MÔN: TỔNG HỢP SINH HỌC VÀ CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ ĐỀ TÀI: ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ VI SINH TRONG SẢN XUẤT VACCINE TÁI TỔ HỢP PHÒNG NGỪA VIÊM GAN B MỤC LỤC: I. Lý do lựa chọn đề tài…………………………………………………………………...1 II. Bệnh viêm gan B. 2.1. Khái niệm bệnh viêm gan B………………………………………………………….1 2.2. Biểu hiện của bệnh viêm gan B………………………………………………………2 2.2.1. Triệu chứng của bệnh viêm gan B………………………………………………….2 2.2.2. Các thể lâm sàng……………………………………………………………………3 2.2.2.1. Viêm gan cấp tính………………………………………………………………...3 2.2.2.2. Viêm gan bạo phát………………………………………………………………..3 2.2.2.3. Triệu chứng hậu viêm gan………………………………………………………..3 2.3. Nguyên nhân bị viêm gan B 2.3.1. Một số nguyên nhân dẫn đến bệnh viêm gan B………………………………….....3 2.3.2. Đại cương về virus viêm gan B…………………………………………………….5 2.3.3. Lịch sử hình thành và phát triển của bệnh……………………………………….....5 2.3.4. Cấu trúc……………………………………………………………………………..6 III. Sản xuất vaccine ngừa bệnh viêm gan B 3.1. Tại sao phải sản xuất vaccine phòng ngừa viêm gan B 3.1.1. Lý do ngừa bệnh viêm gan B……………………………………………………….7 3.1.2. Phòng nhiễm virus viêm ganB như thế nào………………………………………..8 3.1.3. Các phương pháp điều trị khi mắc bệnh viêm gan B……………………………….8 3.2. Các loại vaccine 3.2.1. Sơ lược về vaccine 3.2.1.1. Vài nét về lịch sử vaccine………………………………………………………...9 3.2.1.2. Khái niệm vềvaccine…………………………………………………………….10 3.2.1.3. Thành phần của vaccine…………………………………………………………10 3.2.1.4. Đặc tính cơ bản của vaccine…………………………………………………….10 3.2.1.5. Cơ chế hoạt động của vaccine…………………………………………………...10 3.2.1.6. Phân loại vaccine………………………………………………………………..11 3.2.2. Các vaccine truyền thống ngừa virut viêm gan B 3.2.2.1. Sơ lược về vaccine truyền thống………………………………………………...11 3.2.2.1.1. Hevac B (Pasteur)……………………………………………………………..11 3.2.2.1.2. Recombivax HB……………………………………………………………….11 3.2.2.2. Tính an toàn của vaccine viêm gan B…………………………………………...11 3.2.2.3. Tính miễn dịch của vaccine……………………………………………………..12 3.2.2.4. Một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu lực của vaccine…………………………….13 3.2.2.5. Nhược điểm của vaccine truyền thống………………………………………….14 3.2.3. Phương pháp tạo vaccine tái tổ hợp ngừa virus viêm gan B 3.2.3.1. Các khái niệm liên quan 3.2.3.1.1. Tái tổ hợp là gì?.................................................................................................14 3.2.3.1.2. Vaccine tái tổ hợp …………………………………………………………….15 3.2.3.2. Nguyên lý của kĩ thuật…………………………………………………………..15 3.2.3.2.1. Chọn nguyên liệu cho quá trình sản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B…….15 3.2.3.2.2. Giai đoạn cắt với sự tham gia của enzyme RE kiểu II………………………...15 3.2.3.2.3. Giai đoạn nối với sự có mặt của DNA ligase…………………………………16 3.2.3.2.4. Giai đoạn biến nạp…………………………………………………………….16 3.2.3.2.5. Phát hiện dòng DNA tái tổ hợp chung………………………………………...16 3.2.3.3. Quy trình sản xuất vaccine tái tổ hợpSản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B...18 3.2.3.4. Ưu điểm của phương pháp………………………………………………………20 3.2.3.5. Ý nghĩa của việc sản xuất vaccine tái tổ hợp…………………………………....21 IV. Kết luận………………………………………………………………………………21
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HĨA BÀI TIỂU LUẬN MƠN: TỔNG HỢP SINH HỌC VÀ CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ ĐỀ TÀI: ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ VI SINH TRONG SẢN XUẤT VACCINE TÁI TỔ HỢP PHÒNG NGỪA VIÊM GAN B SINH VIÊN THỰC HIỆN : 1, LỚP : 14CHD Đ ĐÀ NẴNG, 12/11/201 MỤC LỤC: I Lý lựa chọn đề tài………………………………………………………………… II Bệnh viêm gan B 2.1 Khái niệm bệnh viêm gan B………………………………………………………….1 2.2 Biểu bệnh viêm gan B………………………………………………………2 2.2.1 Triệu chứng bệnh viêm gan B………………………………………………….2 2.2.2 Các thể lâm sàng……………………………………………………………………3 2.2.2.1 Viêm gan cấp tính……………………………………………………………… 2.2.2.2 Viêm gan bạo phát……………………………………………………………… 2.2.2.3 Triệu chứng hậu viêm gan……………………………………………………… 2.3 Nguyên nhân bị viêm gan B 2.3.1 Một số nguyên nhân dẫn đến bệnh viêm gan B………………………………… 2.3.2 Đại cương virus viêm gan B…………………………………………………….5 2.3.3 Lịch sử hình thành phát triển bệnh……………………………………… 2.3.4 Cấu trúc…………………………………………………………………………… III Sản xuất vaccine ngừa bệnh viêm gan B 3.1 Tại phải sản xuất vaccine phòng ngừa viêm gan B 3.1.1 Lý ngừa bệnh viêm gan B……………………………………………………….7 3.1.2 Phòng nhiễm virus viêm ganB nào……………………………………… 3.1.3 Các phương pháp điều trị mắc bệnh viêm gan B……………………………….8 3.2 Các loại vaccine 3.2.1 Sơ lược vaccine 3.2.1.1 Vài nét lịch sử vaccine……………………………………………………… 3.2.1.2 Khái niệm vềvaccine…………………………………………………………….10 3.2.1.3 Thành phần vaccine…………………………………………………………10 3.2.1.4 Đặc tính vaccine…………………………………………………….10 3.2.1.5 Cơ chế hoạt động vaccine………………………………………………… 10 3.2.1.6 Phân loại vaccine……………………………………………………………… 11 3.2.2 Các vaccine truyền thống ngừa virut viêm gan B 3.2.2.1 Sơ lược vaccine truyền thống……………………………………………… 11 