 2.2 Phương pháp khử trùng Chồi in vitro sau giai đoạn nhân nhanh có chiều cao 4,5-5,0 cm, xanh, sinh trưởng phát triển bình thường chuyển sang mơi trường MS có bổ sung IBA (0-1,5 mg/L) để cảm ứng tạo rễ Đoạn thân (1,0 - 1,5 cm) bánh tẻ mang chồi ngủ rửa xà phịng 5%, sau rửa lại vòi nước chảy 10 phút Khử trùng sơ cồn 70% 30 giây, rửa lại nước cất vô trùng lần Mẫu tiếp tục lắc với javel nồng độ 20% 10 phút, sau rửa lại nước cất vơ trùng - lần Cắt mẫu sau 2.7 Phương pháp bố trí thí nghiệm xử lý số liệu khử trùng thành đoạn mang chồi ngủ cấy môi trường MS (Murashige & Skoog, Các thí nghiệm bố trí cơng thức lập 1962) bổ sung saccharose 30 g/L agar g/L để tạo chồi in vitro làm nguyên liệu cho thí lại lần, lần 50 mẫu Các tiêu theo dõi quan sát đo đếm sau 10 tuần tương nghiệm ứng với thí nghiệm tạo cụm chồi từ đoạn 2.3 Tái sinh chồi từ mẫu đoạn thân thân, tuần với thí nghiệm nhân nhanh rễ Số liệu phân tích thống kê phần Mẫu non in vitro tuần tuổi cắt mềm Statgraphics centurion 16.1 cho Windows đặt lên mơi trường MS có bổ sung TDZ với Các số trung bình cột với ký tự khác nồng độ khác (0,1-1,0 mg/L) Đoạn thân biệt có ý nghĩa mức P < 0,05 có chứa mắt từ chồi Giảo cổ lam in vitro cắt đặt lên môi trường MS có bổ sung BA với 2.8 Điều kiện ni cấy nồng độ khác (0,3-1,5 mg/L) kết hợp Thí nghiệm thực Phịng thí với IBA 0,5 mg/L để thăm dò khả tái sinh nghiệm Công ty Cổ phần Khoa học Công chồi nghệ Nông nghiệp Anh Đào Thời gian chiếu sáng 2.4 Nhân nhanh chồi 16 h/ngày, nhiệt độ 25 ➧ 20 C, cường độ chiếu sáng 2000 - 2500 Lux Môi trường nuôi cấy Cụm chồi tái sinh từ đoạn thân có chiều điều chỉnh pH 5,8 trước hấp khử trùng cao từ 0,3 - 0,5 cm, chồi sinh trưởng phát triển 1210 C, 1,1 atm 20 phút bình thường chuyển sang mơi trường nhân nhanh MS có bổ sung BA (0,5-3 mg/L) kết hợp với NAA 0,2 mg/L để thăm dò khả nhân chồi Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) www.jad.hcmuaf.edu.vn Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 87 tạo nên cân phá vỡ trạng thái ngủ chồi Đồng thời cytokinin phối hợp 3.1 Ảnh hưởng TDZ đến khả phát với auxin nồng độ thấp giúp cho tăng trưởng chồi non khởi phát tạo mô phân sinh sinh chồi từ mẫu chồi từ nhu mô Nghiên cứu Jalaa & Sau 10 tuần nuôi cấy, môi trường MS bổ Patchpoonporna (2012) cho kết tương sung TDZ nồng độ khác (0,1-1 mg/L), tự với số chồi/mẫu cao 6,8 chồi sử kết cho thấy TDZ ảnh hưởng rõ rệt đến dụng chồi chồi bên Giảo cổ lam ni cấy khả phát sinh hình thái tái sinh chồi môi trường MS kết hợp với BA 1mg/L từ mẫu non Giảo cổ lam (Bảng 1) Ở nồng độ NAA 0,1 mg/L thấp, mẫu cảm ứng tạo rễ (0,1 mg/L) sẹo (0,3 mg/L) Với nồng độ 0,7 mg/L TDZ, số mẫu cảm 3.3 Ảnh hưởng BA NAA tới khả nhân nhanh chồi ứng tạo chồi đạt 74,67% số lượng chồi mẫu đạt tương đối cao với 12,89 chồi/mẫu, Trong trình nhân giống in vitro, phối chồi có màu xanh đậm Khi tăng nồng độ TDZ lên đến 1,0 mg/L, số chồi/mẫu giảm xuống đáng hợp auxin cytokinin với nồng độ tỷ lệ kể, đồng thời