HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG, NUÔI TRỒNG LAN DENDROBIUM NOBILE LIND THEO HƯỚNG CÔNG NGHIỆP

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI BÁO CÁO TỔNG KẾT DỰ ÁN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP BỘ TÊN DỰ ÁN: HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG, NI TRỒNG LAN DENDROBIUM NOBILE LIND THEO HƯỚNG CÔNG NGHIỆP Mã số: Theo HĐ số 05/ 2011 ngày 14/12/2012 Chủ nhiệm đề tài: TS Vũ Ngọc Lan HÀ NỘI, 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI BÁO CÁO TỔNG KẾT DỰ ÁN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ACẤP BỘ TÊN DỰ ÁN: HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG, NUÔI TRỒNG LAN DENDROBIUM NOBILE LIND THEO HƯỚNG CÔNG NGHIỆP Mã số: Theo HĐ số 05/ 2011 ngày 14/12/2012 Xác nhận quan chủ trì dự án (ký, họ tên, đóng dấu) Chủ nhiệm dự án (ký, họ tên) TS Vũ Ngọc Lan HÀ NỘI, 2014 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA THỰC HIỆN DỰ ÁN TS Vũ Ngọc Lan GS.TS Nguyễn Quang Thạch PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh ThS Nguyễn Thị Sơn KS Trần Thế Mai ThS Nguyễn Hữu Cường TS Nguyễn Văn Giang KS Đặng Thị Phương Hảo ThS Hoàng Thị Thủy 10 ThS Nguyễn Thị Ngọc Oanh i MỤC LỤC BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA THỰC HIỆN DỰ ÁN .i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỂ TÀI MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU .3 CÁCH TIẾP CẬN CỦA ĐỀ TÀI .4 PHẠM VI, ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ CÁC CHỈ TIÊU THEO DÕI 6.1 Phương pháp nghiên cứu 6.1.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 6.1.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 15 6.1.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 15 6.2 Các tiêu theo dõi: 6.2.1 Các tiêu theo dõi nuôi cấy in vitro 16 6.2.2 Các tiêu theo dõi vườn ươm 16 6.2.3 Các tiêu theo dõi vườn sản xuất 16 6.3 Điều kiện thí nghiệm 6.3.1 Nhóm thí nghiệm phòng 16 6.3.2 Nhóm thí nghiệm vườn ươm vườn sản xuất 17 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGỒI NƯỚC THUỘC LĨNH VỰC CỦA DỰ ÁN .17 7.1 Thông tin chung lan Dendrobium làm dược liệu 7.2 Những nghiên cứu nuôi cấy mô lan giới 7.3 Những nghiên cứu lan nước CÁC KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐÃ ĐẠT ĐƯỢC .27 8.1.3 Xác định tác động ảnh hưởng đến hệ thống bioreactor tạo hoàn chỉnh 41 8.1.4 Xác định tác động thời vụ cây, giá thể trồng, ẩm độ tưới, loại chế phẩm dinh dưỡng, nồng độ, chế phẩm sinh học tròng phòng trừ sâu bệnh đến khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl vườn ươm 49 8.1.5 Xác định tác động loại chế phẩm dinh dưỡng, nồng độ, chế phẩm sinh học đến khả sinh trưởng phòng trừ sâu bệnh lan Dendrobium nobile Lindl vườn sản xuất .56 8.1.6 Phân tích, đánh giá hàm lượng alkaloid theo thời vụ, phận, tuổi lan Dendrobium nobile Lindl 60 8.2 Nội dung 2: Nhân nhanh lượng giống kỹ thuật nuôi cấy mô 8.3 Nội dung 3: Xây dựng mô hình sản xuất lan Dendrobium nobile Lindl KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 9.1 Kết luận ii 9.2 Đề nghị TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 DANH MỤC CÁC TÀI LIỆU KÈM THEO 73 I QUY TRÌNH 74 iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CT : Công thức SKLM : Sắc ký khí lớp mỏng ĐC : Đối chứng