3.2.2.1.1 Hevac B (Pasteur)…………………………………………………………… 11 3.2.2.1.2 Recombivax HB……………………………………………………………….11 3.2.2.2 Tính an tồn vaccine viêm gan B………………………………………… 11 3.2.2.3 Tính miễn dịch vaccine…………………………………………………… 12 3.2.2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu lực vaccine…………………………….13 3.2.2.5 Nhược điểm vaccine truyền thống………………………………………….14 3.2.3 Phương pháp tạo vaccine tái tổ hợp ngừa virus viêm gan B 3.2.3.1 Các khái niệm liên quan 3.2.3.1.1 Tái tổ hợp gì? .14 3.2.3.1.2 Vaccine tái tổ hợp …………………………………………………………….15 3.2.3.2 Nguyên lý kĩ thuật………………………………………………………… 15 3.2.3.2.1 Chọn nguyên liệu cho trình sản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B…….15 3.2.3.2.2 Giai đoạn cắt với tham gia enzyme RE kiểu II……………………… 15 3.2.3.2.3 Giai đoạn nối với có mặt DNA ligase…………………………………16 3.2.3.2.4 Giai đoạn biến nạp…………………………………………………………….16 3.2.3.2.5 Phát dòng DNA tái tổ hợp chung……………………………………… 16 3.2.3.3 Quy trình sản xuất vaccine tái tổ hợp-Sản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B 18 3.2.3.4 Ưu điểm phương pháp………………………………………………………20 3.2.3.5 Ý nghĩa việc sản xuất vaccine tái tổ hợp………………………………… 21 IV Kết luận………………………………………………………………………………21 Nguồn tài liệu tham khảo: Hồn thiện quy trình cơng nghệ sản xuất vaccine viêm gan B tái tổ hợp Bộ Khoa Học Công Nghệ - Dự án thử nghiệm sản xuất cấp nhà nước Tài liệu Đại cương công nghệ DNA tái tổ hợp Tổng quát virus viêm gan B(HBV) bệnh viêm gan siêu vi B BẢNG PHÂN CÔNG NHIỆM VỤ : Nguyễn Thị Hồng Nga : Lý chọn đề tài Triệu chứng hậu viêm gan B Bùi Thị Thùy Dung : Nguyên nhân bị viêm gan B- cấu trúc virus viêm gan B Phạm Thị Như Thủy : Tại phải sản xuất vaccine Phân loại vaccine Huỳnh Linh Nhã Trúc: Các vaccine truyền thống Đặng Hồ Khánh Hòa : Phương pháp tạo vaccine tái tổ hợp ngừa virus viêm gan B I Lý lựa chọn đề tài Ngay từ xuất sống, đấu tranh loài sinh vật bệnh tật xuất Đặc biệt ký sinh loài vi sinh vật tới động vật bậc cao gây bệnh tật hiểm nghèo tạo nạn dịch thảm khốc cướp nhiều sinh mạng Để giành giật sống người tìm biện pháp nhằm hạn chế tác động có hại đối tượng gây bệnh Vaccine coi tiến y học quan trọng kỉ XX Một loại vaccine quan trọng vaccine phòng ngừa viêm gan B Việt Nam nước có tỷ lệ người mang bệnh cao cộng đồng HBV chiếm tỉ lệ lớn nguyên gây bệnh viêm gan bệnh nhân viêm gan Người mang HBV mạn tính có nguy cao bị bệnh gan trầm trọng trưởng thành, bao gồm ung thư gan sơ gan Bệnh gây gan mạn tính gây tử vong phổ biến Nhiễm HBV vấn đề y tế cộng đồng quan trọng dự phòng Năm 1991, nhóm cố vấn tồn cầu chương trình tiêm chủng mở rộng kêu gọi tất nước đưa thêm vaccine viêm gan B vào chương trình tiêm chủng quốc gia Ở Việt Nam phủ cho phép đưa vaccine viêm gan B vào chương trình tiêm chủng mở rộng để tiêm cho trẻ em tuổi Bên cạnh vaccine viêm gan B sản xuất từ huyết tương người mang HbsAg cao, ngày với phát triển không ngừng công nghệ sinh học người tìm vũ khí hữu hiệu để bảo vệ với số lượng nhiều, an tồn nhanh chóng Đó việc ứng dụng tiến khoa học kĩ thuật lĩnh vực cơng nghệ sinh học để có vaccine viêm gan B tái tổ hợp ADN, nghiên cứu cần thiết nhằm đáp ứng nhu cầu sử dụng vaccine ngày lớn cộng đồng Do đó, nhóm em xin chọn đề tài: “ Ứng dụng công nghệ vi sinh sản xuất Vaccine tái tổ hợp phòng ngừa viêm gan B” để làm báo cáo II Bệnh viêm gan B 2.1 Khái niệm bệnh viêm gan B Viêm gan B bệnh gây loại virus có tên Hepatitis B Virus (viết tắt HBV), gọi viêm gan siêu vi B Viêm gan virus B gây tổn thương gan dẫn tới bệnh viêm gan B nguyên nhân hàng đầu bệnh nguy hiểm gan xơ gan ung thư gan, Virus viêm gan loại B sống sót bên ngồi thể ngày Trong thời gian này, vi rút gây nhiễm trùng xâm nhập vào thể người không bảo vệ vaccine Thời kỳ ủ bệnh siêu vi viêm gan loại B trung bình 75 ngày, thay đổi từ 30 đến 180 ngày Virus phát vòng 30 đến 60 ngày sau bị nhiễm trùng tồn phát triển thành viêm gan B.Viêm gan B có hai dạng: - Viêm gan B cấp tính bệnh lý ngắn ngày, thường xảy vòng tháng kể từ phơi nhiễm với virus viêm gan B Bệnh dẫn đến viêm gan B mãn tính; - Viêm gan B mãn tính xảy dài hạn, virus không bị đào thải mà tiếp tục sống thể bệnh nhân Bệnh lý học viêm gan cấp tình viêm gan virut tháo gỡ cách chậm chạp Hơn phần lớn số liệu cho thấy thành viên họ Hepadnaviridae chất khơng có tính gây độc cao Virus lây truyền hiệu qua đường xuyên da HBV có nồng độ đậm đặc gan máu, với số lượng nược bọt tinh dịch Virus viêm gan B nhân lên gan Tuy nhiên nhiều vị trí khác gan đề cập đến Điều cho hàng loạt thay đổi huyết học thấy bệnh nhân viêm gan cấp tính Các sản phẩm trung gian phiên virus trình nhân lên HBV tìm thấy ngồi gan 2.2.Biểu bệnh viêm gan B 2.2.1.Triệu chứng bệnh viêm gan B Bệnh viêm gan B có triệu chứng, đặc biệt viêm gan B giai đoạn đầu triệu chứng mơ hồ, dễ nhầm với bệnh khác, người bệnh thường tình cờ phát kiểm tra sức khỏe hiến máu Ở thể lành mang virus thể ngủ n thường khơng có triệu chứng Vì thế, việc nhận biết dấu hiệu bệnh quan trọng