NGHIÊN cứu đặc điểm các CHỈ số tế bào máu NGOẠI VI ở NGƯỜI HIẾN máu TÌNH NGUYỆN tại VIỆN HUYẾT học TRUYỀN máu TRUNG ƯƠNG

BFU-E : Burst forming unit-Erythrocyte đơn vị tạo quầng hồng cầuCFU-E : Colony forming unit-Erythrocyte đơn vị tạo cụm hồng cầuCFU-G : Colony-forming units – Granulocyte tế bào gốc định

BÙI THỊ THU

NGHI£N CøU §ÆC §IÓM C¸C CHØ Sè TÕ BµO M¸U NGO¹I VI

ë NG¦êI HIÕN M¸U T×NH NGUYÖN T¹I VIÖN HUYÕT HäC - TRUYÒN M¸U TRUNG ¦¥NG

BÙI THỊ THU

NGHI£N CøU §ÆC §IÓM C¸C CHØ Sè TÕ BµO M¸U NGO¹I VI

ë NG¦êI HIÕN M¸U T×NH NGUYÖN T¹I VIÖN HUYÕT HäC - TRUYÒN M¸U TRUNG ¦¥NG

Nội cùng toàn thể các thầy, cô Bộ môn Xét Nghiệm Huyết học, Khoa Kỹ thuật yhọc Trường Đại học Y Hà Nội đã tận tình giảng dạy kiến thức cho tôi trong suốtquá trình học tập làm nền tảng vững chắc để tôi hoàn thành khóa luận.

Đảng ủy, ban lãnh đạo Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương, đặcbiệt là các thầy cô, anh chị nhân viên tại Khoa Tế bào Tổ chức học đã tạo mọiđiều kiện cho tôi học tập, thực hành, tích lũy kiến thức lâm sàng và thu thập

số liệu hoàn thành khóa luận

ThS Phạm Hải Yến - Giảng viên bộ môn Huyết học - Truyền máu,

Trường Đại học Y Hà Nội, người Cô hướng dẫn đã tận tình dìu dắt, giúp đỡ,luôn nhắc nhở, động viên khích lệ, chỉ bảo tỉ mỉ, tận tình, định hướng đường

đi, cách thức thực hiện cũng như giảng dạy cung cấp cho tôi những kiến thứctrong lĩnh vực nghiên cứu để tôi tự tin hoàn thành khóa luận

Nhân dịp này, tôi cũng xin được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắctới bố, mẹ, các anh, các chị, các em, bạn bè và những người thân trong gia đình

đã dành tình yêu thương cho tôi, luôn luôn động viên, cổ vũ, khích lệ là nguồnsức mạnh to lớn để thôi thúc tôi phấn đấu và trưởng thành trên con đường họctập và nghiên cứu

Xin trân trọng cảm ơn!

Hà Nội ngày 15 tháng 5 năm 2019

Sinh viên

Bùi Thị ThuLỜI CAM ĐOAN

1 Đây là luận văn do bản thân tôi trực tiếp thực hiện dưới sự hướng dẫncủa ThS Phạm Hải Yến.

2 Nghiên cứu này không trùng lặp với bất kỳ nghiên cứu nào khác đãđược công bố tại Việt Nam

3 Các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn chính xác,trung thực và khách quan, đã được xác nhận và chấp nhận của cơ sở nơinghiên cứu cho phép lấy số liệu và xác nhận

Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về những cam kết này

Hà Nội, ngày 15 tháng 5 năm 2019

Người viết cam đoan

Bùi Thị Thu

BFU-E : Burst forming unit-Erythrocyte (đơn vị tạo quầng hồng cầu)CFU-E : Colony forming unit-Erythrocyte (đơn vị tạo cụm hồng cầu)CFU-G : Colony-forming units – Granulocyte (tế bào gốc định hướng

dòng bạch cầu hạt) CFU-GEMM : Colony-forming units generating granulocytes, erythroblasts,

macrophages and megakaryiocytes (tế bào gốc định hướng dòng tủy)CFU-L : Colony-forming units lympho

(tế bào gốc định hướng dòng lympho) CFU- Meg : Colony-forming units – Megakaryoblast

(tế bào gốc định hướng dòng tiểu cầu) CTBC : Công thức bạch cầu

HCT : Hematocrit (Thể tích khối hồng cầu)

HGB : Hemoglobin (Nồng độ huyết sắc tố)

HMTN : Hiến máu tình nguyện

MCH : Mean Corpuscular Hemoglobin

(Lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu)MCHC : Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration

(Nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu)MCV : Mean Corpuscular Volume (Thể tích trung bình hồng cầu)NEUT : Neutrophil (Bạch cầu trung tính)

PLT : Platelet (Tiểu cầu)

RBC : Red Blood cell (Hồng cầu)

RDW : Red cell Distribution With (Dải phân bố kích thước hồng cầu)WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế thế giới)

