XÁC NHẬN GIÁ TRỊ sử DỤNG của PHƯƠNG PHÁP (method validation

CEM LABORATORY TỔNG CỤC MÔI TRƯƠNG TR TRUNG TÂM QUAN TRẮC MÔI TRƯỜNG TR XÁC NHẬN GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PH PHÁP (Method Validation) Người trình bày: Đồn Văn Oán Hà Nội, 30/8/2013 CEM LABORATORY Nội dung Xác nhận giá trị sử dụng (MV)  MV gì?  Tại thực MV cần thiết?  Khi cần thực MV? Thơng số đặc trưng thực MV  Độ chụm (Precision)  Độ chọn lọc (Selectivity)  Độ chệch (Bias)  Độ nhạy (Sensitivity)  Độ tuyến tính & Khoảng làm việc (Linearity & Working Rang  Giới hạn phát (Detection Limit)  Giới hạn định lượng (Quantitation Limit)  Yếu tố ảnh hưởng (Ruggedness and Robustness) Ước lượng độ không đảm bảo đo Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY MV gì? Khẳng định kiểm tra cung cấp chứng khách quan yêu cầu xác định cho việc sử dụng phương pháp phù hợp với mục đích điều kiện phân tích cụ thể thực         Độ chụm Độ chọn lọc Độ chệch Độ nhạy Độ tuyến tính & Khoảng làm việc Giới hạn phát Giới hạn định lượng Các yếu tố ảnh hưởng Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Tại cần thiết phải thực MV?  Tính khoa học: Nguyên lý khoa học; tích xác; tính ổn định  Tính thực tiễn: Phạm vi phương pháp; nguồn lực thực hiện; an toàn; nhu cầu khách hàng/chấp nhận pháp lý; khả so sánh phổ biến; thời gian giá thành…  Cung cấp kết tin cậy để đảm bảo định đưa dựa kết đáng tin cậy  Đáp ứng yêu cầu ISO/IEC 17025 Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Khi cần thực MV? MV  Phương pháp vấn đề cụ thể  Chỉnh sửa phương pháp có - Cải tiến - Mởi rộng phạm vị  Khi QC phương pháp thay đổi theo thời gian  Khi phương pháp thiết lập đưa vào sử dụng - Trong PTN khác - Với người phân tích khác - Thiết bị khác  Để chứng tỏ tương đương đươ phương pháp Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Tiến trình thực Xác định yêu cầu phân tích Lựa chọn phương ph pháp áp dụng Giải pháp thực MV Thẩm định lại phương pháp MV trước Đánh giá lại phương pháp có thay đổi Xác nhận giá trị sử dụng thay đổi từ phương pháp sang phương pháp khác MV phương pháp Kế hoạch thực MV Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Tiến trình thực (tiếp) Tiến hành thực MV Đánh giá thông tin phê duyệt (so sánh số liệu tạo v yêu cầu) Nếu cần thiết, cải tiến phương phấp để đáp ứng yêu cầu Khi yêu cầu đáp ứng cần phải văn ho phương pháp kết phê duyệt phương pháp Xác định thủ tục kiểm soát chất lượng l Sử dụng phương pháp tin cậy, với quy trình kiểm số chất lượng phù hợp tham gia thử nghiệm thành thạo đ cung cấp chứng tin cậy liên tục Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Thông số đặc trưng thực MV phép phân tích Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Mẫu thử nghiệm Mẫu thực MV phải đáp ứng yêu cầu sau:  Có lượng mẫu phù hợp  Được dán nhãn phù hợp  Đại diện cho loại mẫu thử nghiệm  Được vận chuyển lưu giữ điều kiện trì tính ngun vẹn mẫu  Được phân tích khoảng thời gian phù hợp tính từ  thời điểm lấy mẫu  Vật liệu/Hóa chất thêm vào để ổn định mẫu cần phải đượ nhận diện đầy đủ  Vật liệu sử dụng cho thiết bị lấy mẫu cần phải quy