Luận văn lựa chọn lá huyền tinh được thu hái ở vùng Bảy Núi, tỉnh An Giang là đối tượng nghiên cứu và tách chiết hợp chất. Các cao phân đoạn hexane, ethyl acetate, butanol và nước thu được bằng phương pháp chiết -lỏng lỏng từ cao tổng ethanol được xác định sơ bộ thành phần hóa thực vật và khảo sát khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa. Kết quả cho thấy, lá huyền tinh chứa nhiều nhóm hợp chất quan trọng như alkaloid, saponin, flavonoid và tannin. Trong các cao phân đoạn, cao ethyl acetate thể hiện hoạt tính kháng oxy hóa thông qua khả năng bắt gốc tự do DPPH và ABTS˙ + cao nhất, với giá trị IC 50 lần lượt là 70.13 ± 2.2, 42.77 ± 0.1 µg/mL. Ngoài ra, cao ethyl acetate thể hiện hoạt tính kháng viêm in vitro cao gấp 2 lần chất chuẩn diclofenac sodium với giá trị IC 50 đạt 11.11 ± 0.5 mg/mL. Bên cạnh đó, cao ethyl acetate ức chế đối với hầu hết các chủng vi sinh vật thử nghiệm đặc biệt trên vi khuẩn Gram (+) Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus aureus ATCC 29213, MRSA ATCC 43300 với giá trị MIC lần lượt là 6000, 6000 và 3000 µg/mL. Từ cao chiết ethyl acetate, luận văn đã phân lập được hợp chất luteolin. Cấu trúc của hợp chất được phân tích dựa vào dữ liệu phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR và MS so sánh với tài liệu tham khảo. Luteolin thể hiện hoạt tính kháng oxy hóa thông qua khả năng bắt gốc tự do DPPH và thể hiện giá trị IC 50 = 52.75 ± 2.53 µg/mL tương đương với vitamin C. Luteolin đồng thời cũng có khả năng kháng các chủng vi khuẩn Gram (+) là E. faecalis ATCC 29212, S. aureus ATCC 29213, MRSA ATCC 43300 với kính vòng ức chế tương ứng là 11, 11 và 13 cm và cho giá trị MIC đối với MRSA đạt 200 µg/mL
ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRẦN MINH THỤC VI NGHIÊN CỨU HOAT TÍNH SINH HOC VÀ • a THÀNH PHẦN HĨA HOC CỦA LÁ HUYỀN TINH a ( Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2019 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BACH KHOA -ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học: TS Lê Xuân Tiến Cán chấm nhận xét 1: PGS.TS Ngô Đại Nghiệp Cán chấm nhận xét 2: PGS TS Quách Ngô Diễm Phương Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 17 tháng 07 năm 2019 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) Chủ tịch: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Thư ký: TS Phan Thị Huyền Phản biện 1: PGS.TS Ngô Đại Nghiệp Phản biện 2: PGS.TS Quách Ngô Diễm Phương ủy viên: PGS.TS Lê Phi Nga Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỊNG PGS.TS Nguyễn Đức Lượng TRƯỞNG KHOA GS.TS Phan Thanh Sơn Nam ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập- Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Trần Minh Thục Vi MSHV: 1670722 Ngày, tháng, năm sinh: 15/08/1992 Nơi sinh: Phú Yên Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Tên đề tài: NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ HUYỀN TINH ỢACCA LEONTOPETALOIDES (L.) KUNTZE) Nhiệm vụ nội dung: Nghiên cứu thành phần hóa thực vật có huyền tinh đánh giá hoạt tính sinh học cao chiết Phân lập hợp chất từ cao chiết cho hoạt tính cao Ngày giao nhiệm vụ : 6/2018 Ngày hoàn thành nhiệm vụ : 7/2019 Cán hưởng dẫn : TS Lê Xuân Tiến Tp HCM, ngày 07 tháng 07 năm 2019 CÁN Bộ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) TS Lê Xuân Tiến CHỦ NHIỄM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) PGS