NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP NANO BẠC CỦA CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS LICHENIFORMIS PHÂN LẬP TỪ PHÂN CHIM CÚT

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG PHAN PHƯỚC THANH THUẬN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP NANO BẠC CỦA CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS LICHENIFORMIS PHÂN LẬP TỪ PHÂN CHIM CÚT KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS ĐOÀN THỊ VÂN Đà Nẵng, Tháng 04 năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Đà Nẵng, tháng năm 2018 Tác giả luận văn PHAN PHƯỚC THANH THUẬN LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS Đoàn Thị Vân tận tình hướng dẫn, trực tiếp truyền đạt kinh nghiệm q báu để em hồn thiện khóa luận tốt nghiệp, ln tìm kiếm hội để nhóm nghiên cứu vi sinh chúng em nâng cao kiến thức kỹ nghề nghiệp sau Cảm ơn cô động viên em suốt trình thực khóa luận Xin cảm ơn TS Phạm Thị Mỹ (giáo viên chủ nhiệm), ThS Lê Thị Mai (cán quản lý phòng thí nghiệm vi sinh) thầy cô Khoa Sinh – Môi Trường, Đại học Sư Phạm – Đại học Đà Nẵng giúp đỡ em trình thực nghiệm đề tài nghiên cứu Cuối xin gửi lời cảm ơn đến bạn nhóm nghiên cứu vi sinh ứng dụng, hỗ trợ nhiệt tình suốt thời gian qua Cảm ơn tập thể lớp 15CNSH, bạn bè gia đình động viên tơi suốt thời gian làm khóa luận Xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Phan Phước Thanh Thuận MỤC LỤC MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài 10 Ý nghĩa đề tài 10 3.1 Ý nghĩa khoa học 10 3.2 Ý nghĩa thực tiễn 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÔNG NGHỆ NANO VÀ NANO BẠC 11 1.1.1 Vật liệu nano 11 1.1.2 Hạt nano bạc 12 1.1.3 Một số ứng dụng nano bạc 15 1.1.4 Các phương pháp chế tạo nano bạc 16 1.2 KHÁI QUÁT CHUNG VỀ BACILLUS LICHENIFORMIS 19 1.2.1 Phân loại khoa học vi khuẩn Bacillus licheniformis 19 1.2.2 Đặc điểm phân bố 20 1.2.3 Đặc điểm hình thái, sinh hóa 20 1.2.4 Đặc điểm nuôi cấy 20 1.2.5 Cơ chế tổng hợp nano bạc nhận diện nano bạc 21 1.3 Một số nghiên cứu sinh tổng hợp nano bạc từ vi sinh vật nước giới 24 1.3.1 Một số nghiên cứu giới 24 1.3.2 Một số nghiên cứu nước 24 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 25 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 25 2.2 Nội dung nghiên cứu 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 26 2.3.2 Phương pháp thu mẫu phân lập 27 2.3.3 Phương pháp định danh chủng vi khuẩn kĩ thuật sinh học phân tử 27 2.3.4 Phương pháp phá vỡ tế bào vi khuẩn 27 2.3.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ AgNO3 đến trình sinh tổng hợp nano bạc Bacillus licheniformis 28 2.3.6 Khảo sát thời gian sinh tổng hợp nano bạc Bacillus licheniformis 28 2.3.7 Phân tích phổ tử ngoại phổ khả kiến (UV – Vis) 28 2.3.8 Phân tích giản đồ nhiễu xạ tia X (XRD) 28 2.3.9 Phân tích kích thước hạt hình dạng hạt nano bạc tạo thành thơng qua kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 28 2.3.10 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn dung dịch nano bạc 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 30 3.1 Phân lập, định danh vi sinh vật 30 3.1.1 Phân lập, định danh chủng vi khuẩn phân chim cút ủ hoai 30 3.2 Khảo sát thời gian đến trình sinh tổng hợp nano bạc 35 3.2.1 Phân tích phổ tử ngoại phổ khả kiến (UV – Vis) 35 3.3 Kết phân tích nhiễu xạ tia X (XRD) 38 3.4 Kết phân tích kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 38 3.