Nghiên cứu tương đương sinh học viên nén gliclazid giải phóng chậm sản xuất ở việt nam theo mô hình thử đơn liều và đa liều

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y tề' T I U ( \ ( Ỉ Đ Ạ• I H Ọ• C D Ư Ọ• C H À N Ộ•I TRẦN HỒNG NGHIÊN cúu TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN GLICLAZID ■ GIẢI PHÚNG CHẬM SẢN XUẤT VIỆT NAM THEO NlO HÌNH ■ ■ THỬĐƠN LIÊU VÀ ĐA LIỀU LUẬN VĂN THẠC s ĩ D ợ c HỌC ■ ■ ■ ■ Chuyên ngành: KIEM nghiệm THUốC - ĐỘC CHAT M õ SỐ: 60 73 15 N gười hướng dẫn khoa học: TS PHÙNG THỊ VINH ậ * ít, H ù m i, năm 0 V , _N t iứ íí LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Phùng Thị Vinh, người thầy tận tụy hướng dẫn, bảo suốt trình học tập nghiên cứu thực đề tài Xin chân trọng cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, cảm ơn thầy Phòng Đào tạo sau đại học, Bộ mơn Phân tích mơn khác trường Đại học Dược Hà nội tạo điều kiện tốt cho tơi q trình học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đổc Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương, Trung tâm đánh giá tương đương sinh học nơi công tác quan tâm tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành nhiệm vụ học tập nghiên cứu thời gian vừa qua Cuối xin cảm ơn gia đình, đồng nghiệp, bạn bè ln ln động viên, chia sẻ, khích lệ giúp đỡ để tơi có kết ngày hơm Trần Hồng Học viên cao học khóa 12, chun ngành Kiểm nghiệm thuốc - Độc chất MỤC LỤC DANH MỤC CHỬ VIÉT TẮT DANH MỤC BẢNG BIẺU D A N H M Ụ C H ÌN H VẼ ĐẬT VẤN Đ È Phần 1: TỎNG QUAN 1.1 TỒNG QUAN ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 1.1.1 Khái niệm chung 1.1.2 Các phương pháp đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học 1.1.3 Quy trình thực đánh giá tương đương sinh học 1.1.4 Đảm bảo đạo đức nghiên cứu 1.1.5 Đảm bảo chất lượng kết nghiên u 1.2 TỒNG QUAN GLICLAZID 1.2.1 Tính chất lý hóa cách sử dụng 1.2.2 Một số chế phẩm gliclazid giải phóng chậm có thị trường 11 1.2.3 Một sổ phương pháp định lượng Gliclazid dịch sinh học 12 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN c ứ u TĐSH Ở TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 14 1.3.1 Trên giới 14 1.3.2 Trong nước 16 Phần 2: NGUYÊN LIỆU, THIÉT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 18 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Thiết b ị 19 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u .20 2.2.1 Xây dựng phương pháp phân tích 20 2.2.2 Thẩm định phương pháp phân tích 23 2.2.3 Đánh giá tương đương sinh học chế pham gliclazid 30 Phần 3: KÉT QUẢ NGHIÊN c ứ u 38 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 38 3.1.1 Lựa chọn chất nội chuẩn .38 3.1.2 Khảo sát điều kiện sắc k ý 38 3.1.3 Khảo sát phương pháp chiết tách GLI huyết tương 40 3.2 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 43 3.2.1 Tính thích họp hệ thống sắc ký 43 3.2.2 Đánh giá độ chọn lọc - đặc hiệu phương pháp 45 3.2.3 Đường chuẩn khoảng tuyến tính 46 3.2.4 Xác định độ độ x c 49 3.2.5 Tỉ lệ thu hồi phương pháp 51 3.2.6 Khảo sát độ ổn định 52 3.