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Quá trình sinh máu 2

1.1.1 Giai đoạn tế bào gốc 2

1.1.2 Giai đoạn tế bào tăng sinh và biệt hóa 3

1.1.3 Giai đoạn tế bào thực hiện chức năng 4

1.2 Nguyên lý xét nghiệm tế bào máu ngoại vi 9

1.3 Các chỉ số tế bào máu ngoại vi 10

1.3.1 Chỉ số dòng hồng cầu 10

1.3.2 Chỉ số dòng bạch cầu 12

1.3.3 Chỉ số dòng tiểu cầu 13

1.4 Tình hình nghiên cứu các chỉ số tế bào máu ngoại vi của người HMTN 13

Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.1 Đối tượng nghiên cứu 16

2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 16

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 17

2.2 Phương pháp nghiên cứu 18

2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 18

2.2.2 Các chỉ số trong nghiên cứu 18

2.2.3 Quy trình nghiên cứu 20

2.2.4 Xử lý và phân tích số liệu 20

2.3 Đạo đức trong nghiên cứu 21

3.1.1 Phân bố theo giới 22

3.1.2 Phân bố theo tuổi 22

3.2 Đặc điểm các chỉ số tế bào máu ngoại vi của người HMTN 24

3.2.1 Đặc điểm các chỉ số dòng hồng cầu của người HMTN 24

3.2.2 Đặc điểm các chỉ số dòng bạch cầu của người HMTN 26

3.2.3 Đặc điểm chỉ số dòng tiểu cầu của người HMTN 29

Chương 4: BÀN LUẬN 30

4.1 Đặc điểm người HMTN trong nghiên cứu 30

4.1.1 Phân bố theo giới 30

4.1.2 Phân bố theo tuổi 31

4.2 Đặc điểm các chỉ số tế bào máu ngoại vi của người HMTN 33

4.2.1 Đặc điểm các chỉ số dòng hồng cầu của người HMTN 33

4.2.2 Đặc điểm các chỉ số dòng bạch cầu của người HMTN 36

4.2.3 Đặc điểm chỉ số dòng tiểu cầu của người HMTN 39

KẾT LUẬN 41

KIẾN NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO

Bảng 1.1: Công thức bạch cầu ở người trưởng thành 13

Bảng 2.1: Giá trị bình thường của các chỉ số trong nghiên cứu 19

Bảng 3.1: Đặc điểm người HMTN theo tuổi 22

Bảng 3.2: Đặc điểm các chỉ số RBC, HGB, HCT của người HMTN 24

Bảng 3.3: Đặc điểm các chỉ số MCV, MCH, MCHC, RDW-CV của người HMTN 25

Bảng 3.4: Đặc điểm số lượng bạch cầu của người HMTN 26

Bảng 3.5: Đặc điểm CTBC của người HMTN 27

Bảng 3.6: Đặc điểm CTBC của người HMTN .28

Bảng 3.7: Đặc điểm chỉ số dòng tiểu cầu của người HMTN 29

Bảng 4.1: So sánh các chỉ số RBC, HGB, HCT của người HMTN với các nghiên cứu 34

Bảng 4.2: So sánh các chỉ số MCV, MCH, MCHC của người HMTN với các nghiên cứu 35

Bảng 4.3: So sánh CTBC (%) của người HMTN với các nghiên cứu 38

Bảng 4.4: So sánh CTBC (G/L) của người HMTN với các nghiên cứu 38

Bảng 4.5: So sánh chỉ số PLT của người HMTN với các nghiên cứu 39

Biểu đồ 3.1: Phân bố người HMTN theo giới 22 Biểu đồ 3.2: Đặc điểm phân bố theo tuổi của người HMTN 23

ĐẶT VẤN ĐỀ

Máu là một tổ chức lỏng, màu đỏ, lưu thông trong hệ tuần hoàn Máu cóvai trò quan trọng đặc biệt đối với sự sống và sức khỏe con người Máu và cácchế phẩm máu là một dược phẩm quý giá chưa có gì thay thế được Hằngngày, nhu cầu máu cho cấp cứu và điều trị là rất lớn, trong nhiều lĩnh vựcnhư: mất máu sau chấn thương, điều trị các bệnh lý đặc biệt là bệnh về huyếthọc và dự phòng cho các thảm họa an ninh, quốc phòng [1] Theo Tổ chức Y

tế thế giới WHO, mỗi năm, mỗi quốc gia cần 2% dân số hiến máu mới đảmbảo nhu cầu về máu cho điều trị Tình trạng thiếu máu diễn ra phổ biến ở hầuhết các nước trên thế giới, trong đó có Việt Nam [2]

Theo số liệu thống kê của ngân hàng máu Việt Nam, lượng máu tiếpnhận ước tính cả nước trong năm 2018 được khoảng 1,4 triệu đơn vị máu, chỉđáp ứng trên 60% nhu cầu máu cho cấp cứu và điều trị [3] Vậy nên, tuyêntruyền và xây dựng nguồn người hiến máu tình nguyện (HMTN) thườngxuyên, chất lượng là nhiệm vụ trọng tâm hàng đầu của tất cả các ngân hàngmáu Do đó, các thông tin về kết quả xét nghiệm tế bào máu ngoại vi củangười HMTN là rất cần thiết Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương làmột trong những đơn vị hàng đầu của cả nước trong tuyên truyền HMTN vàcung cấp các chế phẩm máu Nhằm bước đầu đánh giá các chỉ số tế bào máungoại vi của người HMTN chúng tôi tiến hành đề tài nghiên cứu:

“Nghiên cứu đặc điểm các chỉ số tế bào máu ngoại vi ở người hiến máu tình nguyện tại Viện Huyết học- Truyền máu Trung ương” với mục tiêu:

1 Mô tả đặc điểm một số chỉ số tế bào máu ngoại vi ở người HMTN tại Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương trong giai đoạn từ ngày 1/11/2018 đến ngày 31/1/2019.

