NGHIÊN cứu ỨNG DỤNG kỹ THUẬT REALTIME PCR đa mồi TRONG PHÁT HIỆN ROTAVIRUS và NOROVIRUS gây TIÊU CHẢY cấp ở TRẺ EM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI VŨ THỊ HẢO Nghiªn cøu ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR đa mồi phát Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI VŨ THỊ HẢO Nghiªn cøu øng dơng kü tht Realtime PCR ®a måi phát Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trỴ em Chun ngành: Vi sinh Mã số : 60720115 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Văn Phủng TS Phùng Thị Bích Thủy HÀ NỘI - 2018 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT (+) ssRNA : A positive-sense single-stranded RNA AIDS : Acquired Immune Deficiency Syndrome DNA : Deoxyribonucleic acid ELISA : Enzyme-linked immunosorbent assay LAT : Latex agglutination test ORF : Open reading frame PCR : Polymerase Chain Reaction RNA : Ribonucleic acid RT-PCR : Reverse transcription Polymerase Chain Reaction TCC : Tiêu chảy cấp TCC : Viêm dày ruột cấp MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tình hình tiêu chảy cấp Rotavirus, Norovirus 1.1.1 Tình hình giới .3 1.1.2 Tình hình Việt Nam 1.2 Đặc điểm tính chất hệ gen Rotavirus, Norovirus 1.2.1 Đặc điểm Rotavirus 1.2.2 Đặc điểm Norovirus 1.3 Các kỹ thuật phát Rotavirus, Norovirus .10 1.3.1 Kỹ thuật nuôi cấy 10 1.3.2 Phát Rotavirus, Norovirus kính hiển vi điện tử 10 1.3.3 Các kỹ thuật miễn dịch dùng để phát Rotavirus, Norovirus 12 1.3.4 Kỹ thuật sinh học phân tử .15 1.4 Sự cần thiết tiến hành nghiên cứu 19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Thời gian nghiên cứu 21 2.3 Đối tượng nghiên cứu 21 2.4 Dụng cụ, trang thiết bị hóa chất nghiên cứu 22 2.4.1 Dụng cụ, trang thiết bị 22 2.4.2 Hóa chất .22 2.5 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5.1 Thiết kế nghiên cứu: .24 2.5.2 Phương pháp realtime PCR đa mồi phát Norovirus Rotavirus .25 2.5.3 Phản ứng Realtime RT- PCR xác định Norovirus Rotavirus .28 2.5.4 So sánh độ nhạy độ đặc hiệu phản ứng Realtime PCR đa mồi với kit thương mại có chứng IVD 30 2.6 Xử lý số liệu .30 2.7 Đạo đức nghiên cứu 30 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 3.1 Hoàn thiện kỹ thuật Realtime PCR đa mồi phát Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em 31 3.1.1 Kết xử lí bệnh phẩm tách chiết RNA 31 3.1.2 Kết phản ứng Realtime PCR 32 3.1.3 So sánh độ nhạy, độ đặc hiệu kỹ thuật Realtime PCR đa mồi với kit thương mại FTD viral gastroenteritis có chứng IVD 33 3.2 Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR đa mồi xác định tỉ lệ Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em 35 3.2.1 Tỷ lệ phát TCC Rotavirus, Norovirus .35 3.2.2 Phân bố tỷ lệ TCC Rotavirus, Norovirus theo giới 36 3.2.3 Phân bố tỷ lệ phát TCC Rotavirus, Norovirus theo nhóm tuổi .38 3.2.4 So sánh số xét nghiệm máu, phân 41 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 46 4.1 Hoàn thiện kỹ thuật Realtime PCR đa mồi phát Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em 46 4.1.1 Kết xử lí bệnh phẩm tách chiết RNA 46 4.1.2 Phản ứng RealTime PCR đa mồi 48 4.2 Một số