Đang tải... (xem toàn văn)
ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ VI SINHTRONG SẢN XUẤT VACCINE TÁI TỔ HỢPPHÒNG NGỪA VIÊM GAN B Viêm gan B là bệnh gây ra bởi một loại virus có tên Hepatitis B Virus (viết tắt là HBV), còn được gọi là viêm gan siêu vi B. Viêm gan virus B gây tổn thương ở gan dẫn tới bệnh viêm gan B và là nguyên nhân hàng đầu của các bệnh nguy hiểm về gan như xơ gan và ung thư gan,..
ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ VI SINH TRONG SẢN XUẤT VACCINE TÁI TỔ HỢP PHÒNG NGỪA VIÊM GAN B SVTH : LỚP Nhóm :9 : 14CHD ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam có khoảng 8,6 triệu người nhiễm bệnh viêm gan B Tỷ lệ người mắc bệnh viêm gan B giới tỷ người bị nhiễm 240 triệu người bị nhiễm mãn tính 780 ngàn người chết năm Viêm gan B gì? ĐỊNH NGHĨA - Viêm gan B bệnh gây loại virus có tên Hepatitis B - Virus (viết tắt HBV), gọi viêm gan siêu vi B Viêm gan virus B gây tổn thương gan dẫn tới bệnh viêm gan B và nguyên nhân hàng đầu bệnh nguy hiểm gan xơ gan ung thư gan, Một số nguyên nhân dẫn đến bệnh viêm gan B - Virus viêm gan B lây qua đường sau: +Lây truyền qua đường tình dục +Lây truyền từ mẹ sang +Lây truyền qua đường máu Đại cương virus viêm gan B Virus viêm gan B (HBV) đánh giá loại virus nguy hiểm, có tính lây nhiễm mạnh mẽ: -Virus viêm gan B có tính lây nhiễm mạnh mẽ - Mức độ nguy hiểm lớn: Sau xâm nhập vào thể virus viêm gan B tiếp tục nhân đôi công gan thời gian dài, hủy hoại tế bào gan, làm chức gan bị suy giảm nghiêm trọng Viêm gan B nguyên nhân hàng đầu dẫn đến xơ gan tác nhân thứ hai gây nên ung thư Các vaccine truyền thống ngừa virut viêm gan Tính miễn dịch vaccine - Sự đáp ứng miễn dịch với vaccine viêm gan siêu vi B quy ết định b ởi r ất nhi ều y ếu t ố t ạo mi ễn dịch yếu tố ký chủ + Yếu tố tạo miễn dịch : Liều vaccine sử dụng; Lịch tiêm ch ủng; Vị trí đường t ạo mi ễn d ịch điều kiện bảo quản vaccine + Các yếu tố liên quan đến ký chủ : Tuổi tác ; Tác động vị trí tiêm; Thuốc lá; Nghiện rượu; Stress hỗ trợ xã hội; Các yếu tố định mặt di truyền; Các vaccine truyền thống ngừa virut viêm gan Một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu lực vaccine - o Mất hiệu lực nhiệt độ cao: >+8 C Bị hiệu lực sau thời gian Đông băng: Bảo quản nhiệt độ từ +2°C đến +8°C Bản chất liều lượng vacxin : Hiệu lực vacxin cao chứa kháng nguyên có tính sinh mi ễn d ịch mạnh - Các chất phụ gia miễn dịch: Các hợp chất nhôm (Al(OH)3 AlPO4): Có tác dụng làm cho vacxin chậm phân giải, có tác dụng kích thích thể đáp ứng miễn dịch mạnh - Tình trạng dinh dưỡng: Suy dinh dưỡng làm giảm đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào rõ miễn dịch d ịch th ể Kháng thể mẹ truyền: Kháng thể mẹ truyền có khả ức chế đáp ứng miễn dịch loại vacxin t ương ứng Hiệu lực miễn dịch số vacxin bị hạn chế tiêm chủng sớm hiệu lực kháng th ể m ẹ truy ền tương đối cao Các vaccine truyền thống ngừa virut viêm gan Nhược điểm vaccine truyền thống - Số lượng hạn chế kháng ngun ít, khơng ph ải m ọi tác nhân gây b ệnh có th ể nhân thành s ố l ượng lớn để sản xuất vaccine - Cần phải nuôi tế bào người động vật tốn để s ản xu ất vaccine t virus ng ười động v ật - Các chủng nhược độc trở lại trạng thái cường độc - Việc bất hoạt không hữu hiệu gây lan truy ền b ệnh b ởi vaccine - Thời hạn sử dụng ngắn phải bảo quản lạnh VACCINE TÁI TỔ HỢP CÁC KHÁI NIỆM Tái tổ hợp gì? -Khi gen liên kết khơng hồn tồn - Xuất dạng giao tử có xếp lại gen Vaccine tái tổ hợp -Đây loại nucleic acid vaccine, dựa nguyên lý mã hóa cho loại protein kháng nguyên đặc hiệu tiêm vào vật chủ (tế bào động vật vi sinh vật) - Có khả