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ AgNO3 đến trình sinh tổng hợp nano bạc 32 3.5.1 Kết kháng khuẩn theo phương pháp khuếch tán qua giếng thạch 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 Kết luận 40 Kiến nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Abs Absorbance CT Công thức LB Luria – Bertani NCBI National Center for Biotechnology Information PCR Polymerase Chain Reaction PTN Phòng thí nghiệm UV – Vis Ultraviolet – Visible TEM Transmission Electron Microscopy XRD X-ray diffraction DANH MỤC BẢNG BIỂU Kí hiệu bảng Tên bảng 2.1 Bố trí lơ thí nghiệm 3.1 Đường kính vòng kháng khuẩn gây Nano Bạc tổng hợp nồng độ 1mM AgNO3 (Đơn vị: mm) 3.2 Đường kính vòng kháng khuẩn gây Nano Bạc tổng hợp nồng độ 2mM AgNO3 (Đơn vị: mm) 3.3 Vị trí đỉnh hấp thu cường độ hấp thu dung dịch nano bạc tổng hợp từ CT3 3.4 Vị trí đỉnh hấp thu cường độ hấp thu dung dịch nano bạc tổng hợp từ CT2 Trang DANH MỤC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình ảnh Trang MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Trong năm gần đây, khoa học công nghệ nano phát triển mạnh mẽ, cơng nghệ tiên tiến với nhiều lĩnh vực ứng dụng y học, điện tử, nông nghiệp, xử lý mơi trường, Với kích thước nano mét loại vật liệu nano can thiệp điến phân tử - nguyên tử, điều đặc biệt quan trọng nghiên cứu ứng dụng công nghệ nano Y – Sinh học Bạc kim loại có tính sát khuẩn mạnh, từ lâu người biết ứng dụng nó, cơng nghệ nano bạc đóng vai trò quan trọng nghiên cứu vật liệu nano Nghiên cứu kích thước nano (từ đến 100 nm), hoạt tính sát khuẩn bạc tăng lên khoảng 50000 lần so với bạc dạng khối, gam bạc nano sát khuẩn cho hàng trăm mét vuông chất [4] Điều làm cho khối lượng bạc sử dụng sản phẩm giảm mạnh, nên tỷ trọng bạc giá thành trở nên khơng đáng kể Nano bạc có tính kháng khuẩn mạnh, vơ hiệu hóa tất enzyme cần thiết cho trao đổi oxy vi khuẩn tiêu diệt chúng vài phút, ngồi hạt bạc với kích thước nhỏ chui vào tế bào, kết hợp với enzyme hay DNA có chứa nhóm sunfua photphate gây bất hoạt enzyme hay DNA dẫn đến gây chết tế bào Nano bạc không gây tác dụng phụ, không gây độc cho người vật nuôi nhiễm lượng bạc nồng độ diệt khuẩn (khoảng nồng độ nhỏ 100ppm), khơng gây nhiễm mơi trường Vì nano bạc ứng dụng rộng rãi Trong nông nghiệp, ứng dụng công nghệ nano bạc nhiều quốc gia xem hướng để phát triển nên nông nghiệp hiệu quả, kinh tế an tồn hơn, phòng trị bệnh vi khuẩn, vi rút, nấm, gây trồng, vật nuôi, bảo quản nông sản Trong ngành may mặc, nano bạc ứng dụng để tạo loại quần áo có khả diệt khuẩn, vi khuẩn gây mùi hôi, mốc Đặc biệt, nghiên cứu tổng hợp nano bạc để phục vụ cho ứng dụng y học, tượng vi khuẩn kháng kháng sinh ngày phổ biến Có nhiều phương pháp để tổng hợp nano bạc, phương pháp hóa học, vật lý, hóa lý kết hợp thường gây nhiều tác động xấu đến mơi trường, chi phí đầu tư tốn kém, giá thành cao lại khó sản xuất rộng rãi Vì vậy, tổng hợp nano bạc đường sinh học xu hướng mạng tính tất