Chương 1 TỔNG QUAN1.1 Quá trình sinh máu

Sinh máu là sự sinh sản của các tế bào máu tiền thân (được duy trì nhờ tếbào gốc sinh máu), sau đó biệt hóa để trở thành các dòng tế bào máu vàtrưởng thành để tạo nên các tế bào lưu hành trong máu ngoại vi Có thể nóiquá trình sinh máu ở người là đỉnh cao của sự tiến hóa, đạt tới mức hoàn thiệnnhất và có những cơ chế điều hòa tinh tế nhất định [4], [5]

Quá trình sinh máu được chia thành ba giai đoạn kế tiếp nhau:

- Giai đoạn tế bào gốc

- Giai đoạn tế bào tăng sinh và trưởng thành

- Giai đoạn tế bào thực hiện chức năng

1.1.1 Giai đoạn tế bào gốc

Tế bào gốc được sinh ra và tồn tại chủ yếu ở tủy xương luôn được duy trì

ở mức độ vừa phải chiếm 0,001-0,05% và chỉ khi cần thiết mới tăng sinh vàbiệt hóa để tạo ra một dòng tế bào tùy theo nhu cầu của cơ thể Cũng có thểthấy tế bào gốc ở hạch và lách nhưng đó là do từ máu ngoại vi di cư đến [6],[7] Dựa theo sự phát triển và biệt hóa, các tế bào gốc được chia thành ba loạichính: Tế bào gốc vạn năng; Tế bào gốc định hướng theo dòng gồm địnhhướng dòng tủy (CFU-GEMM) hay định hướng dòng lympho (CFU-L); Tếbào gốc tiền thân đơn dòng như: dòng hồng cầu (BFU-E, CFU-E), dòng bạchcầu hạt (CFU-G), bạch cầu đoạn ưa acid (CFU-Eo), bạch cầu đoạn ưa base(CFU-Ba), dòng lympho B và T (CFU-B và CFU-T) và tiểu cầu (CFU - Meg)[8], [9]

1.1.2 Giai đoạn tế bào tăng sinh và biệt hóa

Trong giai đoạn này các tế bào có đặc điểm tăng sinh để "tăng lên về mặt

số lượng bằng cách phân chia nguyên nhiễm và biệt hoá để "trưởng thành vềmặt chất lượng Giai đoạn này diễn ra trong tủy xương

Với dòng hồng cầu, tế bào gốc dòng hồng cầu (CFU-E) tạo ra nguyên

tiền hồng cầu Trong quá trình trưởng thành của dòng hồng cầu kích thước tế

bào giảm dần, hàm lượng huyết sắc tố tăng, tỷ lệ nhân/bào tương giảm dần,nhân tế bào dần bị đông đặc và bị đẩy ra ngoài theo tuần tự: Một nguyên tiềnhồng cầu (Proerythroblast) sinh ra hai nguyên hồng cầu ưa base I(Erythroblast basophil) rồi tạo nên bốn nguyên hồng cầu ưa base II Mộtnguyên hồng cầu ưa base II sinh ra hai nguyên hồng cầu đa sắc (Erythroblastpolycromatophil) Nguyên hồng cầu ưa acid (Erythroblast acidophil) được tạo

ra do một nguyên hồng cầu đa sắc nhân đôi Nguyên hồng cầu ưa acid thoátnhân tạo nên hồng cầu lưới Hồng cầu lưới và hồng cầu trưởng thành đượctủy xương giải phóng vào máu ngoại vi [10]

Với dòng bạch cầu, bạch cầu hạt được sinh ra từ tế bào gốc tiền thân làCFU-G tạo nên tế bào đầu dòng là nguyên tủy bào (myeloblast) Từ nguyêntủy bào sinh ra hai tiền tủy bào (promyelocyte) Sau đó, tiền tủy bào phân chiathành tủy bào (myelocyte) Tủy bào sẽ phân chia thành hậu tủy bào(metamyelocyte) Hậu tủy bào biệt hóa thành bạch cầu đũa Bạch cầu đũa làgiai đoạn cuối cùng trước khi tế bào thực sự trưởng thành bạch cầu đoạn [11].Dòng bạch cầu lympho được sinh ra từ tiền thân là CFU-L Sau đóchúng phân chia thành hai nhóm chính: tế bào nguồn B và tế bào nguồn T Tếbào nguồn T và B tiếp tục biệt hoá thành lympho T (quá trình phát triển vàtrưởng thành tại tuyến ức) và lympho B (quá trình phát triển và trưởng thànhtại lách và tủy xương) Các giai đoạn trưởng thành của dòng lympho gồm:

nguyên bào lympho (lymphoblast), tiền lympho (prolymphocyte) và lymphotrưởng thành (lymphocyte) [12].