để tránh bỏ qua giai đoạn vàng điều trị quan trọng không để bệnh chuyển sang giai đoạn nặng Một số triệu chứng viêm gan B thường gặp: - Cơ thể mệt mỏi: Bệnh nhân viêm gan B thường thấy mệt mỏi khơng rõ ngun nhân, có nhiều người tự nhiên mệt hết sức Đây triệu chứng thường gặp người mắc bệnh viêm gan B - Sốt: Có nhiều người bị nhiễm virus viêm gan B thường có tượng sốt nhẹ Người nhiễm virus viêm gan B bị sốt virus công làm tổn thương gan, khiến gan không thải hết chất độc chất độc bên dồn vào máu làm thể bị sốt - Rối loạn tiêu hóa: Những người bệnh viêm gan B thường gặp triệu chứng rối loạn tiêu hóa đầy bụng, buồn nơn, táo bón, số người thấy bụng trướng… - Vàng da triệu chứng báo hiệu viêm gan B: Vàng da triệu chứng rõ ràng viêm gan B Tuy nhiên bị vàng da tức bệnh gan mức nghiêm trọng, cần khám Vì vậy, bạn thấy vàng da bất thường, cần nghĩ tới trường hợp bị viêm gan B khám - Xuất huyết da: Khi thấy có triệu chứng da xuất ban xuất huyết chấm ứ máu mũi xuất huyết cần khám sức khỏe triệu chứng biểu mắc viêm gan B nặng 2.2.2.Các thể lâm sàng 2.2.2.1.Viêm gan cấp tính Những kiểu cơng nhẹ nhàng khơng có biểu lâm sàng xác định mức tăng transaminaza huyết Nói cách khác bệnh nhân không vàng da mắc triệu chứng bệnh cúm viêm ruột-dạ dày Những bệnh nhân thường khơng chẩn đốn trừ có tiền sử mắc bệnh rõ ràng Mức độ trầm trọng bệnh thay đổi từ khơng có biểu bệnh đến vàng da( người hồi phục điển hình) bạo phát tử vong Ở người lớn vàng da đánh dấu triệu chứng biểu tiền lâm sàng ( điển hình từ 3-4 ngày đến 2-3 tuần) Trong thời kì bệnh nhân thường thấy mệt moỉ, bị mắc bệnh đường tiêu hố chán ăn, buồn nơn sốt Những triệu chứng chung sốt, rét, chán ăn, khơng thích uống rượu hút thuốc, mệt mỏi đau đầu nặng Thời kì tiền triệu chứng có kèm theo nước tiểu thẫm màu, phân bạc, da vàng dần 2.2.2.2.Viêm gan bạo phát Rất thể bệnh xảy với bệnh nhân vòng 10 ngày Giai đoạn phát triển nhanh đến mức vàng da khơng nhận nhầm lẫn với rối loạn tâm thần cấp tính viêm màng não mủ cấp tính Mặc khác bệnh nhân bị vàng da trầm trọng Những biểu thể lặp lại nôn, thở hôi, chứng lẫn, buồn ngủ Hiện tượng run rẩy xảy ra, co cứng thường xuyên Những biểu sau bị gián đoạn mê chứng tỏ gan bị tổn thương trầm trọng Thân nhiệt bệnh nhân tăng, vàng da trầm trọng teo gan Tần suất trình viêm gan bạo phát khác phụ thuộc vào kiểu viêm gan virus tỉ lệ mắc bệnh viêm gan B 2.2.2.3 Triệu chứng hậu viêm gan Thời kỳ kéo dài vài tuần đến hàng tháng Những hình ảnh chung lo âu, mệt mỏi, sút cân, biến ăn, sợ rượu khó chịu vùng sườn phải trên, bờ gan bị đau Transaminaza huyết cao gấp lần người thường.Tổ chức mô tế bào gan thay đổi nhẹ, có tượng viêm sơ hóa, đơi có thay đổi mỡ tế bào gan Những biểu không khác so với bệnh nhân bình phục hết triệu chứng bệnh, khơng tiến hành làm sinh thiết gan vòng tháng 2.3 Nguyên nhân bị viêm gan B 2.3.1 Một số nguyên nhân dẫn đến bệnh viêm gan B Viêm gan B bệnh gây loại virus có tên Hepatitis B Virus (viết tắt HBV), gọi viêm gan siêu vi B Viêm gan virus B gây tổn thương gan dẫn tới bệnh viêm gan B nguyên nhân hàng đầu bệnh nguy hiểm gan xơ gan ung thư gan, Virus viêm gan B lây qua đường sau: - Lây truyền qua đường tình dục: Tình dục cho đường lây nhiễm viêm gan B phổ biến nay, bệnh dễ lây nhiễm từ người bệnh sang người lành bệnh việc quan hệ tình dục khơng an tồn Viurs có dịch tiết người bệnh vơ tình thơng qua vết thương, vết trầy xước trình quan hệ xâm nhập vào máu người khỏe mạnh gây bệnh Bệnh thường gặp cặp vợ chồng có hai bị mắc bệnh người quan hệ tình dục với nhiều bạn tình Tất loại quan hệ khơng an tồn quan hệ đường miệng, đường hậu mơn, đồ chơi tình dục có khả dẫn đến mắc bệnh viêm gan B - Lây truyền từ mẹ sang con: Không phải tất trường hợp mẹ nhiễm virus viêm gan B lây truyền sang cho khả lây nhiễm chiếm tỉ lệ cao Viêm gan B dễ dàng lây nhiễm từ mẹ sang qua thai hay trình sinh nở Người mẹ mắc bệnh vào tháng cuối thai kỳ có nguy lây nhiễm mạnh hơn, đặc biệt tháng cuối thai kỳ Thai phụ giai đoạn sử dụng thuốc kháng sinh để chống lây nhiễm cho trẻ - Lây truyền qua đường máu: Qua dụng cụ dính máu người bệnh lây sang máu người lành dụng cụ y tế không khử trùng tốt, châm cứu, xỏ tai, dùng chung bơm kim tiêm, dao cạo râu, bàn chải đánh rang, bấm móng tay, xăm hình… Virus HBV sống dai, chí tồn máu khô nhiều ngày nên khơng tự bảo vệ thân khả nhiễm viêm gan B cao 2.3.2 Đại cương virus viêm gan B Virus viêm gan B (HBV) đánh giá loại virus nguy hiểm, có tính lây nhiễm mạnh mẽ: - Virus viêm gan B có tính lây nhiễm mạnh mẽ: Virus Viêm gan B lây lan qua nhiều đường khác đường máu, đường tình dục mẹ truyền sang - Mức độ nguy hiểm lớn: Sau xâm nhập vào thể virus viêm gan B tiếp tục nhân đôi công gan thời gian dài, hủy hoại tế bào gan, làm chức gan bị suy giảm nghiêm trọng Viêm gan B nguyên nhân hàng đầu dẫn đến xơ gan tác nhân thứ hai gây nên ung thư, năm lại có đến triệu người chết biến chứng bệnh 2.3.3 Lịch sử hình thành phát triển bệnh Lần phát bệnh đại dịch gây