định  Người phân tích cần có số hiểu biết, nhận thức độ khơng đảm đo liên quan q trình lấy mẫu ảnh hưởng đến biến đổi có q trình phân tích Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Độ chụm (Precision) Mức độ gần kết thử nghiệm độc lập thu điều iều kiện quy định Độ chụm thường biểu diễn thuật ngữ sau  Độ lệch chuẩn (s)  Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) hệ số biến thiên (CV)  Độ lệch chuẩn trung bình (SDM) thí nghiệm lặp biết sai số chuẩn giá trị trung bình Principles of Method Validation – Part Page 10 CEM LABORATORY Độ chệch (Bias) Mức độ sai khác kỳ vọng kết thử nghiệm giá trị qui chiếu chấp nhận  Nghiên cứu độ chệch nghiên cứu tổng sai số hệ thống Sự sai khác hệ thống so với giá trị quy chiếu chấp nhận lớn độ chệch lớn  Độ chệch gồm: Độ chệch phòng thí nghiệm Độ chệch phương pháp  Độ chệch âm dương Principles of Method Validation – Part Page 17 CEM LABORATORY Độ chệch (tiếp) Nguyên nhân sai số  Mẫu phân tích  Phương pháp  Thiết bị đo  Độ thu hồi khơng hồn tồn  Phòng thí nghiệm người ng phân tích… Sai số tổng thể xác định từ  Phân tích chất chuẩn biết trước nồng độ (CRM) có phù hợp  Thử nghiệm xác định độ thu hồi mẫu thêm chuẩn  So sánh liên phòng  Phương pháp đối chứng độc lập Principles of Method Validation – Part Page 18 CEM LABORATORY Ước lượng sai số từ việc thêm chuẩn R2-R1 (R4) R4 lượng chất thêm chuẩn Sai số = R3 - R4 Ví dụ: Xác định Atrazine nước Sai số = (45.9 ng/L – 32.4 ng/L) – 15.0 ng/L Sai số = 13.5 ng/L – 15.0 ng/L Sai số = -1.5 ng/L Principles of Method Validation – Part Page 19 CEM LABORATORY Xử lý với sai số Khi có sai số lớn mà loại bỏ  Người sử dụng số liệu phân tích cần phải cảnh báo tồn chúng  Hiệu chỉnh phép đo o hàng ngày  Báo cáo giá trị đo o sai số riêng rẽ  Độ không đảm bảo đo o (MU) kết hợp với hiệu chỉnh sai số tính đến Principles of Method Validation – Part Page 20 CEM LABORATORY Độ (Độ chệch) Vs Độ chụm Inaccurate & Không Đúng imprecise Không Chụm Inaccurate but Chụm Không precise Đúng Accurate but Đúng Không imprecise Chụm Principles of Method Validation – Part Đúng Chụm Page 21 CEM LABORATORY Độ chọn lọc (Selectivity) Đặc trưng phương pháp: Mức độ mà phát xác định rõ ràng chất phân tích định hỗn hợp, mà khơng có ảnh hưởng từ thành phần khác Phổ hấp thụ nguyên tử, Phổ phát xạ nguyên tử, Phổ huỳnh quang, Phổ khối… vs time Principles of Method Validation – Part time Page 22 CEM LABORATORY Khoảng tuyến tính khoảng làm việc (Linearity and Working range)  Khoảng tuyến tính: khoảng nồng độ chất phân tích mà phương pháp phân tích cho kết phân tích tỷ lệ thuận với nồng độ chất phân tích  Khoảng làm việc: khoảng nồng độ chất phân tích mà thiết bị cho tín hiệu đáp ứng tốt Tính tốn độ tuyến tính khoảng làm việc  Phân tích mẫu chuẩn biết nồng độ  Tối thiểu phân tích cấp nồng độ  Vẽ đồ thị từ kết thu - Đánh giá độ tuyến tính hệ số hồi quy r2 > 0,99 - Xác định khoảng tuyến tính tương đối, cận cận khoảng làm việc Principles of Method Validation – Part Page 23 CEM LABORATORY Khoảng tuyến tính khoảng làm việc Principles of Method Validation – Part Page 24 CEM LABORATORY