Dòng bạch cầu mono xuất phát từ tế bào gốc định hướng dòng mono(CFC-M) Quá trình biệt hóa bạch cầu mono qua các giai đoạn: nguyên bàomono (monoblast), tiền mono (promonocyte) và bạch cầu mono trưởng thành(monocyte) [12]

Với dòng tiểu cầu, CFU-Meg phát triển thành tế bào tiền thân đầu dòngtiểu cầu là nguyên mẫu tiểu cầu (megakaryoblast), tiếp theo là mẫu tiểu ưa baserồi đến mẫu tiểu cầu có hạt chưa sinh tiểu cầu và mẫu tiểu cầu có hạt đang sinhtiểu cầu Mẫu tiểu cầu có hạt đang sinh tiểu cầu sẽ sinh ra tiểu cầu Trung bìnhmột mẫu tiểu cầu sẽ phóng thích ra khoảng 3000-4000 tiểu cầu [13]

1.1.3 Giai đoạn tế bào thực hiện chức năng

Các tế bào sau khi biệt hóa và trưởng thành thì có mặt ở máu ngoại vi,

cơ quan dự trữ (xoang, gan, lách), và cả trong tủy xương và hạch bạch huyết

để thực hiện các chức năng bảo vệ cơ thể

Hồng cầu trưởng thành lưu hành trong máu ngoại vi là tế bào khôngnhân, rất ít bào quan, hình đĩa lõm hai mặt, đường kính khoảng 7-8 µm, dày1-3 µm, dày không quá 1 µm ở trung tâm Trên tiêu bản nhuộm giemsa hồngcầu có màu hồng, khoảng 1/3 giữa tế bào nhạt màu hơn [14] Hồng cầu gồmnhiều thành phần khác nhau, trong đó, thành phần chính của hồng cầu làhemoglobin chiếm 28% hồng cầu Hemoglobin quy định chức năng của hồngcầu Hemoglobin kết hợp với oxy ở phổi ở phần Fe2+ của heme tạo thànhoxyhemoglobin (HbO2), vận chuyển đến mô giải phóng O2 cho tế bào Tại mô,hemoglobin kết hợp với carbonic tạo thành carbohemoglobin (HbCO2) sau đóphân ly ở phổi nhờ vậy mà CO2 được vận chuyển ra ngoài tế bào Đời sốnghồng cầu khoảng 120 ngày Mỗi giây có khoảng 2.5 triệu hồng cầu bị loại

khỏi tuần hoàn Để thay thế hồng cầu già cỗi, mỗi ngày tủy xương sản xuất rakhoảng 200 tỷ hồng cầu mới (hồng cầu lưới) Bình thường, tốc độ phá hủy vàtốc độ tạo hồng cầu xấp xỉ bằng nhau giữ cho số lượng hồng cầu trong máungoại vi luôn được hằng định [15].

Bạch cầu trong máu ngoại vi là các tế bào có nhân, không bắt màu thuốcnhuộm thông thường, có chức năng chủ yếu là bảo vệ cơ thể chống lại các tácnhân gây bệnh xâm nhập từ bên ngoài cũng như bên trong cơ thể Dựa vàokích thước tế bào, hình dáng nhân và cách bắt màu thuốc nhuộm của các hạttrong bào tương (thuốc nhuộm thường sử dụng là Giemsa), người ta đã xácđịnh năm loại bạch cầu ở máu ngoại vi: Bạch cầu đoạn trung tính, bạch cầuđoạn ưa acid, bạch cầu đoạn ưa base, bạch cầu lympho và bạch cầu mono

 Bạch cầu đoạn trung tính: Trên tiêu bản nhuộm Giemsa, bạch cầu đoạntrung tính có 2-5 đoạn, giữa các đoạn có eo thắt, bào tương có nhiều hạt nhỏbắt màu hồng tím, kích thước 10-16 µm Chức năng của bạch cầu trung tính làhàng rào bảo vệ của cơ thể, có khả năng vận động, ẩm bảo và thực bào rất tíchcực chủ yếu là các vi sinh vật nhất là vi khuẩn Đời sống của bạch cầu đoạntrung tính kéo dài khoảng 7 đến 9 ngày (kể từ khi biệt hóa từ nguyên tủy bàođến khi bị loại khỏi cơ thể) Bạch cầu này chỉ lưu hành ở máu ngoại vi trongkhoảng 7 giờ trước khi đi vào các mô thực hiện chức năng và chết đi sau vàigiờ [16],[ 17]

 Bạch cầu đoạn ưa acid: Trên tiêu bản nhuộm Giemsa, bạch cầu đoạn ưaacid nhân chia thành 2 đoạn, giữa các phần liên kết nhau bằng phần liên kếtnhỏ (hình gọng kính), bào tương chứa các hạt bắt màu vàng cam, kích thước13-18 µm Chức năng của bạch cầu đoạn ưa acid là tấn công và giải phóng ranhiều chất như men thuỷ phân từ các hạt của bào tương, oxy nguyên tử, cácpeptid, có tác dụng tiêu diệt ký sinh trùng mạnh đặc biệt là các loại sán máng