siêu vi viêm gan B thực Lurman vào năm 1885 Một đợt bùng phát bệnh đậu mùa xảy Bremen vào năm 1883 1289 nhân viên nhà máy đóng tàu chủng ngừa bạch huyết từ người khác Sau vài tuần, lên đến tám tháng sau đó, 191 cơng nhân tiêm chủng ngừa bị bệnh vàng da chẩn đoán bị viêm gan huyết Các nhân viên khác tiêm phòng với lơ khác bạch huyết khỏe mạnh Bây coi ví dụ cổ điển dịch tễ học nghiên cứu, chứng minh bạch huyết bị ô nhiễm nguồn gốc dịch bệnh bùng phát Sau đó, bùng phát nhiều Viêm gan B bệnh truyền nhiễm viêm gan gây siêu viêm gan B(HBV) có ảnh hưởng đến hominoidea , bao gồm người Ban đầu gọi "viêm gan huyết thanh", bệnh gây dịch bệnh phận châu Á châu Phi , bắt nguồn Trung Quốc Khoảng 1/3 dân số giới bị nhiễm thời điểm sống họ, bao gồm 350 triệu người lây nhiễm mãn tính 2.3.4 Cấu trúc Virus viêm gan B thuộc họ Hepadnaviridae, loại vi-rút hướng gan (hepatotropic) có cấu trúc nhân DNA Hiện người ta chưa nuôi cấy virus viêm gan B nghiên cứu virus viêm gan B thiết kế dựa mơ hình thực nghiệm vi-rút nhóm Hepadnavirus gây bệnh số động vật có vú marmot, sóc x ám số loài chim vịt Bắc Kinh Trong huyết bệnh nhân giai đoạn nhân đôi vi-rút, người ta tìm thấy ba kiểu cấu trúc: 2.3.4.1 Hạt Dane hay virion hồn chỉnh có đường kính 42 nm, gồm lớp : - Vỏ ngồi dày nm, cấu tạo chuỗi polypeptid Chuỗi có kích thước ngắn KN bề mặt HbsAg - Vỏ capsit cấu thành chuỗi polypeptid: + Chuỗi polypeptid lõi ngắn KN lõi vi-rút, gọi HBcAg + Chuỗi polypeptid dài có trọng lượng phân tử 25 kDa, gọi polypeptid trước lõi Cấu trúc gồm polypeptid ngắn cọng với peptid đơn, gọi HbsAg 2.3.4.2 Các cấu trúc hình cầu hình ống Hầu hết hạt HBs có hình cầu, đường kính khoảng 17-25nm, chiếm số lượng lên đến 1013/ml Ngồi có hạt hình ống, có đường kính 20nm với chiều dài thay đổi, chiếm lượng vào khoảng 1011/ml Ngược lại, huyết người có nồng độ virut thấp, chứa khoảng 10 12/ml hạt HBs hình cầu vài khơng có hạt hình ống Hai cấu trúc phần KN bề mặt virut sản xuất dư thừa bào tương tế bào gan, chúng mang đặc tính HBsAg Tuy nhiên chúng khơng chứa HBV DNA nên khơng có tính lây nhiễm Cấu trúc hình cầu hình ống có chứa kháng ngun bề mặt khơng có hạt lõi mang genome nên khơng có tính gây bệnh 2.3.4.3 Cấu trúc gen HBV Bộ gen virus viêm gan B phân tử DNA dạng vòng có khoảng 3.200 nucleotide (3,2 kb) Đây chuỗi xoắn kép khơng hồn tồn gồm hai chuỗi đơn có chiều dài khác Cấu trúc genome HBV - Chuỗi dài nằm ngồi, có cực tính âm (-), tạo nên vòng tròn liên tục với chiều dài cố định 3,2 kb Chuỗi gen mã hóa cho tất thơng tin ditruyền vi-rút - Chuỗi ngắn nằm trong, có cực tính dương (+) với chiều dài thay đổi từ 50 – 100% chiều dài gen Bộ gen DNA có cấu trúc kép gồm gen (còn gọi khung đọc mở S, C, P X Đây vùng mã hoá để tổng hợp protein vi-rút Quá trình đọc mã bắt + Ln sinh hoạt tình dục an tồn để tránh trao đổi chất dịch thể sinh hoạt tình dục qua đường miệng, âm đạo hậu mơn + Không dùng chung bàn chải, dao cạo râu, bơng tai dụng cụ khác tiếp xúc với máu chất dịch thể + Băng vết cắt vết bầm tím để tránh tiếp xúc với máu + Không chạm vào máu chất dịch người mà không dùng dụng cụ bảo vệ + Bảo đảm trẻ em sinh có mẹ mắc bệnh chủng ngừa ngay, điều trị Globulin miễn dịch viêm gan B - Phòng ngừa sử dụng thảo dược: Đã có số cơng trình nghiên cứu số loại thảo dược có tác dụng tốt bệnh viêm gan B mãn tính, Nhân trần, Bồ bồ, Cà gai leo, Mật nhân,…Trong cà gai leo nghiên cứu bản, khoa học với nhiều công trình nghiên cứu thuyết phục,và đưa vào bào chế thử nghiệm lâm sàn Thuốc đánh giá không độc, người bệnh thuyên giảm triệu chứng vàng da, mệt mỏi, men gan hạ, tỷ lệ khỏi bệnh cao 3.1.3 Các phương pháp điều trị mắc bệnh viêm gan B - Sử dụng loại thuốc chữa viêm gan B + Thuốc kháng virus: Điều trị chống virus hướng chủ yếu điều trị bệnh viêm gan B mạn tính, loại thuốc điều trị viêm gan B tốt có interferon, interferon, interferon, vidarabi, ribavirin, acid polynosinic-polycytidylic…việc sử dụng thuốc phải theo dẫn bác sĩ + Thuốc điều tiết miễn dịch: Tăng cường miễn dịch đặc thù chọn dùng acid immune ribonucleic tính chống virus viêm gan B dặc thù, thuốc tăng cường miễn dịch chọn coenzyme, polysaccharide ganoderma, dịch sơn đạu căn… Những thuốc chất thay thuốc chống virus, thông qua nâng cao chức miễn dịch thể đạt đến mục đích trừ virus + Thuốc ức chế miễn dịch: Có thể chọn dùng thuốc adrenalin, azathioprine, penicillamin,… thíc hợp dùng cho viêm gan mạn tính hoạt động có biểu tự thân miễn dịch rõ, khơng dùng cho diều trị viêm gan mạn tính kéo dài - Liệu pháp truyền ngược tự thân: + Đây phương pháp chữa viêm gan tân tiến, chúng khuyến khích thể sản sinh tế bào có tính sát thương, lợi dụng chức tự miễn dịch thể công tiêu diệt virus viêm gan, tránh tình trạng bệnh tái phát lại sau ngưng dùng thuốc kháng virus phương pháp chữa bệnh truyền thống Phương pháp tăng cường hệ miễn dịch thể, kích hoạt bạch cầu đa nhân trung tính thể, chống khối u bảo vệ gan hiệu Vì phương pháp khơng sử dụng thuốc nên thân thiện với