Giới hạn phát (LoD) Giới hạn định lượng (LoQ)  Giới hạn phát (LoD) nồng độ chất phân tích nhỏ nh phát không thiết xác định hà lượng điều kiện thí nghiệm  Giới hạn định lượng (LoQ LoQ) nồng độ thấp chất ph tích mẫu định lượng với độ chụm đ chấp nhận điều kiện tiến hành phân tích  Giới hạn phát (LoD): (LoD Giới hạn phát thiết (IDL) Giới hạn phát phương pháp (MDL)  Giới hạn định lượng (LoQ LoQ): Giới hạn định lượng thiết (IQL) Giới hạn định lượng phương pháp (MQL) Principles of Method Validation – Part Page 25 CEM LABORATORY Giới hạn phát (LoD) Giới hạn định lượng (LoQ) LoD = x S/N LoQ = LoD = S/N (Dựa vào độ lệch chuẩn nhiễu) Độ lệch chuẩn nhiễu SD Principles of Method Validation – Part Page 26 CEM LABORATORY Tính tốn giới hạn phát phương pháp (MD EPA 40 CFR Part 136 APPENDEX B, revision 1.11 Dự đốn MDL chất phân tích Chuẩn bị mẫu thêm chuẩn (Spike) có nồng độ lần giá t MDL dự đốn Phân tích mẫu theo quy trình phân tích ghi nhận kết phâ tích Nếu hiệu suất thu hồi đạt yêu cầu, chuyển sang bước Nế không đạt yêu cầu, quay trở lại bước (1) chọn MDL cao Chuẩn bị mẫu thêm chuẩn có nồng độ bước (2) phâ tích theo quy trình phân tích Ghi nhận kết tính tốn MDL Kiểm tra lại giá trị MDL thu MDL < Spike < 10xMDL S/N có nằm khoảng u cầu khơng? 2,5 – 10? Hiệu suất thu hồi có nằm khoảng yêu cầu không? 70 – 110? Principles of Method Validation – Part Page 27 CEM LABORATORY Ví dụ tính tốn MDL • Phân tích Toluen nước GC/MS • MDL ước tính 0,040 ug/L • Nồng độ Spike 0,21 ng/L vào nước cất lần • MDL < Spike < 10x MDL 0,084 < 0,21 < 0,84 • S/N = 0,20/0,029 = 7,0 • AVE H = 96,9% Principles of Method Validation – Part Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu AVE SD MDL S/N Kết ug/L 0,23 0,21 0,24 0,19 0,18 0,22 0,17 0,16 0,23 0,20 0,029 0,084 7,0 H% 110 100 114 90 86 105 81 76 110 96,9 Page 28 CEM LABORATORY Yếu tố ảnh hưởng (Robustness and Ruggedness)  Xem xét độ nhạy thông số đặc trưng phương pháp thay nhỏ mơi trường điều kiện phân tích mà khơng ảnh hưởng đến kết phân tích  Chỉ mức độ ổn định phương pháp trình sử dụng Principles of Method Validation – Part Page 29 CEM LABORATORY Tài liệu tham khảo EURACHEM Guide 1998 The Fitness for Purpose of Analytical Methods IUPAC Technical Report 2002 Harmonized Guideline for Single Laboratory Validation of Methods, Pure Appl Chem Chem 2002, 74, 835-855 Principles of Method Validation – Part Page 30 CEM LABORATORY XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN! Principles of Method Validation – Part Page 31 ... pháp MV trước Đánh giá lại phương pháp có thay đổi Xác nhận giá trị sử dụng thay đổi từ phương pháp sang phương pháp khác MV phương pháp Kế hoạch thực MV Principles of Method Validation – Part... thực MV? MV  Phương pháp vấn đề cụ thể  Chỉnh sửa phương pháp có - Cải tiến - Mởi rộng phạm vị  Khi QC phương pháp thay đổi theo thời gian  Khi phương pháp thiết lập đưa vào sử dụng - Trong... đươ phương pháp Principles of Method Validation – Part Page CEM LABORATORY Tiến trình thực Xác định yêu cầu phân tích Lựa chọn phương ph pháp áp dụng Giải pháp thực MV Thẩm định lại phương pháp