đặc điểm dịch tễ Rotavirus, Norovirus 51 4.2.1 Tỷ lệ mắc tiêu chảy cấp Rotavirus, Norovirus 51 4.2.2 Yếu tố giới bệnh nhân TCC Rotavirus, Norovirus 53 4.2.3 Yếu tố tuổi bệnh nhân TCC Rotavirus, Norovirus 53 4.2.4 Biến đổi xét nghiệm 55 KẾT LUẬN 59 KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Tỷ lệ tử vong tiêu chảy cấp Rotavirus Hình 1.2 Hình ảnh minh họa cấu trúc Rotavirus Hình 1.3 Hình ảnh minh họa cấu trúc Norovirus Hình 1.4 Hình ảnh Rotavirus kính hiển vi điện tử 11 Hình 1.5 Hình ảnh Norovirus kính hiển vi điện tử 12 Hình 1.6 Ngun lí phương pháp ELISA 13 Hình 1.7 Ngun lí kĩ thuật sắc kí miễn dịch 14 Hình 1.8 Biểu đồ quan hệ chu kỳ tín hiệu huỳnh quang phản ứng realtime PCR .16 Hình 1.9 Cơ chế hoạt động Taq Man Probe Realtime PCR 18 Hình 2.1 Nguyên lí hoạt động hệ thống tách chiết MagNA Pure LC 2.0 .27 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các đoạn gen Rotavirus Bảng 1.2 Cấu trúc protein Rotavirus Bảng 2.1 Trình tự Primer, Probe gen Rotavirus, Norovirus 24 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng 29 Bảng 3.1 Nồng độ RNA sau tiền xử lý mẫu tách chiết nucleic acid 31 Bảng 3.2 Phân bố giá trị Ct (chu kỳ ngưỡng phát hiện) kỹ thuật realtime PCR đơn mồi kỹ thuật cải tiến phát Norovirus Rotavirus .32 Bảng 3.3 Kêt giá trị Ct (chu kỳ ngưỡng phát hiện) so sánh kỹ thuật realtime RT-PCR đa mồi kit thương mại FTD viral gastroenteritis có chứng IVD 33 Bảng 3.4 Bảng phân bố nguyên Norovirus Rotavirus gây tiêu chảy cấp trẻ em 35 Bảng 3.5 Bảng phân bố tỷ lệ giới nhóm TCC Rotavirus, TCC Norovirus, nhóm đồng nhiễm nhóm âm tính 36 Bảng 3.6 Tỷ lệ nhóm tuổi nhóm bệnh nhân TCC Rotavirus, TCC Norovirus, đồng nhiễm âm tính 38 Bảng 3.7 So sánh số xét nghiệm máu nhóm TCC Rotavirus nhóm âm tính 41 Bảng 3.8 So sánh số xét nghiệm nhóm TCC Norovirus nhóm âm tính 42 Bảng 3.9 Kết soi phân nhóm TCC Rotavirus, nhóm TCC Norovirus nhóm âm tính 45 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Tỉ lệ nguyên Rotavirus, Norovirus gây TCC trẻ em 36 Biểu đồ3.2 Tỷ lệ bệnh nhân mắc TCC Rotavirus theo giới tính 37 Biểu đồ 3.3 Phân bố tỷ lệ bệnh nhân TCC Norovirus theo giới tính 38 Biểu đồ 3.4 Phân bố tỉ lệ TCC Rotavirus theo nhóm tuổi .39 Biều đồ 3.5 Phân bố tỉ lệ tiêu chảy cấp Norovirus theo nhóm tuổi .40 Biểu đồ 3.6.So sánh thay đổi nồng độ Natri máu nhómTCC Rotavirus, nhóm TCC Norovirus nhóm âm tính 43 Biểu đồ 3.7 So sánh thay đổi nồng độ Kali máu nhóm TCC Rotavirus, nhóm TCC Norovirus nhóm âm tính .44 LỜI CẢM ƠN Với lòng người học trò, em xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Lê Văn Phủng TS Phùng Thị Bích Thủy hướng dẫn tận tình, giúp đỡ chia sẻ khó khăn em suốt q trình học tập, nghiên cứu để thực đề tài Sự hướng dẫn tận tình kiến thức quý báu thầy đóng vai trò vơ quan trọng trình học tập, nghiên cứu khoa học để em hoàn thành luận văn Em xin gửi cám ơn toàn thể anh chị nhân viên, kỹ thuật viên khoa nghiên cứu sinh học phân tử bệnh truyền nhiễm Bệnh viện Nhi Trung ương giúp đỡ nhiệt tình, tạo điều kiện mặt trình thu thập, xử lí bệnh phẩm, cho em lời khun bổ ích q trình thực luận văn Em xin