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC CHẾ PHẨM GLICLAZID 58 3.3.1 Kết lâm sà n g 58 3.3.2 Xác định nồng độ thuốc huyết tương 59 3.3.3 Các thông số dược động học 61 3.3.4 Ket đánh giá tương đương sinh học 68 Phần 4: BÀN LU Ậ N 78 4.1 VÈ XÂY DựNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH GLICLAZID TRONG HUYẾT TƯƠNG 4.2 VÈ THẦM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH TRONG HUYẾT TƯƠNG 79 4.3 VỀ ĐÁNH GIÁ TĐSH CHẾ PHẨM GLICLAZID 80 KÉT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Tóm tắt số chế phẩm gliclazid có thị trường 11 Bảng 1.2: Tóm tắt số phương pháp định lượng Gliclaãd phương phápHPLC 12 Bảng 2.3: Các chất chuẩn sử dụng 18 Bảng 2.4: Các mẫu huyết tương trắng sử d ụ n g 18 Bảng 2.5: Các dung mơi hóa chất sử dụng phương pháp phân tíc h .18 Bảng 2.6: Các thiết bị sử dụng phương pháp phân tích 20 Bảng 2.7: Thiết bị HPLC Shimadzu 20 Bảng 2.8: Cách chuẩn bị đường chuẩn 25 Bảng 2.9: Chuẩn bị mẫu QC huyết tương 26 Bảng 2.10: Kết ngẫu nhiên hố bố trí uổng thuốc 32 Bảng 3.11: Kết xác định độ phù họp hệ thống sắc ký 44 Bảng 3.12: Ảnh hưởng mẫu trắng thời điểm trùng thời gian lưu (tR) G L Iv lS 46 Bảng 3.13: Kết xác định giới hạn định lượng (LLOQ) 47 Bảng 3.14: Ket khảo sát đường chuẩn 47 Bảng 3.15: Sự tương quan nồng độ GLI huyết tương đáp ứng pic 48 Bảng 3.16: Ket khảo sát độ đúns, độ lặp lại ngày 49 Bảng 3.17: Kết khảo sát độ đúng, độ lặp lại khác ngày 50 Bảng 3.18: Kết khảo sát tỉ lệ thu hồi I S 51 Bảng 3.19: Kết khảo sát tỉ lệ thu hồi G L I 52 Bảng 3.20: Kết độ ổn định dung dịch chuẩn GLI gốc, IS thời gian ngắn nhiệt độ phòng 53 Bảng 3.21: Ket độ ổn định dung dịch chuẩn GLI gốc thời gian dài nhiệt độ - 40 ° c 53 Bảng 3.22: Kết độ ổn định dung dịch IS gốc thòi gian dài nhiệt độ - 40°c 54 Bảng 3.23: Kết nghiên cứu độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông - rã 54 Bảng 3.24: Kết nghiên cứu độ ổn định mẫu huyết tương nhiệt độ phòng thời gian n g ắ n 55 Bảng 3.25: Độ ổn định dài ngày mẫu huyết tương 56 Bảng 3.26: Độ ổn định mẫu sau xử lý auto-sampler 57 Bảng 3.27: Nồng độ GLI tối đa huyết tương (Cmax) 61 Bảng 3.28: Thời gian đạt đến nồng độ tối đa huyết tương (Tmax) 62 Bảng 3.29: Diện tích đưòng cong nồng độ - thời gian (AUC) 63 Bảng 3.30: Diện tích đường cong nồng độ - thòi gian Xthời gian (AUMC) thời gian lưu trú trung bình nghiên cứu đon liều 64 Bảng 3.31: Nồng độ Cmin khoảng thời gian T thử đa liề u 65 Bảng 3.32: Nồng độ Cav (Mg/rnl) khoảng thời gian T thử đa liều 66 Bảng 3.33: Độ dao động DF DF/t khoảng thời gian I thử đa liều 67 Bảng 3.34: So sánh Cmax phương pháp khoảng tin cậy 90%, đon liều 68 Bảng 3.35: So sánh AUCo, bàng phương pháp khoảng tin cậy 90%, đơn liều 69 Bảng 3.36: So sánh MRTbằng phương pháp khoảng tin cậy 90%, đơn liều 70 Bảng 3.37: So sánh Tmaxtheo phương pháp thống kê phi tham số, đon liều 72 Bảng 3.38: So sánh C max phương pháp khoảng tin cậy 90%, đa liều 73 Bảng 3.39: So sánh AUC*5bằng phương pháp khoảng tin cậy 90%, đa liều 74 Bảng 3.40: So sánh Tmaxtheo phương pháp thống kê phi tham số, đa liều 76 Bảng 4.41: So sánh thông sổ DĐH gliclazid sản xuất Việt Nam vói thơng sổ DĐH tài liệu công bổ 82 