nghiên cứu sự thay đổi nồng độ hormon steroid trong nước bọt, sữa và huyết thanh trên những người sống tại vùng phơi nhiễm chất da camdioxin ở việt nam

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Dioxin nhóm hợp chất hữu độc hại, sản phẩm phụ không mong muốn số ngành cơng nghiệp hóa chất đốt cháy sản phẩm hữu Với dặc tính khơng hòa tan nước, khó thối hóa nên môi trường bị ô nhiễm, dioxin lắng đọng đất, cặn bùn tích trữ sinh học vào số loại động vật có chuỗi thức ăn người Khi xâm nhập vào thể người, dioxin tích lũy chủ yếu mơ mỡ thể đào thải chậm Dioxin tác động đến trình sinh sản phát triển, gây rối loạn hệ thống miễn dịch nội tiết thể có hàm lượng nhỏ Nó tác động đến nhiều quan, hệ quan thể gây rối loạn bệnh lý phức tạp đa dạng, điều làm giảm tuổi thọ người bị phơi nhiễm họ hệ tương lai Trong chiến tranh Việt Nam giai đoạn 1961 đến 1972 quân đội Mỹ rải lượng lớn chất diệt cỏ có tạp nhiễm lượng lớn dioxin thành phần xuống nhiều vùng rộng lớn miền Nam Việt Nam, nhằm mục đích phát quang để phá hủy nơi ẩn lấp quân đội giải phóng chiến đấu miền Nam Việt Nam Do đặc tính bền vững dioxin, tác động gây nên hậu nghiêm trọng sức khoẻ người môi trường sống Việt Nam Dioxin ảnh hưởng tới bào thai từ sớm qua rau thai, trẻ nhỏ tiếp xúc với dioxin bị ảnh hưởng phát triển thể chất tâm thần , Phơi nhiễm dioxin gây tác dụng độc hại mà số tác động hệ thống nội tiết Bên cạnh đó, với đặc tính ưa lipid dioxin nên người mẹ cho bú, dioxin đồng phân chủ yếu tập trung vào sữa mẹ Như vậy, sữa mẹ đường thải trừ dioxin chủ yếu Nồng độ dioxin sữa mẹ phụ thuộc vào mức độ tiếp xúc loại đồng phân dioxin Mặt khác, dioxin polychlorinated biphenyls (PCBs) chứng minh tích lũy tuyến thượng thận xâm nhập vào thể Đồng thời làm thay đổi tổng hợp hormon steroid vỏ thượng thận theo liều lượng thời gian tác động Tuy nhiên, tác động dioxin hormon steroid thượng thận chưa điều tra kỹ lưỡng thông qua đánh giá thực nghiệm Hơn nữa, chưa có nhiều nghiên cứu nồng độ dioxin chiến tranh liên quan đến hormon streroid huyết thanh, đặc biệt nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ trẻ em sống khu vực điểm nóng dioxin Việt Nam Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài “nghiên cứu thay đổi nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa huyết người sống vùng phơi nhiễm chất da cam/dioxin Việt Nam” với mục tiêu: Xác định nồng độ dioxin sữa người mẹ sống Phù Cát - Bình Định Xác định nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ con, sữa huyết người mẹ sống Phù Cát - Bình Định Tìm hiểu mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa huyết với nồng độ dioxin sữa người mẹ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Hormon steroid 1.1.1 Đại cương hormon steroid Hormon steroid có nguồn gốc từ cholesterol đặc trưng nhân steroid Cấu trúc bao gồm ba vòng sáu cạnh vòng năm cạnh, tương ứng với tên gọi A, B, C D Hình 1.1 Cấu trúc nhân steroid Cấu trúc biết đến cyclopentanoperhydrophenanthrene, có sáu vị trí khơng đối xứng, cung cấp nhiều đồng phân khác Hơn nữa, vị trí C-17 có nhóm mà thay đổi tạo thành hormon steroid khác có chức tùy thuộc vào chức nhóm Hormon steroid tổng hợp loạt mô, bật tuyến thượng thận tuyến sinh dục Tiền thân từ cholesterol tổng hợp tế bào từ acetate, từ thành phần este-cholesterol giọt lipid tế bào từ hấp thu lipoprotein tỉ trọng thấp chứa cholesterol 1.1.2 Các loại hormon steroid Các