TS Lê Thị Thủy Tiên PHẦN DÀNH CHO KHOA, BỘ MÔN: Người duyệt (chấm sơ bộ): Đơn vị: Ngày bảo vệ: Điểm tổng kết: Nơi lưu trữ luận văn: LỜI CẢM ƠN Trong hành trình chinh phục kiến thức, em ln có đồng hành giúp đỡ người bạn, người cô, người thầy mà thiếu họ em khơng thể hồn thành luận văn Lời cảm on đầu tiên, em xin gửi đến thầy, cô môn Công nghệ sinh học tận tâm truyền đạt cho em kiến thức lĩnh vực công nghệ sinh học để em thêm hiểu rõ yêu quý môn mà em lựa chọn Em xin chân thành cảm on thầy Lê Xuân Tiến Thầy giúp đỡ hướng dẫn cho em, dạy kiến thức mà em thiếu sót Thầy ln tràn đầy lượng mang lượng tích cực truyền sang ngưòi Thầy giúp em thấy khó khăn vượt qua, có cố gắng việc thành công Đặc biệt, em xin gửi lòi cảm on đến Nguyễn Kim Minh Tâm, người luôn đồng hành theo sát em q trình làm thí nghiệm Cơ tận tĩnh hướng dẫn kỹ năng, thao tác thí nghiệm hon nữa, cô chia sẻ với em lúc bị khó khăn, áp lực, ln thúc đẩy, động viên em q trình làm việc Cũng xin gửi lòi cảm on đến người bạn, người em sát cánh em suốt q trình hồn thành luận văn Họ ngưòi mang lại tiếng cười, giúp đỡ với em chia sẻ buồn vui suốt khoảng thời gian học tập dưói mái trường Bách Khoa Lời cảm ơn đặc biệt nhất, xin gửi đến cha mẹ Cha mẹ tạo điều kiện tốt để học tập, bên cạnh để cổ vũ động viên Cha mẹ ln điểm tựa để chia sẻ niềm vui khó khăn sống Cuối cùng, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến tất người, cầu chúc tốt đẹp đến hy vọng đường tương lai tới, em ln có người đồng hành bên cạnh Trần Minh Thục Vi TÓM TẮT LUẬN VĂN Luận văn lựa chọn huyền tinh thu hái vùng Bảy Núi, tỉnh An Giang đối tượng nghiên cứu tách chiết hợp chất Các cao phân đoạn hexane, ethyl acetate, butanol nước thu phương pháp chiết -lỏng lỏng từ cao tổng ethanol xác định sơ thành phần hóa thực vật khảo sát khả kháng khuẩn kháng oxy hóa Ket cho thấy, huyền tinh chứa nhiều nhóm hợp chất quan trọng alkaloid, saponin, flavonoid tannin Trong cao phân đoạn, cao ethyl acetate thể hoạt tính kháng oxy hóa thơng qua khả bắt gốc tự DPPH ABTS ' + cao nhất, vói giá trị IC50 70.13 ± 2.2, 42.77 ±0.1 pg/mL Ngoài ra, cao ethyl acetate thể hoạt tính kháng viêm in vitro cao gấp lần chất chuẩn diclofenac sodium với giá trị IC50 đạt 11.11 ±0.5 mg/mL Bên cạnh đó, cao ethyl acetate ức chế hầu hết chủng vi sinh vật thử nghiệm đặc biệt vi khuẩn Gram (+) Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus aureus ATCC 29213, MRS A ATCC 43300 với giá trị MIC 6000, 6000 3000 pg/mL Từ cao chiết ethyl acetate, luận văn phân lập họp chất luteolin cấu trúc họp chất phân tích dựa vào liệu phổ ^-NMR, 13C-NMR MS so sánh với tài liệu tham khảo Luteolin thể hoạt tính kháng oxy hóa thông qua khả bắt gốc tự DPPH thể giá trị IC50 = 52.75 ± 2.53 pg/mL tương đương với vitamin c Luteolin đồng thời có khả kháng chủng vi khuẩn Gram (+) E faecalis ATCC 29212, s aureus ATCC 29213, MRS A ATCC 43300 với kính vòng ức chế tương ứng 11, 11 13 cm cho giá trị MIC MRSA đạt 200 pg/mL 11 ABSTRACT This research was carried out to study the preliminary phytochemical, the optimisation of extraction process and the bioactivities of Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze leaves The results indicated that the leaves contained many valuable compounds including alkaloids, flavonoids, saponins and tannins All extracts from different solvent (n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water) showed significant antioxidant, and antibacterial activities, among those ethyl acetate extract showed the highest that activities Free radical scavenging activities according to DPPH and ABTS ' + assays of the extract showed the IC50 values as 70.13+ 2.2, 42.77 + 0.1 pg/mL, respectively In vitro anti-inflammatory activity of ethyl acetate extract was with the IC50 value of 11.11 + 0.5 mg/mL In addition, ethyl acetate extract was able to against all of the tested microorganisms, especially against Gram-positive bacteria such as Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus aureus ATCC 29213, MRS A ATCC 43300 with the MIC values of 6000, 6000 and 3000 pg/mL, respectively Luteolin was isolated The chemical structure of luteolin was determined by ^-NMR, 13CNMR spectroscopies Antioxidant and antibacterial activities of luteolin were evaluated Luteolin was against all tested Gram-positive bacteria, especially MRSA ATCC 43300 with the MIC value of 200 pg/mL The IC50 value of DPPH assays showed the result of 52.75 + 2.5 pg/mL iii LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Trần Minh Thục Vi, học viên cao học ngành Cơng nghệ Sinh học, khóa 2016 đợt 2, Khoa Kỹ thuật Hóa học, Trường đại học Bách khoa Thành phố Hồ Chí Minh, xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thực hiện, số liệu kết nghiên cứu thực hướng dẫn khoa học TS Lê Xuân Tiến Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm kết nghiên cứu luận văn tốt nghiệp Tp Hồ Chỉ Minh, ngày 07 tháng 07 năm 2019 Học viên thực IV MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .i TÓM TẮT LUẬN VĂN ii ABSTRACT iii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC BẢNG xi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .xiii MỞ ĐẦU CHƯƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Tacca 1.1.1 Phân bố chi Tacca 1.1.2 Thành phần hóa học lồi thuộc chi Tacca 1.1.3 Cơng dụng lồi thuộc chi Tacca 12 1.2 Cây huyền tinh (Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze) .13 1.2.1 Mô tả thực vật 13 1.2.2 Thành phần hóa học Tacca leontopetaloỉdes (L.) Kuntze 14 1.2.3 Công dụng Tacca leontopetaloỉdes (L.) Kuntze 14 1.2.4 Tình hình nghiên cứu Tacca Leontopetaloỉdes (L.) Kuntze 15 1.3 Mục tiêu nghiên cứu đề tài .18 1.4 Ỹ nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 18 CHƯƠNG : NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cưu 19 2.1 Nguyên liệu- hóa chất- thiết bị 20 V 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .20 2.1.2 Hóa chất 20 2.1.3 Thiết bị 20 2.1.4 Các chủng vi sinh vật thử nghiệm .20 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.2.1 Xác định sơ thành phần hóa thực vật 22 2.2.2 Chiết cao phân đoạn đánh giá hoạt tínhsinh học 23 2.2.3 Tách chiết hợp chất 25 2.2.4 Xác định tính chất hợp chất tách .26 2.3 Phương pháp nghiên cứu .26 2.3.1 Chuẩn bị dược liệu 26 2.3.2 Xác định độ ẩm 27 2.3.3 Xác định tro toàn phần 27 2.3.4 Xác định thành phần hóa thực vật .28 2.3.5 Phương pháp chiết .29 2.3.6 Phương pháp xác định khả kháng oxy hóa .29 2.3.6.1 Phương pháp xác định khả trung hòa gốc tự DPPH .30 2.3.6.2 Phương pháp xác định khả bắt gốc tự ABTS 32 2.3.7 Phương pháp xác định khả kháng vi sinh vật 34 2.3.7.1 Phương pháp khuếch tán thạch 35 2.3.7.2 Phương pháp pha loãng thạch 36 2.3.8 Phương