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1: Đồ thị biến thiên nồng độ dược chất máu theo thời g ia n Hình 3.2: Phổ hấp thụ G L I 38 Hình 3.3: Phổ hấp thụ IS 38 Hình 3.4: sắc đồ mẫu GLI IS pha động .40 Hình 3.5: sắc đồ mẫu GLI IS huyết tương 40 Hình 3.6: sắc đồ mẫu trắng xử lý n-hexan 41 Hình 3.7: sắc đồ mẫu trắng xử lý dichlorom ethan 41 Hình 3.8: sắc đồ mẫu trắng xử lý MeCN-CHCl3 41 Hình 3.9: sắc đồ mẫu chuẩn + IS xử lý MeCN-CHCl3 41 Hình 3.10: sắc đồ mẫu trắng xử lý chiết pha rắn .43 Hình 3.11: sắc đồ mẫu chuẩn + IS xử lý chiết pha rắn 43 Hình 3.12: sắc ký đồ dung dịch chuẩn GLI IS pha đ ộ n g 44 Hình 3.13: sắc ký đồ huyết tương trắ n g 45 Hình 3.14: sắc ký đồ huyết tương trắng có pha IS 45 Hình 3.15: sắc ký đồ huyết tương trắng có pha chuẩn GLI nồngđộ LLOQ (0,2 Ịig/mL) IS 45 Hình 3.16: sắc ký đồ huyết tương trắng có pha chuẩn Gli IS nồng độ khoảng đường chuẩn (4,0 |ig/m L ) 45 Hình 3.17: Đường cong trung bình nồng độ thuổc - thời gian 20 NTN thử đơn liều 60 Hình 3.18: Đường cong trung bình nồng độ thuốc - thời gian 20 NTN thử đa liều 60 NHỮNG CHỮ VIẾT TẤT ANOVA Phân tích phương sai AUC Diện tích đường cong AƯMC Diện tích đường cong nồng độ - thời gian BCS Hệ thống phân loại sinh dược học BMI Chỉ số khối thể cc, cc2 Đường chuân Ct Nồng độ thuốc thời điểm I C av Nồng độ thuốc trung bình trạng thái ổn định Đường chuẩn c' “'max c' “•min Nồng độ thuốc tốt đa cv% Hệ số biến thiên DF Dao động nồng độ thuốc huyết tương EMS Trung bình bình phương sai số FDA Cục quản lý thuốc thực phẩm Mỹ GCP Thực hành tốt lâm sàng GLI Gliclazid GLP Thực hành tốt phòng thí nghiệm GMP Thực hành tốt sản xuất thuốc HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HQC Mau kiểm tra nồng độ cao HT Huyết tương IS Glibenclamid (nội chuân) Kel Hằng số tốc độ thải trừ LLOQ Giới hạn định lượng Nồng độ thuốc tối thiểu trạng thái ổn định X thời gian LQC Mầu kiểm tra nồng độ thấp MeCN Acetonitril MQC Mầu kiếm tra nồng độ trung bình MR Giải phóng chậm MRT Thời gian lưu trú trung bình NTN Người tình nguyện PDA Detector quang phô QC Mau kiểm tra R Thuốc đổi chứng SD Độ lệch chuẩn SKD Sinh khả dụng T Thuốc thử T 1/2 Thời gian bán thải TB Trung bình TDKD Tác dụng kéo dài TĐSH Tương đương sinh học Tmax Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa WHO Tổ chức Y tế giới T Khoảng cách liều Các đon vị đo lường viêt tăt sau Đơn vị đo chiều dài Centimet cm Milimet mm Micromet p.m Nanomet nm Gam g Miligam mg Microgam Hg Lít L Mililit mL Microlit |iL Giờ h Phút Đơn vị đo khối lượng Đơn vị đo thê tích Đơn vị thời gian ===== Shimadzu LCsolution Analysis Report ===== Acquired by Sample Name Vial # Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name : HOANG : std 5.4 28 50 uL C:\LabSolutions\HOANG\Data\Gliclazide\NTNl\Gli 28.led C:\LabSolutions\HOANG\Methods\Gliclazide.lcm c :\LabSolutions\HOANG\Batch\Gliclazide\ 14-07-2008.leb mill PDA Multi 1/229nm 4nm Quantitative Results PDA ID# Name Gliclazide Glibenclamide Ret Time 6.645 8.116 Area 639808 372248 Theoretical Plate#Tailing Factor Resolution 12512.910 1.255 0.000 13436.071 1.207 5.683 