yếu Phương pháp tổng hợp tạo hạt nano bạc tiêu chuẩn kích thước phân bố tốt so với phương pháp khác đồng thời mở triển vọng sản xuất với qui mô lớn Các hạt nano ổn định trình sản xuất polymer sinh học Ở Phương pháp sinh học tác nhân sinh tổng hợp nano bạc vi nấm, vi khuẩn Với thời gian sinh trưởng ngắn, trình sinh tổng hợp tạo kích thước hạt nhỏ đồng đều, khơng tốn dung mơi hóa học khơng gây ảnh hưởng mơi trường nên lồi vi nấm hay vi khuẩn đối tượng nghiên cứu Trong đó, Bacillus licheniformis vi khuẩn có khả sinh trưởng phổ nhiệt cao môi trường nuôi cấy thông thường, vi khuẩn ứng dụng cơng nghiệp sản sinh nhiều enzyme ngoại bào chịu nhiệt protease, amylase, lipase v.v Như B licheniformis có Nhằm tiếp cận với phương pháp xuất phát từ lý luận, thực tiễn nêu trên, tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu khả sinh tổng hợp nano bạc chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis phân lập từ phân chim cút” Mục tiêu đề tài Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis từ phân chim cút Đánh giá khả sinh tổng hợp nano bạc vi khuẩn Bacillus licheniformis phân lập Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu cung cấp dẫn liệu khoa học có giá trị tham khảo cho sinh viên, kĩ thuật viên loài Bacillus licheniformis định danh, khả tổng hợp nano bạc từ lồi Bacillus licheniformis 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Thành cơng khóa luận xác định số điều kiện sinh tổng hợp nano bạc từ vi khuẩn Bacillus licheniformis có ý nghĩa việc ứng dụng tạo nên vật liệu, sản phẩm nano bạc phục vụ ngành y học, nông nghiệp, điện tử, môi trường, v.v 10 2.3.10 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn dung dịch nano bạc Phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Theo phương pháp Well diffusion assay [24] Các chủng vi sinh vật kiểm định nêu phần đối tượng nghiên cứu trang môi trường thạch đặc trưng chúng đĩa petri Tiến hành hút 100μl dịch vi sinh vật kiểm định trang lên mặt thạch Dùng ống nghiệm đường kính khoảng 1cm vô trùng đục lỗ thạch đối xứng Dùng pipet hút khoảng 300 – 400µl dịch nano bạc thơ cho vào lỗ thạch Ủ đĩa thạch tủ ấm 30oC, Sau 24 quan sát vòng kháng khuẩn thu Khả kháng khuẩn vi khuẩn xác định diện vòng kháng khuẩn xung quanh lỗ Hoạt tính kháng khuẩn độ lớn vòng kháng khuẩn Đường kính vòng kháng khuẩn tính theo cơng thức sau: H=D-d Trong đó: H: đường kính vòng kháng khuẩn xung quanh lỗ D đường kính vùng ức chế ( bao gồm đường kính lỗ) d: đường kính lỗ 29 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Phân lập, định danh vi sinh vật 3.1.1 Phân lập, định danh chủng vi khuẩn phân chim cút ủ hoai Từ phân chim cút ủ thô, nhóm nghiên cứu chúng tơi tiến hành phân lập chủng vi sinh vật kí hiệu chủng TT01 tiến hành định danh chủng Hình 3.1 Phân chim cút sau ủ thô (a); Khuẩn lạc chủng TT01 (b) Từ hình 3.1(b) cho thấy, khuẩn lạc chủng TT01 màu trắng, nhẵn, có váng đục bề mặt Tiến hành nhuộm Gram chủng TT01 Kết thu thể hình 3.2 Hình 3.2 Tế bào chủng TT01 nhuộm Gram 30 Quan sát hình 3.2 cho thấy, tế bào chủng TT01 hình que, Gram dương Mẫu gửi định danh Trung tâm Cơng nghệ sinh học thành phố Hồ Chí Minh Tiến hành phá mẫu thu DNA, giải trình tự gen vùng 16S Tra cứu BLAST NCBI thu kết thể hình 3.3 Hình 3.3 Kết tra cứu BLAST NCBI Hình 3.4 Kết chạy phát sinh loài 31 Qua kết thể hình 3.3, nhóm nghiên cứu chúng tơi nhận thấy chủng TT01 có tương đồng trình tự vùng gen 16S 100% với loài Bacillus licheniformis Từ phát sinh lồi hình 3.4, chủng TT01 chủng phân lập so với chủng Bacillus licheniformis đăng kí trình tự GenBank, chủng đặt tên Bacillus licheniformis TT01 để phục vụ cho nghiên cứu ứng dụng sau 3.