thể người bệnh, khơng gây tác dụng phụ - Điều trị viêm gan B đông y: + Các thuốc từ dược liệu thiên nhiên giúp bổ gan, mát gan, tăng cường chức gan, bảo vệ gan không gây tác dụng phụ, nhiên lại có nét hạn chế khơng thể đào thải virus viêm gan - Điều trị cách đông tây kết hợp: + Đây phương pháp chữa viêm gan vô hiệu nhiều người sử dụng + Thuốc tây y sử dụng gây hạn chế định gay hại cho gan, nên việc kết hợp đông y để tăng cường chức thải độc gan, hỗ trợ gan, giúp tăng hiệu loại bỏ nhanh chóng virus khỏi thể - Điều trị tế bào gốc: + Đây phương pháp nhất, mang lại hiệu lớn cho bệnh nhân + Phương pháp đưa vào thể bệnh nhân tế bào tua lấy biệt hóa từ thể người bệnh nên có tính an tồn cao 3.2 Các loại vaccine 3.2.1 Sơ lược vaccine 3.2.1.1 Vài nét lịch sử vaccine Edward Jenner- bác sĩ người Anh công nhận nười sử dụng vaccine để ngừa bệnh cho ngườingay từ người ta chưa biết đến nguyên nhân gây bệnh - Năm 1976, châu Âu có dịch đậu mùa Jenner thực thành công thử nghiệm vaccine ngừa bệnh Ông chiết lấy dịch từ vết đậu bò cánh tay bệnh nhân bị nhiễm bệnh đậu bò cấy dịch lên người cậu bé tuổi khỏe mạnh, sau cậu bé mắc bệnh đậu bò sau 48 ngày cậu bé khỏi bệnh Jenner liền tiêm chất có chứa mầm bệnh đậu mùa cho cậu bé thấy cậu bé không mắc bệnh Louls Pasteur người mở kỷ nguyên đấu tranh chống bệnh nhiễm trùng việc tiêm chủng dự phòng - Ngày 4/7/1885 lần Pasteur cộng tiêm chủng 13 lần virus dại lấy từ tủy sống thỏ với độc tính tăng dần cho cậu bé tuổi, Joseph Meister bị chó dại cắn đến 14 vết thương cậu bé thoát chết - Ngày 14/10/1885, viện Pasteur thành lập, vòng năm viện điều trị cho 5000 người Hiện nay, nhiều loại vaccine đời, vaccine truyền thống cải tiến phát triển quy mô công nghiệp, phục vụ cho chương trình tiêm chủng mở rộng làm giảm tỷ lệ tử vong trẻ em với nhiều bệnh nguy hiểm 3.2.1.2 Khái niệm vaccine Vaccine chế phẩm có tính kháng ngun dùng để tạo miễn dịch đặc hiệu chủ động, nhằm tăng sức đề kháng thể số tác nhân gây bệnh cụ thể 3.2.1.3 Thành phần vaccine - Kháng nguyên: Là chất hóa học có khả gây thể trả lời miễn dịch, đặc biệt sản xuất kháng thể Thông thường kháng nguyên protein hay loại polysaccharide - Chất bổ trợ vaccine : Là chất bổ sung vào vaccine, có khả kích thích sinh miễn dịch khơng đặc hiệu nhằm nâng cao hiệu lực độ dài miễn dịch vaccine 3.2.1.4 Đặc tính vaccine - Tính an toàn: loại vaccine sản xuất vô trùng, khiết không độc với thể vật chủ - Tính hiệu lực: vaccine có hiệu lực lớn vaccine gây miễn dịch mức độ cao tồn thời gian dài - Tính kháng nguyên: + Kháng nguyên mạnh kháng nguyên vào thể lần sinh nhiều kháng thể + Kháng nguyên yếu chất phải đưa vào nhiều lần kèm theo tá dược sinh kháng thể - Tính miễn dịch : tạo hiệu đề kháng cho thể sau tác nhân gây bệnh xâm nhập 3.2.1.5 Cơ chế hoạt động vaccine Khi tiêm vaccine(kháng nguyên) vào thể, hệ miễn dịch nhận diện vaccine vật thể lạ tiêu dịch chúng đáp ứng miễn dịch ghi nhớ Về sau tác nhân thực thụ gây bệnh xâm nhập thể, hệ miễn dịch tư sẵn sàng để công tác nhân gây bệnh nhanh chóng hữu hiệu cách huy động nhiều thành phần hệ miễn dịch, đánh thức tế bào lympho nhớ để tiêu diệt tác nhân gây bệnh 3.2.1.6 Phân loại vaccine - Dựa vào thành phần kháng nguyên: + Vaccine hệ I - vaccine toàn khuẩn bao gồm kháng nguyên thân, vỏ bọc độc tố +Vaccine hệ II: vaccine chứa số thành phần gây bệnh mầm bệnh + Vaccine hệ III - vaccine tái tổ hợp: vaccine sản xuất công nghệ gen - Dựa vào hoạt tính mầm bệnh: + Vaccine vô hoạt( vaccine chết) : điều chế từ vi khuẩn virus bị giết chết Vaccine chứa kháng nguyên vô hoạt yếu tố vật lý (nhiệt độ, tia tử ngoại, sóng siêu âm, hóa chất acid phenic) + Vaccine nhược độc( vaccine sống nhược độc): Là loại vắc xin chế từ vi khuẩn virut làm yếu đến mức không gây nguy hiểm cho thể đáp ứng miễn dịch tốt, từ chủng vi sinh vật vốn có tính gây bệnh thấp động vật tuyển chọn từ tự nhiên 3.2.2 Các vaccine truyền thống ngừa virut viêm gan 3.2.2.1 Sơ lược vaccine truyền thống Vaccine viên gan B truyền thống gọi Vaccine viêm gan B hệ thứ chế tạo từ huyết tương người mang HBsAg (+) HBsAg tinh chế để loại trừ yếu tố khác gắn vào Vaccine dùng để phòng bệnh cho người lớn, trẻ sơ sinh có nguy mắc viêm gan B chứng tỏ loại Vaccine có hiệu lực an toàn Các loại Vaccine hệ thứ gồm : Hevac B (Pasteur), Recombivax HB 3.2.2.1.1 Hevac B (Pasteur) Là vaccine sản xuất từ Pháp có tác dụng bảo vệ chống lại nhiễm siêu vi khuẩn viêm gan B Tuy nhiên có tác dụng sử dụng đến liều dùng thứ hai Vì vậy, vaccine sử dụng khả tái phát nhiễm virut viêm gan B trình tiêm chủng thấp nhất.Vaccine phải tiêm bắp thịt 3.2.2.1.2 Recombivax HB Là vaccine định để phòng ngừa nhiễm trùng gây tất loại phản ứng virut viêm gan B Recombivax HB phê duyệt để sử dụng dành cho lứa tuổi 3.2.2.2 Tính an toàn vaccine viêm gan B Tất loại vaccine viêm gan B sử dụng Việt Nam phải đáp ứng tiêu chuẩn chất lượng an toàn quốc tế, đạt tiêu chuẩn chất lượng theo quy định Bộ Y tế Trước vào sử dụng, lơ vaccine sản xuất