(schistosomum) hoặc giun xoắn (trichinella) Bạch cầu đoạn ưa acid còn tập

trung ở nơi có phản ứng dị ứng xảy ra (tiểu phế quản, da, ) chúng tiết ra cácenzym để chống lại tác dụng của histamine và các chất trung gian khác trongphản ứng dị ứng Ngoài ra, chúng còn có khả năng thực bào các phức hợpkháng nguyên - kháng thể Vì vậy, chúng ngăn cản không cho quá trình viêmlan rộng rãi Bạch cầu đoạn ưa acid được biệt hóa và trưởng thành từ tủyxương, sau 1 đến 8 giờ lưu hành ở máu ngoại vi, sau đó đi vào các mô và tồntại chủ yếu ở dưới da, niêm mạc đường hô hấp và đường tiêu hóa Thời giantồn tại trong các mô của bạch cầu này dài hơn so với bạch cầu trung tính [18]

 Bạch cầu đoạn ưa base: Trên tiêu bản nhuộm Giemsa, bào tương bạchcầu đoạn ưa base chứa các hạt bắt màu xanh tím và che phủ lên nhân, kíchthước 12-16 µm Chức năng của bạch cầu đoạn ưa base phóng thích heparinngăn cản quá trình đông máu và thúc đẩy sự vận chuyển mỡ từ máu sau bữa

ăn nhiều chất béo Ngoài ra, bạch cầu đoạn ưa base và dưỡng bào (tế bàomast) đóng vai trò quan trọng trong phản ứng dị ứng vì kháng thể IgE có khảnăng gắn vào màng dưỡng bào và bạch cầu đoạn ưa base Khi các khángnguyên lạ đặc hiệu phản ứng với kháng thể làm cho các tế bào này vỡ ra giảiphóng ra một số chất hóa học trung gian tại một số tổ chức viêmnhư: histamin, bradykinin, serotonin, enzym thuỷ phân lysosom và nhiều chấtkhác gây nên hiện tượng dị ứng Bạch cầu đoạn ưa base được trưởng thành

và loại khỏi cơ thể trong thời gian ngắn tương tự như bạch cầu đoạn ưa acid.Đôi khi có thể quan sát thấy các bạch cầu đoạn ưa base tập trung ở các vùngtổn thương do phản ứng dị ứng [19]

 Bạch cầu lympho trưởng thành gồm hai loại: lympho lớn có kích thước17-20 µm và lympho nhỏ có kích thước 6-9 µm Tỉ lệ nhân/nguyên sinh chấtkhoảng 3/1 đến 2/1 Nhân tròn hoặc bầu dục, không có hạt nhân Nguyên sinhchất màu xanh nhạt và mỏng đôi khi có vài hạt ưa azua Dựa vào các dấu ấn

miễn dịch và chức năng, bạch cầu lympho được chia thành hai nhóm chính làlympho B và lympho T, ngoài ra còn có tế bào diệt tự nhiên NK (Naturalkiller cell) Bạch cầu lympho B tham gia đáp ứng miễn dịch dịch thể, cònlympho T tham gia đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào Đời sống củabạch cầu lympho trong mô lympho nguyên phát (tủy xương, tuyến ức) thườngchưa tiếp xúc với kháng nguyên nên thường có đời sống ngắn trong vài ngày.Trong mô lympho thứ phát (hạch bạch huyết, mảng Payer, hệ liên võng nộimô…) các lympho có đời sống dài hơn, đặc biệt sau khi tiếp xúc với khángnguyên, các tế bào có thể tồn tại vài năm hoặc vài chục năm [20].

 Bạch cầu mono còn gọi là đại thực bào, có kích thước thay đổi 13 - 21

µm đôi khi lên 50µm Nhân xốp, cuộn Nguyên sinh chất rộng, màu xanh xámhoặc xám, có thể gặp không bào trong bào tương Trong bào tương có ít hạtmàu đỏ cam chứa phosphatase acid và men peroxydase Bạch cầu mono cóchức năng chủ yếu là thực bào, ẩm bào giống bạch cầu đoạn trung tính vớicác tác nhân như vi khuẩn lao, virus, nấm và một số ký sinh trùng Chức năngnày được tăng cường khi các tế bào bị hoạt hóa, bị đánh dấu bởi các bạch cầulympho Ngoài ra, các bạch cầu mono còn có chức năng trình diện khángnguyên, tương tác với hệ thống miễn dịch bằng cách tiết ra các interleukin…Bạch cầu mono được sinh ra từ tủy xương, trải qua các giai đoạn trưởng thànhrồi ra máu ngoại vi, lưu hành trong máu khoảng từ 20-40 giờ trước khi đi vàocác mô và trở thành các đại thực bào dưới các dạng khác nhau như tế bàoKuffer ở gan, tế bào Langerhans ở da, tế bào đuôi gai ở các nang lympho… vàtồn tại trong thời gian dài, có thể vài tháng hoặc lâu hơn [21]