pháp đánh giá khả kháng viêm 36 2.3.9 Phương pháp định lượng 38 2.3.9.1 Phương pháp định lượng flavonoid 38 VI 2.3.9.2 Phương pháp định lượng saponin theo oleanolic acid .40 2.3.9.3 Định lượng đường khử theo glucose 42 2.3.10 Phương pháp sắc ký 44 2.3.10.1 Sắc ký mỏng .44 2.3.10.2 Sắc ký cột 45 CHƯƠNG : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 46 3.1 Xác định sơ thành phần hóa thực vật: 46 3.1.1 Định danh: 46 3.1.2 Độ ẩm tro toàn phần dược liệu: .46 3.1.3 Chiết cao phân đoạn 48 3.1.4 Kết định tính thành phần hóa thực vật .49 3.2 Hoạt tính sinh học cao chiết huyền 50 3.2.1 Khả kháng oxy hóa 50 3.2.1.1 Khả trung hòa gốc tự DPPH 50 3.2.1.2 Khả trung hòa gốc tự ABTS'+ .50 3.2.2 Khả kháng khuẩn loại cao: 52 3.2.3 Khả kháng viêm cao ethyl acetate: 54 3.2.4 Kết định lượng hợp chất: 55 3.3 Tách chiết hợp chất: 55 3.3.1 Phân lập hợp chất cao EtOAc huyền tinh: 55 3.3.1.1 Kết phân tích sắc ký lớp mỏng (TLC): .55 3.3.1.2 Kết sắc ký cột thô: 57 3.3.1.3 Tinh phân đoạn 1.6: 58 3.3.2 Xác định cấu trúc phương pháp đo phổ: 62 vii 32 Ndouyang, c J., et al.,2015, Effect of Processing Method on the Antinutrient Content of Taccaleontopetaloides (L.) Kuntze Flour BritishJournalofAppliedScience&Technology 5(3):258-269 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 Aziz , s A., etal., 2015 Are (Linn.) o Kuntze Mini Tuber Growth Taccaleontopetaloides Affected by Media Composition and Tuber Size? JournalofTropicalCropScience (1): 19 Habila, J D., et al,2011 Comparative evaluation of phytochemicals, antioxidant and antimicrobial activity of four medicinal plants native to northern Nigeria AustralianJournalofBasicandAppliedSciences 5(5): p 537-543 Heywood, V H (Ed.), etal., 2007 Flowering plant families of the world FireflyBooks Ltd p.403 Hutchinson, J.,1967 Key to the families of flowering plants of the world Key to the familiesoffloweringplantsoftheworld Omojola, M 0,2013 Tacca starch: a review of its production, physicochemical properties, modification and industrial uses African journal of Food, Agriculture, Nutrition and Development 13(4): 7972-7984 Ciulei, I., 1982 Pratical manuals on the industrial utilization of medicinal and aromatic plants Part I Methodology for analysis of vegetable drugs University of Bucharest-Romania Jovanovic, s V., et al.,2000 Antioxidants in nutrition Annals of the New York Academy of Sciences 899(l):326-334 Shimamura, T., et al.,2014 Applicability of the DPPH Assay for evaluating the Antioxidant Capacity of Food Additives - Inter-laboratory Evaluation Study AnalyticalSciences 30: 717-721 Brand-Williams, w., et al., 1995 Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity LWT-FoodScienceandTechnology 28(l):5-30 Re, R., et al., 1999 Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay Freeradicalbiologyandmedicine 26(9-10): 1231- 1237 Krishnaiah, D., etal ,2011 A review of the antioxidant potential of medicinal plant species Foodandbioproductsprocessing 89(3): 217-233 Balouiri, M., et al.,2016 Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review JournalofPharmaceuticalAnalysis 6:1-79 Andrews, J.M., 2001 Determination of minimum inhibitory concentrations JournalofAntimicrobialChemotherapy 48(1):5-16 Chandra, s c., et al.,2012 Evaluation of in vitro anti-inflammatory activity of coffee against the denaturation of