Shimadzu LCsolution Analysis Report === Acquired by Sample Name Vial # Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name : HOANG : HQC2 35 50 uL C:\LabSolutions\HOANG\Data\Gliclazide\NTNl\Gli 35.led C:\LabSolutions\HOANG\Methods\Gliclazide.lcm C:\LabSolutions\HOANG\Batch\Gliclazide\14-07-2008.1cb mAU PDA Multi / 229nm 4nm Quantitative Results PDA ID# Name Gliclazide Glibenclamide Ret Time 6.638 8.110 Area 525775 344465 Theoretical Plate#Tailing Factor Resolution 12303.432 1.250 0.000 13458.102 1.210 5.673 === Shimadzu LCsolutioiì Analysis Report === Acquired by Sample Name Vial# Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name : HOANG : NTN1-1-4 50 uL c :\LabSolutions\HOANG\Data\Gliclazide\NTN l\Gli led C:\LabSolutions\HOANG\Methods\Gliclazide.lcm C:\LabSolutions\HOANG\Batch\Gliclazide\14-07-2008.1cb 111in PDA Multi / 229nm 4nm Quantitative Results PDA ID# Name Gliclazide Glibenclamide Ret Time 6.626 8.088 Area 38542 369022 Theoretical Plate#Tailing Factor Resolution 12176.972 1.326 0.000 13300.197 1.267 5.614 Shimadzu LCsolution Analysis Report Acquired by Sample Name Vial# Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name : HOANG : NTN1-II-4 32 50 uL C:\LabSolutions\HOANG\Data\Gliclazide\NTNl\Gli 32.led C:\LabSolutions\HOANG\Methods\Gliclazide.lcm C:\LabSolutions\HOANGVBatch\Gliclazide\14-07-2008.1cb niAU PDA Multi 1/ 229nm 4nm Quantitative Results PDA ID# Name Gliclazide Glibenclamide Ret Time 6.630 8.101 Area 154909 342395 Theoretical Plate# Tailing Factor Resolution 12567.430 1.268 0.000 13395.244 1.247 5.694 PHỤ LỤC Giá trị biểu thị mửc độ sai khác phương pháp so sánh không tham số Wincoxon Signed Rank Test (Pharmaceutical Statistics 3rd Edition) Tables Table IV.13 Values Leading to Significance for the Wilcoxon Signed Rank Test (Two - Sided Test) Sample size, N % Level3 % Level 10 11 10 12 13 13 17 10 14 21 13 15 25 16 16 30 19 17 35 23 18 40 28 19 32 46 20 52 37 - - aI f th e sm a lle r n k su m is les th a n o r eq u al to table value, the comparative group are different at the indicated level of significance PHỤ LỤC Tạp chí kiểm nghiệm thuốc -•e NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU SO SÁNH SINH KHẢ DỤNG CHẾ PHAM GLICLAZID PHĨNG THÍCH KÉO DÀI SẢN XUẤT TẠI VIỆT NAM TRÊN MƠ HÌNH THỬ ĐƠN LlỂU VÀ ĐA LlỂU TRÁN HOÀNG, PHÙNG THỊ VINH, TẠ M ẠNH HÙNG Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Đặt vấn đề Sinh khả dụng thuốc dạng rắn dùng đường uống đặc biệt thuốc phóng thích kéo dài thường bị ảnh hưởng nhiều công thức bào chế đặc điểm sinh lý đường tiêu hóa Do vậy, việc nghiên cứu đánh giá khả hấp thu dạng thuốc cần thiết Hơn nữa, với dạng phóng thích kéo dài, phải đảm bảo thuốc khơng bị phóng thích q nhanh nồng độ thuốc khoảng điều trị Để đánh giá chất lượng in vivo chế phẩm sản xuất nước, thực nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng chế phẩm có chứa Gliclazid phóng thích kéo dài mơ hình đơn liều đa liều so với chế phẩm lưu hành sau dùng mức liều Điều kiện phương pháp nghiên cứu 2.1 Thuốc nghiên cứu - Thuốc thử: Viên nén gliclazid hàm lượng 