hormon steroid xác định theo nguồn gốc tác dụng sinh học chủ yếu chúng Thông thường, phân loại hormon steroid vào năm nhóm chính, chủ yếu dựa vào thụ thể mà chúng ràng buộc 1.1.2.1 Glucocorticoid Glucocorticoid bao gồm thành phần cortisol corticosteron bắt nguồn từ vỏ thượng thận ảnh hưởng chủ yếu đến trao đổi chất theo nhiều cách khác Cortisol glucocorticoid tiết tuyến vỏ thượng thận, có nguồn gốc sinh học từ pregnenolon với vai trò enzym 17α- hydroxypregnenolon, 17α-hydroxyprogesteron 11- deoxycortisol Glucocorticoid thường xâm nhập qua màng tế bào gắn với thụ thể glucocorticoid bào tương Sau phức hợp xâm nhập vào nhân tế bào gắn vào vị trí chuyên biệt ADN, dẫn đến gen đặc hiệu biểu có chép ARN thơng tin Cuối cùng, protein đặc hiệu tổng hợp phát huy tác dụng sinh học glucocorticoid Mặc dù thụ thể glucocorticoid giống nhiều mô quan protein tổng hợp lại thay đổi nhiều tùy thuộc vào mơ đích phát huy tác dụng khác mô khác nhau, điều tạo nên tác dụng đa dạng glucocorticoid Hình 1.2 Cấu trúc hóa học cortisol 1.1.2.2 Mineralocorticoid Các mineralocorticoid tuyến thượng thận tiết bao gồm aldosteron 11-deoxycorticorterson Aldosteron sản xuất vùng cầu vỏ thượng thận bắt nguồn từ progesteron ảnh hưởng chủ yếu hệ thống renin - angiotensin, trình tồng hợp theo bước sau: Progesteron → 11-Deoxycorticosteron → Corticosteron → Aldosteron Các bước xúc tác enzym CYP21A2, CYP11B1 aldosteron synthase/CYP11B tương ứng Nhóm hydroxyl progesteron carbon-21 mang 11-deoxycorticosteron corticosteron sau bước hydroxyl carbon-11 Quá trình hydroxyl khử oxi hóa carbon-18 xúc tác CYP11B2 kết hình thành aldosteron Mineralocorticoid có tác dụng quan trọng việc điều hòa thể tích dịch ngoại bào chuyển hóa kali hay gọi nhóm hormon chuyển hóa muối nước 1.1.2.3 Androgen Androgen bắt nguồn từ tuyến vỏ thượng thận, tuyến sinh dục chủ yếu ảnh hưởng đến trưởng thành chức quan sinh dục thứ cấp Hormon androgen có nguồn gốc từ hai steroid 17α-hydroxy bao gồm 17αhydroxypregnenolon 17α -hydroxyprogesteron Hai steroid chuyển đổi enzym CYP17 để trở thành androgen dehydroepiandrosteron (DHEA) androstenedion tương ứng DHEA chuyển thành androstenedion 3β-HSD (3β-hydroxysteroid dehydrogenase) Sự hình thành androgen tuyến thượng thận giới hạn DHEA androstenedion, tinh hồn lại có diện 17β-HSD (17β-hydroxysteroid dehydrogenase) tế bào Leydig để đảm bảo hình thành testosteron [8],[9] Ở giai đoạn trước tuổi dậy có lượng nhỏ androgen tiết trước Trong giai đoạn dậy androgen cần thiết cho phát triển hệ thống sinh sản nam, nhóm hormon góp phần quan trọng cho hình thành trì ham muốn tình dục Androgen có xu hướng làm tăng kích thước quan sinh sản nam giới Ngược lại, thiếu hụt nam giới trưởng thành gây teo giảm hoạt động phận sinh dục Ở phụ nữ khoảng nửa lượng androgen hàng ngày sản xuất từ buồng trứng dạng testosteron androstenedion Phần lại tuyến thượng thận sản xuất, chủ yếu DHEA DHEA-S, mà chuyển đổi thành androstenedion testosteron mô khác Ở phụ nữ sản xuất dư thừa hormon androgen rối loạn tuyến thượng thận, rối loạn buồng trứng rối loạn chuyển hóa mỡ 1.1.2.4 Estrogen Estrogen hormon steroid nữ sản xuất chủ yếu buồng trứng, số lượng sản xuất vỏ thượng thận, rau thai tinh hoàn nam giới Estrogen giúp kiểm sốt phát triển giới tính, bao gồm thay đổi thể chất liên quan đến tuổi dậy Nó ảnh hưởng đến q trình rụng trứng chu kỳ kinh nguyệt, cho bú sau mang thai, tình trạng tâm