protein Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 2(1): S178S180 74 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 Hiai, s., etal., 1976 Color reaction of some sapogenins and saponins with vanillin and sulfuric acid PlantaMedica 29(02): 116-122 Miller, G L., 1959 Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar Analyticalchemistry 31(3):426-428 Zhang, L., 2006 Biosystematics and evolutionary ecology of Taccaceae (PhD Dissertation) Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences Wojdylo, A., et al, 2007 Antioxidant activity and phenolic compounds in 32 selected herbs Foodchemistry 105(3):940-949 Soobrattee, M A., etal, 2005 Phenolics as potential antioxidant therapeutic agents: mechanism and actions MutationResearch/FundamentalandMolecularMechanismsofMutagenesis 579(l-2):200-213 Leopoldini, M., et al., 2004 Antioxidant properties of phenolic compounds: Hatom versus electron transfer mechanism The Journal of Physical Chemistry A 108(22):4916-4922 Wright, J s., et al, 2001 Predicting the activity of phenolic antioxidants: theoretical method, analysis of substituent effects, and application to major families of antioxidants JournaloftheAmericanChemicalSociety 123(6): 1173-1183 Guardia, T., et al, 2001 Anti-inflammatory properties of plant flavonoids Effects of rutin, quercetin and hesperidin on adjuvant arthritis in rat II farmaco 56(9):683687 Park, Y., etal ,2007 *H and 13C-NMR data of hydroxyflavone derivatives Magnetic Resonanceinchemistry 45(8): p 674-679 Miean, K H., et al., 2001 Flavonoid (myricetin, quercetin, kaempferol, luteolin, and apigenin) content of edible tropical plants Journal of agricultural and food chemistry 49(6):3106-3112 Skerget, M., et al.,2005, Phenols, proanthocyanidins, flavones and flavonols in some plant materials and their antioxidant activities Food chemistry 89(2): p 191198 Kim, J H., et al.,2005, Luteolin prevents PDGF-BB-induced proliferation of vascular smooth muscle cells by inhibition of PDGF P-receptor phosphorylation Biochemicalpharmacology 69(12): p 1715-1721 Perez, G.,2001, Anti-inflammatory activity of compounds isolated from plants TheScientificWorldJournal 1: p 713-784 Lv, p c., et al ,2009, Synthesis and biological evaluation of novel luteolin derivatives as antibacterial agents European journal of medicinal chemistry 44(2): p 908914 Kumar, s., et al., 2013 Chemistry and biological activities of flavonoids: an overview TheScientificWorldJournal 2013(162750) 75 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 Nazari, Q A., et al.,2013, Protective effect of luteolin on an oxidative-stress model induced by microinjection of sodium nitroprusside in mice Journal of pharmacological sciences, p 13019FP Dang, V s., etal, 2018 Tacca khanhhoaensis vs Dang & Vuong (Taccaceae), a new species from southern Vietnam PhytoKeys 114:115-122 Igile, G O., et al, 1994 Flavonoids from Vernonia amygdalina and their antioxidant activities JournalofAgriculturalandFoodChemistry 42(ll):2445-2448 Rice-Evans, c A., et al, 1996, Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids Freeradicalbiologyandmedicine 20(7): p 933-956 Silva, M M., et al.,2002 Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids: a re-examination FreeRadicalResearch 36(11): p 1219-1227 Sato, Y., et al.,2000, Phytochemical flavones isolated