Tiểu cầu trong máu ngoại vi là những mảnh vỡ hình đĩa mỏng, không cónhân, đường kính 3 – 4µm Trên tiêu bản nhuộm giemsa, tiểu cầu hình tròn,dạng chấm, màu tím nhạt Tiểu cầu có đặc tính dính lại với nhau khi ra khỏi

lòng mạch, do vậy nếu tiêu bản làm từ máu không chống đông phần lớn tiểucầu tập trung thành các đám, bao gồm từ vài tiểu cầu đến nhiều tiểu cầu Tiểucầu rất cần thiết cho sự toàn vẹn của mạch máu nhờ khả năng làm non hoá tếbào nội mạch và củng cố màng nội mạch thông qua hoạt động của yếu tố tăngtrưởng nội mạc Tiểu cầu còn tham gia vào quá trình cầm máu kỳ đầu nhờ cókhả năng kết dính, ngưng tập và phóng thích các chất Đời sống của tiểu cầungắn, thời gian từ lúc xuất hiện một nguyên mẫu tiểu cầu đến khi phóng thích

ra tiểu cầu trung bình khoảng 10 ngày, đời sống tiểu cầu khoảng từ 8 – 14ngày Sau khi ra ngoài cơ thể, ở nhiệt độ phòng có thể lưu giữ tiểu cầu khoảng

5 ngày với điều kiện lắc liên tục [22], [23]

Hình 1.1: Sơ đồ quá trình sinh máu

1.2 Nguyên lý xét nghiệm tế bào máu ngoại vi

Hiện nay, nhờ sự phát triển của khoa học công nghệ mà các máy đếm tếbào tự động ngày càng được phát triển, đổi mới về kĩ thuật cũng như cách

thức vận hành Tuy vậy, các máy đếm tế bào đều mang những nguyên lý cơbản sau:

 Nguyên lý dòng chảy: là nguyên lý đầu tiên và cơ bản nhất được sửdụng trong tất cả các dòng máy đếm tế bào máu Một lượng thể tích máuđược hút và pha loãng với dung dịch pha loãng tế bào được chuyển từ buồngtrộn tới buồng đếm Hỗn hợp dung dịch pha loãng được bơm vào dòng dungdịch Sheath đang chảy nhanh Hai dòng dịch này chảy với tốc độ khác nhau

và không bị lẫn vào nhau Cấu trúc hình học đặc biệt của buồng đếm và tốc

độ chảy cao của dòng dung dịch Sheath ép dòng tế bào dịch chuyển theo thứ

tự từng tế bào một tạo “dòng chảy một chiều”

 Nguyên lý trở kháng: Khi có một tế bào máu đi qua khe vào giữa haibản điện cực sẽ làm thay đổi trở kháng của dòng điện một chiều, sự thay đổinày tạo ra các xung điện có độ lớn tỷ lệ với kích thước tế bào từ đó có thểphân loại dòng tế bào theo kích thước được cài trên máy và máy đếm được sốlượng từng loại tế bào

 Nguyên lý laser: Khi có một tế bào máu đi qua, chùm tia sáng chiếuqua sẽ bị tán xạ ánh sáng Góc tán xạ sẽ thay đổi và tỷ lệ nghịch với kíchthước của tế bào máu Mắt cảm quang sẽ đo góc tán xạ và đưa ra kích cỡxung phù hợp Các dữ liệu đo ở các góc khác nhau sẽ cho thông tin về kíchthước tế bào, cấu trúc, hạt tế bào Các dữ liệu đo quang học thu được sẽchuyển thành xung điện Xung điện này sẽ được lưu trữ phân tích bởi máytính

 Nguyên lý đo Hemoglobin: Buồng đo huyết sắc tố gồm một đèn LED,một buồng chứa dung dịch mẫu cần đo, bộ đo cường độ ánh sáng Mẫu máu saukhi bị ly giải hồng cầu và chuyển huyết sắc tố thành dẫn xuất methemoglobin -một dẫn xuất bền vững mà sự hấp phụ tốt nhất ở bước sóng 540 nm Mật độquang của phức hợp tỷ lệ thuận với nồng độ huyết sắc tố của mẫu

 Ngoài ra, một số máy đếm tế bào hiện đại có thể bổ sung thêm các cơchế khác nhằm phân loại các loại tế bào tốt hơn như: Nhuộm peroxidase, côngnghệ VCS…

Thông thường, máy đếm tế bào sẽ có 2 buồng đếm gồm:

 Buồng đếm hồng cầu, tiểu cầu: Máu được pha loãng với một dung dịchđiện phân không phá vỡ tế bào Hồng cầu, tiểu cầu được cho qua khe cóđường kính 7-8 µm

 Buồng đếm bạch cầu: Máu được pha loãng với dung dịch acid để làm

vỡ hồng cầu Bạch cầu được cho qua khe có đường kính 10 µm

Dựa trên các cơ chế trên mà máy đếm tế bào có thể cung cấp các chỉ sốcủa dòng hồng cầu, dòng bạch cầu, dòng tiểu cầu