lý trình lão hóa Estrogen bao gồm thành phần estron estradiol, chúng chủ yếu ảnh hưởng đến phát triển, trưởng thành chức quan sinh dục nữ giới xác định tính dục nữ Q trình tổng hợp estrogen đòi hỏi enzym P450 nhóm aromatase hay CYP19A1 Chất hai androstenedion (cho estron) testosteron (cho estradiol) Estron estradiol hốn đổi cho thơng qua phản ứng thuận nghịch liên quan đến enzym 17β-HSD, trình chuyển đổi thành phần androstenedion-testosteron Hoạt động aromatase có mặt buồng trứng rau thai 1.1.2.5 Progesteron Progesteron sản xuất buồng trứng, rau thai phần nhỏ tuyến thượng thận Hormon có vai trò quan trọng chu kỳ kinh nguyệt trì phát triển bào thai Trong mang thai, progesteron kích thích phát triển tuyến vú 1.1.3 Tổng hợp hormon steroid Trong cholesterol tổng hợp nhiều mô thể, hormon steroid tổng hợp vỏ thượng thận, buồng trứng tinh hoàn Các hormon steroid tổng hợp nhóm tế bào định phụ thuộc vào vai trò enzym, đa số enzym thuộc nhóm cytochrom P450 oxygenase Dưới tác động enzym P450 SCC hay CYP11 A ty thể tế bào, chuỗi bên cholesterol tách tạo thành pregnenolon Quá trình chịu tác động hormon kích vỏ thượng thận ACTH Sau hình thành, pregnenolon vận chuyển khỏi ty thể tế bào để tiếp tục chuyển đổi thành 17-hydroxy-pregnenolon tác dụng enzym P450C17 Tác dụng hệ thống enzym 3β-HSD2 chuyển nối đôi để tạo thành 17α-hydroxy- progesteron từ 17-hydroxypregnenolon Sau đó, vùng lưới vùng bó vỏ thượng thận enzym P450C21 P450C11 làm trung gian cho q trình hydroxyl hóa vị trí 11β thành phần 17-hydroxy-pregnenolon Sau chuỗi phản ứng kết thúc chuyển 11-deoxycortisol thành cortisol 11 deoxycorticosteron thành corticosteron Tại vùng cầu lớp vỏ thượng thận, enzym P 450 aldo hay gọi CYP11 B2 đóng vai trò trung gian cho q trình hydroxyl hóa vị trí 11β q trình oxy hóa vị trí 18 để chuyển đổi từ 11-deoxycorticosteron thành corticosteron 18-hydroxycorticosteron Cuối chuỗi phản ứng tạo thành aldosteron hormon có vai trò chuyển hóa muối nước Trong hệ võng nội mạc, có enzym P 450C17 đóng vai trò trung gian cho trình hoạt động 17α-hydroxylase 17-20 lyase, enzym P450C21 làm trung gian cho q trình hydroxyl hóa vị trí 21 progesteron 21-hydroxyprogesteron Androgen vỏ thượng thận tổng hợp khởi đầu tác dụng enzym P450C17, với hoạt hóa enzym thành phần pregnenolon progesteron hydroxyl hóa vị trí 17α Tại ty thể tế bào tác dụng enzym 17,20 demolase chuỗi bên có nguyên tử carbon vị trí 17 bị tách khỏi thành phần 17-hydroxy-pregnenolon để tạo thành DHEA có chứa nhóm ceto vị trí C17 Tiếp theo tác dụng enzym sulfokinase thượng thận DHEA chuyển thành DHEA sulfat, trình thuận nghịch Enzym 17,20 demolase có tác dụng chuyển đổi từ 17-hydroxyprogesteron thành androstenedion, lại phần nhỏ androstenedion thành lập từ DHEA Ở người trưởng thành androgen bao gồm DHEA androstenedion hay estrogen gồm estron (E1) estradiol (E2) chủ yếu tổng hợp tinh hoàn nam giới buồng trứng nữ giới tác dụng hormon kích thích LH FSH Tuy nhiên, đường sinh tổng hợp hormon steroid với thành phần tham gia giống tất mô, khác biệt khả tổng hợp tiết kích thích hay ức chế số enzym cụ thể Sinh tổng hợp hormon steroid đòi hỏi kích thích enzym oxy hóa nằm ty thể lưới nội chất Hình 1.3 Sơ đồ tổng hợp hormon steroid 1.1.4 Tác dụng sinh học Các hormon steroid giải phóng lưu thơng máu sau hình thành, chúng lưu thông đến phận khác thể thực hoạt tính sinh học cách xuyên màng tế bào liên kết với thụ thể tế bào Phức hợp hormon steroid - thụ thể thực tác dụng sinh học cách gắn vào nucleotid cụ thể ADN gen đáp ứng Sự tương tác phức hợp hormon steroid - thụ thể với ADN gây kích thích kìm hãm q trình phiên mã gen liên quan Một số rối loạn nội tiết liên quan đến rối loạn sinh tổng hợp steroid khiếm khuyết enzym cụ thể Khơng có khả tiết mức bình thường 10 steroid thượng thận dẫn đến mắc bệnh tăng sản bẩm sinh tuyến thượng thận (CAH) Trong phần lớn trường hợp, hội chứng đột biến gen CYP21A2 kết hợp với tăng tiết androgen thượng thận phần nam hóa bé gái Khuyết tật tổng hợp androgen tinh hoàn (do đột biến gen CYP17 17β-HSD) dẫn đến tượng lưỡng tính nam Các hormon steroid tổng hợp tiết tuyến nội tiết vỏ thượng thận tuyến sinh dục Sau giải phóng vào máu, chúng lưu hành đến phận khác thể, nơi chúng đem lại đáp ứng cụ thể từ tế bào cụ thể Các glucocorticoid ảnh hưởng đến hoạt động chuyển hóa carbohydrat, protein, lipid ảnh hưởng đến loạt chức quan trọng khác bao gồm phản ứng viêm khả thích ứng với căng thẳng Các mineralocorticoid phần lớn có chức điều chỉnh tiết muối nước thận Cả androgen estrogen ảnh hưởng đến phát triển sinh dục chức Các hormon tạo nên khác biệt giới tính, từ đặc điểm giới tính thứ cấp đến hành vi tình dục Progesteron sản xuất thể vàng rau thai, tác động đến phát triển niêm mạc tử cung tuyến vú Progesteron có vai trò điều tiết hoạt động liên quan đến chu kỳ kinh nguyệt mang thai , 1.1.5 Một số phương pháp định lượng hormon steroid Đã có nhiều kỹ thuật sử dụng để xác định nồng độ hormon steroid Phương pháp xét nghiệm miễn dịch sử dụng rộng rãi tính đơn giản kinh tế, tính đặc hiệu độ nhạy chưa cao để phân tích đồng thời nhiều loại steroid Phương pháp sắc ký lỏng kết hợp với khối phổ kép (LCMS/MS) lựa chọn hàng đầu để tốt cho định lượng hormon steroid 157 Becker J.B, Arnold A.P, Berkley K.J et al (2005) Strategies and methods for research on sex differences in brain and behavior Endocrinology, 146(4), 1650-1673 158 Thorp J.A, Jones P.G, Knox E et al (2002) Does antenatal corticosteroid therapy affect birth weight and head circumference? Obstet Gynecol, 99(1), 101-108 159 Koppe J.G, Smolders-de Haas H, and Kloosterman G.J (1977) Effects of glucocorticoids during pregnancy on the outcome of the children directly after birth and in the long run Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 7(5), 293-299 160 Goedhart G, Vrijkotte T.G, Roseboom T.J et al (2010) Maternal cortisol and offspring birthweight: results from a large prospective cohort study Psychoneuroendocrinology, 35(5), 644-652 161 Welberg L.A, Seckl J.R, and Holmes M.C (2000) Inhibition of 11betahydroxysteroid dehydrogenase, the foeto-placental barrier to maternal glucocorticoids, permanently programs amygdala GR mRNA expression and anxiety-like behaviour in the offspring Eur J Neurosci, 12(3), 1047-1054 162 Murphy B.E, Clark S.J, Donald I.R et al (1974) Conversion of maternal cortisol to cortisone during placental transfer to the human fetus Am J Obstet Gynecol, 118(4), 538-541 163 Reynolds R.M (2013) Glucocorticoid excess and the developmental origins of disease: two decades of testing the hypothesis 2012, Curt Richter Award Winner Psychoneuroendocrinology, 38(1), 1-11 164 Moisiadis V.G and Matthews S.G (2014) Glucocorticoids and fetal programming part 1: Outcomes Nat Rev Endocrinol, 10(7), 391-411 165 Moisiadis V G and Matthews S.G (2014) Glucocorticoids and fetal programming part 2: Mechanisms Nat Rev Endocrinol, 10(7), 403-411 166 Quissell D.O (1993) Steroid hormone analysis in human saliva Ann N Y Acad Sci, 694, 143-145 167 Kim M.S, Lee Y.J, and Ahn R.S (2010) Day-to-day differences in cortisol levels and molar cortisol-to-DHEA ratios among working individuals Yonsei Med J, 51(2), 212-218 168 Touitou Y, Auzeby A, Camus F et al (2009) Daily profiles of salivary and urinary melatonin and steroids in healthy prepubertal boys J Pediatr Endocrinol Metab, 22(11), 1009-1015 169 Gerritsen L, Geerlings M.I, Beekman A.T et al (2010) Early and late life events and salivary cortisol in older persons Psychol Med, 40(9), 1569-1578 170 Wudy S.A, Hartmann M, and J.H (2002) Determination of 11deoxycortisol (Reichstein's compound S) in human plasma by clinical isotope dilution mass spectrometry using benchtop gas chr matographymass selective detection, in Steroids 2002, 851-857 171 Chace D.H (2009) Mass spectrometry in newborn and metabolic screening: historical perspective and future directions J Mass Spectrom, 44(2), 163-170 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành chương trình nghiên cứu sinh viết luận án này, em nhận hướng dẫn, giúp đỡ nhiệt tình q thầy Cho phép em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: GS TS Teruhiko Kido, Trưởng Khoa Khoa học sức khỏe, Viện đào tạo Y dược Khoa học sức khỏe, Trường Đại Học Kanazawa, thầy tận tình giúp đỡ, cho em kiến thức kinh nghiệm, đồng thời hỗ trợ phương tiện kinh phí để đề tài thực TS Đặng Đức Nhu, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi để em thực đề tài hoàn thành luận án PGS TS Phạm Thiện Ngọc, GS TS Tạ Thành Văn Bộ Mơn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội, thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ truyền thụ cho em kiến thức quý báu để thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn: Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau Đại học, Ban 10-80, tập thể Bộ mơn Hóa sinh Trường Đại Học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập trường Ban giám đốc, Khoa Sinh hóa Bệnh viện Việt Tiệp Hải Phòng quan tâm ủng hộ, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình học tập Trân trọng biết ơn chia sẻ, giúp đỡ động viên sâu sắc gia đình, bạn bè đồng nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận án trung thực, thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Đào Văn Tùng DANH MỤC VÀ KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACTH : Adrenocorticotropic Hormone Kích tố vỏ thượng thận Adion : Androtenedion AND : Acid Deoxyribo Nucleic AhR : Aryl hydrocarbon Receptor Thụ thể Aryl hydrocarbon ARN : Acid Ribonucleic mARN : messenger Acid Ribonucleic IARC : International Agency for Research on Cancer Cơ quan nghiên cứu Quốc tế ung thư CAH : Congenital Adrenal Hyperplasia Tăng sản thượng thận bẩm sinh CDC : Centers for Disease Control and Prevention Trung tâm kiểm sốt phòng ngừa dịch bệnh Hoa Kỳ CLIA : Chemiluminescent Immuno Assay Xét nghiệm miễn dịch hóa phát quang DDI : Daily Dioxin Intake Lượng dioxin tiêu thụ hàng ngày DHEA : Dehydroepiandrosteron DHEA-S : Dehydroepiandrosterone Sulfate DR CALUX : Dioxin Response Chemically Activated Luciferase gene Expression Kỹ thuật cảm biến sinh học tế bào để định lượng dioxin E1 : Estron E2 : Estradiol ECL : Electrode Chemi Luminescence Kỹ thuật điện hóa phát quang EGFR : Epidermal Growth Factor Receptor Thụ thể phát triển biểu bì ELISA : Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kỹ thuật miễn dịch enzym FIA : Fluoroimmunoassay Xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang FSH : Follicle-Stimulating Hormone Kích thích tố nang trứng 3β-HSD : 3β hydroxysteroid dehydrogenase 17β-HSD : 17β-hydroxysteroid dehydrogenase HRGC/HRMS : High-resolution gas chromatography/high-resolution mass Hệ thống sắc ký khí khối phổ có độ phân giải cao IOM : Institute of Medicine Viện hàn lâm Khoa học Hoa Kỳ LC-MS/MS : Liquid Chromatography–Mass Spectrometry- Mass Spectrometry Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ kép LH : Luteinizing Hormone Kích thích tố thể vàng NIOSH : National Institute for Occupational Safety and Health Viện nghiên cứu Sức khỏe Bảo hộ lao động Hoa Kỳ P450 SCC : Men tách chuỗi bên cholesterol (CYP11A1) P450C11β : 11β- Hydroxylase (CYP11B1) P450C11AS : Aldosteron Synthetase (CYP11B2) P450C17 : 17α-Hydroxylase (CYP17) P450C19β : 11β- Hydroxylase (CYP19A1) P450C21 : 21β- Hydroxylase (CYP21A2) RIA : Radioimmunoassay kỹ thuật miễn dịch phóng xạ SECA : The Southern Early Childhood Association TEQ : Toxic Equivalent TEFs : Toxic Equivalency Factor T4 : Thyroxin T3 : Triiodothyronin TCDD : 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-para-dioxin TCDF : 2,3,7,8-tetrachlorodibenzofuran TNF : Tumor Necrosis Factor cytokine thuộc yếu tố gây hoại tử PCBs : Polychlorinate biphenyls PCDD : Polychlorinated dibenzo-para-dioxins PCDFs : Polychlorinated dibenzofuran ppt : parts-per-trillion Một phần nghìn tỷ WHO : World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới U.S EPA : United States Environmental Protection Agency Cơ quan bảo vệ môi trường Hoa Kỳ PGHS-2 : Prostaglandin-Encoperoxide H2 synthase-2 MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Danh mục chữ viết tắt Mục lục Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Hormon steroid 1.1.1 Đại cương hormon steroid 1.1.2 Các loại hormon steroid 1.1.3 Tổng hợp hormon steroid .7 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.1.5 Một số phương pháp định lượng hormon steroid 10 1.2 Chất độc da cam/dioxin .15 1.2.1 Cơng thức hóa học 15 1.2.2 Tính chất lý học, hóa học dioxin 17 1.2.3 Các nguồn ô nhiễm .19 1.2.4 Chuyển hóa tiết 20 1.2.5 Cơ chế tác động .21 1.2.6 Lịch sử ô nhiễm dioxin Việt Nam 23 1.2.7 Ảnh hưởng dioxin sức khỏe người .25 1.2.8 Một số phương pháp định lượng dioxin 34 1.3 Cơ sở khoa học thực nghiên cứu 36 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Khu vực nghiên cứu 38 2.2 Đối tượng nghiên cứu 39 2.2.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 41 2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ .41 2.3 Phương pháp nghiên cứu .41 2.4 Các quy trình kỹ thuật nghiên cứu 41 2.4.1 Quy trình lấy mẫu 41 2.4.2 Kỹ thuật định lượng dioxin sữa 45 2.4.3 Kỹ thuật định lượng hormon steroid kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ kép 47 2.5 Ước tính lượng dioxin hấp thụ hàng ngày trẻ bú sữa mẹ 50 2.6 Địa điểm phân tích 50 2.7 Xử lý số liệu nghiên cứu .51 2.8 Đạo đức nghiên cứu 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 53 3.1 Đặc điểm chung 53 3.1.1 Đặc điểm chung mẹ 53 3.1.2 Đặc điểm chung .54 3.2 Nồng độ dioxin sữa mẹ 56 3.3 Nồng độ hormon steroid nước bọt .62 3.3.1 Nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 62 3.3.2 Nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ thời điểm sau năm cho bú 65 3.3.3 Nồng độ hormon steroid nước bọt trẻ thời điểm tuổi 68 3.4 Nồng độ hormon steroid sữa huyết mẹ 70 3.4.1 Nồng độ hormon steroid sữa mẹ thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 70 3.4.2 Nồng độ hormon steroid huyết mẹ thời điểm sau năm cho bú 72 3.5 Tỷ lệ nồng độ hormon steroid nước bọt huyết mẹ sau năm cho bú 75 3.6 Mối tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid 77 3.6.1 Mối tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid nước bọt 77 3.6.2 Mối tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid sữa huyết mẹ .80 3.7 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt với hormon steroid sữa huyết 82 3.7.1 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ với hormon steroid sữa thời điểm từ đến 16 tuần tuổi 82 3.7.2 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ với hormon steroid huyết thời điểm sau năm cho bú .83 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 84 4.1 Đặc điểm chung 84 4.1.1 Đặc điểm khu vực nghiên cứu 84 4.1.2 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu .85 4.2 Nồng độ dioxin sữa mẹ 87 4.3 Mơ hình đáp ứng liều dioxin hormon steroid 89 4.3.1 Đáp ứng liều dioxin với hormon glucocorticoid vỏ thượng thận 89 4.3.2 Đáp ứng liều dioxin với hormon androgen estrogen 92 4.4 Nồng độ hormon steroid nước bọt .94 4.4.1 Nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ 94 4.4.2 Nồng độ hormon steroid nước bọt 97 4.5 Nồng độ hormon steroid sữa huyết mẹ .101 4.5.1 Nồng độ hormon steroid sữa mẹ thời điểm từ đến 16 tuần tuổi .101 4.5.2 Nồng độ hormon steroid huyết mẹ thời điểm sau năm cho bú 102 4.6 Tỷ lệ nồng độ hormon steroid nước bọt huyết người mẹ sau năm cho bú 103 4.7 Mối liên quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ hormon steroid 105 4.8 Mối liên quan nồng độ dioxin sữa mẹ với số thể trẻ .108 4.9 Mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt với hormon steroid sữa huyết 112 KẾT LUẬN 115 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Bảng 3.13 Bảng 3.14 Bảng 3.15 Bảng 3.16 Đặc điểm người mẹ khu vực nghiên cứu 53 Đặc điểm trẻ thời điểm nghiên cứu 54 Cân nặng lúc sinh trẻ Kim Bảng Phù Cát 55 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDDs sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 56 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDFs sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 57 So sánh nồng độ tổng số đồng phân dioxin sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát .58 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDDs sữa người mẹ sinh đầu lòng thứ 59 So sánh nồng độ đồng phân dioxin nhóm PCDFs sữa người mẹ sinh đầu lòng thứ 60 So sánh nồng độ tổng số đồng phân dioxin sữa người mẹ sinh đầu lòng thứ .61 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ Kim Bảng Phù Cát .62 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 63 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 64 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ Kim Bảng Phù Cát .65 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 66 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 67 So sánh nồng độ hormon steroid nước bọt trẻ Kim Bảng Phù Cát 68 Bảng 3.17 So sánh nồng độ hormon nước bọt trẻ đầu lòng, thứ Kim Bảng Phù Cát 68 Bảng 