mẫu có tượng chuyển sang màu thích hợp có tác động đáng kể tới hình thành nâu Trên mơi trường khơng bổ sung TDZ, mẫu bị chồi chất lượng chồi Bổ sung BA với nồng độ vàng, hóa nâu chết lụi Kết phù hợp từ 0,5-3,0 mg/L kết hợp với NAA 0,2 mg/L vào với nhận định Duong (2011) cho môi trường nuôi cấy cải thiện hệ số nhân chồi TDZ chất có hoạt tính cytokinin có Giảo cổ lam từ 2,12-3,93 lần sau tuần ni cấy, hoạt tính auxin nên bổ sung vào môi trường cao công thức đối chứng (1,17 lần) Hệ số nuôi cấy nồng độ cao, thường ức chế tái sinh nhân chồi tăng dần tăng nồng độ BA từ 0,5dẫn đến tượng mẫu chuyển sang màu nâu 2,0 mg/L Tuy nhiên, tăng nồng độ BA lên đen chết Bên cạnh đó, có mặt TDZ 3,0 mg/L, tác nhân ức chế khả nhân môi trường, nồng độ thấp vừa phải, chồi, tiêu hệ số nhân chồi, chiều cao thúc đẩy khả sinh tổng hợp cytokinin chồi chất lượng chồi giảm Hệ số nhân chồi nội sinh mô thực vật (Nguyễn Thị Liễu & ctv., đạt cao 3,93 lần bổ sung mg/L 2010) Nghiên cứu Lyyra (2006) kết luận BA vào môi trường nuôi cấy, nhiên hình mơi trường MS bổ sung TDZ 0,1 mg/L cho hiệu thái chiều cao chất lượng chồi so tái sinh chồi Liễu trắng (Salix nigra) cao với chồi nuôi môi trường chứa 1,5 mg/L Trong với đối tượng Thu hải đường (Bego- BA (Bảng 3) nia tuberous) tỷ lệ tái sinh chồi đạt 83,33% Như vậy, 1,5 mg/L lựa chọn nồng độ môi trường MS 1/2 có bổ sung TDZ 0,2 mg/L BA tốt để nhân chồi Giảo cổ lam Bui & (Duong & ctv., 2009) Trong phạm vi nghiên cứu ctv (2015) sử dụng môi trường MS bổ sung này, nồng độ TDZ 0,7 mg/L cho hiệu tái sinh Kinetin 0,4 mg/L BA 0,5 mg/L thu cụm chồi tốt từ mẫu non Giảo cổ lam hệ số nhân chồi đạt 4,36 lần sau 30 ngày nuôi cấy với vật liệu chồi đơn in vitro tái sinh từ mẫu 3.2 Ảnh hưởng BA IBA tới khả cấy ban đầu Trong kết nghiên cứu tái sinh chồi từ đoạn thân cho thấy từ mẫu cấy ban đầu tạo khoảng 24-35 chồi sau 42 ngày nuôi cấy cảm ứng Sau tuần nuôi cấy, kết cho thấy tất tạo cụm chồi 30 ngày nhân nhanh cơng thức thí nghiệm, tỷ lệ mẫu tạo chồi tương đối cao từ 73,33-86,67% (Bảng 2) Tuy 3.4 Ảnh hưởng IBA lên khả tạo rễ nhiên, số chồi/mẫu có khác rõ rệt in vitro nghiệm thức Trong đó, nồng độ BA 1mg/L kết hợp với IBA 0,5 mg/L, cho tỷ lệ mẫu tạo chồi Để tạo rễ cho in vitro cần sử dụng auxin cao (83,33%) số lượng chồi mẫu đạt IBA bổ sung vào môi trường nuôi cấy Sau tuần lớn (7,39) Kết phù hợp với nhận nuôi cấy, ghi nhận mơi trường có khơng định Bui (2000) cho phát sinh bổ sung IBA, chồi có khả tạo rễ, điều phát triển chồi chịu tác động cân chứng tỏ lượng auxin nội sinh Giảo cổ chất điều hòa sinh trưởng auxin cytokinin Sự lam in vitro mức cao Tuy nhiên, bổ sung IBA kết hợp hai nhóm chất điều hịa sinh trưởng vào mơi trường nuôi cấy làm tăng số rễ/cây Kết Quả Thảo Luận www.jad.hcmuaf.edu.vn Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) Trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh 88 ➧ 3,06c Tỷ lệ mẫu bật chồi (%) 73,33 ➧ 1,15d 76,00 ➧ 2,00cd 3,86 ➧ 0,35b 80,00 ➧ 3,46bc 