from Scutellaria barbata and antibacterial activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus Journal of ethnopharmacology 72(3): p 483-488 Joung, D., et al.,2016, Potentiating activity of luteolin on membrane permeabilizing agent and ATPase inhibitor against methicillin-resistant Staphylococcus aureus Asian Pacificjournaloftropicalmedicine 9(1): p 19- 22 Tsuchiya, H., et al., 1996, Comparative study on the antibacterial activity of phytochemical flavanones against methicillin-resistant Staphylococcus aureus Journal of ethnopharmacology 50(1): p 27-34 Wang, Q., et al.,2010, Antibacterial activity and mechanism of luteolin on Staphylococcusaureus 50(9): p 1180-1184 Zhishen, J., et al., 1999, The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals Foodchemistry 64(4): p 555-559 Borokini, T I., et al.,2012, Phytochemical Screening of Tacca Leontopetaloides (L.) Kuntze Collected from Four Geographical Locations in Nigeria InternationalJournalof ModernBotany (4): p 97-102 Abdel-Aziz, M.E.,etal., 1990, Steroidal Sapogenins from Taccaleonpetaloides.PlantaMedica 56: p 218-221 76 Chuẩn bị ống nghiệm chứa loại dịch chiết, cô đến cắn sau hòa tan vào 2ml PHỤ LỤC methanol láy dịch Cho lànsơ lượt ống hóa nghiệm Phụ lục A.đểQuy trìnhthử phân tích bộvào thành phần thựccác vậtloại thuốc thử: - Ống 1: mẫu đối chứng A.l Quy trình tịnh tính thành phần hóa thực vật: - Ống 2: lmL FeCl3 5%/EtOH A.1.1 Định tính alkaloid: - Ống 3: lmL NaOH 10%/EtOH Chuẩn dịch chiết COO hexane, EtAOc, butanol nước Cho 10 ml dịch chiết vào - Ốngbị4:các lmL Pb(CH ) 10% 5: nghiệm đậm đến cắn Phần đượckim hòa tanĐun vào nhẹ 2-4 ml dung dịch H2SO4 - Ống 0.5mLvàHC1 đặc 3-5 cắn hạt Mg loại vài phút 1%/H20, lọc lấy dịch Tiến hành nhỏ 2-4 giọt loại thuốc thử vào ống nghiệm Các loại thuốc thử để định tính alkaloid gồm: thuốc thử Mayer, thuốc thử Dragendorff, thuốc thử Bouchardat Hình A2 Định tinhflavonoid cao EtOAC Kết cho thấy: - Hình Al Định tính alkaloid cao hexane Ống 1: mẫu đối chứng - Ống Trong đó:2: mẫu thử chuyển sang màu xanh đen - Ống 3: mẫu thử màu đậm so với mẫu đối chứng - Ông 1: Mầu đối chứng - Ống 4: xuất kết tủa - Ông 2: Mầu thử với thuốc thử Mayer, thấy xuất kết tủa trắng - Ống 5: mẫu thử có ánh hồng - Ông 3: Mầu thử với thuốc thử Dragendorff., thấy xuất kết tủa đỏ cam A.1.3 Định tính saponin: - Ơng 4: Mầu thử với thuốc thử Bouchardat, thấy xuất kết tủa nâu Tạo bọt đặc trưng saponin, nên phương pháp xác đỉnh A.1.2 tính flavonoid: hỉệnQuy diệntrình định saponin Chuẩn bị ống nghiệm chứa loại dịch chiết, đến cắn sau hòađịnh tan tính vào flavoid 5ml methanol lấyứng dịchCyanidin thử DịchKet vàotính ốngdonghiệm Quyđó trĩnh dựa trênđề phản cho dương flavonoid thêm 5mL nước Lắc mạnh phút theo chiều dọc nghiệm để có chứa nhân y-benzopyron 77 78 yên Quan sát cột bọt bong bóng ống nghiệm Nếu cột bọt bền vững, chứng tỏ có saponin mẫu thử A.L4 Định tính anthraquinons: Anthraquỉnons nhận diện bed phản ứng Bomtrager 5mL dịch chiết cho vào ống nghiệm Thêm vào mẫỉ ống mL KOH 10% sau lắc Quan sát lớp KOH bên dưới, thấy chuyển sang đỏ xanh tím chứng tỏ mẫu thử có anthraquỉnons dạng tự A I.5 Định tính tannin: Cho loại dịch chiết vào ống nghiệm, ống lmL Mỗi dịch chiết thực với ống nghiệm - Ông 1: thêm 2-3 giọt FeCl3 5% lắc Nếu dung dịch chuyển sang màu xanh đến xanh đen, chứng tỏ dung dịch cố polyphenol - Ống 2: thêm giọt gelatine lắc Nếu thấy xuất kết tủa, chứng tỏ mẫu thử cố tannin HìnhA3* Định tính tannin cửa cao nước - Ống 1: mẫu đối chứng - Ông 2: thử với dung dịch FeCl3 5% thấy chuyển sang màu xanh đen - Ống 3: mẫu thử với gelatin 5%, thấy xuất kết tủa bơng trắng 79 A 1.6 Định tính acid hữu cơ: Cho loại dịch chiết vào ống nghiệm, ống lmL đến cắn Hòa cắn vào 2mL ethanol 96% lọc lấy dịch Thêm vào ống thử bột Na2C03 Nếu thấy có bọt khí bay lên chứng tỏ mẫu thử có acid hữu A.l Định tính đường khử: Cho loại dịch chiết vào ống nghiệm, ống nghiệm lmL đến cắn Hòa tan vào 2mL nước lọc lấy dịch Thêm 0.5mL thuốc thử Fehling A 0.5mL thuốc thử Felhling B Đun cách thủy 10 phút, thấy xuất kết tủa đỏ gạch chứng tỏ mẫu thử có đường khử Hình A4 Định tỉnh đường khử cao hexane - Ống 1: Mau đối chứng Ông 2: Mầu thử với thuốc thử, thấy xuất kết tủa đỏ gạch Hình A5 Định tỉnh đường khử cao EtOAc - Ông 1: Mầu đối chứng Ông 2: Mầu thử với thuốc thử, thấy xuất kết tủa đỏ gạch 80 h 2.5g KI 5g H20 10g Hình A6 Định tỉnh đường khửu cao n-butanol - Ống 1: Mau đối chứng - Ống 2: Mau thử với thuốc thử, thấy xuất kết tủa đỏ gạch Hình A7 Định tỉnh đường khử cao nước - Ông 1: Mầu đối chứng Ông 2: Mầu thử với thuốc thử, thấy xuất kết tủa đỏ gạch A.2 Các loại thuốc thử Thuốc thử Boucharat: Dung dịch A Bi(N03)2 85g CH3COOH 10 mL H20 10 mL KI 8g H20 20 mL Dung dịch B HgCl2 6.8g KI 2.5g H20 500g Pha dung dịch A vào dung dịch B Khi sử dụng, thêm 20 mL CH 3COOH 10 mL H20 vào 20 ml hỗn hợp A B Thuốc thử Mayer (CH3C0)20 6.8g H2SO4 đậm đặc ml Thuốc thử Liberman-Buchard Q1SO4 1.73g H20 25 mL NaOH 2.5g Fehling A Fehling B Thuốc thử Fehling KnaC4H406.4H20 H20 8.5g 25 mL 82 Nồng độ (Hg/mL) Lần Lần ODMẪU KHÔNG' 0.690 Lần ODMẪU KHÔNG' 0.688 50 0.412 0.113 57.10 0.409 0.119 57.97 0.417 0.142 60.37 30 0.613 0.123 29.70 0.611 0.134 30.87 0.622 0.136 29.97 20 0.648 0.125 24.96 0.662 0.137 23.91 0.671 0.134 22.62 18 0.696 0.129 18.65 0.683 0.124 18.99 0.703 0.138 18.59 14 0.704 0.121 16.36 0.711 0.132 16.09 0.721 0.136 15.71 10 0.718 0.101 11.48 0.720 0.113 12.03 0.747 0.145 13.26 LÀ HH ODTRẲ ©O ODi NG 1% OD2 44.884 1% NG OD3 44.168 IQOTB Nồng độ (Hg/mL) ODTRẲ ODMẪU KHÔNG' 0.754 ODTRẲ NG 1% 43.237 44.096 ± 0.826 Lần Lần Lần ODmẫư KHÔNG* 0.360 ODmẫư KHÔNG* 0.362 ODmẫư KHỎNG! 0.362 OŨ! ODjjan g 1000 0.250 0.160 75.00 0.252 900 0.280 0.163 67.48 0.278 800 0.312 0.164 Bảng 58.89 0.167 0.317 B2.0.321 Ket bắt gốc tự57.46 DPPH cao0.163 hexane57.46 600 0.356 0.172 1% OD2 48.89 0.365 ODjjan g OD3 ODjjan g 0.158 74.03 0.250 0.160 75.14 0.155 66.04 0.279 0.161 67.53 1% 0.169 45.86 0.358 1% 0.172 48.62 83 Nồng độ (Hg/mL) Lần ODMẪU KHÔNG' 0.360 ODi ODTTẲ 0.352 0.142 Òo LÀ HH 500 Lần NG 1% 41.67 ODMẪU KHÔNG' 0.362 ODTRẲ OD2 630.51 1% NG 0.353 0.150 43.93 ODMẪU KHÔNG' 0.362 OD3 ODTRẲ 0.360 0.151 638.18 NG 1% 42.27 633.04 633.91 +3.908 IQotb Nồng độ (Hg/mL) Lần Lần Lần Lần ODMẪUKHÔNG' 0.336 ODMẪU KHÔNG' 0.341 ODMLUKHÔNGL 0.338 ODI ODTRẲ NG 1% OD2 1% ODFRẲ NG OD3 ODFRẲ NG 1% Bảng B3 Ket bat gốc tự DPPH cao ethyl acetate 0.067 97.92 0.075 0.060 95.60 0.080 0.066 95.86 150 0.074 120 0.110 0.045 80.65 0.117 0.055 81.82 0.093 0.042 83.43 90 0.173 0.044 61.73 0.183 0.050 61.03 0.169 0.044 63.06 60 0.225 0.047 47.02 0.226 0.036 44.28 0.225 0.047 47.34 50 0.248 0.025 33.63 0.253 0.030 34.60 0.240 0.028 37.28 IC50 IC50TB 70.93 71.85 67.61 70.13 + 2.230 84 LẦN LẦN LẦN ODMLUkhông! 