60 mg, sản xuất nước - Thuốc chứng: Diamicron MR (gliclazid 30 mg), sản xuất Les Laboratoires Servier, France 2.2 Thiết k ế nghiên cứu Thiết kế chéo, ngẫu nhiên, thuốc, giai đoạn (ô vuông la tinh 2x2), đơn liều đa liều, sử dụng 20 người tình nguyện, tình trạng đói Đơn liều: Uống viên 60 mg thuốc thử viên 30 mg thuốc chứng Thời điểm lấy mẫu máu: 1, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,12, 16, 48, 72 Lấy ml máu ly tâm 3000 vòng/phút Hút lớp huyết tương, bảo quản - 40°c đến phân tích Thời gian nghỉ giai đoạn ngày Đa liều: Mỗi ngày uống viên 60 mg thuốc thử viên 30 mg thuốc chứng, liên tục sáu ngày Ngày thứ 4, thứ lấy mẫu máu trước uống thuốc Ngày thứ lấy mẫu máu trước uống thuốc thời điểm sau uống thuốc: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 16, 24 Ly tâm, tách phần huyết tương, bảo quản - 40°c Thời gian nghỉ giai đoạn ngày 2.3 Người tình nguyện Người tình nguyện nam giới khỏe mạnh, độ tuổi từ - , sô' BMI cân nặng chiều cao khoảng từ 18 - 25 kg/m2 Không nghiện ma túy, rượu, thuốc Khơng có rối loạn tim mạch, hơ hấp, tiêu hóa, thận, huyết học, nội tiết, hệ thần kinh bệnh tâm thần Không nhiễm HIV, HbsAg (âm tính với phép thử nhanh) Người có tiền sử dị ứng với Gliclazid thuốc nhóm bị loại trừ 2.4 Phân tích mẫu sinh học Sử dụng phương pháp phân tích xác định nồng độ Gliclazid huyết tương thẩm định đạt yêu cầu quy định cho phân tích thuốc dịch sinh học với tiêu độ đặc hiệu, giới hạn định lượng dưới, đường chuẩn khoảng tuyến tính, độ đúng, độ xác, hiệu suất chiết độ ổn định gliclazid huyết tương bảo quản Tóm tắt phương pháp phân tích sau: - Chiết tách gliclazid từ huyết tương kỹ thuật chiết lỏng - lỏng với dung môi hữu Xác định nồng độ gliclazid phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - Thiết bị phân tích: Hệ thống HPLC (Shimadzu), với detector PDA phận tiêm mẫu tự động - Chất chuẩn dùng phân tích: Chuẩn gliclazid chuẩn nội glibenclamid Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương sản xuất 2.5 Phán tích thơng kê Đơn liều: Thơng số dược động học phân tích thống kê theo hướng dẫn Dược điển Trung Quốc (CP 2005) bao gồm c Tmax, Kel, AUC(Ọ?2 iòị, A U C ^ ỵ Sinh khả dụng (F) người tình nguyện tính theo AUC ị AUCR: F = AUCp/AUCp, X 100% Đa liều: Ịm ax’ c max’ Cm ị„tính trưc tiếp từ liệu n n g độ thuốc máu AUCSS tính theo phương pháp hình thang Cav DF tính theo cơng thức: Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Sô 2.2009; Tập 7.(24) Bảng 3: Kết nồng độ (i^Lg/ml) thuốc trung bình 20 N T N uống đa liều 10 12 16 24 Thuốc thủ 1,733 1,578 1,665 1,760 2,130 2,133 2,491 2,463 2,458 2,440 2,556 2,419 1,679 Thuốc chứng 1,426 1,708 2,229 3,098 4,031 3,907 3,800 3,678 3,517 2,994 2,651 2,150 1,568 Thời gian 3.3 Kết phân tích dược động học Thử nghiệm đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học ill vivo chế phẩm Gliclazid sản xuất nước so với Diamicron MR (Gliclazide 30mg) 20 người Việt Nam tình nguyện khoẻ mạnh có kết sau: Bảng 4: Các thông sô' dược động học trung bình Mơ hình thủ THUỐC TH Ử liều viên 60mg (TB ± S D ) DIAMICRON MR liêu viên 30mg (TB ± SD) 1,708 ± , ,4 ± ,6 15,6 ± , 7,8 ± 5,5 , ± 2 6 , ± ,3 2,910 ± 1,226 4,444 ± 1,903 10,3 ± ,1 5,2 ± 1,7 Cnun^g/mL) 1,669 ± 0,876 1,497 ± 0,768 c av (jig/mL) 2,179 ± 0,937 2,580 ± 1,045 67,2 ± 53,5 116,5 ±43,1 2,8 ± 2,2 4,9 ± 1,8 52,286 ± 22,480 61,920 ±25,088 Thông s ố clược động học c max (Hg/mL) Đon liều Tmax (giờ) AUC0 - (ịig.giờ/mL) c max Tmax (giờ) Đa liều (6 liều liên tục) DF (%) DF/ X (%/giờ) AUCSS (ng.giờ/mL) 3.4 So sánh đánh giá sinh khả dụng Bảng 5: Kết xác định sinh khả dụng tương đối đánh giá TĐSH nghiên cứu đơn liêu Thông số G iá trị - Đ n h g iá F 0.7 ( % ) ( T B ± S D ) 90,0% ± F oo( % ) ( T B ± S D ) 90,2% ± 25,4% 22,7% Khoảng tin cậy 90% LnCmax thử/chứng 60,72% - 78,98% nằm ngồi khoảng giói hạn 80%-125% Khoảng tin cậy 90% Ln AƯCq x thử/chứng 74,41% - 98,90% nằm khoảng giới hạn T max 80% -125% Khác có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99% Không đáp ứng yêu cầu Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Sơ 2.2009; Tập 7.(24) CP 2005 designed as single-dose and multiple-dose in 20 healthy volunteers under fasting conditions The results show that the test product is a controlled -release dosage form with delayed absorption after administration However, following to CRP 2005’s guidelines, the test product is not bioequivalent to the reference in terms ofA U C (extent o f absorption) and Cmax (rate o f absorption) The study has provided meaningful proofs fo r the pharmaceutical company to adjust the formulation and manufacturing process to obtain an expected product with better quality NGHIÊN CỨU ĐỈNH LƯỢNG pOXYCYCLIN HYDROCLORID TRONG HUYET TƯƠNG BANG PHƯƠNG PHÁP HPLC VŨ THÚY NGA Công ty CP Traphaco Đật vấn đề Doxycyclin hydroclorid (DOX) kháng sinh bán tổng hợp nhóm tetracyclin có hoạt phổ rộng, có tác dụng nhiều loại vi khuẩn ưa khí kỵ khí Gram(+), Gram(-) số vi sinh vật kháng thuốc Rickettsia, Coxiella Burnetii, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia sp [1] Doxycyclin hydroclorid hấp thu nhanh (2 sau uống liều 200mg DOX lần đầu tiên, nồng độ đỉnh đạt Cmax = 3|ig/ml huyết tương dùng liều lOOmg đạt Cmax ~ 2p.g/ml huyết tương) hấp thu gần trọn vẹn (95%) qua đường tiêu hóa, q trình hấp thu khơng bị ảnh hưởng tình trạng no đói [1, 3, 6], Thuốc có thời gian bán thải dài, T ’/2 ~ 14-17 dùng liều đơn T>/2 ~ 20-22 dùng đa liều [1], Nâng cao chất lượng thuốc sản xuất nước, đảm bảo chất lượng thuốc lưu hành thị trường nhiệm vụ quan trọng hàng đầu ngành Dược Việt Nam giai đoạn Khi yêu cầu “sinh khả dụng tương đương sinh học" Cục Quản lý thuốc thực phẩm Mỹ cơng bố khái niệm chất lượng thuốc khơng giói hạn phép thử In vitro, mà gắn với khái niệm sinh khả dụng (SKD) tương đương sinh học (TĐSH) [2] SKD biểu thị tốc độ mức độ hấp thu dược chất từ chế phẩm thuốc vào hệ tuần hoàn (đảm bảo chất lượng thực sản phẩm) Hai chế phẩm coi TĐSH đạt tương đương hóa lý, tương đương bào chế có SKD khác không đáng kể mức liều điều kiện thử nghiệm Để góp phần triển khai đánh giá SKD TĐSH cho chế phẩm thuốc Doxycyclin hydroclorid sản xuất nước sở nghiên cứu Y - Dược, chúng HÀ THỊ MINH