7,39 ➧ 0,43a 86,67 ➧ 3,06a 6,92 ➧ 2,36b ➧ 0,41a Số chồi/mẫu 1,14 ➧ 0,06d 2,18 ➧ 0,29c 4,29 Hình thái mẫu Chồi to, to, xanh đậm Chồi to, vàng, phần gốc hình thành sẹo Cụm chồi với nhiều chồi nhỏ, xếp, trắng xanh Cụm chồi với nhiều chồi trung bình, xếp, trắng xanh Cụm chồi với nhiều chồi to, to, xanh Cụm chồi với nhiều chồi to, vàng Bảng Ảnh hưởng BA IBA lên khả tái sinh cụm chồi từ đoạn thân Giảo cổ lam 78,67 ➧1,15ab IBA (mg/L) 0,0 0,5 83,33 Các chữ khác cột biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa mức ý nghĩa P = 0,05 BA (mg/L) 0,0 0,3 0,5 0,7 1,0 1,5 a-d Số chồi/mẫu cấy 0,00 ➧ 0,00f 1,56 ➧ 0,08e 7,52 ➧ 0,35d 11,57 ➧ 0,75b 12,89 ➧ 0,31a 8,51 ➧ 0,40c Hình thái mẫu Chuyển vàng, hóa nâu Hình thành rễ cuống Sẹo rắn, cụm chồi nhỏ gân Cụm chồi nhỏ gân mép Cụm chồi với nhiều chồi nhỏ Cụm chồi nhỏ, phần hóa nâu Bảng Ảnh hưởng TDZ lên khả tái sinh cụm chồi từ non Giảo cổ lam Tỷ lệ mẫu bật chồi (%) 0,00 ➧ 0,00e 23,33 ➧ 2,31d 39,33 ➧ 3,06c 68,00 ➧ 2,00b 74,67 ➧ 3,06a 66,67 ➧ 4,16b Các chữ khác cột biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa mức ý nghĩa P = 0,05 TDZ (mg/L) 0,1 0,3 0,5 0,7 1,0 a-f www.jad.hcmuaf.edu.vn Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) www.jad.hcmuaf.edu.vn a-e 0,2 NAA (mg/L) 0,0 Hệ số nhân chồi (lần) 1,17 ➧ 0,08e 2,12 ➧ 0,13d 3,18 ➧ 0,02c 3,67 ➧ 0,11a 3,93 ➧ 0,20a 2,75 ➧ 0,51c Chiều cao chồi (cm) 2,50 ➧ 0,26d 3,65 ➧ 0,22c 4,72 ➧ 0,40ab 5,32 ➧ 0,35a 4,98 ➧ 0,50a 4,29 ➧ 0,35b Chất lượng chồi Chồi nhỏ, vàng Chồi trung bình, xanh nhạt Chồi to, khỏe, xanh Chồi to, khỏe, xanh Chồi trung bình, xanh, gân vàng Chồi nhỏ, cong, vàng nhạt Tỷ lệ mẫu tạo rễ (%) 83,33 ➧ 4,16d 92,67 ➧ 2,31bc 97,33 ➧ 1,15a 96,67 ➧ 1,15a 96,00 ➧ 1,00ab 90,67 ➧ 1,15c Số rễ/chồi 1,76 ➧ 0,33d 3,26 ➧ 0,27c 5,29 ➧ 0,41a 4,71 ➧ 0,38b 3,49 ➧ 0,29c 2,17 ➧ 0,03d Chiều dài rễ (cm) 1,61 ➧ 0,19d 3,12 ➧ 0,16c 4,33 ➧ 0,24a 3,86 ➧ 0,22b 2,78 ➧ 0,17c 1,76 ➧ 0,15d Các chữ khác cột biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa mức ý nghĩa P = 0,05 a-d IBA (mg/L) 0,0 0,3 0,5 0,7 1,0 1,5 Bảng Ảnh hưởng IBA đến khả rễ Giảo cổ lam Các chữ khác cột biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa mức ý nghĩa P = 0,05 BA (mg/L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 Bảng Ảnh hưởng BA NAA đến khả nhân chồi giảo cổ lam Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 89 Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) 90 đất cát tro trấu phân bò hoai Tỷ lệ sống (%) 86,67 ➧ 0,11b 74,67 ➧ 0,06c 72,00 ➧ 0,31c 91,33 ➧ 0,29a Chiều cao (cm) 7,97 ➧ 0,04b 7,09 ➧ 0,10a 7,38 ➧ 0,05b 9,5 ➧ 0,02a cao, mập, phát triển, phiến to, màu xanh đậm phát triển trung bình, phiến to, màu xanh đậm phát triển kém, phiến nhỏ,màu xanh nhạt cao, mập, phát triển, phiến to, màu xanh đậm Nhận xét Cây Cây Cây Cây Bảng Ảnh hưởng giá thể lên khả sống sinh trưởng in vitro Giá thể : : : : Nguồn vật liệu đưa vào nuôi cấy khác cho tỷ lệ tái sinh chồi Giảo cổ lam khác Đối với mẫu lá: Môi trường MS kết hợp với TDZ nồng độ 0,7 mg/L thích hợp cho tái sinh cụm chồi Môi trường cho tỷ lệ mẫu cảm ứng tạo cụm chồi đạt 74,67% 12,89 chồi/mẫu sau 10 tuần nuôi cấy Đối với mẫu đoạn thân: môi trường MS kết hợp với BA mg/L IBA 0,5 mg/L cho tỷ lệ mẫu cảm ứng cụm chồi đạt 83,33% đạt 7,39 chồi/mẫu sau tuần nuôi cấy dừa dừa dừa dừa Kết Luận Các chữ khác cột biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa mức ý nghĩa P = 0,05 Sau cảm ứng tạo rễ để tạo hoàn chỉnh, chuyển in vitro vườn ươm theo dõi vòng tuần Kết (Bảng 5) cho thấy, khả thích nghi nuôi cấy mô đưa vườn ươm tương đối cao, tỷ lệ sống sót đạt từ 72-91,33% tùy thuộc vào loại giá thể Trong đó, giá thể xơ dừa: phân bò hoai (7:3) cho tỷ lệ sống cao 91,33% chiều cao đạt 9,5 cm Về hình thái cứng cáp, phát triển tốt, phiến to, màu xanh đậm, rễ khỏe hình thành nhiều rễ Giá thể xơ dừa nhẹ, thoát nước tốt giúp hệ rễ phát triển mạnh, kết hợp với phân chuồng hoai cung cấp dinh dưỡng cho cây, giá thể thích hợp số loại giá thể đưa dùng để ươm vườn ươm (Hình 1) Xơ Xơ Xơ Xơ 3.5 Ảnh hưởng loại giá thể lên tỷ lệ sống in vitro a-c chiều dài trung bình rễ, đặc biệt cơng thức bổ sung IBA 0,5 mg/L cho tỷ lệ mẫu tạo rễ đạt 97,33% số rễ/chồi đạt cao tới 5,29, chiều dài rễ đạt tới 4,33 cm (Bảng 4) Như vậy, môi trường nuôi cấy chồi Giảo cổ lam có bổ sung IBA 0,5 mg/L cho tỷ lệ rễ cao nhất, xuất nhiều rễ phụ Thực vậy, việc bổ sung auxin IBA vào mơi trường ni cấy nhiều lồi thực vật dẫn đến cảm ứng tạo rễ bất định (Ludwig-Muller, 2000) Cũng theo Bui (2000), auxin hình thành rễ bất định tác động vào hai giai đoạn thành lập rễ sơ khởi kéo dài Ở giai đoạn đầu cần auxin nồng độ cao để tạo rễ sơ khởi giai đoạn sau cần auxin nồng độ thấp để kéo dài rễ Do đó, IBA nồng độ thấp (≤ 1,0 mg/L) thường sử dụng môi trường tạo rễ in vitro giai đoạn tạo hoàn chỉnh Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Mơi trường thích hợp cho nhân nhanh chồi in vitro MS kết hợp với BA 1,5 mg/L NAA 0,2 Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) www.jad.hcmuaf.edu.vn Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh 91 Hình a) Chồi GCL tái sinh từ đoạn thân b) Cụm chồi tái sinh từ môi trường MS + TDZ 0,7 mg/L c) cụm chồi tái sinh từ đoạn thân môi trường MS + BA mg/L + IBA 0,5 mg/L d, e) nhân nhanh chồi Giảo cổ lam môi trường MS + BA 1,5 mg/L + NAA 0,2 mg/L f, g) tạo hoàn chỉnh môi trường MS + IBA 0,5 mg/L h) thích nghi vườn ươm giá thể xơ dừa (70%): phân bị hoai (30%) mg/L Trên mơi trường sau tuần nuôi cấy hệ số nhân đạt 3,67 lần, chiều cao chồi đạt 5,32 cm cho hình thái chồi mập, cuống to xanh đậm Chồi in vitro cảm ứng tạo rễ tốt môi trường MS kết hợp với IBA 0,5 mg/L Ở môi trường này, sau tuần nuôi cấy, tỷ lệ rễ đạt 97,33%, số rễ/chồi 5,29 chiều dài rễ đạt 4,33 cm Giá thể xơ dừa: phân bò với tỷ lệ 7:3 cho tỷ lệ sống vườn ươm cao nhất, sau tuần theo dõi, đạt 91,33% với chiều cao trung bình 9,5 cm Tài Liệu Tham Khảo (References) Bui, L