KẾT QUẢ bảo QUẢN LẠNH mẫu TINH DỊCH BÌNH THƯỜNG và THIỂU TINH NẶNG KHI sử DỤNG máy NICOOL LM1O và PHƯƠNG PHÁP ĐÔNG TINH VIÊN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẰNG KẾT QUẢ BẢO QUẢN LẠNH MẪU TINH DỊCH BÌNH THƯỜNG VÀ THIỂU TINH NẶNG KHI SỬ DỤNG MÁY NICOOL LM1O VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐÔNG TINH VIÊN LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẰNG KẾT QUẢ BẢO QUẢN LẠNH MẪU TINH DỊCH BÌNH THƯỜNG VÀ THIỂU TINH NẶNG KHI SỬ DỤNG MÁY NICOOL LM1O VÀ PHƯƠNG PHÁP ĐÔNG TINH VIÊN Chuyên ngành : Mô phôi thai học Mã số : 62720102 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Bình HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trong q trình học tập hồn thành luận văn này, ngồi nỗ lực thân, em hướng dẫn giúp đỡ tận tình thầy cô, anh chị, bạn bè Nhà trường người thân gia đình Trước hết em xin bày tỏ lời cảm ơn tới Ban giám hiệu trường Đại học Y Hà Nội, Phòng quản lý đào tạo sau đại học, Bộ môn Mô học – Phôi thai học Bộ môn Y sinh học – Di truyền tạo điều kiện cho em học tập, nghiên cứu, hồn thành luận văn Em xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS Nguyễn Khang Sơn PGS Nguyễn Mạnh Hà – người thầy cho em phương pháp luận, bảo em nhiều kiến thức chuyên ngành tạo điều kiện thuận giúp đỡ em trình học tập nghiên cứu Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS Nguyễn Thị Bình – người thầy cho em ý kiến quý báu người trực tiếp tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ em suốt trình làm nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Hội đồng thông qua đề cương Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp đóng góp cho em nhiều ý kiến quý báu, giúp đỡ em sữa chữa thiếu sót luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô, anh chị Bộ môn Mô học – Phôi thai học giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em trình nghiên cứu Cuối cùng, em xin bày tỏ biết ơn tới gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành đề tài Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Nguyễn Thị Hằng LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ BQL Bảo quản lạnh CSF Cryosurvival factor / Chỉ số sống sót sau bảo quản lạnh DNA Desoxyribonucleic acid IUI Intra Uterine Insemination/ Bơm tinh trùng vào buồng tử cung IVF In Vitro Fertilization/ Thụ tinh ống nghiệm ICSI Intra – cytoplasmic Sperm Injection/ Bơm tinh trùng vào bào tương noãn PR Progressive Motility / Di động tiến tới NP Non-progressive Motility/ Di động không tiến tới TT Tinh trùng WHO World Health Organization / Tổ chức Y tế giới HOS Hypo-osmotic Swelling CPA Cryoprotectant Agent/ Chất bảo vệ lạnh PESA Percutaneous Epididymal Sperm Aspiration/ Lấy tinh trùng từ mào tinh kim xuyên qua da TESA Testicular Sperm Aspiration/ Lấy tinh trùng từ tinh hoàn OPS Open – pulled Straw/ Cọng rạ đặc biệt MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tình hình vơ sinh giới Việt Nam 1.1.1 Tỷ lệ vô sinh giới Việt Nam 1.1.2 Vô sinh nam 1.2 Xét nghiệm tinh dịch đồ 1.2.1 Các số cần đánh giá xét nghiệm tinh dịch đồ 1.2.2 Giá trị tiên lượng số tinh dịch đồ .7 1.3 Bảo quản lạnh tinh trùng người 1.3.1 Lịch sử phát triển bảo quản lạnh tinh trùng người .7 1.3.2 Cơ sở khoa học phương pháp bảo quản lạnh 10 1.3.3 Các phương pháp bảo quản lạnh .13 1.3.4 Bảo quản lạnh số lượng tinh trùng 17 1.4 Những nghiên cứu phương pháp đông tinh viên 20 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 2.3 Cỡ mẫu phương pháp chọn mẫu 22 2.4 Thiết kế nghiên cứu 23 2.5 Các biến số nghiên cứu 23 2.6 Kĩ thuật công cụ thu thập số liệu 23 2.6.1 Kĩ thuật thu thập số liệu: thu thập số liệu dựa biểu mẫu nghiên cứu 23 2.6.2 Công cụ thu thập số liệu .23 2.7 Quy trình thu thập số liệu 24 2.7.1 Quy trình xét nghiệm tinh dịch 24 2.7.2 Quy trình bảo quản tinh trùng 24 2.8 