NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG in vitro TỪ LÁ CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (Polygonum multiflorum Thunb)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG in vitro TỪ LÁ CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (Polygonum multiflorum Thunb) Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: PHẠM MINH TÂM Niên khóa: 2008 – 2012 Tháng 07 năm 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG in vitro TỪ LÁ CÂY HÀ THỦ Ô ĐỎ (Polygonum multiflorum Thunb) Hƣớng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS TRỊNH THỊ THANH HUYỀN PHẠM MINH TÂM Tháng 07 năm 2012 LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô môn Công nghệ sinh học trường đại học Nông Lâm, người truyền đạt cho em kiến thức quý báu suốt bốn năm ngồi giảng đường Đại Học tạo nhiều điều kiện học tập cho em Em xin chân thành cảm ơn ThS Trịnh Thị Thanh Huyền hướng dẫn tạo điều kiện cho em thực tập hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp em biết ơn anh Ngơ Quang Hưởng, chị Phí Thị Thu Hiền, Ngơ Ngọc Tú, tồn thể nhân viên trung tâm bạn thực tập trung tâm Em chân thành cám ơn tất bạn lớp Cơng Nghệ Sinh Học khố 34 giúp đỡ em nhiều qua trình học tập thời gian làm đề tài tốt nghiệp Em chân thành cảm ơn thầy Lê Đình Đơn, thầy Nguyễn Tiến Thắng truyền cảm hứng nhiệt huyết cho em theo đuổi đường công nghệ sinh học Con xin chân thành gia đình tạo điều kiện giúp đỡ, ln động viên ủng hộ hồn thành tốt công việc học tập Tháng năm 2012 Phạm Minh Tâm i TĨM TẮT Hà thủ đỏ (Polygonum multiflorum Thunb) thảo dược quý chứa thành phần: emodin, chrysophanol, rhein, physcion, protid, tinh bột, lipid, lecitin, rhaponticin (rhapontin, ponticin) 2,3,5,4 tetrahydroxytibene -2-O-b-D-glucoside, Tanin…là loại thuốc truyền thống Việt Nam, Trung Quốc Nhân giống hà thủ ô đỏ in vitro tạo số lượng lớn thời gian ngắn giúp đáp ứng cho nhu cầu trồng trọt mục đích sử dụng khác Nội dung nghiên cứu bao gồm tái sinh chồi từ tạo hoàn chỉnh để ni trồng ngồi vườn ươm Lá hà thủ ô đỏ cấy vào môi trường MS bổ sung alphanaphthaleneacetic acid (NAA), andbenzyladenine (BA) thidiazuron (TDZ) 2,4dichlorophenoxyacetic acid (2,4D) 93% mẫu cho cảm ứng môi trường chứa 0,75 mg/l TDZ, 2,0 mg/l BA 0,5 mg/l 2,4D tạo mơ sẹo nặng trung bình 0,419 g Sau mơ sẹo cấy chuyền sang môi trường MS chứa 4mg/l BA and 1.5mg/l Kinitin để tạo chồi với trung bình 3,933 chồi tái sinh mẫu Chồi nhân cụm chồi môi trường MS bổ sung mg/l 6-benzylaminopurine (BAP), 0,25 mg/l NAA với trung bình 7,44 chồi cụm chồi tạo rễ môi trường MS bổ sung 0,5 mg/l NAA Cuối cùng, hoàn chỉnh trồng vườn ươm giá thể chứa 50% xơ dừa 50 % tro trấu cho tỷ lệ sống 57%, chiều cao trung bình đạt 5.27 cm số trung binh 4,41 mổi ii SUMMARY The title of thesis “Regenerate shoots form leaf Polygonum multiflorum Thunb.” Polygonum multiflorum Thunb is valuable herb containing components: emodin, chrysophanol, rhein, physcion, proteins, starch, lipid, lecitin, rhaponticin (rhapontin, ponticin) 2,3,5,4 tetrahydroxytibene -2-O-b-D-glucoside, Tanin…It is also known as tradition medicine of China and VietNam Micropropagation of Polygonum multiflorum Thunb in vitro produce large amounts of plants in a short time to respond cultivation and other purposes Contents of the study include shoot regeneration form leaf and the creation of whole trees for growing in nursery Leaf of Polygonum multiflorum Thunb were grown in vitro on Murashige and Skoog's (MS) basal medium containing different concentrations of alpha- naphthaleneacetic acid (NAA), andbenzyladenine (BA), thidiazuron (TDZ), 2,4dichlorophenoxyacetic acid (2,4D) The leaf explants (93%) produced callus (0,419g) on MS basal medium supplemented with 0,75 mg/l TDZ, 2.0 mg/l BA and 2,4D 0,5mg/l Therefor, the callus regenerated shoots on MS supplemented BA 4mg/l and Kinitin 1.5mg/l After four weeks, multiple shoots developed from the calli culture with average of 3,93 shoots per sample.The single shoots were propagated on MS supplemented mg/l 6-benzylaminopurine (BAP), 0,25 mg/l NAA with average of 7,44 shoots per sample and rooted on MS supplemented with 0,5 mg/l NAA Finally, whole trees were grown in greenhouses on substrates (containing 50% coconut fiber and 50% rice husk ash) with 57% survive, average height of 5.27 cm and 4.41 is the average number of leaves on each plant Key words: Polygonum multiflorum Thunb, in vitro, micropropagation… iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH CÁC BẢNG vii DANH SÁCH CÁC HÌNH viii Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chƣơng TỔNG QUAN 2.1Giới thiệu chung hà thủ ô đỏ 2.1.1Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Phân bố 2.1.4 Tác dụng dược lý 2.2Khái niệm nuôi cấy mô tế bào 2.2.2 Sự tạo mẫu cấy in vitro vô trùng 2.2.2 Sự tăng sinh tế bào có định hướng tái sinh hoàn chỉnh 2.2.3 Ni trồng ngồi vườn ươm 2.2.4 Auxin Cytokinin 2.2.4.1 Auxin 2.2.4.2Cytokinin 2.2.5 Môi trường dinh dưỡng nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.5.1 Các chất khoáng 2.2.5.2 Nguồn Carbon (C) 2.2.5.3 Các vitamin 2.2.5.4 Các điều kiện vật lý nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.6 Những vấn đề nuôi cấy mô 10 iv 2.2.6.1 Sự tạp nhiễm 10 2.2.6.2 Tính bất định mặt di truyền 10 2.2.6.3 Sự phát sinh chất độc q trình ni cấy 11 2.2.6.4 Hiện tượng thủy tinh thể 11 2.3 Sự tạo sẹo từ mẫu tái sinh chồi từ sẹo 12 2.3.1 Cấu tạo 12 2.3.2 Khái niệm mô sẹo 12 2.3.3 Sự phát sinh chồi từ mô sẹo 12 2.4 Các cơng trình nghiên cứu liên quan 13 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 14 3.1 Thời gian địa điểm 14 3.2 Vật liệu 14 3.2.1 Trang thiết bị dụng cụ 14 3.2.2 Dung dịch khử trùng mẫu môi trường cấy 14 3.3 Nội dung nghiên cứu 14 3.4 Phương pháp 15 3.4.1 Quy trình khử trùng mẫu 15 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Cytokinin Auxin lên tạo mô sẹo 16 3.4.3 Tái sinh chồi từ mô sẹo 17 3.4.4 Sự nhân cụm chồi 17 3.4.5 Sự tạo rễ 18 3.4.6 Ni trồng ngồi vườn ươm 18 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20 4.1 Thời gian nồng độ javel thích hợp để khử trùng mẫu cấy 20 4.2 Sự tạo mô sẹo 20 4.3 Sự tái sinh chồi từ sẹo 22 4.4 Sự nhân cụm chồi 24 4.5 Sự tạo rễ 26 4.6 Ni trồng ngồi vườn ươm 27 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BA:N6 – benzyladenine BAP:6-Benzylaminopurine ĐC: đối chứng MS:môi trường Murashige and Skoog (1962) NAA:α – napthylacetic acid TDZ:Thidiazuron ( N-phenyl-N-1,2,3-thiadiazol-5-ylurea) NT: Nghiệm thức 2,4D: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid vi DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng nồng độ thời gian khử trùng javel đến tỷ lệ sống mẫu hà thủ ô đỏ 15 Bảng 3.2 Nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng cytokinin auxin lên khả tạo mô sẹo từ mẫu hà thủ ô 16 Bảng 3.3 Nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng BA Kinitin lên khả tạo mô sẹo từ mẫu hà thủ ô 17 Bảng 3.4 Nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng BAP NAA lên khả tạo mô sẹo từ mẫu hà thủ ô 18 Bảng 3.5 Nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng NAA lên tạo rễ 18 Bảng 3.6 Nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng giá thể lên sinh trưởng phát triển hà thủ ô đỏ 19 Bảng 4.1 Kết khử trùng 20 Bảng 4.2 Tỷ lệ phát sinh mô sẹo khối lượng mô sẹo sau 40 ngày 21 Bảng 4.3 Kết tái sinh chồi từ mô sẹo sau 30 ngày nuôi cấy 23 Bảng 4.4 Kết nhân cụm chồi sau 25 ngày nuôi cấy 25 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng NAA lên tạo rễ sau 30 ngày nuôi cấy 26 Bảng 4.6 Kết khảo sát sinh trưởng loại giá thể sau 15 ngày 27 vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Hà thủ ô đỏ Hình 2.2 Mô tả ảnh hưởng cytokinin auxin lên tế bào thực vật nuôi cấy Mauseth Hình 2.3 Cấu tạo 12 Hình 3.1 Quy trình khử trùng 15 Hình 4.1 Mơ sẹo sau 50 ngày ni cấy môi trường N19 22 Hình 4.2 Mơ sẹo sau 50 ngày ni cấy mơi trường N13 22 Hình 4.3 Mô sẹo cảm ứng tái sinh chồi sau 10 ngày mơi trường K6 23 Hình 4.4 Mơ sẹo cảm ứng tái sinh chồi sau 10 ngày môi trường K4 23 Hình 4.5 Mơ sẹo sau 30 ngày nuôi cấy môi trường K2 24 Hình 4.6 Mơ sẹo sau 30 ngày nuôi cấy môi trường K5 24 Hình 4.7 Mơ sẹo sau 30 ngày nuôi cấy môi trường K6 24 Hình 4.8 Mơ sẹo sau 30 ngày nuôi cấy môi trường K3 24 Hình 4.9 Chồi sau cấy 25 ngày 25 Hình 4.10 Cụm chồi sau cấy 25 ngày môi trường V6 25 Hình 4.11 Rễ sau cấy 30 ngày 27 Hình 4.12 Cây trồng 15 ngày…………………………………………… 28 Hình 4.13 Cây sau 15 ngày trồng H2 28 viii Debergh P.C and Zimmerman, H.R.1991 Micropropagation: Technology and Application.Kluwer Academic Publisher Fish N and KrapA., 1986.The effect of intial culture media.Theor Appl Genet Mauseth J D 1995 Botany, Saunders College Publishing 31 PHỤ LỤC Bảng Tỷ lệ sống mẫu sau khử trùng Nghiệm thức NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 Lần 52% 66% 46% 12% 8% Lần lặp lại Lần 40% 72% 38% 16% 4% Trung bình Lần 56% 74% 42% 16% 6% 49,3% 70,7% 42% 14,7% 6% Bàng Bảng ANOVA tỷ lệ sống mẫu 10 ngày số liệu bảng chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 0.831 0.208 92.720 0.0000 Within 10 0.022 0.002 -Total 14 0.853 