3.18 So sánh nồng độ hormon nước bọt trẻ trai, trẻ gái Kim Bảng Phù Cát 69 Bảng 3.19 So sánh nồng độ hormon steroid sữa người mẹ Kim Bảng Phù Cát 70 Bảng 3.20 So sánh nồng độ hormon steroid sữa người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 71 Bảng 3.21 So sánh nồng độ hormon steroid sữa người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 71 Bảng 3.22 So sánh nồng độ hormon steroid huyết mẹ Kim Bảng Phù Cát 72 Bảng 3.23 So sánh nồng độ hormon steroid huyết người mẹ sinh đầu lòng Kim Bảng Phù Cát 73 Bảng 3.24 So sánh nồng độ hormon steroid huyết người mẹ sinh thứ Kim Bảng Phù Cát 74 Bảng 3.25 So sánh tỷ lệ nồng độ hormon steroid nước bọt huyết mẹ Kim Bảng Phù Cát thời điểm sau năm cho bú 75 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Biểu đồ 3.2 Mức độ dioxin sữa mẹ khu vực nghiên cứu 58 Mức độ dioxin sữa người mẹ sinh đầu lòng sinh thứ .61 Biểu đồ 3.3 Nồng độ hormon cortisol (A) cortison (B)của người mẹ Kim Bảng Phù Cát thời điểm 76 Biểu đồ 3.4 Tương quan tổng đồng phân PCDDs+PCDFs với nồng độ cortisol (A) cortison (B) nước bọt người mẹ sinh đầu lòng 77 Biểu đồ 3.5 Tương quan nồng độ dioxin sữa với nồng độ cortisol (A) cortison (B) nước bọt mẹ .78 Biểu đồ 3.6 Tương quan nồng độ dioxin sữa mẹ với nồng độ cortisol (A), cortison (B) DHEA (C) nước bọt .79 Biểu đồ 3.7 Tương quan tổng đồng phân PCDDs+PCDFs với nồng độ cortisol (A) cortison (B) sữa mẹ .80 Biểu đồ 3.8 Tương quan nồng độ dioxin sữa mẹ với nồng độ cortisol (A) cortison (B) huyết mẹ 81 Biểu đồ 3.9 Mối tương quan nồng độ cortisol (A), cortisol (B), androstenedion (C) estradiol (D) sữa nước bọt 82 Biểu đồ 3.10 Mối tương quan nồng độ cortisol (A), cortisol (B), DHEA (C), androstenedion (D), estron (E) estradiol (F) huyết nước bọt 83 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 Hình 1.6 Hình 1.7 Hình 1.8 Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 2.4 Hình 2.5 Hình 2.6 Hình 4.1 Hình 4.2 Hình 4.3 Hình 4.4 Cấu trúc nhân steroid .3 Cấu trúc hóa học cortisol Sơ đồ tổng hợp hormon steroid Cấu trúc hóa học dibenzo-para-dioxin .16 Cấu trúc hóa học PCDD 17 Hoạt động thụ thể AhR tương tác với dioxin tế bào 21 Máy bay Mỹ rải chất da cam xuống lãnh thổ Việt Nam chiến dịch Ranch Hand 24 Tập kết chất da cam/dioxin trước đưa phun rải năm từ 1961 – 1972 25 Địa điểm lấy mẫu nghiên cứu 38 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 40 Hình ảnh cân đo số thể trẻ 42 Hướng dẫn đo số thể trẻ lớn 44 Sơ đồ quy trình phân tích dioxin sữa 45 Sơ đồ quy trình phân tích hormon huyết nước bọt 50 Sơ đồ tổng hợp steroid hormon 91 Mức độ lưu hành DHEA thể 99 Ảnh hưởng dioxin enzym CYP17 100 Vai trò enzym 11Beta-hydroxysteroid dehydrogenase typ 1của rau thai 111 3,21,24,25,58,61,76-83,100 1-2,4-20,22-23,26-57,59-60,62-75,84-99,101-152 ... hành nghiên cứu đề tài nghiên cứu thay đổi nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa huyết người sống vùng phơi nhiễm chất da cam/dioxin Việt Nam với mục tiêu: Xác định nồng độ dioxin sữa người mẹ sống. .. Xác định nồng độ hormon steroid nước bọt mẹ con, sữa huyết người mẹ sống Phù Cát - Bình Định Tìm hiểu mối tương quan nồng độ hormon steroid nước bọt, sữa huyết với nồng độ dioxin sữa người mẹ... có nhiều nghiên cứu nồng độ dioxin chiến tranh liên quan đến hormon streroid huyết thanh, đặc biệt nồng độ hormon steroid nước bọt người mẹ trẻ em sống khu vực điểm nóng dioxin Việt Nam Vì vậy,