Sai số cách khống chế .28 2.8.1 Sai số nghiên cứu viên: 28 2.8.2 Sai số thao tác kỹ thuật: 28 2.9 Quản lý phân tích số liệu .28 2.10 Đạo đức nghiên cứu 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ .31 3.1 So sánh kết bảo quản lạnh mẫu tinh dịch bình thường hạ nhiệt máy Nicool LM10 phương pháp đông tinh viên 31 3.1.1 Đặc điểm mẫu tinh dịch nghiên cứu 31 3.1.2 So sánh kết bảo quản lạnh hạ nhiệt máy Nicool LM10 phương pháp đông tinh viên mẫu tinh dịch bình thường 33 3.1.3 Đánh giá mối tương quan số số trước bảo quản đến chất lượng tinh trùng sau bảo quản 37 3.2 So sánh kết bảo quản lạnh mẫu tinh dịch thiểu tinh nặng hạ nhiệt máy Nicool LM10 phương pháp đông tinh viên 43 3.2.1 Đặc điểm mẫu tinh dịch nghiên cứu 43 3.2.2 So sánh kết bảo quản lạnh hạ nhiệt máy Nicool LM10 phương pháp đông tinh viên mẫu tinh dịch thiểu tinh nặng .45 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 50 4.1 Về quy trình bảo quản lạnh sâu 50 4.1.1 Xét nghiệm tinh dịch chọn mẫu nghiên cứu 50 4.1.2 Cân với môi trường bảo vệ lạnh 51 4.1.3 Đóng gói hạ nhiệt độ 53 4.1.4 Lưu trữ 55 4.1.5 Rã đông 55 4.2 So sánh kết bảo quản lạnh mẫu tinh dịch bình thường hạ nhiệt máy Nicool LM10 phương pháp đông tinh viên 56 4.2.1 Mật độ 57 4.2.2 Tỷ lệ sống 57 4.2.3 Tỷ lệ di động 58 4.2.4 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường .59 4.2.5 Đánh giá mối tương quan số số trước bảo quản đến chất lượng tinh dịch sau bảo quản .61 4.3 So sánh kết bảo quản lạnh mẫu tinh trùng thiểu tinh nặng hạ nhiệt máy Nicool LM10 phương pháp đông tinh viên 63 4.3.1 Tổng số tinh trùng tỷ lệ thu hồi tinh trùng .63 4.3.2 Tỷ lệ tinh trùng sống 64 4.3.3 Tỷ lệ di động 66 KẾT LUẬN 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các số xét nghiệm tinh dịch đồ Bảng 1.2 Các loại tinh dịch đồ bất thường theo WHO 2010 Bảng 3.1 Chất lượng tinh trùng mẫu nghiên cứu trước BQL 32 Bảng 3.2 Chất lượng tinh trùng nhóm sau bảo quản lạnh 33 Bảng 3.3 So sánh mật độ tỷ lệ sống sau BQL nhóm .34 Bảng 3.4 So sánh tỷ lệ tinh trùng di động, di động tiến tới sau BQL nhóm .35 Bảng 3.5 So sánh tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường sau BQL nhóm .36 Bảng 3.6 So sánh số CSF sau bảo quản lạnh nhóm .36 Bảng 3.7 Chất lượng tinh trùng mẫu thiểu tinh nặng trước BQL 44 Bảng 3.8 Chất lượng tinh trùng nhóm sau bảo quản lạnh 45 Bảng 3.9 So sánh tổng số tinh trùng tỷ lệ tinh trùng sống sau BQL nhóm .46 Bảng 3.10 So sánh tổng số tinh trùng di động, di động tiến tới sau BQL nhóm .47 Bảng 3.11 So sánh tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường sau BQL nhóm .48 Bảng 3.12 So sánh số CSF sau bảo quản lạnh nhóm .48 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố mẫu tinh dịch bình thường theo lứa tuổi 31 Biểu đồ 3.2 Mối tương quan mật độ tinh trùng chất lượng tinh trùng sau bảo quản nhóm đơng lạnh chậm .37 Biểu đồ 3.3 Mối tương quan mật độ tinh trùng trước bảo quản chất lượng tinh trùng sau bảo quản nhóm đơng viên có CPA 38 Biểu đồ 3.4 Mối tương quan mật độ tinh trùng trước bảo quản chất lượng tinh trùng sau bảo quản nhóm đơng viên khơng có CPA 39 Biều đồ 3.5 Mối tương quan tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước bảo quản chất lượng tinh trùng sau bảo quản nhóm đông lạnh chậm 40 Biểu đồ 3.6 Mối tương quan tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước bảo quản đến chất lượng tinh trùng sau bảo quản nhóm đơng tinh viên có CPA 41 Biểu đồ 3.7 Mối tương quan tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước bảo quản đến chất lượng tinh trùng sau bảo quản nhóm đơng tinh viên khơng có CPA 42 Biểu đồ 3.8 Phân bố mẫu tinh dịch thiểu tinh nặng theo lứa tuổi .43 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Tỷ lệ vô sinh giới Hình 1.2 Quá trình hạ nhiệt độ máy Nicool LM10 .14 Hình 1.3 Ảnh hưởng tốc độ làm