cảm ơn tập thể thầy cô, chị kỹ thuật viên, bác sỹ nội trú vi sinh khóa 39,40,41 ln giúp đỡ, tạo điều kiện, động viên em trình học tập thực luận văn Em xin cám ơn Ban Giám Hiệu, phòng Đào tạo Sau đại học, phòng ban chức Trường đại học Y Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành luận văn Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến người than gia đình bạn bè ln ủng hộ em suốt trình làm đề tài Hà Nội, tháng năm 2018 Vũ Thị Hảo LỜI CAM ĐOAN Tơi Vũ Thị Hảo, bác sĩ nội trú khóa 41, trường đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Vi sinh Tôi xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS.TS Lê Văn Phủng TS Phùng Thị Bích Thủy Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin cam đoan điều trình bày hồn tồn trung thực xác Vũ Thị Hảo 53 Trong nghiên cứu chúng tơi, tỷ lệ trẻ nam/ nữ nhóm TCC Rotavirus là: 68,6%/ 31,4% xấp xỉ 2,2/1 Tỷ lệ bệnh nhân nam nhiều bệnh nhân nữ có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 So sánh đặc điểm giới bệnh nhân TCC Rotavirus với nghiên cứu khác, thấy tương đồng: nghiên cứu Đỗ Phương Thảo (năm 2016), tỷ lệ trẻ nam/ trẻ nữ xấp xỉ 1,9/1 ; nghiên cứu Nguyễn Vũ Trung (năm 2004), tỷ lệ nam/ nữ 181/93 (xấp xỉ 1,95: 1) Tuy nhiên, xét tương quan tỷ lệ TCC Rotavirus giới, tỷ lệ bệnh nhân TCC Rotavirus nam (34,7%) cao nữ (27,3%) Chúng thấy tỉ lệ TCC Rotavirus nam cao nữ khơng có khác biệt với p > 0,05 Điều tương đồng với kết nghiên cứu Nguyễn Vũ Trung Về đặc điểm giới nhóm TCC Norovirus, kết nghiên cứu chúng tơi cho thấy nhóm TCC Norovirus, tỉ lệ bệnh nhân nam/ nữ là: 68,4%/31,6%, xấp xỉ 2,2/1 Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Trong xét mối tương quan giới tỷ lệ TCC Norovirus, tỷ lệ TCC Norovirus nam (20%) nhiều nữ (15,9%) Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với p= 0,579; sử dụng Chi – Square test Trong nghiên cứu Nicaragua (năm 2008) 542 bệnh nhân TCC cho thấy tỷ lệ TCC Norovirus giới nữ (15%) cao giới nam (10%), có ý nghĩa thống kê với p= 0,044 Chúng chưa có lời lý giải thỏa đáng cho vấn đề này, khác biệt nghiên cứu nằm cỡ mẫu khác nhau, để xác định vấn đề này, cần nghiên cứu có cỡ mẫu lớn hơn, có tính thống kê tổng quát 4.2.3 Yếu tố tuổi bệnh nhân TCC Rotavirus, Norovirus Trong nghiên cứu chúng tơi, nhóm TCC Rotavirus phần lớn trẻ độ tuổi 0-24 tháng chiếm 82,9% So sánh với đặc điểm tuổi nhóm trẻ TCC Rotavirus số nghiên cứu khác giới Việt Nam, 54 chúng tơi thấy có tương đồng nghiên cứu: theo nghiên cứu Yongbo Kang (năm 2018) Trung Quốc, nghiên cứu Đỗ Phương Thảo (năm 2016), nghiên cứu Nguyễn Vân Trang (năm 2014) tỷ lệ 83,2% , 90,5% , 88,8% Nghiên cứu tỉ lệ tiêu chảy cấp Rotavirus cao nhóm bệnh nhân độ tuổi 13-24 tháng, chiếm 44,8% Nhóm bệnh nhân từ 25 đến 59 tháng tuổi, nhóm bệnh nhân từ đến 12 tháng tuổi chiếm tỷ lệ thấp 37,5%; 27,1% Tỷ lệ TCC Rotavirus thấp nhóm tuổi đến tháng tuổi 23,1% Nghiên cứu Nguyễn Vũ Trung (năm 2004) 587 trẻ TCC cho tỷ lệ TCC Rotavirus cao nhóm 13-24 tháng 57,6%; theo sau nhóm tuổi 0-12 tháng 25-36 tháng chiếm tỷ lệ 46,3% 44,2% Như kết tương đồng với kết Nguyễn Vũ Trung , nhiên có khác biệt nhỏ phân chia độ tuổi nghiên cứu Trong nhóm TCC Norovirus chúng tôi, bệnh nhân độ tuổi 0-24 tháng tuổi chiếm đa số (94,7%) So sánh với đặc điểm độ tuổi bệnh nhân TCC Norovirus nghiên cứu khác, chúng tơi thấy có tương đồng Nghiên cứu Filemon Bucardo (năm 2008) Nicaragua, nhóm TCC Norovirus, bệnh nhân tuổi chiếm 90% , nghiên cứu Nguyễn Vân Trang (năm 2014) Việt Nam, tỷ lệ 91,3% Xét mối tương quan nhóm tuổi tỷ lệ TCC Norovirus, nhận thấy tỷ lệ TCC Norovirus cao bệnh nhân từ đến 12 tháng tuổi chiếm 29,2% Nhóm tuổi từ 13 đến 24 tháng, nhóm tuổi từ đến tháng chiếm tỷ lệ thấp 13,8%; 11,5% Tỷ lệ TCC Norovirus thấp bệnh nhân từ 25 đến 59 tháng 6,2% Kết tương đồng với nghiên cứu Nguyễn Vân Trang cho tỷ lệ nhóm đến 12 tháng tuổi cao Tuy nhiên nghiên cứu cho tỉ lệ TCC Norovirus nhóm tuổi đến 12 tháng tuổi cao nghiên cứu Nguyễn Vân Trang (16%) 55 Nguyên nhân cỡ mẫu chúng tơi 119 bệnh nhân phân chia nhóm tuổi nhiều hạn chế 4.2.4 Biến đổi xét nghiệm 4.2.4.1 Xét nghiệm máu Chỉ số huyết học: Phân tích số xét nghiệm cận lâm sàng nhóm Rotavirus dương tính âm tính, chúng tơi nhận thấy giá trị Hb, Hct trung bình nhóm Rotavirus dương tính cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm Rotavirus âm tính So sánh số xét nghiệm cận lâm sàng nhóm TCC Norovirus nhóm âm tính, chúng tơi nhận thấy giá trị Hct trung bình nhóm TCC Norovirus cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm âm tính Giá trị Hct tỷ lệ thể tích hồng cầu thể tích máu tồn phần Giá trị Hct tăng trường hợp bệnh nhân tiêu chảy cấp phản ánh tình trạng nước Trong nghiên cứu chúng tôi, qua phân tích số xét nghiệm máu, nhóm TCC Rotavirus có số Hct cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm âm tính Điều phù hợp với chế bệnh sinh gây TCC Rotavirus, Norovirus có rối loạn hấp thu nước dịch, gây tình trạng nước cấp tính trẻ tiêu chảy cấp Natri máu: Theo nghiên cứu Rytlewska 773 trẻ tiêu chảy cấp Sopot, trường hợp dương tính với Rotavirus có Natri máu ngưỡng bình thường 135-148 mmol/l chiếm 93,84%, Natri máu 148 mmol/l chiếm 0,36% Nghiên cứu Đỗ Phương Thảo (năm 2016) 346 bệnh nhân tiêu chảy cấp Rotavirus bệnh viện Nhi trung ương cho thấy bệnh nhân có Natri máu ngưỡng 130-150 mmol/l chiếm phần lớn 95,1%, bệnh nhân có Natri máu < 130 mml/l, Natri máu >150 mmol/l 4,6%; 0,4% 56 Kết chúng tơi cho thấy nhóm TCC Rotavirus phần lớn có giá trị Natri máu nằm giới hạn bình thường 130-150 mmol/l (94,3%), có tỉ lệ nhỏ < 130 mmol/l (5,7%) Natri máu nhóm TCC Norovirus nằm giới hạn bình thường Trong nhóm âm tính, tỉ lệ 4,8% Kết chúng tơi khơng có trường hợp có Natri máu > 150 mmol/l Như vậy, gghiên cứu tác giả Rytlewska, Đỗ Phương Thảo cho thấy Natri máu bệnh nhân phần lớn nằm giới hạn bình thường Hạ Natri máu nghiên cứu chiếm tỷ lệ tương đương Trong nghiên cứu chưa ghi nhận trường hợp tăng Natri máu Trên giới nước có nhiều nghiên cứu Norovirus phạm vi 80 tài liệu tham khảo khuôn khổ luận văn, chưa ghi nhận nghiên cứu sâu phân tích số xét nghiệm máu đối tượng Tuy nhiên, nghiên cứu chúng tơi, số Natri máu nhóm TCC Norovirus nằm khoảng giới hạn bình