Coefficient of Variation = 12.95% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 1.480 0.493 0.08 0.03 3.00 2.120 0.707 0.04 0.03 3.00 1.260 0.420 0.04 0.03 3.00 0.440 0.147 0.02 0.03 3.00 0.180 0.060 0.02 0.03 -Total 15.00 5.480 0.365 0.25 0.06 Within 0.05 Bartlett's test Chi-square = 4.368 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.358 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng tỷ lệ sống mẫu 10 ngày kết bảng 32 Error Mean Square = 0.002000 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1002 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 0.4900 B Mean = 0.7100 A Mean = 0.7100 A Mean = 0.4900 B Mean = 0.4200 B Mean = 0.4200 B Mean = 0.1500 C Mean = 0.1500 C Mean = 0.06000 C Mean = 0.06000 C Bảng Khối lượng sẹo trung bình sau 40 ngày nuôi cấy Nghiệm thức N1 Lần 0,202 Lần lặp lại Lần 0,238 Lần 0,174 Trung bình (g) 0,205 N2 0,178 0,216 0,234 0,209 N3 0,164 0,31 0,224 0,233 N4 0,28 0,29 0,444 0,338 N5 0,12 0,142 0,14 0,134 N6 0,092 0,138 0,108 0,113 N7 0,302 0,206 0,25 0,253 N8 0,164 0,178 0,134 0,159 N9 0,35 0,396 0,396 0,381 N10 0,294 0,384 0,334 0,337 N11 0,11 0,082 0,07 0,087 N12 0,268 0,342 0,324 0,311 N13 0,07 0,058 0,058 0,062 N14 0,348 0,36 0,44 0,383 N15 0,144 0,118 0,154 0,139 N16 0,112 0,092 0,076 0,093 N17 0,264 0,24 0,226 0,243 N18 0,178 0,118 0,162 0,153 N19 0,462 0,4 0,396 0,419 33 Bàng Bảng ANOVA trọng lượng trung bình sau 40 ngày số liệu bảng chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 18 0.667 0.037 23.653 0.0000 Within 38 0.060 0.002 -Total 56 0.727 Coefficient of Variation = 17.69% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.614 0.205 0.03 0.02 3.00 0.628 0.209 0.03 0.02 3.00 0.698 0.233 0.07 0.02 3.00 1.014 0.338 0.09 0.02 3.00 0.402 0.134 0.01 0.02 3.00 0.338 0.113 0.02 0.02 3.00 0.758 0.253 0.05 0.02 3.00 0.476 0.159 0.02 0.02 3.00 1.142 0.381 0.03 0.02 10 3.00 1.012 0.337 0.05 0.02 11 3.00 0.262 0.087 0.02 0.02 12 3.00 0.934 0.311 0.04 0.02 13 3.00 0.186 0.062 0.01 0.02 14 3.00 1.148 0.383 0.05 0.02 15 3.00 0.416 0.139 0.02 0.02 16 3.00 0.280 0.093 0.02 0.02 17 3.00 0.730 0.243 0.02 0.02 18 3.00 0.458 0.153 0.03 0.02 19 3.00 1.258 0.419 0.04 0.02 -Total 57.00 12.754 0.224 0.11 0.02 Within 0.04 Bartlett's test Chi-square = 21.055 Number of Degrees of Freedom = 18 Approximate significance = 0.277 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng trọng lượng trung bình mơ sẹo sau 40 ngày kết bảng 34 Error Mean Square = 0.02000 Error Degrees of Freedom = 38 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.2712 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = Ranked Order 0.2100 0.2100 0.2300 0.3400 0.1300 0.1100 0.2500 0.1600 0.3800 0.3400 0.09000 0.3100 0.06000 0.3800 0.1400 0.09000 0.2400 0.1500 0.4200 ABCD ABCD ABCD ABC BCD BCD ABCD ABCD AB ABC CD ABCD D AB BCD CD ABCD ABCD A Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 19 14 10 12 17 18 15 11 16 13 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 0.4200 0.3800 0.3800 0.3400 0.3400 0.3100 0.2500 0.2400 0.2300 0.2100 0.2100 0.1600 0.1500 0.1400 0.1300 0.1100 0.09000 0.09000 0.06000 A AB AB ABC ABC ABCD ABCD ABCD ABCD ABCD ABCD ABCD ABCD BCD BCD BCD CD CD D Bảng Số chồi trung bình tái sinh mô sẹo Nghiệm thức Lần lặp lại Lần Trung bình K1 Lần K2 1,4 0,6 1 K3 1,2 1,6 1,6 1,467 K4 0,4 0,8 0,4 K5 2,0 2,4 2,467 K6 4,4 3,6 3,8 3,933 K7 1,4 1,8 1,4 K8 2,4 1,8 2,067 K9 1,2 2,4 1,4 2,2 35 Lần 0F Bàng Bảng ANOVA số chồi trung bình mơ sẹo sau 30 ngày số liệu bảng chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 33.479 3.720 16.706 0.0000 Within 20 4.453 0.223 -Total 29 37.932 Coefficient of Variation = 28.43% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 0.27 3.00 3.000 1.000 0.40 0.27 3.00 4.400 1.467 0.23 0.27 3.00 1.200 0.400 0.40 0.27 3.00 7.400 2.467 0.50 0.27 3.00 11.800 3.933 0.42 0.27 3.00 4.200 1.400 0.40 0.27 3.00 6.200 2.067 0.31 0.27 3.00 6.600 2.200 0.87 0.27 10 3.00 5.000 1.667 0.64 0.27 -Total 30.00 49.800 1.660 1.14 0.21 Within 0.47 Bartlett's test Chi-square = 23.457 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng số chồi trung bình mơ sẹo sau 30 ngày kết bảng Error Mean Square = 0.2230 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.9501 at alpha = 0.010 36 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = = = Ranked Order 0.0000 1.000 1.470 0.4000 2.470 3.930 1.400 2.070 2.200 F DE CD EF B A CD BC BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = 3.930 2.470 2.200 2.070 1.670 1.470 1.400 1.000 0.4000 A B BC BC BCD CD CD DE EF Bảng 10 Kết số chồi trung bình, thí nghiệm nhân cụm chồi sau 25 ngày nuôi cấy Nghiệm thức Lần lặp lại Lần Trung bình V1 Lần 1,33 Lần 1,67 1,33 V2 3,67 3,67 3,45 V3 4,67 3,67 4,67 4,34 V4 3,33 3,33 3,55 V5 5,67 4,67 4,67 V6 7,33 7,44 V7 4 4,33 4,11 Bàng 11 Bảng ANOVA số chồi trung bình thí nghiệm nhân cụm chồi sau 25 ngày số liệu bảng 10 chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 61.172 10.195 51.937 0.0000 Within 14 2.748 0.196 -Total 20 63.920 Coefficient of Variation = 10.61% 37 Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 4.000 1.333 0.34 0.26 3.00 10.340 3.447 0.39 0.26 3.00 13.010 4.337 0.58 0.26 3.00 10.660 3.553 0.39 0.26 3.00 15.010 5.003 0.58 0.26 3.00 22.330 7.443 0.51 0.26 3.00 12.330 4.110 0.19 0.26 -Total 21.00 87.680 4.175 1.79 0.39 Within 0.44 Bartlett's test Chi-square = 2.438 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.875 Bảng 12 Bảng trắc nghiệm phân hạng số chồi trung bình sau 25 ngày kết bảng 11 Error Mean Square = 0.1960 Error Degrees of Freedom = 14 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.9319 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 1.330 3.450 4.340 3.550 5.000 7.440 4.110 Ranked Order D C BC C B A BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 7.440 5.000 4.340 4.110 3.550 3.450 1.330 A B BC BC C C D Bảng 13 Kết chiều cao trung bình chồi, thí nghiệm nhân cụm chồi sau 25 ngày nuôi cấy 38 Nghiệm thức Lần lặp lại Lần 3,63 Lần 3,6 Trung bình (cm) 3,67 V1 Lần 3,77 V2 2,13 2,13 2,2 2,16 V3 