MS : Murashige & Shoog, 1962 KC : Knudson C, 1965 VW : Vacin & Went, 1949 RE : Robert Ernst, 1979 CW : Nước dừa CV(%) : Hệ số biến động (Correlation of Variants) LSD : Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P = 0.5 (Least Significant Difference) THT : Than hoạt tính iv DANH MỤC CÁC BẢNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO 6.1 Phương pháp nghiên cứu ii 6.2 Các tiêu theo dõi: 16 .ii 6.3 Điều kiện thí nghiệm 16 ii 7.1 Thông tin chung lan Dendrobium làm dược liệu 17 ii 7.2 Những nghiên cứu nuôi cấy mô lan giới 20 ii 7.3 Những nghiên cứu lan nước 22 .ii 8.2 Nội dung 2: Nhân nhanh lượng giống kỹ thuật nuôi cấy mô 64 ii 8.3 Nội dung 3: Xây dựng mơ hình sản xuất lan Dendrobium nobile Lindl 65 ii 9.1 Kết luận 67 ii 9.2 Đề nghị 69 .iii Bảng Ảnh hưởng phương thức gieo hạt đến khả nảy mầm, phát sinh hình thái lồi Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng Ảnh hưởng số pH đến khả nhân nhanh protocorm lồi Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) Bảng Ảnh hưởng EC môi trường nuôi cấy KC đến khả nhân nhanh protocorm loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng Ảnh hưởng EC môi trường nuôi cấy MS đến khả nhân nhanh chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng Ảnh hưởng nhịp điệu nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm protocorm loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng 10 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm protocorm lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) Bảng 11 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng 12 Ảnh hưởng pH tạo hồn chỉnh mơi trường đặc hệ thống bioreactor loài lan in vitro Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) Bảng 13 Ảnh hưởng EC trình tạo hoàn chỉnh loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) v Bảng 14 Ảnh hưởng nhịp điệu ni cấy q trình tạo hồn chỉnh lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) Bảng 15 Ảnh hưởng than hoạt tính q trình tạo hồn chỉnh lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) Bảng 16 Ảnh hưởng thời vụ đến tỷ lệ sống, khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) Bảng 17 Ảnh hưởng loại giá thể trồng đến tỷ lệ sống, khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) Bảng 18 Ảnh hưởng ẩm độ giá thể trồng đến tỷ lệ sống, khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) Bảng 19 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng nồng độ đến khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) Bảng 20 Ảnh hưởng loại chế phẩm sinh học phòng trừ sâu bệnh đến khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) Bảng 21 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng nồng độ đến khả sinh trưởng phòng trừ sâu bệnh lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn sản xuất Bảng 22 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng nồng độ đến khả sinh trưởng phòng trừ sâu bệnh lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn sản xuất Bảng 23 Kết định lượng alcaloid toàn phần lan Thạch hộc vi DANH MỤC HÌNH Hình Minh họa ảnh hưởng số pH đến khả nhân nhanh protocorm loài Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) 29 Hình Minh họa ảnh hưởng số pH đến khả nhân nhanh chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) 30 Hình Minh học ảnh hưởng EC môi trường nuôi cấy KC đến khả nhân nhanh protocorm loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .32 Hình Minh học ảnh hưởng EC môi trường nuôi cấy KC đến khả nhân nhanh cụm chồi lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) .33 Hình Minh họa ảnh hưởng nhịp điệu nuôi cấy đến khả nhân nhanh protocorm lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) .35 Hình Minh họa ảnh hưởng nhịp điệu nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .36 Hình Minh họa ảnh hưởng phương thức nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm protocorm loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .37 Hình Minh họa ảnh hưởng phương thức ni cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .38 Hình Minh họa ảnh hưởng cường độ ánh sáng nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm protocorm loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .40 Hình 10 Minh họa ảnh hưởng cường độ ánh sáng nuôi cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .40 Hình 11 Minh họa ảnh hưởng pH tạo hồn chỉnh mơi trường đặc hệ thống bioreactor loài lan in vitro Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) .42 Hình 12 Minh họa ảnh hưởng EC q trình tạo hồn chỉnh lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần nuôi cấy) 44 Hình 13 Minh họa ảnh hưởng nhịp điệu ni cấy q trình tạo hồn chỉnh lồi lan Dendrobium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) 45 Hình 14 Minh họa ảnh hưởng THT q trình tạo hồn chỉnh loài lan Dendrob ium nobile Lindl (Sau tuần ni cấy) 46 Hình 15 Quy trình nhân giống invitro lan Dendrobium nobile Lindl hệ thống bioreacter .48 vii Hình 16 Minh họa ảnh hưởng thời vụ đến tỷ lệ sống, khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) .49 Hình 17 Minh họa ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống, khả sinh trưởng lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm (Sau tuần nuôi trồng) 51 Hình 18 Minh họa lan Dendrobium nobile Lindl giai đoạn vườn ươm 55 Hình 19 Quy trình ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl vườn ươm 56 Hình 20 Hình ảnh ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl ngồi vườn sản xuất .58 Hình 21 Quy trình ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl ngồi vườn sản xuất .59 Hình 22 Sắc ký ký đồ SKLM định tính alcaloid lồi thạch hộc .62 Hình 23 Minh họa mơ hình ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl ngồi vườn sản xuất Hòa Bình 66 Hình 24 Minh họa mơ hình ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl ngồi vườn sản xuất Trường ĐH Nơng nghiệp Hà Nội 67 viii Giai đoạn 1: Nhân giống invitro lan Dendrobium nobile Lindl hệ thống bioreacter Cây mẹ Dendrobium nobile Lindl được chọn lọc, thu hạt lan Gieo hạt môi trường MS + 6,0g agar/lít mơi trường + 10g saccharoza/lít mơi trường + 100ml ND/lít mơi trường Nhân nhanh Protocorm, chồi hệ thống bioreactor Chồi Khoáng MS + 100ml nước dừa + 30g sacaroza + 60g chuối chín + 6,0g agar/lít mơi trường; pH 5,4; ni cấy nổi:1 phút chìm; cường độ ánh sáng 2500 lux Protocorm Khoáng KC + 100ml nước dừa + 10g sacaroza + 60g khoai tây/lít + 6,0g agar/lít mơi trường; pH 5,4; ni cấy nổi:1 phút chìm; cường độ ánh sáng 2500 lux Tạo hồn