lạnh đến tế bào đơng lạnh 16 Hình 1.4 Các dụng cụ sử dụng BQL số lượng tinh trùng .19 Hình 2.1 Các bước kĩ thuật đơng tinh viên 27 Hình 2.2 Các bước kĩ thuật rã đông đông tinh viên .28 ĐẶT VẤN ĐỀ Vô sinh tình trạng ngày phổ biến khơng có dấu hiệu ngừng gia tăng với ước tính gần 15% cặp vợ chồng giới gặp tình trạng [1] Vơ sinh nam, nữ, vợ chồng vô sinh không rõ nguyên nhân Trong trường hợp vô sinh nam, có tới 90% bất thường tinh trùng khơng có tinh trùng, số lượng tinh trùng ít, tinh trùng di động yếu hay tinh trùng dị dạng… [2] Trước tình hình trên, giải pháp hiệu giúp nâng cao khả có cho cặp vợ chồng bảo quản lạnh tinh trùng để sử dụng cho kĩ thuật hỗ trợ sinh sản bơm tinh trùng vào buồng tử cung (Intra Uterine Insemination – IUI), thụ tinh ống nghiệm (In Viro Fertilization – IVF) hay đặc biệt bơm tinh trùng vào bào tương noãn (Intra – cytoplasmic Sperm Injection – ICSI) với trường hợp số lượng tinh trùng Bảo quản lạnh (BQL) tinh trùng người kỹ thuật thường quy áp dụng trung tâm hỗ trợ sinh sản hay ngân hàng tinh trùng với mục đích lưu giữ tinh trùng trước tiến hành thụ tinh nhân tạo hay thụ tinh ống nghiệm Phương pháp đặc biệt quan trọng trường hợp nam giới trước xạ trị, hóa trị liệu mắc số bệnh đái tháo đường hay bệnh tự miễn, dẫn đến tổn thương tinh hoàn rối loạn chức xuất tinh, trường hợp hiến tinh trùng Ngoài ra, bảo quản tinh trùng định cho người chồng phải công tác xa thực kỹ thuật hỗ trợ sinh sản với mẫu tinh dịch tươi BQL coi thành công tinh trùng trở lại hoạt động sống bình thường, khơng bị tổn thương cấu trúc chức đưa nhiệt độ 37°C [3] Tuy nhiên có thực tế chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh giảm tỷ lệ sống, khả di động đứt gãy DNA Một thách 63 tinh trùng bình thường, mật độ tinh trùng thu hồi gần tối đa, khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với trước bảo quản Vật mang lý tưởng để bảo quản tinh trùng phải cho phép làm lạnh số lượng nhỏ tinh trùng chí tinh trùng nhằm bảo tồn chất lượng tinh trùng tránh lặp lại việc đông lạnh – rã đông mẫu, cho phép sử dụng tinh trùng từ lần thu hồi cho nhiều chu kỳ IVF Khi so sánh tỷ lệ thu hồi tinh trùng nhóm, chúng tơi nhận thấy nhóm đơng tinh viên có sử dụng chất bảo vệ lạnh cho tỷ lệ cao 90,73%; nhóm đơng lạnh chậm cho kết thấp 80,56% Giữa nhóm đơng tinh viên có khơng sử dụng chất bảo vệ lạnh cho kết khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm đơng lạnh chậm Kết tương tự kết Jin L cộng (2010) [41] Trong lịch sử, nhiều tác giả nghiên cứu bảo quản số lượng tinh trùng từ nhiều loại vật mang khác nhau, từ vật mang sử dụng từ lâu cọng rạ, cryoloop, màng suốt… đến vật mang phát triển ứng dụng gần cryotop, cell sleeper… Mỗi loại có ưu nhược điểm riêng tỷ lệ thu hồi tinh trùng, chất lượng tinh trùng sau rã đông khả thụ tinh khác tùy nghiên cứu Ví dụ với vật mang màng suốt hay cell sleeper, tỷ lệ thu hồi tinh trùng sau rã đơng cao, thất tinh trùng Tuy nhiên, bảo quản màng suốt vi thao tác, kích thước lỗ ảnh hưởng đến lưu trữ tinh trùng [38],[39], [66] Phương pháp cần phải có nguồn cung cấp có khả lẫn DNA lạ Với cell sleeper nguy lây nhiễm chéo cao [67],[69] 4.3.2 Tỷ lệ tinh trùng sống Như phân tích trên, tượng shock lạnh nên tỷ lệ tinh trùng sống sau bảo quản thấp so với trước bảo quản Đặc biệt, bất thường 64 tinh trùng phối hợp đa bất thường thiểu tinh phối hợp nhược tinh, quái tinh nên sau BQL, tỷ lệ tinh trùng sống thấp Nguyên nhân cho tỷ lệ tinh trùng sống sau bảo quản lạnh thấp liên quan đến tần số mắc khuyết tật màng quan sát thấy nhiều mẫu tinh dịch bất thường (thiểu tinh, nhược tinh hay quái tinh) Theo nghiên cứu Nguyễn Xuân Bái (2010) thấy tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường nhóm thiểu tinh thấp nhóm nhược tinh (11,2  7,1% so với 14,6  6,9%) khác biệt có ý nghĩa thống kê (p