3,4 3,07 3,1 3,19 V4 2,5 2,47 2,37 2,44 V5 2,87 2,77 2,8 2,81 V6 4,17 3,93 4,17 4,09 V7 2,4 2,37 2,3 2,36 Bàng 14 Bảng ANOVA chiều cao trung bình chồi, thí nghiệm nhân cụm chồi sau 25 ngày số liệu bảng 13 chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 28.139 4.690 155.099 0.0000 Within 56 1.693 0.030 -Total 62 29.833 Coefficient of Variation = 5.88% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 9.00 33.000 3.667 0.17 0.06 9.00 19.400 2.156 0.14 0.06 9.00 28.700 3.189 0.18 0.06 9.00 22.000 2.444 0.18 0.06 9.00 25.300 2.811 0.15 0.06 9.00 36.800 4.089 0.21 0.06 9.00 21.200 2.356 0.17 0.06 -Total 63.00 186.400 2.959 0.69 0.09 Within 0.17 Bartlett's test Chi-square = 1.790 Number of Degrees of Freedom = 39 Approximate significance = 0.938 Bảng 15 Bảng trắc nghiệm phân hạng chiều cao trung bình chồi sau 25 ngày kết bảng 14 Error Mean Square = 0.03000 Error Degrees of Freedom = 56 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.3266 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = Ranked Order 3.670 2.160 3.190 2.440 2.810 4.090 2.360 B E C E D A E Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 4.090 3.670 3.190 2.810 2.440 2.360 2.160 A B C D E E E Bảng 16 Kết số rễ phụ sau 30 ngày Nghiệm thức Lần lặp lại Lần 2,67 Trung bình R0(ĐC) Lần 1,67 Lần 1,67 R1 3,67 3,67 3,45 R2 6,67 5,89 R3 3,67 3,67 3,45 R4 2,67 1,33 Bàng 17 Bảng ANOVA số rễ phụ trung bình sau 30 ngày số liệu bảng 16 chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 30.318 7.580 21.198 0.0001 Within 10 3.576 0.358 -Total 14 33.894 40 Coefficient of Variation = 17.81% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 6.010 2.003 0.58 0.35 3.00 10.340 3.447 0.39 0.35 3.00 17.670 5.890 0.84 0.35 3.00 10.340 3.447 0.39 0.35 3.00 6.000 2.000 0.67 0.35 -Total 15.00 50.360 3.357 1.56 0.40 Within 0.60 Bartlett's test Chi-square = 1.507 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.825 Bảng 18 Bảng trắc nghiệm phân hạng số rễ phụ sau 30 ngày kết bảng 17 Error Mean Square = 0.3580 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.341 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = Ranked Order 2.000 3.450 5.890 3.450 2.000 C B A B C Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 5.890 3.450 3.450 2.000 2.000 A B B C C Bảng 19 Kết chiều dài trung bình rễ sau 30 ngày Nghiệm thức Lần lặp lại Lần 2,67 Lần 2,8 Trung bình (cm) 2,6 R0(ĐC) Lần 2,33 R1 2,73 3,13 2,97 2,94 R2 4,1 4,0 3,5 3,87 R3 3,77 3,3 3,2 3,42 R4 3,13 2,7 2,77 2,87 41 Bàng 20 Bảng ANOVA chiều dài trung bình rễ sau 30 ngày số liệu bảng 19 chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 3.032 0.758 10.980 0.0011 Within 10 0.690 0.069 -Total 14 3.723 Coefficient of Variation = 8.37% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 7.797 2.599 0.24 0.15 3.00 8.830 2.943 0.20 0.15 3.00 11.600 3.867 0.32 0.15 3.00 10.270 3.423 0.30 0.15 3.00 8.620 2.873 0.22 0.15 -Total 15.00 47.117 3.141 0.52 0.13 Within 0.26 Bartlett's test Chi-square = 0.533 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.970 