chỉnh mơi trường đặc thống khí Khống RE + 10g sacaroza + 1g THT + 6,0g agar/ lít mơi trường; pH 5,7; ánh sáng 2300 lux Cây giống đạt chiều cao cm, lá, rễ Vườn ươm Giá thể bột xơ dừa, vào vụ Xuân 75 Giai đoạn 2: Nuôi trồng in vitro lan D nobile Lindl vườn ươm Bước 1: Chọn đủ tiêu chuẩn, mùa vụ điều kiện khác Cây cao 4cm, lá, rễ, được rửa agar, khử trùng dung dịch KMnO4 0,1% 10 phút Giá thể bột xơ dừa được tiến hành khử trùng phơi giãi nắng khô ngâm dung dịch KMnO4 0,1% Ra vào vụ xuân Bước 2: Tiến hành trồng vào khay Mỗi khay trồng 30 cây, cách 3cm, hàng cách hàng 4cm Khay nhựa có kích thước 40 x 25 x 12 cm, lỗ khay 0,5 x 1,0 cm; lót đáy lưới có mắt lỗ 0,1 x 0,1 cm Đặt khay nơi bóng mát, thống khí Tiến hành phun ẩm thường xun, đảm bảo ẩm độ giá thể trồng đạt 40-50% Bước 3: Chăm sóc Phun phân bón vi sinh Komix o,5 ml/lít, tuần/lần) Cây đạt chiều cao 8cm, trở lên, tiến hành tách chuyển chậu nhỏ riêng lẻ để có đủ diện tích sống Phun ln chuyển Phun tưới nước thuốc phòng trừ sâu dạng sương mù bệnh chế phẩm BT để giữ độ ẩm dịch chiết cho giá thể gừng, tỏi, ớt phòng trồng, ln trừ sâu bệnh 1/2 đảm bảo ẩm độ 40%-50% tháng lần, để phòng sâu bệnh Phun định kỳ luân phiên 01 lần/ tháng với nồng độ 1gram/lít Cây đạt chiều cao > 10cm, đường kính thân 0,5cm - 0,6cm; - chồi Vườn sản xuất 76 Giai đoạn 3: Nuôi trồng in vitro lan D nobile Lindl vườn sản xuất Mùa vụ chuẩn bị Cây từ vườn ươm đạt chiều cao 10cm, đường kính thân 0,5cm 0,6cm có từ - chồi Ra vào vụ xuân Giá thể bột xơ dừa được khử trùng dung dịch KMnO4 0,1% sau tiến hành phơi khơ ngồi nắng đến khơ Trồng giá thể bột xơ dừa, khối lượng 50 gram/chậu, phun sương nước lần/ngày vào vụ hè Chăm sóc Chậu đặt nơi thoáng mát, tránh ánh nắng trực tiếp Ở giai đoạn cần tưới nước hạn chế, không tưới nước trực tiếp vào phần gốc rễ, tiến hành tưới dạng sương mù, phun xung quanh bề mặt giá thể, giá thể ẩm kích thích rễ 60% hoạt động để hút ẩm Phun 02 lần/ngày vào vụ hè, lượng nước tưới sử dụng 20ml/chậu/01 lần phun mù Sau tuần tiến hành phun phân bón Komix 2ml/lít 1lần/tuần để giúp thích ứng nhanh, chống chịu lại thay đổi môi trường sống tăng khả sinh trưởng Phun chế phẩm BT dịch chiết gừng, tỏi, ớt phòng trừ sâu bệnh 1/2 tháng lần Nội dung quy trình 4.1 Giai đoạn 1: Nhân giống invitro lan D nobile Lindl hệ thống bioreacter Bước 1: Chọn, nuôi dưỡng mẹ để thu - Cây mẹ có giả hành to mập (đường kính 1,5cm đến 2cm), dài (chiều dài 50cm đến 60cm), lớn (chiều dài khoảng 7cm , chiều rộng khoảng 3cm) Cây có sức sinh trưởng, không bị sâu bệnh 77 - Tiến hành nuôi dưỡng, chăm sóc đến mùa hoa - Thụ phấn cho hoa vào T3 đến T4 để thu vào T7 đến T9 hàng năm Bước 2: Gieo hạt Quả sau thụ phấn khoảng – tháng, mềm, không bị nứt vỡ, được thu hái độ chín, để khử trùng đưa vào làm nguồn ngun liệu ni cấy mơ Tại phòng chuẩn bị: + Quả lan sau thu hái được cắt tỉa để lại nguyên phần mang có chiều dài khoảng 4cm đến 5cm + Tiến hành rửa vòi nước máy + Sau ngâm lắc 10 phút, rửa bàn chải nhỏ khe kẽ dung dịch xà phòng, rửa vòi nước máy + Quả đựng bình Trong phòng cấy mẫu, bốc cấy (Laminer): - Tráng nước cất vô trùng khoảng lần - Nhúng dung dịch cồn 960, hơ đốt lửa đèn cồn - Rạch quả, lấy hạt cấy rải bề mặt môi trường nuôi cấy khởi động - Môi trường nuôi cấy khởi động cho gieo hạt : Khoáng MS+ 100ml nước dừa + 10g sacaroza/lít mơi trường - Lượng hạt 01 lan cấy được cho 10 bình tam giác loại 250ml, 70ml mơi trường ni cấy khởi động/01 bình tam giác Trong phòng ni cây: - Các bình mẫu cấy được chuyển vào phòng ni, sau 60 ngày thu được protocorm, cụm chồi/bình Tất bình mẫu được nuôi điều kiện: Nhiệt độ 260C - 280C Ánh sáng 2000 lux – 3000 lux Quang chu kỳ: 16h sáng + h tối 78 Bước 3: Nhân nhanh protocorm, chồi hệ thống bioreactor Trong phòng cấy mẫu, bốc cấy (Laminer): Nhân nhanh protocorm cụm chồi cho lan D nobile Lindl hệ thống bioreactor: Nhân nhanh protocorm môi trường KC (1965) + (100ml nước dừa + 10g saccharoza + 60g khoai tây)/lít mơi trường; Nhân nhanh cụm chồi môi trường MS + (100ml ND + 60g chuối chín + 30g saccharose)/lít; Các điều kiện nuôi cấy: pH môi trường = 5,4; nhịp điệu ni cấy nổi:1 phút chìm; cường độ ánh sáng 2500 lux Trong phòng ni cây: Tất bình mẫu được ni điều kiện: Nhiệt độ 260C - 280C Ánh sáng 2500 lux Quang chu kỳ: 16h sáng + h tối Bước 4: Tạo hoàn chỉnh, để chuẩn bị chuyển ngồi vườn ươm Trong phòng cấy mẫu, bốc cấy (Laminer): Chọn tách riêng chồi có tiêu chuẩn, chiều cao đạt 3cm, được cấy vào môi trường tạo hồn chỉnh Tạo hồn chỉnh: mơi trường ni cấy đặc thống khí RE + 10g sacaroza + 1,0 g THT/lít mơi trường, pH mơi trường = 5,7; cường độ chiếu sáng 2300 lux Trong phòng ni cây: Tất bình mẫu được ni điều kiện: Nhiệt độ 260C - 280C Ánh sáng 2300 lux Quang chu kỳ: 16h sáng + h tối Sau tháng tạo hồn chỉnh có chiều cao 4cm, lá, rễ, đủ tiêu chuẩn để tiến hành đưa vườn ươm Bước 5: Đưa xuống vườn ươm Vườn ươm có mái che, điều chỉnh được phần cường độ chiếu sáng, ẩm độ khơng khí 79 - Thời vụ vụ xuân - Giá thể trồng bột xơ dừa 4.2 Giai đoạn 2: Nuôi trồng in vitro lan D nobile Lindl vườn ươm Vườn ươm có mái che, điều chỉnh được phần cường độ chiếu sáng, ẩm độ khơng khí Bước 1: Chọn đủ tiêu chuẩn, mùa vụ điều kiện khác - Chọn nuôi cấy mô đạt tiêu cao cm, có lá, rễ; rút an tồn khỏi bình theo thao tác sau: o Cây được rửa agar, dinh dưỡng nhiều lần nước máy, tránh làm gãy, giập nát o Làm khô cách rải giấy thấm o Ngâm khử trùng dung dịch KMn0 0,1% phút dung dịch thuốc Vicarben 0,1% phút, sau để khô cách rải giấy thấm - Mùa vụ vườn ươm tháng (vụ xuân) - Giá thể trồng giá thể bột xơ dừa, chuẩn bị giá thể sau: o Giá thể được khử trùng ngâm dung dịch KMnO 0,1% giờ, tiếp phơi giãi nắng khô ánh sáng mặt trời o Giá thể được đựng khay trồng nhựa có kích thước 40cm x 25cm x 12cm, lót đáy lưới nhựa chắn trùng, có kích thước 100 lỗ/cm2 để hạn chế lọt giá thể trồng o Giá thể bột xơ dừa được trải khay có chiều dày lớp giá thể đạt 5cm Bước 2: Tiến hành trồng vào khay rổ - Cây đạt tiêu được khử trùng làm khô nước - Khay trồng có đầy đủ giá thể đủ tiêu chuẩn trồng - Phun nước vào khay trồng dạng sương mù để tạo độ ẩm giá thể 40% - 50% 80 - Trồng vào khay, khay trồng 30 cây, cách 3cm, hàng cách hàng 4cm, trồng kín rễ, chặt gốc sâu khoảng 0,3cm - Đặt khay ni trồng có ánh sáng tán xạ chắn khoảng 70% ánh sáng, thống khí Bước 3: Chăm sóc ni cấy mơ - Thường xuyên phun tưới nước dạng sương mù cho khay cây, để đảm bảo ẩm độ giá thể trồng đạt 40 - 50% - Cây sau ni trồng được tháng được phun phân bón vi sinh Komix có nồng độ 0,5 ml/lít, ngày/lần - Phun thuốc phòng trừ sâu bệnh: Phun luân chuyển thuốc phòng trừ sâu bệnh chế phẩm BT dịch chiết gừng, tỏi, ớt phòng trừ sâu bệnh 1/2 tháng lần, để phòng sâu bệnh - Phun tưới nước dạng sương mù để giữ độ ẩm cho giá thể trồng, đảm bảo ẩm độ 40%-50% - Cây sau tháng nuôi trồng khay nhựa chung đạt chiều cao 7cm, lá, tiến hành tách chuyển chậu nhỏ riêng lẻ để chuyển sang vườn sản xuất - Chăm sóc đến tháng thứ tiến hành chuyển chậu riêng vườn sản xuất 4.3 Giai đoạn 3: Nuôi trồng in vitro lan D nobile Lindl vườn sản xuất Bước 1: Mùa vụ thu thập chuẩn bị điều kiện cần thiết khác - Mùa vụ tiến hành đưa thu thập vào vườn sản xuất cuối vụ xuân, sau thu thập hoa, đạt tỷ lệ sống 100% - Mùa vụ tiến hành chuyển từ vườn ươm sang vườn sản xuất, nuôi cấy mô được sinh trưởng chậu riêng tháng, đạt tỷ lệ sống 100% - Giá thể trồng bột xơ dừa được khử trùng ngâm dung dịch KMnO4 0,1% giờ, tiếp được phơi giãi nắng khơ ánh sáng mặt trời - Trồng chậu đất nung (KT chậu 25cm:18cm:22cm) có chứa 300gam bột xơ dừa/chậu 81 Bước 2: Chăm sóc ngồi vườn sản xuất - Chậu đặt nơi thoáng mát, tránh ánh nắng trực tiếp Ở giai đoạn cần tưới nước hạn chế, không tưới nước trực tiếp vào phần gốc rễ, tiến hành tưới dạng sương mù, phun xung quanh bề mặt giá thể, giá thể ẩm kích thích rễ 60% hoạt động để hút ẩm Phun 02 lần/ngày vào vụ hè, lượng nước tưới sử dụng 20ml/chậu/01 lần phun mù - Chế độ dinh dưỡng cho thu thập nuôi cấy mơ sử dụng Komix, lần/ tuần, có nồng độ 0,2ml/lít - Phun chế phẩm BT dịch chiết gừng, tỏi, ớt phòng trừ sâu bệnh 1/2 tháng lần - Cây nuôi cấy mô sau tháng vườn ươm, được chuyển sang vườn sản xuất Tại vườn sản xuất đạt chiều cao khoảng 8cm, từ -10 82 II MƠ HÌNH Mơ hình 1: 01 mơ hình sản xuất lan Dendrobium nobile Lindl vùng địa Hòa Bình khu ngun liệu tự nhiên công ty cổ phần Y Dược Sông Đà có 20.000 năm tuổi, 100.000 được tháng tuổi được ghép lên gỗ, được nuôi trồng tự nhiên - Mơ hình: trồng nhà lưới có lưới che, cắt nắng, giảm bớt ánh sáng trực tiếp - Giống: từ nuôi cấy mô được trồng vườn ươm nên đồng đều, sinh trưởng khỏe - Giá thể: Bột xơ dừa được khử trùng nên hạn chế được sâu bệnh hại - Chăm sóc: Các vườn có nhân cơng đạo, kiểm sốt chặt chẽ kỹ sư nên xử lý kịp thời theo quy trình chăm sóc - Hiện trạng nay: sinh trưởng chậm vào mùa rét có tượng rụng lá, thay đổi màu sắc thân cây, lác đác có tượng chết 83 Mơ hình 2: Mơ hình sản xuất lan Dendrobium nobile Lindl Vườn thực nghiệm Viện SHNN - trường ĐH Nơng nghiệp HN với diện tích 200 m có 20.000 năm tuổi - Mơ hình: trồng nhà lưới có mái che, lưới cắt nắng, giảm bớt ánh sáng trực tiếp - Giống: từ nuôi cấy mô được trồng vườn ươm nên đồng đều, sinh trưởng khỏe - Giá thể: Bột xơ dừa được khử trùng nên hạn chế được sâu bệnh hại - Chăm sóc: Các vườn có nhân cơng đạo, kiểm sốt chặt chẽ kỹ sư nên xử lý kịp thời theo quy trình chăm sóc - Hiện trạng nay: sinh trưởng chậm rụng hoàn toàn, thay đổi màu sắc thân cây, có tỷ lệ chết 84 III MỘT SỐ HÌNH ẢNH THÍ NGHIỆM 85 IV CÁC MƠI TRƯỜNG SỬ DỤNG TRONG CÁC NGHIÊN CỨU * Nền khoáng KnudsonC (1965) Thành phần Lượng lấy 1l dung dịch 1l môi truờng sử Đa lượng mẹ (g) KCl 5,00 KH2PO4 5,00 MgSO4 2,44 NH4NO3 10,00 (NH4)2SO4 10,00 Ca(NO3)2 (Pha riêng) Vi lượng 4,82 (mg) MnSO4.H2O Sắt 568,00 (g) FeSO4.7H2O 5,00 dụng 50 ml/l 10 ml/l ml/l * Nền khoáng MS (1962) Thành phần Luợng lấy 1l dung dịch 1l môi truờng sử mẹ (g) Đa lượng NH4NO3 33, 00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 3,40 CaCl2 (Pha riêng) 6,60 86 dụng 50 ml/l Vi luợng (mg) H3BO3 620,00 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H2O 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O Sắt 2,50 (g) FeSO4.7H2O 5,56 Na2EDTA Vitamin 7,46 (mg) Glycine 400 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridoxin (B6) 100 Thyamin HCl (B1) 20 Inositol * Nền khoáng RE Thành phần Đa lượng NH4NO3 (NH4)2SO4 KNO3 Mg(NO3)2.6H2O KH2PO4 Ca(NO3).4H2O (Pha riêng) Sắt FeSO4.7H2O Na2EDTA 10 ml/l ml/l ml/l 100 Luợng lấy 1l dung dịch 1l môi truờng sử mẹ dụng (g) 8,00 3,00 8,00 50 ml/l 2,00 6,00 3,00 (g) 5,00 ml/l 7,40 87 V ĐỐI CHIẾU KẾT QUẢ ĐỀ TÀI BẢNG ĐỐI CHIẾU KẾT QUẢ THỰC HIỆN CÁC SẢN PHẨM ĐỀ TÀI T T Kế hoạch Kết thực Số lượng Yêu cầu khoa học Báo cáo 13 Báo cáo đầy đủ phần, 13 chuyên đề nội dung có tính logic Có đầy đủ bảng số liệu qua xử lý Quy trình nhân 01 Quy Quy trình được trình bày rõ 01 giống, ni trình ràng, lôgic, dễ hiểu, dễ làm trồng lan D theo Quy trình có tính khả nobile Lindl thi áp dụng ngồi quy mơ cơng sản xuất Quy trình có cơng nghiệp có suất lý thuyết đạt 500.000 cơng suất lý giống/1năm Quy trình thuyết 500.000 chi tiết, đầy đủ, cụ thể giống/năm bước nhân giống in vitro; ni trồng in vitro ngồi vườn ươm vườn sản xuất Vườn mơ hình 02 mơ - 01 mơ hình sản xuất lan D 02 hình nobile Lindl vùng (Đã được Bộ địa Hòa Bình khu nghiệm thu ngun liệu tự nhiên thực địa công ty cổ phần Y Dược tháng Sơng Đà có 20.000 07/2013) năm tuổi, 100.000 được tháng tuổi được ghép lên gỗ, được ni trồng tự nhiên - 01 mơ hình sản xuất lan Dendrobium nobile Lindl Vườn thực nghiệm Viện SHNN - trường ĐH Nơng nghiệp HN với diện tích 200 m2 có 20.000 năm tuổi được nuôi trồng công nghiệp Tên sản phẩm 88 Đánh giá Đạt 100% Đạt 100% Đạt 100% Hội thảo Tập huấn 01 02 Đã tổ chức 01 hội thảo giới thiệu quy trình nhân giống, ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl theo hướng công nghiệp Trường cho 50 người - Đã tổ chức 01 tập huấn lớp cho 20 cán kỹ thuật quy trình nhân giống, ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl Hòa Bình - Đã tổ chức 01 tập huấn lớp cho 180 nông dân được phổ biến cách thức nhân giống, ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl Hòa Bình 01 Đạt 100% 02 Đạt 100% - Góp phần đào tạo thành công 01 NCS 01 01 - Số học viên cao học 02 03 - Kỹ sư : 00 06 - Số báo công bố: 02 03 Đạt 100% 89 Đạt 100% Vượt mức Vượt mức ... thiệu quy trình nhân giống, ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl theo hướng cơng nghiệp 5.5.Tổ chức 02 khóa tập huấn Tập huấn 1: Cho 20 cán kỹ thuật quy trình nhân giống, ni trồng lan Dendrobium nobile. .. ĐH Nơng nghiệp Hà Nội THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thơng tin chung: - Tên dự án: Hồn thiện quy trình nhân giống, ni trồng lan Dendrobium nobile Lindl theo hướng công nghiệp - Mã số: Theo HĐ số... HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI BÁO CÁO TỔNG KẾT DỰ ÁN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ACẤP BỘ TÊN DỰ ÁN: HỒN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG, NI TRỒNG LAN DENDROBIUM NOBILE LIND THEO HƯỚNG CÔNG NGHIỆP Mã số: Theo HĐ