D., Nguyen, T T., Nguyen, D V., Nguyen, B V., La, H V., & Ngo, B X (2015) Study on the ability of propagation of Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) in vitro Journal of Agriculture and Rural Development 11, 249-256 Bui, V T (2000) Plant physiology In: General plant physiology II University of Science, Ho Chi Minh City, Vietnam Duong, N T (2011) Plant biotechnology: basic and applied research Ho Chi Minh City, Vietnam: HCMC Agricultural Publishing House Duong, N T., Nguyen, H T., & Mai, P X (2009) A highly efficient protocol for Micropropagation of Be- www.jad.hcmuaf.edu.vn gonia tuberous Protocols for In Vitro Propagation of Ornamental Plants 589, 15-20 Jalaa, A., & Patchpoonporna, W (2012) Effect of BA NAA and 2,4-D on Micropropagation of Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum Makino) International Transaction Journal of Engineering, Management, & Applied Sciences & Technologies 3(4), 363-370 Ludwig-Muller, J (2000) Indole-3-butyric acid in plant growth and development Journal of Plant Growth Regulation 32(2-3), 219-230 Lyyra, S (2006) In vitro regeneration of Salix nigra from adventitious shoots Tree Physiology 26(7), 969-975 Mishra, R N., & Joshi, D (2011) Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum): The Chinese RasayanCurrent Research Scenario International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical sciences 2(4), 14831502 Murashige, T., & Skoog, F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures Plant Physiology 15(3), 473-497 Nguyen, L T., Nguyen, T T., & Nguyen, K V (2010) The adventitious root induce of Ngoc Linh ginseng (Panax vietnamesis, Ha et Grushv.) in vitro cultures VNU Journal of Science, Natural Sciences and Technology 27, 30-36 Pradhan, N., Gavalli, J., & Waghmare, N (2015) WHO guidelines for standardization of herbal drugs International Ajurvedic Medicinal Journal 3(8), 2238-2243 Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) 92 Tran, B T., Bui, T V., & Tran, L N (2009) Effects of different substrates, varieties, nutrient solutions on growth and yield of hydroponic lettuce, winter-spring 2007-2008 Can Tho University Journal of Science 11, 339-346 Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Vo, C V (2012) Vietnamese herbal medicine Ha Noi, Vietnam: Medical Publishing House www.jad.hcmuaf.edu.vn ... Chí Minh THƠNG TIN BÀI BÁO TĨM TẮT Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) loại dược liệu quý y học cổ truyền Việt Nam Nghiên cứu tiến hành nhằm xây dựng quy trình nhân giống Giảo cổ lam. .. Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllium Thunb.) Hồ Lê Diễm Trinh∗ , Nguyễn Thị Tường Vi & Phan Thị Á Kim Công Ty Cổ Phần Khoa Học Công... nghệ sinh học, đặc biệt nhân Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển 17(5) 86 Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh giống in vitro Nghiên cứu thực nhằm thiết lập quy trình nhân giống in vitro Giảo cổ lam