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ AgNO3 đến trình sinh tổng hợp nano bạc 3.5.1 Kết kháng khuẩn theo phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Đục lỗ thạch để kiểm tra tính kháng khuẩn mẫu dịch chiết hay dịch tổng hợp phương pháp đánh giá đơn giản, hiệu nhiều tác giả sử dụng Hiện hạt nano bạc tổng hợp theo phương pháp sinh học biết đến có khả ức chế sinh trưởng nhiều loài vi sinh vật gram âm, gram dương, nấm mốc Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Bacillus cereus, Fusarium sp., Trong nghiên cứu có ba chủng vi sinh vật gây bệnh sử dụng để kiểm tra tính kháng khuẩn E.coli, B.Cereus, R.solancerum a b Hình 3.7 Dịch nano bạc tổng hợp từ CT2 (a) dịch (b) tạo vòng kháng khuẩn vi sinh vật kiểm định E.coli 32 c d Hình 3.8 Dịch nano bạc tổng hợp từ CT2 (c) dịch (d) tạo vòng kháng khuẩn vi sinh vật kiểm định B.cereus e f Hình 3.9 Dịch nano bạc tổng hợp (nồng độ 1mM AgNO3) từ CT2 (e) dịch (f) tạo vòng kháng khuẩn vi sinh vật kiểm định Ralstonia solanacearum Bảng 3.1 Đường kính vòng kháng khuẩn gây Nano Bạc tổng hợp nồng độ 1mM AgNO3 (Đơn vị: mm) Đối Chứng Chủng vi sinh Nước cất vật kiểm định Dịch Nano Bạc AgNO3 Dịch 1mM ngoại bào CT1 CT2 CT3 TT01 E.coli 2,2 3,2 6,9 15,5 7,3 B.cereus 1,5 3,5 7,1 17,2 7,8 R.solanacearum 2,5 2,8 18,5 10,2 33 h g Hình 3.10 Dịch nano bạc tổng hợp (nồng độ 2mM AgNO3) từ CT2 (g) dịch (h) tạo vòng kháng khuẩn vi sinh vật kiểm định B.cereus i k Hình 3.11 Dịch nano bạc tổng hợp (nồng độ 2mM AgNO3) từ CT2 (i) dịch (k) tạo vòng kháng khuẩn vi sinh vật kiểm định E.coli 34 Bảng 3.2 Đường kính vòng kháng khuẩn gây Nano Bạc tổng hợp nồng độ 2mM AgNO3 (Đơn vị: mm) Đối Chứng Chủng vi sinh Nước cất vật kiểm định Dịch Nano Bạc AgNO3 Dịch 2mM ngoại bào CT1 CT2 CT3 TT01 E.coli 3,7 7,3 15,1 7,5 B.cereus 2,5 4,1 7,5 13,7 9,2 R.solanacearum 7,5 3,8 6,2 16 10,5 Kết bảng 3.1 3.2 cho thấy dung dịch nano bạc tổng hợp nồng độ 1mM (AgNO3) , 2mM (AgNO3) cho đường kính vòng kháng khuẩn cao so với dung dịch đối chứng Mẫu tổng hợp nồng độ 1mM (AgNO3) cho kết cao dung dịch nano bạc tổng hợp nồng độ 2mM (AgNO3) Đường kính vòng kháng khuẩn chủng Ralstonia solanacearum cao so với chủng Bacillus cereus E.Coli 3.2 Khảo sát thời gian đến trình sinh tổng hợp nano bạc 3.2.1 Phân tích phổ tử ngoại phổ khả kiến (UV – Vis) Sinh tổng hợp nano bạc theo CT1 Phản ứng sinh tổng hợp thực cách thu dịch vào 100ml dung dịch AgNO3 1mM, ủ lắc liên tục (150rpm) thời gian từ – ngày, sau tổng hợp tiến hành quét phổ UV – Vis bước sóng từ 300nm đến 700nm 35 Hình 3.12 Phổ UV – Vis sau ngày khảo sát sinh tổng hợp Nano Bạc từ CT3 Bảng 3.3 Vị trí đỉnh hấp thu cường độ hấp thu dung dịch nano bạc tổng hợp từ CT3 Mẫu Thời gian phản ứng Đỉnh hấp thu (nm) (ngày) Cường độ hấp thu (Abs) Keo Nano Bạc tổng 389,5 0,46 hợp từ CT3 416 0,51 419,5 0,68 Kết bảng 3.3 cho thấy sau ngày hiệu suất tổng hợp từ CT3 (dịch ngoại bào ủ với AgNO3 1mM) không cho hiệu quả, đỉnh phổ hấp thu nano bạc không thay đổi nhiều, cường độ hấp thu nhỏ giao động từ 0,46 – 0,68 Điều thấy dịch ngoại bào vi khuẩn tiết khử gốc NO3- từ AgNO3, theo nghiên cứu số tác giả [21] dịch (canh trường ly tâm sinh khối vi khuẩn) chứa enzyme, protein, acid amin, polysaccharide vitamin có vai trò tích cực việc khử ion Ag+ chế chấp nhận rộng rãi để tổng hợp nano bạc từ vi khuẩn qua khử trung gian enzyme khử nitrat (nitrat reductase) Nhưng nghiên cứu chưa thấy kết khả quan từ dịch ngoại bào vi khuẩn Bacillus licheniformis TT01 tổng hợp nano bạc 36 Sinh tổng hợp nano bạc theo CT2 Phản ứng sinh tổng hợp thực cách chuyển sinh khối ướt vào 100ml dung dịch AgNO3 1mM, ủ lắc liên tục (150rpm) thời gian từ – ngày, sau tổng hợp phá vỡ tế bào vi khuẩn tiến hành ly tâm thu dịch để quét phổ UV – Vis từ 300nm đến 700nm Mẫu từ màu trắng vàng, đục chuyển sang màu vàng nâu nhẹ Sự đổi màu dung dịch sinh tổng hợp chứng tỏ có nano bạc kích thích cộng hưởng plasmon bề mặt hạt kim loại bạc có kích thước nano Kết nhận được trình bày hình 3.13 bảng 3.4 Hình 3.13 Phổ UV – Vis sau ngày khảo sát sinh tổng hợp Nano Bạc từ CT2 Bảng 3.4 Vị trí đỉnh hấp thu cường độ hấp thu dung dịch nano bạc tổng hợp từ CT2 Mẫu Thời gian phản ứng Đỉnh hấp thu (nm) (ngày) Cường độ hấp thu (Abs) 388 0,44 Keo Nano Bạc tổng 412 1,16 hợp từ CT2 418,5 1,67 419,5 2,38 37 Kết bảng 3.4 cho thấy sau – ngày có diện nano bạc, hạt nano bạc hình thành có kích thước nhỏ bao phủ protein có dung dịch nên đỉnh hấp thu nano bạc phát Khi tăng thời gian phản ứng, đỉnh hấp thu cường độ hấp thu tăng dần Từ ngày đến ngày, đỉnh hấp thu nano bạc thấy vị trí gần chênh lệch (412 – 420nm) phù hợp với số tài liệu nghiên cứu, suy đốn kích thước hạt bị thay đổi (đồng đều) Đây ưu điểm lớn q trình sinh tổng hợp nhờ vi khuẩn thơng thường theo phương pháp khử hoá học, tăng thời gian phản ứng, đỉnh hấp thu chuyển dịch theo chiều có bước sóng lớn thường xảy tượng kết tụ tạo hạt có kích thước lớn 3.3 Kết phân tích nhiễu xạ tia X (XRD) 3.4 Kết phân tích kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 38 PHỤ LỤC 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua kết nghiên cứu trên, nhóm nghiên cứu tơi rút số kết luận sau: 1.1 Từ phân chim cút ủ thơ phân lập chủng vi khuẩn kí hiệu TT01 có khả sinh trưởng mơi trường LB Chủng vi khuẩn TT01 có khuẩn lạc có màu trắng đục, lồi, bề mặt sần sùi, viền có cưa, thuộc nhóm vi khuẩn gram dương, tế bào hình que Bước đầu định danh sơ chủng vi khuẩn TT01 thuộc chi Bacillus, định danh đến tên loài cho kết Bacillus licheniformis 1.2 Đã thực thành công trình sinh tổng hợp nano bạc vi khuẩn Bacillus licheniformis Thời gian tổng hợp nồng độ muối AgNO3 khảo sát sơ dựa tài liệu vầ điều kiện thực nghiệm nhận thấy chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis tổng hợp nano bạc tốt nồng độ 1mM AgNO3 với thời gian phản ứng tạo nano bạc từ – ngày 1.3 Các hạt nano bạc tổng hợp Bacillus licheniformis nhận diện qua phương pháp phân tích