0.319 ODMLN không! 0.317 NỒNG độ (HG/ML) ODttẳng 750 0.030 0.014 94.98 0.029 0.012 500 0.179 0.071 66.14 0.174 350 0.217 0.060 300 0.231 200 0.266 ©LÀoHH ODI 0.320 OD3 ODtrẳng 94.64 0.030 0.012 94.38 0.075 68.77 0.171 0.068 67.81 50.78 0.216 0.060 50.79 0.210 0.069 55.94 0.052 43.89 0.237 0.061 44.48 0.232 0.055 44.69 0.053 33.09 0.264 0.055 34.11 0.253 0.051 36.89 1% OD2 ODmlnkhông: 350.72 1% ODtrẳng 343.04 1% 325.08 339.61 ± 13.159 IQotb LẦN LẦN LẦN ODMẪU KHÔNG' 0.508 ODMẪU KHÔNG' 0.513 ODMẪU KHÔNG' 0.506 NỒNG ĐỘ (|IG/ML) OŨ! ODTRẲ 1000 0.251 0.043 900 0.265 0.043 56.30 0.262 0.042 57.12 0.259 0.057 60.08 650 0.298 0.038 50.59 0.288 0.044 52.44 0.293 0.049 51.78 500 0.317 0.052 47.83 0.314 0.050 48.54 0.327 0.045 44.27 400 0.347 0.060 43.50 0.351 0.062 43.66 0.358 0.074 43.87 NG 1% OD2 ODTRẲ NG 1% OD3 ODJJA NG 1% 59.02B5.0.250 0.047 0.241 0.056 Bảng Kết bẳt gốc 60.38 tự DPPH cao nước 63.39 85 Lần Lần Lần O Dmẫu k h ôn g' 0.508 O Dmẫu kh ôn g' 513 O Dmẫu kh ôn g' 506 O D i O Dtr án g 1% O D O Dt rẳn g 1% O D O Dtr ẳn g 1% Nồng độ ÒO LÀ HH (Hg/mL) IC50TB 629.84 595 68 612.77 612.76+17.08 86 LẦN NỒNG ĐỘ LẦN ODMẪU KHÔNG' 0.448 ODMẪUKHÔNG: 0.432 ODI 1% OD2 1% OD3 1% 80 0.004 99.097 0.003 99.330 0.004 99.074 60 0.081 81.716 0.083 81.473 0.083 80.787 40 0.145 67.269 0.141 68.527 0.142 67.129 20 0.230 48.081 0.247 44.867 0.251 41.898 10 0.310 30.022 0.316 29.464 0.311 28.009 LÀ HH ©O (HG/ML) ODMẪU KHƠNG' 0.443 LẦN 25.792 26.777 IC50TB 27.0453 ± 1.407 LẦN NỒNG ĐỘ (| IG/ML) 28.567 LẦN ODMLU KHÔNG' 0.442 LẦN ODMẪƯ KHƠNG* 0.451 ODmIukhơng: 0.443 OD2 1% 850 0.130 70.588 0.131 70.953 0.121 72.686 800 0.151 65.837 0.157 65.188 0.152 65.688 750 0.218 700 0.231 47.673 0.238 47.324 0.228 48.601 600 0.293 33.710 0.304 32.594 0.284 35.892 IC50 IC50TB CN 1% OŨ! 1% Bảng C2 Kết0.218 bẳt gốc51.663 tự ABTS cao hexane 50.679 0.223 49.661 715.413 717.164 709.472 714.016 + 4.032 87 LẦN NỒNG ĐỘ LẦN ODMẪU KHÔNG' 0.449 ODMẪU KHÔNG' 0.433 ODI 1% OD2 1% OD3 1% 70 0.064 85.586 0.07 84.410 0.071 83.603 60 0.097 78.153 0.099 77.951 0.100 76.905 50 0.174 60.811 0.166 63.029 0.156 63.972 40 0.246 44.595 0.256 42.984 0.251 42.032 30 0.300 32.211 0.304 32.292 0.293 32.227 LÀ HH ©O (HG/ML) ODMẪU KHƠNG' 0.444 LẦN 42.679 42.719 IC50TB 42.773 + 0.130 LÂN NỒNG ĐỘ (HG/INL) 42.921 ODMLU KHÔNG: 0.447 LÂN LÂN ODMIUKHÔNG: 0.443 ODMLU KHÔNG: 0.434 OD2 1% 350 0.095 78.747 0.086 80.587 0.077 82.258 300 0.163 63.535 0.143 67.720 0.144 66.820 250 0.197 200 0.283 36.689 0.274 38.149 0.271 37.558 150 0.333 25.292 0.330 25.391 0.328 24.433 IC50 IC50TB M 1% ODI 1% Bảng C4 Ket0.199 bẳt gốc55.079 tự ABTS cao butanol 55.928 0.191 55.990 242.358 237.91 238.203 239.49 + 2.488 88 ... tháng, năm sinh: 15/08/1992 Nơi sinh: Phú Yên Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Tên đề tài: NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ HUYỀN TINH ỢACCA LEONTOPETALOIDES (L.) KUNTZE). .. huyền tinh bị bỏ tận dụng làm compost cho mùa huyền tinh năm sau Do đó, luận văn Nghiên cứu hoạt tính sinh học thành phần hóa học huyền tinh (Tacca leontopetaloides (L.) Kuntze) nhằm góp phần. .. nội dung: Nghiên cứu thành phần hóa thực vật có huyền tinh đánh giá hoạt tính sinh học cao chiết Phân lập hợp chất từ cao chiết cho hoạt tính cao Ngày giao nhiệm vụ : 6/2018 Ngày hoàn thành nhiệm