1.3 Các chỉ số tế bào máu ngoại vi

1.3.1 Chỉ số dòng hồng cầu

 Số lượng hồng cầu (RBC)

- Là số lượng hồng cầu tính trong một đơn vị thể tích máu toàn phần đơn

vị quốc tế quy ước là T/L (1T/L = 1012)

- Giá trị bình thường: Nam : 4,5-5,9 T/L; Nữ: 4,0-5,2 T/L

 Nồng độ huyết sắc tố (HGB)

- Là lượng huyết sắc tố trong một lít máu toàn phần (g/L)

- Giá trị bình thường: Nam: 135-175 g/L; Nữ: 120-160 g/L

- Hemoglobin là chỉ số dùng để đánh giá tình trạng thiếu máu.Theo định

nghĩa của Tổ chức Y tế thế giới WHO thì thiếu máu là tình trạng giảm lượnghuyết sắc tố lưu hành trong máu ngoại vi so với người bình thường cùng giới,cùng lứa tuổi, sống trong cùng một môi trường sống

 Thể tích khối hồng cầu (HCT)

- Là thể tích toàn bộ tế bào máu (chủ yếu là hồng cầu) so với thể tích

máu toàn phần (đơn vị quốc tế lít/lít viết tắt L/L)

- Giá trị bình thường: Nam: 0,41-0,53 L/L; Nữ: 0,36-0,46 L/L

 Thể tích trung bình hồng cầu (MCV)

- Là thể tích một hồng cầu được tính trung bình, đơn vị đo là fetolit (fL)

(1fL = 10-15 lit)

- Thông số này được tính toán một cách tự động dựa trên kích thước của

từng hồng cầu trong quá trình đo thực hiện trên các máy đếm tự động

- Công thức tính : MCV= HCT RBC

- Giá trị bình thường: 85-95 fL

- Chỉ số này có giá trị trong tiếp cận nguyên nhân thiếu máu gồm:

MCV<80 fL thuộc nhóm thiếu máu hồng cầu nhỏ MCV>100fL thuộc nhómthiếu máu hồng cầu to MCV từ 80-100 fL là thiếu máu hồng cầu bình thường

 Dải phân bố kích thước hồng cầu (RDW)

- Là giá trị biểu thị sự phân bố kích thước của hồng cầu.

- RDW bao gồm: hệ số biến thiên RDW-CV, tính theo đơn vị %, giá trị

bình thường: 11 đến 14% và độ lệch: RDW-SD, tính theo đơn vị fL.

 Lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH)

- Là lượng huyết sắc tố trung bình chứa đựng trong một hồng cầu Đơn

- Chỉ số này có giá trị trong tiếp cận các nguyên nhân thiếu máu gồm:MCH < 28 pg thuộc nhóm thiếu máu nhược sắc MCH từ 28-32 pg thuộcnhóm thiếu máu bình sắc.

 Nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCHC)

- Là lượng huyết sắc tố chứa đựng trong 1 lít hồng cầu, đơn vị tính g/L

- Thông số này được tính gián tiếp qua tỉ số giữa nồng độ huyết sắc tố vàgiá trị hematocrit

- Công thức: MCHC = HGB HCT

- Giá trị bình thường: 320-360 g/L

- Chỉ số này có giá trị trong tiếp cận nguyên nhân thiếu máu cùng vớiMCH gồm: MCHC < 320 g/L thuộc nhóm thiếu máu nhược sắc MCH từ320-360 g/L thuộc nhóm thiếu máu bình sắc

Bảng 1.1: Công thức bạch cầu ở người trưởng thành

Loại Bạch cầu CTBC(%) CTBC(G/L)

 Số lượng tiểu cầu (PLT)

- Số lượng tiểu cầu là số lượng tuyệt đối của tiểu cầu trong một lít máutoàn phần, tính theo đơn vị Giga, viết tắt là G/L ( 1G/L= 109 /L)

và góp phần trong giảng dạy, nghiên cứu khoa học Có nhiều tác giả trong vàngoài nước đã tiến hành rất nhiều nghiên cứu các chỉ số tế bào máu ngoại vi

và luôn luôn được đổi mới, bổ sung hoàn thiện

Các chỉ số tế bào máu ngoại vi được nghiên cứu vào cuối thế kỉ XIX vàphát triển mạnh vào đầu thế kỉ XX, ban đầu các nhà nghiên cứu chỉ nghiêncứu những chỉ số như số lượng hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, số lượngbạch cầu, số lượng tiểu cầu, sau đó nâng dần lên hoàn thành các chỉ số và

thành lập công thức bạch cầu [24] Năm 1987, Arumanayagam M đặt nềnmóng đầu tiên đã nghiên cứu trên quần thể người Hồng Kông khỏe mạnh thấyrằng phần lớn các chỉ số tế bào của nam đều lớn hơn của nữ Ở nam giới thểtích trung bình hồng cầu và số lượng bạch cầu tăng theo tuổi, trong khi sốlượng hồng cầu và huyết sắc tố giảm dần, ngược lại ở phụ nữ, các chỉ sốtương đối hằng định cho đến 70 tuổi, sau đó số lượng hồng cầu giảm nhanh,trong khi thể tích trung bình hồng cầu lại tăng cao.