kiểm tra chất lượng tăng cường độ ăn toàn thêm lần xuất xưởng Vaccine có số tác dụng phụ nhỏ phổ biển, chẳng hạn đau chỗ tiêm sốt kéo dài ngày Cũng giống tất loại vaccine khác, vaccine viêm gan B gây phản ứng phản vệ với xác suất ca 1,1 triệu liều vaccine Trong trường hợp phản ứng xảy ra, cần báo cho trung tâm y tế gần để họ kịp thời theo dõi xử lí Ngồi tác dụng phụ khác ghi nhận với vaccine viêm gan B 3.2.2.3 Tính miễn dịch vaccine Sự đáp ứng miễn dịch với vaccine viêm gan siêu vi B định nhiều yếu tố tạo miễn dịch yếu tố ký chủ Yếu tố tạo miễn dịch bao gồm liều vaccine sử dụng , lịch tiêm chủng , vị trí đường tạo miễn dịch điều kiện bảo quản vaccine Các yếu tố liên quan đến ký chủ ảnh hưởng đến đáp ứng với chủng ngừa viêm gan bao gồm tuổi tác, phái tính, thể trọng, thói quen hút thuốc tình trạng bệnh Sự đáp ứng miễn dịch với vaccine viêm gan siêu vi, diễn đạt tỷ lệ nghịch chuyển huyết lẫn hàm lượng Anti HBs trung bình: -Tuổi tác: đáp ứng miễn dịch suy giảm theo tuối tác Trong nghiên cứu Malvern (Úc) tạo miễn dịch thành công 94% lứa tuỗi < 30 67% lứa tuổi > 30 Phái tính: nữ giới cho thấy đáp ứng miễn dịch tốt nam giới kết hợp có ý nghĩa cao phái nữ đáp ứng miễn dịch thuận lợi độc lập với biến số khác Theo nghiên cứu Corrao ,1998 tỉ lệ đáp ứng nam 79,7 % nữ 92,2% -Tác động vị trí tiêm: Theo nghiên cứu Shaw FE,1989: có cách tiêm: Nhóm I: tiêm vào tay (cơ tam giác) kim inch Nhóm II : tiêm vào mơng kim inch Nhóm III: tiêm vào mông kim inch Tỉ lệ đáp ứng hàm lượng kháng thể trung bình cao nhóm I thấp Trong nhóm II chiều dài kim tiêm quan trọng mũi tiêm vào mơng áp dụng , kim ngắn chắn lưu vaccine lớp mỡ dày, nơi thiếu tế bào đáp ứng miễn dịch thẩm thấu -Thuốc lá: hút thuốc làm giảm đáp ứng kháng thể có lẽ ức chế chức tế bào T , co mạch gây nicotin đóng vai trò việc làm chậm thải vaccin từ vị trí tiêm chích -Nghiện rượu: sản xuất kháng thể biến cố phụ thuộc lympho bào T4 , người nghiện rượu có giảm có ý nghĩa lớp giúp đỡ tác động lympho bào làm giảm đáp ứng họ tạo miễn dịch -Stress hỗ trợ xã hội: Cơng trình nghiên cứu Glaser cho thấy stress đơn làm tỗn hại chức miễn dịch làm giảm đáp ứng miễn dịch vaccin viêm gan siêu vi B -Ðáp ứng miễn dịch suy giảm bệnh nhân thẩm tích máu: Các đơn bào bệnh nhân khơng thể tạo tín hiệu cần thiết sản xuất interleukin -2(IL-2) tế bào T đáp ứng kháng nguyên Mức IL-2 thấp gây đáp ứng tăng sinh tế bào T sụt giảm tính mẫn thụ thể IL-2 thất bại chế tác động phản hồi âm tính - Tiểu đường phụ thuộc insulin: Các tính chất bất thường đa miễn dịch học dường xảy bệnh nhân tiểu đường phụ thuộc insulin mắc bệnh thời gian dài Ðiều ngun nhân tính mẫn cảm lớn nhiễm bệnh quan sát thấy bẹnh nhân có kiểm sốt chuyển hóa - Các yếu tố định mặt di truyền: Trong cơng trình nghiên cứu trước người ta chứng minh haplotype mở rộng HLA-B8 ,SC01 ,DR3 người không đáp ứng vacxin viêm gan siêu vi B thiếu gen đáp ứng miễn dịch HBsAg tính đáp ứng kế thừa theo kiễu trội Nhiều cơng trình nghiên cứu chứng tỏ thất bại vacxin viêm gan siêu vi B khơng đặc tính vacxin hay bệnh nhân(tuổi tác ,béo phì.) mà gen lặn phức hợp tương hợp mô chủ yếu Như đáp ứng kháng thể bình thường HBsAg diện gen đáp ứng miễn dịch trội ,trong thiếu gen dẫn đến hàm lượng Anti HBs thấp tính lặn Sự đáp ứng miễn dịch người HBsAg chưa nghiên cứu nhiều hệ thống Tuy nhiên dựa điều quan sát chuột kiến thức miễn dịch học, giả định chế sau tính khơng đáp ứng chủng ngừa vaccin viêm gan siêu vi B: - Các khiếm khuyết trình diện HBsAg lympho bào T - Một lổ hỏng kho trữ tế bào T - Sự ứ chế lympho bào T ức chế chuyên biệt HbsAg - Một lỗ hỏng kho trữ tế bào B 3.2.2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu lực vaccine Tùy loại vắc-xin, có loại nhạy cảm với nhiệt độ cao, có loại nhạy cảm với nhiệt độ đông băng, hay nhạy cảm với ánh sáng - Mất hiệu lực nhiệt độ cao Vắc-xin bị tiếp xúc với nhiệt độ +8oC bị hiệu lực sau thời gian Chỉ thị nhiệt độ lọ vắc-xin sử dụng để phát xem vắc-xin có bị hỏng tiếp xúc với nhiệt độ cao quy định không - Đông băng Các vắc-xin viêm gan B cần bảo quản nhiệt độ từ +2°C đến +8°C vắc-xin bị hỏng tiếp xúc với nhiệt độ đông băng - Bản chất liều lượng vacxin Hiệu lực vacxin cao chứa kháng ngun có tính sinh miễn dịch mạnh Mặt khác vacxin phải sản xuất từ chủng vi sinh vật “đủ tư cách đại diện” cho tác nhân gây bệnh Đường đưa vacxin vào thể - Các chất phụ gia miễn dịch: Các chất phụ gia miễn dịch dùng rộng rãi hợp chất nhôm (aluminum hydroxit aluminum photphat) Chất phụ gia miễn dịch có tác dụng làm cho vacxin chậm giáng hóa, giảm liều lượng số lần tiêm chủng Chất phụ gia có tác dụng kích thích thể đáp ứng miễn dịch mạnh Như chất phụ gia miễn dịch vừa có tác dụng làm tăng hiệu kinh tế, vừa có tác dụng làm tăng hiệu miễn dịch - Tình trạng dinh dưỡng: Những ảnh hưởng tình trạng dinh dưỡng đến đáp ứng miễn dịch xác định Những kết nghiên cứu cho thấy, suy dinh dưỡng làm giảm đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào rõ miễn dịch