thường 130-150 mmol/l So sánh với nhóm TCC Rotavirus, số Natri máu bệnh nhân TCC Norovirus biến đổi Kali máu: Theo nghiên cứu Rytlewska (năm 2000) 773 trẻ tiêu chảy cấp Sopot, trường hợp dương tính với Rotavirus, kali máu nằm giới hạn 3,5 -5,5 mmol/l chiếm 96,10%; kali máu 5.5 mmol/l chiếm 2,90% 1,09% Nghiên cứu Đỗ Phương Thảo (năm 2016) tỷ lệ kali máu nằm giới hạn 3,5-5,5 mmol/l chiếm phần lớn (83,35%), tỷ lệ kali máu < 3,5 mmol/l >5,5 mmol/l chiếm 16% 0,8% Nghiên cứu chúng tơi cho thấy nhóm TCC Rotavirus phần lớn có giá trị kali máu nằm giới hạn bình thường (80%), có 20% trường hợp có giá trị kali máu < 3,5 mmol/l Với nhóm TCC Norovirus, 100% 57 trường hợp nằm giới hạn 3,5-5,5 mmol/l Trong khi, nhóm âm tính có 95,2% trường hợp có kali máu khoảng 3,5-5,5 mmol/l, 3,2% trường hợp có kali máu < 3,5% mmol/l, 1,6% trường hợp có kali máu > 5,5 mmol/l Kết nghiên cứu nghiên cứu Rytlewska, Đỗ Phương Thảo cho thấy kali máu phần lớn nằm giới hạn bình thường Tỷ lệ hạ kali máu cuả tương đồng với kết nghiên cứu Đỗ Phương Thảo ; cao kết nghiên cứu Rytlewska So sánh nhóm TCC Rotavirus TCC Norovirus, tỷ lệ Natri máu, kali máu phần lớn nằm giới hạn bình thường nhóm Ở nhóm Norovirus chưa ghi nhận trường hợp có rối loạn điện giải Như TCC Norovirus gây biến đổi điện giải đồ so với TCC Rotavirus 4.2.4.2 Kết soi phân Theo nghiên cứu Đỗ Phương Thảo (năm 2016), tỷ lệ có hồng cầu phân bệnh nhân tiêu chảy cấp Rotavirus dao động từ 0-8,3%, tỷ lệ bạch cầu phân dao động từ 15,8-20,8% Nghiên cứu đưa tỷ lệ xuất hồng cầu phân nhóm TCC Rotavirus, nhóm TCC Norovirus, nhóm âm tính 0%; 10,5%; 27,4% Tỉ lệ xuất hồng cầu phân nhóm có khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Tỷ lệ xuất bạch cầu phân nhóm TCC Rotavirus, nhóm TCC Norovirus, nhóm âm tính 8,6%; 26,3%; 62,9% Tỷ lệ xuất bạch cầu phân nhóm có khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05.Theo nghiên cứu chúng tôi, tỷ lệ hồng cầu bạch cầu phân nhóm TCC Rotavirus ( 0%; 8,6%) thấp so với kết nghiên cứu Đỗ Phương Thảo Chúng tơi cho khác biệt giữ nhóm TCC Rotavirus nhóm âm tính xuất phát từ chế bệnh sinh tiêu chảy Rotavirus khác với chế tiêu chảy tác nhân vi khuẩn E coli, Shigella, Cơ chế chủ yếu TCC Rotavirus tổn thương vi nhung mao niêm mạc ruột non, gây rối loạn hấp thu chất dinh dưỡng, điện giải, nước 58 Theo nghiên cứu chúng tôi, tỷ lệ hồng cầu , bạch cầu phân nhóm Norovirus dương tính là: 10,5%; 26,3% thấp so với tỷ lệ nhóm âm tính Chúng tơi cho khác biệt giữ nhóm TCC Norovirus nhóm âm tính xuất phát từ chế bệnh sinh tiêu chảy Norovirus tương tự Rotavirus khác với chế tiêu chảy tác nhân vi khuẩn E coli, Shigella, Cơ chế chủ yếu TCC Norovirus tổn thương vi nhung mao niêm mạc ruột non, gây rối loạn hấp thu chất dinh dưỡng, điện giải, nước 59 KẾT LUẬN Hoàn thiện kĩ thuật RealTime PCR đa mồi  Sự cải tiến bước tiền xử lí mẫu ủ nhiệt góp phần làm tăng độ tinh acid nucleic  Với giá trị phát tác nhân định tính kĩ thuật Realtime PCR đa mồi có giá trị phát tương đương kĩ thuật Realtime PCR đơn mồi  Với giá trị phát tác nhân định tính kĩ thuật Realtime PCR đa mồi có độ nhạy, độ đặc hiệu tương đương với kit thương mại FTD viral gastroenteritis Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR đa mồi xác định tỉ lệ Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em TCC Rotavirus chiếm tỷ lệ 31,9%, độ tuổi từ 13 đến 24 tháng chiếm cao (37,1%), tỷ lệ nam/ nữ 2,2:1 Tỉ lệ TCC Rotavirus cao nhóm bệnh nhân từ 13 đến 24 tháng tuổi (44,8 %), tỷ lệ mắc nam cao nữ, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê p > 0,05 TCC Norovirus chiếm tỷ lệ 18,5%, độ tuổi từ đến 12 tháng chiếm chủ yếu (63,2%), tỷ lệ nam/ nữ xấp xỉ 2,2/1 Tỉ lệ TCC Norovirus cao nhóm bệnh nhân từ đến12 tháng tuổi (29,2%), tỷ lệ mắc nam cao nữ, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê p > 0,05 Giá trị Hct trung bình nhóm TCC Rotavirus, nhóm TCC Norovirus cao có ý nghĩa thống kê so với nhóm âm tính Nhóm TCC Rotavirus có giá trị Natri máu, Kali máu chủ yếu nằm giới hạn bình thường với tỉ lệ lượt 94,3%, 80% 60 Nhóm TCC Norovirus có giá trị Natri máu, Kali máu nằm giới hạn bình thường Tỉ lệ phát hồng cầu, bạch cầu phân nhóm TCC Rotavirus, Norovirus thấp có ý nghĩa thống kê so với nhóm âm tính 61 KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO MẪU THU THẬP THÔNG TIN Họ tên bệnh nhân: Ngày sinh: Mã BN: Tuổi: Mã bệnh phẩm: Giới: Địa chỉ: Ngày vào viện: Điện thoại liên lạc: Chiều cao: Cân nặng tại: Kg Xét nghiệm máu: CRP: Hb: Hct: Bạch cầu: Bạch cầu trung tính: Bạch cầu lympho: Tiểu cầu: Na+ : K+ : Cl- : Xét nghiệm soi phân: Hồng cầu phân: Bạch cầu phân: BỆNH ÁN NGHIỂN CỨU ST T 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 MA XET NGHIE M 11 14 15 16 17 19 21 22 23 24 25 26 27 28 29 34 36 39 40 41 44 45 46 48 50 51 52 HO TEN BENH NHAN Le Ngoc D Nguyen Thi Phuong L Nguyen Duc T Lu Anh T Nguyen Hong P Hoang Minh T Do Nhat Quang A Tran Huu Thai A Nguyen Ngoc L Nguyen Huu Tung L Hoang Huyen M Dao Hoang P Nguyen Phuong M Tran Xuan Viet B Chu Ngoc A Duong Gia B Le Khanh L Nguyen Bao T Do Ngoc Huyen M Nguyen Thu N Tran Mai C Tran Trung H Vu Tung L Tran Duc S Dang Quang H Dang Bao K Nguyen Thi Thuy H Nguyen Le To U Do The V Nguyen Tien D Nguyen Nam D Tong Thi Huong T Pham Ha A TUOI (THANG ) 12 16 14 13 14 10 36 13 24 20 5 44 16 16 48 10 14 36 GIOI nu nu nam nu nam nam nam nam nam nam nu nam nu nam nu nam nu nu nu nu nam nam nam nam nam nu nu nu nam nam nam nu nu MA SO BENH NHAN 160463529 166044909 170021116 170019874 170083496 160494769 170086725 160529464 160291038 170061299 160502151 170058504 160291111 165323435 160420989 170048186 170144123 160398443 160226288 160520223 170050640 170125389 14028497 160315140 174004355 170043556 130207938 170174943 160405939 170071656 170071604 160266073 170514318 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 53 54 59 61 62 63 64 65 69 70 71 72 73 75 77 82 83 84 86 89 90 91 92 95 97 99 101 102 103 106 109 110 111 113 114 117 120 121 122 Pham Gia H Nguyen Duc Q Nguyen Bao A Nguyen Tien D Nguyen Dao Khanh H Tran Anh D Tong Ba T Nguyen Bao H Nguyen Gia H Hua Dinh P Ngo Bao N Nguyen Bao A Nguyen Ha An N Dang Kieu Khanh M Nguyen Thi Bao A Pham Nguyen Gia L