hóa lý: UV – Vis, TEM, XRD Phổ UV – Vis cho thấy đỉnh hấp thu dao động từ 412 – 419,5nm Kết XRD khẳng định có tồn Ag kim loại mẫu Ảnh TEM cho thấy hạt nano bạc dung dịch 1.4 Dung dịch nano bạc tạo thành từ q trình sinh tổng hợp có khả kháng khuẩn với chủng vi khuẩn có hại gây bệnh đường ruột như: E.coli, Bacillus cereus vi khuẩn gây bệnh héo xanh thực vật Ralstonia solanacearum Kiến nghị 2.1 Kiểm tra hoạt tính enzyme nitrate reductase, từ nghiên cứu tác động đến trình sinh trưởng Bacillus licheniformis để cải tiến hoạt tính enzyme nhằm nâng cao hiệu suất phản ứng tổng hợp 2.2 Tiếp tục hồn thiện quy trình cụ thể đánh giá tác động hoạt độ nước đến tế bào vi khuẩn Thử nghiệp dịch nội bào để ủ với AgNO3 tạo nano bạc 2.3 Khảo sát lượng sinh khối, khảo sát nồng độ AgNO3, pH, nhiệt độ ảnh hưởng đến trình sinh tổng hợp nano bạc 2.4 Tiếp tục ứng dụng dịch nano bạc tổng hợp để thử kháng khuẩn 40 chủng nấm bệnh phytophthora spp., Fusarium spp từ tạo chế phẩm bảo vệ thực vật 2.5 Nghiên cứu tạo loại vải kháng khuẩn cách ngâm dịch nano bạc để sản xuất trang hay áo quần chuyên dụng có tính chất kháng khuẩn 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Phạm Thị Trân Châu, Phan Tuấn Nghĩa (2007), Công nghệ sinh học enzyme ứng dụng, NXB Giáo Dục Nguyễn Hoàng Hải (2007), Các hạt nano kim loại, Trung tâm khoa học vật liệu, Trường đại học khoa học tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội Nguyễn Đức Nghĩa (2007), Công nghệ vật liệu nền, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ Trần Minh Hải, Nghiên cứu chế tạo nano bạc ứng dụng Công nghệ sinh học, Đại học công nghệ, Đại học quốc gia Hà Nội Trần Linh Thước, Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm, NXB giáo dục Trần Thị Thanh (2003), Công nghệ vi sinh, NXB Giáo dục Tài liệu tiếng Anh Ahmad, A., Mukherjee, P., Senapati, S., Mandal, D., Khan, M.I., Kumar,R., Sastry, M (2003), “Extracellular biosynthesis of silver nanoparticles using the fungus Fusarium Oxysporum”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 28, 313- 318 Bhainsa, K.C., D’Souza, S.F (2006), “Extracellular biosynthesis of silver nanoparticles using the fungus Aspergillus fumigatus”, Colloids and Surfaces B:Biointerfaces , 47, 160164 Chen, X., Schluesener, H.J (2008), “Nanosilver: A nanoproduct in medical application”, Toxicology Letters, 176, 1-12 10 Jain, P., Pradeep, T (2005), “Potential of Silver Nanoparticle-Coated Polyurethane Foam As an Antibacterial Water Filter”, Biotechnology and bioengineering, 90(1), 59-63 11 Jeong, S.H., Hwang, Y.H., Yi, S.C (2005), “Antibacterial properties of padded PP/PE nonwovens incorporating nano-sized silver colloids”, Journal of Materials Science, 40, 5413-5418 12 Maase, M., Reetz, M.T (1999), “Redox-controlled size-selective fabrication of nanostructured transition metal colloids”, Advanced Materials, 11(9), 773-777 13 Nicolaj, L.K., Andersen, O.Z (2006), Silver Nanoparticles, Projet of Faculty of Physics and Nanotechnology, Aalborg University, – 66 14 Saifuddin, N., Wong, C.W., Yasumira, A.A (2009), “Rapid Biosynthesis of Silver Nanoparticles Using Culture Supernatant of Bacteria with Microwave Irradiation”, EJournal