Ngày nay, nghiên cứu các chỉ số tế bào máu ngoại vi đã trở thành mộtcách thường quy Năm 2005, Nguyễn Đức Thuận và cộng sự đã “Đánh giátình hình người HMTN của Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương năm2005” nghiên cứu đã chỉ ra được: Các chỉ số của người HMTN là nằm tronggiới hạn bình thường, Tuy nhiên nghiên cứu mới chỉ dừng lại ở các chỉsố:RBC, HGB, MCV, WBC, PLT Vậy nên, các chỉ số là chưa đầy đủ [25]

Năm 2015-2016, Phạm Văn Hiệu “Nghiên cứu đặc điểm người hiếnmáu và mô hình tổ chức tiếp nhận máu tại một số bệnh viện quân đội khu vực

Hà Nội” cũng chỉ ra được đặc điểm các chỉ số cơ bản của tế bào máu ngoại vi

về dòng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu [26]

Năm 2017, Nguyễn Thị Hiền Hạnh và cộng sự đã “Nghiên cứu một sốchỉ số huyết học tế bào và khoảng tham chiếu bình thường của người khỏemạnh” từ 511 người HMTN tại Viện quân y 103 cũng đã chỉ ra được giá trịtrung bình của các chỉ số hồng cầu và tiểu cầu Tuy nhiên, với chỉ số dòngbạch cầu chỉ có số lượng bạch cầu mà không có công thức bạch cầu [27]

Năm 2018, Huỳnh Thị Bích Huyền và cộng sự “Thiết lập khoảng thamchiếu các chỉ số huyết học trên người trường thành cho phòng xét nghiệmbệnh viện truyền máu huyết học” Nghiên cứu này được thực hiện từ 392nhân viên khỏe mạnh HMTN ở bệnh viện cũng đã chỉ ra được giá trị trung

bình của các chỉ số cần thiết, so sánh được các giá trị này ở hai giới nam và

nữ [28]

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

Nghiên cứu thực hiện trên 3650 người tham gia HMTN tại Viện Huyếthọc - Truyền máu Trung ương trong thời gian từ ngày 1/11/2018 đến ngày31/1/2019

2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn

Người HMTN có đầy đủ các tiêu chuẩn theo quy định tại thông tư26/2013/TT- BYT Hướng dẫn hoạt động truyền máu do Bộ Y tế ban hành:

 Tiêu chuẩn về thời gian hiến máu:

1 Khoảng thời gian tối thiểu giữa hai lần liên tiếp hiến máu toàn phầnhoặc khối hồng cầu bằng gạn tách là 12 tuần

2 Khoảng thời gian tối thiểu giữa hai lần liên tiếp hiến huyết tương hoặchiến tiểu cầu bằng gạn tách là 02 tuần

Tiêu chuẩn lâm sàng:

- Tuổi: Nam từ 18 đến 60 tuổi, nữ từ 18 đến 55 tuổi

- Cân nặng: nữ ≥ 42kg và nam ≥ 45kg

- Tiền sử: khỏe mạnh, sức khỏe ổn định trong thời gian 4 tuần trướcHMTN, không mắc các bệnh mạn tính hoặc cấp tính về thần kinh, tâm thần, hôhấp, tuần hoàn, tiết niệu, tiêu hoá, gan mật, nội tiết, máu và tổ chức tạo máu,bệnh hệ thống, bệnh tự miễn, tình trạng dị ứng nặng; không mang thai vào thờiđiểm đăng ký HMTN (đối với phụ nữ); không có tiền sử lấy, hiến, ghép bộphận cơ thể người; không nghiện ma tuý, nghiện rượu; không có khuyết tật

nặng và khuyết tật đặc biệt nặng , không mắc bệnh lây truyền qua đường máu,bệnh lây truyền qua đường tình dục tại thời điểm đăng ký HMTN

- Tỉnh táo, tiếp xúc tốt

- Nhịp tim đều, tần số 60-90 lần/phút

- Huyết áp tâm thu: 100 mmHg - 160 mmHg

- Huyết áp tâm trương: 60 mmHg -100mmHg

- Người HMTN nhắc lại là người hiến máu an toàn

 Tiêu chuẩn cận lâm sàng:

- Đối với người hiến máu toàn phần và hiến các thành phần máu bằnggạn tách: HGB ≥ 120 g/L; nếu hiến máu toàn phần ≥ 350 ml, HGB ≥ 125g/L

- Đối với người hiến tiểu cầu, bạch cầu hạt, tế bào gốc bằng gạn tách:PLT≥ 150 G/L

- Các test virus HIV (Human Immunodeficiency Virus), virus viêm gan

B (Hepatitis B virus), virus viêm gan C (Hepatitis C virus), giang mai, sốt rét

âm tính

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ

- Người HMTN không đáp ứng được đầy đủ các tiêu chuẩn mà nghiêncứu đã đề ra

- Tiêu chuẩn loại trừ nghi ngờ mang gen Thalassemia:

 MCV < 80fL

 MCH <27 pg

 MCHC < 320 g/L