CHÁU, ĐOÀN CAO SƠN Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tiến hành đề tài: “Nghiên cứu định lượng Doxycycỉin hydroclorid huyết tương phương pháp HPLC Thực nghiệm 2.1 Nguyên - vật liệu dùng nghiên cứu a) Chất chuẩn nội chuẩn (IS) Chất chuẩn: Doxycyclin Hyclat - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương; SKS: 0307035; Hàm lượng 90,29% (khan), độ ẩm ,0 % Nội chuẩn: Cloramphenicol- Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương; SKS: 039259; Hàm lượng 99,80% b) Dung mơi, hố chất Hóa chất: đạt tiêu chuẩn tirih khiết phân tích (PA) Acid Percloric 60% Acid Oxalic Dung môi: dùng chiết tách chạy sắc ký loại dùng cho HPLC Methanol (MeOH), Acetonitril (ACN) Huyết tương: huyết tương trắng người mua Viện Huyết học truyền máu Trung ương c) Dụng cụ, thiết bị Tất dụng cụ thiết bị chuẩn hóa theo ISO/IEC 17025-2005 GLP bao gồm: Thiết bị phân tích: Máy sắc ký lỏng hiệu nãng cao Merck-Hitachi D-7000 Thiết bị khác: Máy ly tâm, cân phân tích, micropipet loại, loại dụng cụ thuỷ tinh có độ xác thích hợp Tạp chí KIỂM NGHIỆM THUỐC - Sô 2.2009; Tập 7.(24) PHỤ LỤC Bảng kết nồng độ thuốc huyết tương NTN uống thuốc đơn liều đa liều \ r r r r Nông độ thuôc ỉmyêt tương NTN sau ng íhc thử - đơn liêu ~-^7Tiri7 gian (giờ) Nồng đô Gliclazid huyết tuong (ng/ mL) 10 12 16 24 36 48 60 72 0.000 0.000 0.000 0.000 0.472 0.634 0.942 1.115 1.390 1.654 1.310 0.810 0.394 0.000 0.000 0.000 0.000 0.213 0.487 1.023 0.935 1.404 1.639 1.799 1.992 1.264 0.894 0.564 0.386 0.229 0.000 0.000 0.000 0.159 0.446 0.615 1.218 1.475 1.479 1.724 1.377 0.967 0 0 6 0.000 0.000 5 0.516 0.876 1.260 1.755 1.771 1.111 0.702 0.456 0.316 0.000 0.000 0.136 0.473 0.701 0.916 1.792 1.646 2.442 1.889 1.488 0.743 0.469 0.280 0.227 0.000 0.000 0 0.166 0.133 0.261 0.313 0.361 0.772 1.308 0 0 0 0 NTN \ 0.000 0.000 4 7 0.861 1.097 1.7 10 2.102 2.734 1.692 0.543 0.474 10 0 0 0.000 0.263 0.3 2 0.694 0.888 1.254 1.531 1.810 8 0.507 0.344 0.312 11 0 0 0 0 0.000 0.3 0.808 1.198 416 77 1.440 1.493 9 0.355 12 0 0 0.181 4 0.638 1.071 46 1.315 0.9 0.528 0 0.000 13 0 0 0 0 4 0 0 0.770 1.293 1.852 1.795 1.367 0.787 0.431 0.315 0.212 14 0.000 0.000 0.000 0.316 0.637 0.581 0.769 1.017 1.438 1.329 1.082 0.757 0.372 0.290 0.159 15 0.000 0.000 0.191 0.405 0.591 0.782 0.633 0.553 0.444 0.396 0 0 0 0 0.000 0 0 0 0 16 0.000 0 0 2 0.445 0.610 0.6 4 0.987 17 0 0 0 0 0.238 4 0.653 3 1.0 22 1.031 1.043 1.071 0.762 0.132 0.000 18 0 0 0.000 0.220 9 0.781 1.160 1.420 1.785 1.347 7 0.3 19 0.000 0 0 0.182 7 9 1.368 1.511 1.401 1.296 1.101 6 9 0.202 0 0 20 0 0 0 0 0.2 41 4 0.525 0.909 2.358 1.3 65 1.404 8 0.176 0 0 21 0 0 0 0 2 0.514 0 7 9 1.152 1.205 1.330 1.016 0.504 0.244 22 0.000 0.317 0 0.673 0.768 1.044 1.715 1.621 1.285 1.1 63 0.564 2 0.000 0 0 TB 0.000 0.021 0.155 0.373 6 2 1.378 1.4 7 0.774 5 SD 0 0 0 0.091 0.187 3 0.526 0.355 2 0.152 \ r r r r > Nông độ thuôc huyêt tương NTN sau uông thuồc chứng - đơn liêu ~~—jr /itr i gia n (g iừ ) Nồng dc Gliclazid huyết tiroìig (ng/ niL) 10 12 16 24 36 48 60 72 0.000 0.000 0.351 1.150 2.611 2.966 2.991 2.969 1.843 1.345 0.735 