of Chemistry, 6(1), 61-70 15 Vigneshwaran, N., Ashtaputre, N.M., Varadarajan, P.V., Nachane, R.P., Paralikar, K.M., Balasubramanya, R.H (2007), “Biologycal synthesis of silver nanoparticles using the fungus Aspergillus flavus”, Materials Letters, 61, 1413- 1418 42 16 Nguyen Phuc Quan, Nguyen Minh Ly, Tran Quoc Vinh, Kieu Thi My Yen, Le Vu Khanh Trang, Tran Cong Khanh (2018), “Comparison of the antibacterial activity against Escherichia coli of silver nanoparticle produced by chemical synthesis with biosynthesis”, Materials Science: Materials Review, Volume 2, Issue 17 Duran, N., Marcato, P.D., Alves, O.L., Esposito, E (2005), “Mechanistic aspects of biosynthesis of silver nanoparticles using several Fusarium oxysporum strains”, Journal of Nanobiotechnology, 3(8), 1-7 18 Basavaraja, S., Balaji, S.D., Lagashetty, A., Rajasab, A.H., Venkataraman,A (2008), “Extracellular biosynthesis of silver nanoparticles using the fungus Fusarium semitectum”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 43, 1164-117 19 Kalimuthu, K., Babu, R.S., Venkataraman, D., Bilal, M., Gurunathan, S (2008), “Biosynthesis of silver nanocrystals by Bacillus licheniformis”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 65, 150-153 20 Mokhtari, N., Daneshpajouh, S., Seyedbagheri, S., Atashdehghan, R., Abdi, K., Sarkar, S., Minaian, S., Shahverdi, H.R., Shahverdi, A.R (2009), “Biological synthesis of very small silver nanoparticles by culture supernatant of Klebsiella pneumonia: The effects of visible-light irradiation and the liquid mixing process”, Materials Research Bulletin, 44, 1415–142 21 Shaarika Sarangadharan, Sivakumar Nallusamy (2015), “Biosynthesis and Characterization of Silver Nanoparticles Produced by Bacillus licheniformis” International Journal of Pharma Medicine and Biological Sciences Vol 4, No 22 Karbasian, M., Atyabi, S.M., Siadat, S.D., Momen, S.B, Norouzian, D (2008), “Optimizing Nano-silver Formation by Fusarium oxysporum PTCC 5115 Employing Response Surface Methodology”, American Journal of Agricultural and Biological Science, 3, 433-437 23 Kathiresan, K., Manivannan, S., Nabeel, M.A., Dhivya, B (2009), “Studies on silver nanoparticles synthesized by a marine fungus, Penicillium fellutanum isolated from coastal mangrove sediment”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 71, 133–137 24 Mounyr Balouiri, Moulay Sadiki, Saad Koraichi Ibnsouda (2015), “Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review” Journal of Pharmaceutical Analysis, 6(2): 71-79 43 ... licheniformis phân lập từ phân chim cút Mục tiêu đề tài Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis từ phân chim cút Đánh giá khả sinh tổng hợp nano bạc vi khuẩn Bacillus licheniformis phân lập Ý nghĩa... 3.1 Phân lập, định danh vi sinh vật 3.1.1 Phân lập, định danh chủng vi khuẩn phân chim cút ủ hoai Từ phân chim cút ủ thơ, nhóm nghiên cứu chúng tơi tiến hành phân lập chủng vi sinh vật kí hiệu chủng. .. định danh chủng vi khuẩn Bacillus licheniformis từ phân chim cút - Khảo sát khả sinh tổng hợp nano bạc từ dịch ngoại bào sinh khối Bacillus licheniformis 25 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Sơ đồ