dịch thể Tuy nhiên trẻ suy dinh dưỡng cần tiêm chủng lý do: Thứ nhất, chúng có khả đáp ứng miễn dịch; thứ hai, chúng dễ bị mắc bệnh truyền nhiễm - Kháng thể mẹ truyền: Kháng thể mẹ truyền có khả ức chế đáp ứng miễn dịch loại vacxin tương ứng Vì hiệu lực miễn dịch số vacxin bị hạn chế tiêm chủng sớm hiệu giá kháng thể mẹ truyền tương đối cao Những bệnh lao, bại liệt có chế đề kháng chủ yếu miễn dịch qua trung gian tế bào, đứa trẻ không mẹ truyền, phải tiêm vacxin phòng lao uống vacxin phòng bại liệt từ sớm ngày sau sinh 3.2.2.5 Nhược điểm vaccine truyền thống - Số lượng hạn chế kháng ngun ít, khơng phải tác nhân gây bệnh nhân thành số lượng lớn để sản xuất vaccine - Cần phải nuôi tế bào người động vật tốn để sản xuất vaccine từ virus người động vật - Các chủng nhược độc trở lại trạng thái cường độc - Việc bất hoạt khơng hữu hiệu gây lan truyền bệnh vaccine - Thời hạn sử dụng ngắn phải bảo quản lạnh 3.2.3 Phương pháp tạo vaccine tái tổ hợp ngừa virus viêm gan B 3.2.3.1 Các khái niệm liên quan 3.2.3.1.1 Tái tổ hợp gì? Khi gen liên kết khơng hồn tồn, xuất dạng giao tử khơng giống cha mẹ có xếp lại gen Hiện tượng gọi tái tổ hợp (recombination) dạng xuất gọi dạng tái tổ hợp (recombinant) 3.2.3.1.2 Vaccine tái tổ hợp Đây loại nucleic acid vaccine, dựa nguyên lý mã hóa cho loại protein kháng nguyên đặc hiệu tiêm vào vật chủ (tế bào động vật vi sinh vật) để sản xuất kháng nguyên khởi động phản ứng miễn dịch Vaccine tái tổ hợp chế phẩm sinh học vi sinh vật làm giảm độc lực, khơng có khả gây bệnh đối tượng nhận vaccine Khi đưa vaccine vào thể phương pháp khác nhau, chúng có khả kích thích thể sinh miễn dịch Khi thể chịu kích thích kháng nguyên, cảm ứng tạo loại protein có chức bảo vệ gọi kháng thể (antibody) 3.2.3.2 Nguyên lý kĩ thuật 3.2.3.2.1 Chọn nguyên liệu cho trình sản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B - DNA chọn làm phương tiện vận chuyển gene (vector) DNA plasmide tế bào vi khuẩn E.Coli (Eschenchia Coli) tách làm theo phương pháp chiết tách DNA plasmide Có đủ đặc điểm cần thiết vector + Có điểm khởi đầu chép (Origin of replication- ori) để tự chép tồn độc lập tế bào + Có đoạn trình tự nhận biết cho enzyme cắt hạn chế EcoRI SalI để hở tạo nơi lắp ráp đoạn gene lạ + Có trình tự khởi điểm promoter cho trình phiên mã mRNA ribosome binding site cho trình dịch mã tạo nucleotide + Có gene thị kháng ampicillin cho phép dễ dàng nhận biết chúng tế bào nhận q trình ni cấy - DNA chứa gene cần nghiên cứu (DNA lạ) gene mã hóa cho kháng nguyên bề mặt HbsAg thu nhận từ tế bào virus Hepatitis B chiết tách, làm sạch, kiểm tra theo phương pháp chiết tách DNA - Các enzyme sử dụng kĩ thuật tạo dòng : + Enzyme tổng hợp: DNA polymerase dùng để xúc tác cho trình chép acid nucleotide đoạn DNA khuôn + Enzyme cắt hạn chế (Restriction Endonuclease) : EcoRI SalI dùng để gắn vào vị trí nhận biết đơn đặc hiệu plasmide cắt thành hai mảnh, gắn vào hai đầu DNA quan tâm cắt chúng thành dạng đầu dính tương ứng với plasmide + Enzyme nối :T4 DNA ligase để nối hai đầu dính plasmide DNA lạ nhờ liên kết phosphodiester - Tế bào vật chủ tế bào vi khuẩn E.Coli 3.2.3.2.2 Giai đoạn cắt với tham gia enzyme RE kiểu II: Enzyme RE (Restriction Endonuclease) kiểu II enzyme cắt hạn chế đặc hiệu bên đoạn nhận biết vị trí xác định dùng công nghệ AND tái tổ hợp Ưu điểm enzyme có kiểu hoạt tính cắt, enzyme cắt vị trí phù hợp định trước bên hay cạnh trình tự nhận biết Từ tế bào vi khuẩn E.Coli dùng enzyme thích hợp cắt đoạn gene làm DNA plasmide Nhờ emzyme RE đến plasmide E.Coli gặp chuỗi đích phân tử DNA plasmide cắt DNA làm mảnh dạng đầu dính Tạo nên plasmide có đầu cắt hạn chế Tiếp theo, từ virus Hepatittis B xác định đoạn gene mã hóa cho kháng nguyên bề mặt HbsAg,nhờ enzyme DNA polymerase thực phản ứng PCR khuyếch đại lượng gene lên nhiều lần tạo lượng lớn DNA quan tâm tạo thành cDNA Sau sử dụng enzyme thích hợp cắt đoạn gene cDNA Gắn đầu đoạn gene với enzyme cắt hạn chế tạo thành gene gắn enzyme, sau cắt đoạn gene theo đầu lệch enzyme cắt hạn chế EcoRI SalI Ta đoạn DNA lạ có đầu cắt hạn chế tương thích với plasmide sử lý 3.2.3.2.3 Giai đoạn nối với có mặt DNA ligase Bước kĩ thuật di truyền nối đoạn DNA vào vector chuyển gene để tạo plasmide có mang DNA lạ Phản ứng nối thực nhờ DNA ligase Đầu tiên, hai mảnh DNA đầu lệch có base bổ sung nên chúng tiến lại gần để tạo liên kết hidro base nito bổ sung Sau nucleotide hai đầu nối tạo liên kết ester OH(3’) P(5’) tác dụng DNA ligase Như với giai đoạn nối ta thu plasmide ghép gene virus Hepatitis B 3.2.3.2.4 Giai đoạn biến nạp Nhờ công nghệ điện biến nạp (nhờ xung điện) hóa biến nạp (nhờ Ca 2+) để thay đổi màng tế bào vi khuẩn E.Coli, tạo lỗ hở màng tế bào để Plasmide vào Tại DNA mang kháng nguyên bề mặt HbsAg virus Hepatitis B plasmide hợp tạo virus tái tổ hợp 3.2.3.2.5 Phát dòng DNA tái tổ hợp chung Sau biến nạp DNA tái tổ hợp vào tế bào vật chủ E.Coli, ta tiến hành nuôi cấy riêng rẽ vi khuẩn mơi trường có