Bảng 21 Bảng trắc nghiệm phân hạng chiều dài rễ sau 30 ngày kết bảng 20 Error Mean Square = 0.06900 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.5887 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 2.600 2.940 3.870 3.420 2.870 Ranked Order C BC A AB BC Mean Mean Mean Mean Mean 42 = = = = = 3.870 3.420 2.940 2.870 2.600 A AB BC BC C Bảng 22 Kết chiều cao ni trồng ngồi vườn ươm 15 ngày Nghiệm thức Lần lặp lại Lần 3,38 Lần 3,26 Trung bình (cm) 3,38 H1 Lần 3,483 H2 4,933 5.367 5,56 5,27 H3 5,05 5,06 5,24 5,12 Bàng 23 Bảng ANOVA chiều cao trung bình sau 15 ngày số liệu bảng 22 chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 35.203 17.602 56.027 0.0000 Within 44 13.823 0.314 -Total 46 49.026 Coefficient of Variation = 12.23% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 16.00 54.100 3.381 0.45 0.14 17.00 89.600 5.271 0.68 0.14 14.00 71.700 5.121 0.51 0.15 -Total 47.00 215.400 4.583 1.03 0.15 Within 0.56 Bartlett's test Chi-square = 2.914 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.233 Bảng 24 Bảng trắc nghiệm phân hạng chiều cao theo kết bảng 23 Error Mean Square = 0.3140 Error Degrees of Freedom = 44 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test 43 LSD value = 0.7986 at alpha = 0.050 Original Order Mean Mean Mean = = = Ranked Order 3.380 B 5.270 A 5.120 A Mean Mean Mean = = = 5.270 A 5.120 A 3.380 B Bảng 25 Kết số ni trồng ngồi vườn ươm 15 ngày Nghiệm thức Lần lặp lại Lần Trung bình H1 Lần 3,67 Lần 3,8 3,81 H2 4,33 4,33 4,6 4,41 H3 3,75 4,2 4,2 4,07 Bàng 26 Bảng ANOVA số trung bình sau 15 ngày số liệu bảng 25 chuyển đổi theo công thức sqrt (x +0,5) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 2.984 1.492 1.961 0.1528 Within 44 33.484 0.761 -Total 46 36.468 Coefficient of Variation = 21.24% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 16.00 61.000 3.813 0.91 0.22 17.00 75.000 4.412 0.87 0.21 14.00 57.000 4.071 0.83 0.23 -Total 47.00 193.000 4.106 0.89 0.13 Within 0.87 Bartlett's test Chi-square = 0.119 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.942 44 Bảng 27 Bảng trắc nghiệm phân hạng số theo kết bảng 26 Error Mean Square = 0.7610 Error Degrees of Freedom = 44 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.243 at alpha = 0.050 Original Order Mean Mean Mean = = = 3.810 4.410 4.070 Ranked Order A A A Mean Mean Mean = = = 45 4.410 4.070 3.810 A A A ... đến vitamin kích thích cách tích cực sinh trưởng phát triển thực vật, khơng phải vitamin cần thiết trường hợp Các vitamin khác, đặc biệt nicotinic acid (vitamin B3), canxi pantothenate (vitamin... Các vitamin Tất tế bào ni cấy có khả tổng hợp tất loại vitamin thường với số lượng mức u cầu Để mơ có sức sinh trưởng tốt phải bổ sung thêm vào môi trường hay nhiều loại vitamin Các vitamin sau... (B1), pyridoxin HCl (B6), nicotinic acid, vitamin B1 khơng thể thiếu sử dụng hầu hết môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật Linsmaier Skoog khẳng định vitamin B1 cần thiết cho sinh trưởng sau nghiên