kích thích thể sinh miễn dịch Khi thể chịu kích thích kháng nguyên, cảm ứng tạo loại protein có chức bảo vệ gọi kháng thể (antibody) NGUYÊN LÝ CỦA KĨ THUẬT - Vector chuyển gene DNA plasmide tế bào vi khuẩn E.Coli Có điểm khởi đầu chép (Origin of replication- ori) Có đoạn trình tự nhận biết enzyme cắt hạn chế EcoRI SalI Có trình tự khởi điểm promoter Có gene thị kháng ampicillin cho phép dễ dàng nhận biết chúng tế bào nhận q trình ni cấy - DNA chứa gene cần nghiên cứu (DNA lạ) gene mã hóa cho kháng nguyên bề mặt HbsAg thu nhận từ tế bào virus Hepatitis B - Các enzyme sử dụng kĩ thuật tạo dòng : + Enzyme tổng hợp: DNA polymerase để xúc tác trình chép + Enzyme cắt hạn chế (Restriction Endonuclease) : EcoRI SalI + Enzyme nối :T4 DNA ligase để nối hai đầu dính plasmide DNA lạ Giai đoạn cắt với tham gia enzyme RE : Giai đoạn nối với có mặt DNA ligase Giai đoạn biến nạp: Giai đoạn phát dòng DNA tái tổ hợp : Quy trình sản xuất vaccine tái tổ hợp-Sản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B Bước 1: Lựa chọn kháng nguyên đích: kháng nguyên bề mặt HbsAg virus Hepatitis B Bước 2: Phân tích xác định gen đích Tách chiết mARN Gắn poly A Tạo cDNA mạch đơn Olligo T Hỗn hợp cDNA mạch đơn oligo T Tổng hợp cDNA kép Tách riêng mRNA Bước 3: Nhân dòng gen cADN kép Tạo ADN tái tổ hợp Biến nạp Tế bào chủ E.Coli Thu nhận khuẩn lạc chứa cADN Chất kháng sinh ampicillin Xác định dòng cần Thu nhận dòng cần Bước 4: Biểu gen tế bào chủ Tế bào chủ Sinh vật nhân sơ E.coli Bước 5,6: Nuôi cấy thu nhận protein kiểm tra chất lượng tinh protein Nuôi cấy Thu nhận protein Cô đặc Phương pháp vi lọc tủa B1: Trao đổi ion Phương pháp sắc ký có Tinh protein độ phân giải cao B2: Lọc gel B3: Sắc ký tương tác kị nước hay sắc ký lực Bước 7: Sản xuất chế phẩm Bước 8: Kiểm tra sản phẩm Ưu điểm phương pháp: - Nâng cao suất sản xuất vaccine - Tạo miễm dịch tốt thể bị suy giảm miễn dịch thể bị suy nhược - Tạo sản phẩm vaccine với nhiều ưu điểm: + Vaccine tái tổ hợp an tồn khơng sử dụng trực tiếp vi sinh vật gây bệnh ( gen độc loại trừ ), hiệu lực ổn định + Giá thành hạ khơng cần ni virus phơi ga hay tổ chức mô động vật vốn phức ạp tốn kém, giảm bớt chi phí vận chuyển chi phí kiểm tra tính an tồn trước dùng KẾT LUẬN - Sự đời vaccine có ý nghĩa vơ to lớn nhân loại Nó giúp cho lồi người khỏi nhiều đại dịch hiểm nghèo (đậu mùa, bại liệt; sởi, uốn ván v.v.) – - Tuy nhiên, nhiều bệnh thách thức người, chưa có vaccine đủ hiệu để ngăn ngừa Trong phải kể nhiều bệnh virus (cúm, sốt xuất huyết, AIDS v.v.) - Tính ưu việt loại vaccine ngày khẳng định: tinh khiết, phản ứng phụ, hiệu lực tạo miễn dịch cao, sản xuất nhanh giá thành thấp Có thể nói, thành tựu từ khoa học kỹ thuật ứng dụng công nghệ sinh học y học , đặc biệt ứng dụng công nghệ vi sinh sản xuất vaccine mở nhiều hướng nghiên cứu hiệu công tác điều trị bệnh - Ngày với phát triển không ngừng công nghệ sinh học người tìm vũ khí hữu hiệu để bảo vệ với số lượng nhiều, an tồn nhanh chóng Đặc biệt Vaccine hệ hay Vaccine tái tổ hợp ... người nhiễm b nh viêm gan B Tỷ lệ người mắc b nh viêm gan B giới tỷ người b nhiễm 240 triệu người b nhiễm mãn tính 780 ngàn người chết năm Viêm gan B gì? ĐỊNH NGHĨA - Viêm gan B bệnh gây loại... tên Hepatitis B - Virus (viết tắt HBV), gọi viêm gan siêu vi B Viêm gan virus B gây tổn thương gan dẫn tới b nh viêm gan B và nguyên nhân hàng đầu b nh nguy hiểm gan xơ gan ung thư gan, Một số... triển: viêm gan B cấp tính => viêm gan B mãn tính => Xơ gan ung thư gan CÁCH PHÒNG NHIỄM VIÊM GAN B - Tiêm phòng ngừa vaccine viêm gan B - Ln sinh hoạt tình dục an tồn - Khơng dùng chung b n chải,