chứa ampicillin theo dõi + Nếu có khuẩn lạc xuất hiện, chứng tỏ vi khuẩn có mang gene ampicillin tức chúng có mang plasmide ban đầu plasmide tái tổ hợp + Ngược lại, khơng xuất khuẩn lạc chứng tỏ vi khuẩn mang DNA tự nối thành mạch vòng Mục đích giai đoạn nhờ vào mơi trường ni cấy để phân lập, chọn dòng 3.2.3.3.Quy trình sản xuất vaccine tái tổ hợp- Sản xuất vaccine tái tổ hợp viêm gan B Với công nghệ gene đại, người ta cắt đoạn gene tổng hợp vi sinh vật gây bệnh, ghép gene vào vi khuẩn hay tế bào nuôi cấy để tạo protein đặc hiệu cho mầm bệnh, dùng protein để tiêm chủng tạo miễn dịch đặc hiệu Dạng vaccine an tồn tác dụng phụ, khả miễn dịch cao Minh họa quy trình sản xuất Vaccine phòng ngừa virut viêm gan Bở người: Bước 1: Lựa chọn kháng nguyên đích: kháng nguyên bề mặt HbsAg virus Hepatitis B Bước 2: Phân tích xác định gen đích Tách chiết mARN Gắn đuôi polyA Tạo cDNA mạch đơn Olligo T Hỗn hợp cDNA mạch đơn oligo T Tách riêng mRNA Tổng hợp cDNA kép Các mRNA eukaryote có poly A đầu 3’ Chính trình tự tạo điều kiện thuận lợi cho việc tổng hợp sợi DNA bổ sung cDNA Khi đem trộn lẫn đoạn ngắn gồm nucleotide thymine (oligo T) với mRNA xảy lai hóa với mRNA Đoạn oligo T làm mồi cho enzyme phiên mã ngược tổng hợp sợi cDNA maf sản phẩm sợi kép RNA-cDNA Ở đầu 3’ cDNA tổng hợp có trình tự đầu 5’ở mRNA Tiếp theo, cách sử lý với NaOH, sợi mRNA bị loại Kế tiếp đầu 3’ cDNA lại làm mồi cho DNA polymerase tổng hợp sợi thứ hai dọc theo khn vốn có Tạo thành cDNA sợi kép Bước 3: Nhân dòng gen cADN kép Tạo ADN tái tổ hợp Biến nạp Tế bào chủ Thu nhận khuẩn lạc chứa cADN Xác định dòng cần E.Coli Chất kháng sinh ampicillin Thu nhận dòng cần Bước 4:Biểu gen tế bào chủ Tế bào chủ Sinh vật nhân sơ E.coli Bước 5,6: Nuôi cấy thu nhận protein kiểm tra chất lượng tinh protein Nuôi cấy Thu nhận protein Cô đặc Phương pháp vi lọc tủa B1: Trao đổi ion Tinh protein Phương pháp sắc ký có độ phân giải cao B2: Lọc gel B3: Sắc ký tương tác kị nước hay sắc ký lực Bước 7: Sản xuất chế phẩm Bước 8: Kiểm tra sản phẩm 3.2.3.4 Ưu điểm phương pháp - Nâng cao suất sản xuất vaccine - Tạo miễm dịch tốt thể bị suy giảm miễn dịch thể bị suy nhược - Tạo sản phẩm vaccine với nhiều ưu điểm: + Vaccine tái tổ hợp an tồn khơng sử dụng trực tiếp vi sinh vật gây bệnh ( gen độc loại trừ ), hiệu lực ổn định + Giá thành hạ khơng cần nuôi virus phôi ga hay tổ chức mô động vật vốn phức ạp tốn kém, giảm bớt chi phí vận chuyển chi phí kiểm tra tính an tồn trước dùng, khồng cần bảo quản lạnh.Phù hợp với điều kiện sử dụng nước phát triển nước ta 3.2.3.5 Ý nghĩa việc sản xuất vaccine tái tổ hợp - Đối với người: +Tạo “Lá chắn” cho thể Ví dụ: Đối với bệnh tiểu đường típ 1: Căn bệnh tiến triển hệ miễn dịch người bệnh cơng loại Protein có tên GAD ( nằm tế bào tuyến tuy) tế bào có chức giải phóng insulin Khi tiêm phòng vaccine hệ vào thể triệt tiêu q trình ngăn chặn việc giải phóng kháng thể miễn dịch tiêu diệt tế bào có chứa loại Protein GAD Ngồi ra, loại vaccine có tác dụng điều chỉnh hoạt động hệ miễn dịch, ngăn chặn khơng cơng tế bào nguyên vẹn khớp người người mắc bệnh khớp - Đối với vật nuôi: + Vaccine tái tổ hợp có thành cơng định việc ngăn chặn nhiều bệnh động vật đa số virus gây Ví dụ: Bệnh đốm trắng tôm virus WSSV gây Bệnh hoại tử tuyến tụy IPNV cá nước mặn IV Kết luận Sự đời vaccine có ý nghĩa vơ to lớn nhân loại Nó giúp cho lồi người khỏi nhiều đại dịch hiểm nghèo (đậu mùa, bại liệt; sởi, uốn ván v.v.) Tuy nhiên, nhiều bệnh thách thức người, chưa có vaccine đủ hiệu để ngăn ngừa Trong phải kể nhiều bệnh ký sinh trùng (thí dụ sốt rét, giun, sán), vi khuẩn (lao), virus (cúm, sốt xuất huyết, AIDS v.v.) Một số lý tác nhân gây bệnh biến đổi thường xun khiến cho miễn dịch khơng hữu hiệu chí cơng vào hệ miễn dịch trường hợp HIV v.v Các loại vaccine truyền thống dần tính phòng bệnh.Đặc biệt gây phản ứng phụ chết người thời gian gần Tính ưu việt loại vaccine ngày khẳng định: tinh khiết, phản ứng phụ, hiệu lực tạo miễn dịch cao, sản xuất nhanh giá thành thấp Có thể nói, thành tựu từ khoa học kỹ thuật ứng dụng công nghệ sinh học y học , đặc biệt ứng dụng công nghệ vi sinh sản xuất vaccine mở nhiều hướng nghiên cứu hiệu công tác điều trị bệnh Ngày với phát triển không ngừng cơng nghệ sinh học người tìm vũ khí hữu hiệu để bảo vệ với số lượng nhiều, an tồn nhanh chóng Đặc biệt Vaccine hệ hay Vaccine tái tổ hợp ... xuất Vaccine tái tổ hợp phòng ngừa viêm gan B để làm b o cáo II B nh viêm gan B 2.1 Khái niệm b nh viêm gan B Viêm gan B bệnh gây loại virus có tên Hepatitis B Virus (viết tắt HBV), gọi viêm gan. .. thành viêm gan B .Viêm gan B có hai dạng: - Viêm gan B cấp tính b nh lý ngắn ngày, thường xảy vòng tháng kể từ phơi nhiễm với virus viêm gan B Bệnh đơi dẫn đến viêm gan B mãn tính; - Viêm gan B mãn... nhân viêm gan cấp tính Các sản phẩm trung gian phiên virus trình nhân lên HBV tìm thấy ngồi gan 2.2.Biểu b nh viêm gan B 2.2.1.Triệu chứng b nh viêm gan B Bệnh viêm gan B có triệu chứng, đặc biệt