Nguyen Hieu H Do Nguyen K Hoang Dang P Vu Quang M Tran Nhu Bao N Nguyen Thao M Nguyen Huu Gia B Nguyen Khac Minh D Kim Sung M Ngo Nhat A Nguyen Gia H Chu Quang H Nguyen Quang M Vu Duy K Pham Gia M Vu Nam P Doan Nhat N Nguyen Dinh Gia B Nguyen Tu A Pham H Vu Thanh P Le Vuong Gia H Pham Hoang P 14 27 36 11 22 25 13 15 22 22 11 11 22 22 36 8 12 48 12 10 24 11 12 18 nam nam nu nam nu nam nam nu nam nam nu nu nu nu nu nam nu nam nam nam nu nu nam nam nam nam nam nam nam nu nu nam nam nam nu nam nam nam nam 160517043 160102911 170448024 170151465 160555753 160146792 170046477 160503173 170102223 160376570 170147246 160422302 170353746 170343146 160243706 160291089 160438450 170257455 170070661 170049120 160212658 160305394 170281345 160107144 160450974 160337564 140048974 170275906 170217089 170018801 150054415 170333821 170236989 170226462 170253255 169252636 170337986 170370449 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 124 135 143 145 148 153 156 158 160 161 162 163 166 167 175 180 182 183 187 188 189 195 196 198 199 201 202 203 204 205 206 209 210 211 212 213 215 218 220 Nguyen Trung Bac L Ta Khanh H Bui Huy K Nguyen Bao N Tang Huy H Luong Tat T Phan Khanh D Nguyen Tuan D Vu Thuy Tuong V Nguyen Thi Bao N Nguyen Ngoc Thien A Le Trung H Bui Dan L Hoang Thanh L Nguyen Viet C Vu Linh C Doan Cong D Ngo Quoc L Do Tuan H Doan Tuan H Nguyen Cong Gia H Mai Bao M Duong Kieu A Truong Gia B Duong Ngoc L Cao Phan Han N Nguyen Bao H Tran Ngoc L Le Nhu Y Le Ngoc D Hoang Phuc L Bach Truong G Hoang Nam P Nguyen Thanh D Nguyen Gia H Ngo Duc A Tran Khoa N Kieu Ngoc Bao V Vu Nguyen Bao N 10 11 10 15 36 7 12 24 4 11 24 26 27 15 13 12 22 41 12 37 17 nam nu nam nu nam nam nam nam nu nu nu nam nam nam nam nu nam nam nam nam nam nam nu nam nu nu nu nam nu nu nam nam nam nam nu nam nam nu nam 170472360 170444312 170133336 170511241 176625635 170451584 170457934 170503362 170315109 170544443 170491578 170555994 179069980 170069847 160298154 170179372 170401668 170447063 170529494 170519992 170481395 170529571 170502322 170519384 170486047 170169337 170500815 170516488 170549787 170500721 170543529 150151841 470498217 170298533 170522057 170548771 150486394 170525222 170520506 112 113 114 115 116 117 118 119 221 222 223 226 231 240 244 247 Do Quoc H Pham Dinh T Chu Minh T Vu Duc D Le Trung K Pham Tung A Vu Nguyen Viet K Vu Hai D 27 15 47 13 nam nam nam nam nam nam nu nam 170518087 170031262 170500386 170500516 160462009 170451589 160469305 160532490 ... Hoàn thiện kỹ thuật Realtime PCR đa mồi phát Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR đa mồi xác định tỉ lệ Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em 3 CHƯƠNG... ứng Vì vậy, để ứng dụng sớm sàng lọc bệnh viện, thực đề tài Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR đa mồi phát Rotavirus Norovirus gây tiêu chảy cấp trẻ em với hai mục tiêu: Hoàn thiện kỹ. .. 1.3.4.3 Kỹ thuật Realtime PCR đa mồi Trong Realtime PCR, người ta sử dụng cặp mồi phản ứng kỹ thuật Realtime PCR đa mồi dựa nguyên tắc Realtime PCR, thiết kế nhiều cặp mồi phản ứng nhằm phát nhiều