0.580 0.305 0.180 0.000 0.000 0.918 2.158 4 2.488 2.266 2 2.951 1.276 1.022 0.641 3 0.000 0.000 1.320 3.111 2.990 3.166 2.752 2.133 1.520 6 0.222 0.000 0.000 0.000 0.559 1.486 2.849 3.210 3.479 3.070 2.710 2.149 0.684 0.366 0.338 0.323 0.000 0.000 0.000 0.699 3.134 2.530 3.033 2.571 2.210 1.868 1.527 0.4 3 7 0.000 0.000 0.200 1.623 2.248 1.630 1.472 1.661 1.462 1.211 1.230 0.981 0.345 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 1.164 1.538 1.737 1.831 1.997 2.084 1.824 2.007 2.478 1.809 1.225 0.844 0.684 10 0.000 0.179 1.3 69 2.148 2 2.125 2.099 1.762 1.355 6 0.454 0.215 11 0 0 0 0 1.408 9 1.971 1.934 1.8 34 1.598 1.321 1.328 1.0 98 0.679 0.278 12 0 0 1.451 1.992 1.962 1.783 1.674 1.749 1.310 0.9 0.514 0.241 0.189 0 0 0 0 13 0 0 1.697 2.812 2 2.668 2 1.722 1.4 90 7 7 0.379 0.215 14 0 0 0.9 1.357 1.200 1.052 1.428 0.912 1.4 67 1.051 1.175 0.990 4 15 0 0 0 0 1.229 1.661 1.720 1.855 1.658 1.463 1.506 1.123 7 0.390 0.173 0 0 NTN 16 0 0 1.283 1.544 1.271 1.245 1.093 9 0.950 0 0 0 0 17 0 0 0.9 1.796 2.234 2 5 1.609 1.347 9 0.386 0.166 0 0 0 0 18 0 0 0 0 1.755 2.075 1.9 70 1.905 1.8 68 1.836 1.577 1.638 1.548 1.668 1.083 0.787 19 0.000 1.465 2 2.417 2.177 1.966 1.691 1.372 5 2 0.211 0 0 20 0.000 0.071 0.931 1.062 1.122 1.249 1.228 1.162 1.045 1.387 8 3 0 0 21 0 0 1.495 1.994 1.796 1.606 1.531 1.008 6 0.165 0.000 0 0 22 0.000 0 0 0.389 0.993 3.577 2.789 2.143 1.668 1.096 0.302 0.000 0.000 0.000 TB 0.000 0.109 1.153 1.934 2.124 2.223 2.106 1.899 1.680 1.419 0.987 0.672 0.399 0.256 0.139 SD 0.000 0.129 0.417 0.614 0.621 0.769 0.622 0.632 0.552 0.534 0.462 4 3 2 0.244 r > r r r > Nông độ thuôc huyêt tương NTN sau uông thuôc thử - đa liêu ' ~ ^ n i gia n (g iờ ) Nồ n g dí Gliclazid huyết tương (|ig/ mL) -48 -24 10 12 16 24 1.929 1.847 1.686 1.830 2.084 2 3 3.1 31 0 2.828 3.169 2 0.787 1.486 1.786 1.912 1.710 2.097 6 2 ' 2 6 7 3.177 3.052 1.647 1.743 2.331 2.100 2.141 2.104 2.661 2.714 2.880 2.424 2.696 6 1.970 0.8 23 ,1 2.108 2.010 1.7 82 1.873 2.6 11 1 3.219 3.245 3.488 3.307 3.325 1.164 1.205 1.828 1.810 1.955 1.880 2.979 3.428 3.418 3.497 3.518 2.913 1.715 0.735 0.498 9 0.890 1.0 60 1.372 1.1 23 1.207 1.341 39 1.464 1.664 1.840 7 3.431 7 3.868 5.518 4.549 7.011 3.938 3.932 4.647 10 1.879 1.667 1.510 32 1.637 1.665 2 2.099 1.9 69 2.119 2.546 2.702 2.408 1.550 11 1.904 2.306 2.185 2.305 2.855 3.998 3.171 3.070 4.983 4.241 4.191 3.934 3.664 2.875 2.141 12 1.195 1.291 1.325 0.896 1.040 1.093 1.250 1.330 1.345 1.363 1.566 1.621 1 1.482 1.023 13 587 1.078 1.346 1.1 60 1.633 1.513 2.206 1.828 2.164 1.979 2.195 5 1.531 1.944 1.438 NTN 14 2.0 53 15 1.838 1.498 16 0.931 17 1.970 1.751 1.729 1.686 1.939 2.277 2.167 2.031 04 2.014 1.361 1.006 1.001 1.380 17 1.378 0.988 052 0.959 0.999 1.053 1.162 1.313 1.832 1.585 1.240 3.210 3.069 2.958 3.429 4 4.674 4.787 3 2.256 2.377 3.111 2.884 5 4 05 1.761 0.888 0.850 1.260 1.866 1.531 1.722 1.990 2.091 2.427 1.895 1.051 1.855 1.927 944 889 0.799 057 0 0.897 3 3.408 2.207 2.300 1.084 0.818 1.268 2.818 1.354 1.2 76 1.266 1.620 1.2 88 1.616 1.3 68 0.912 6 0.597 0 0 0.979 18 2.064 2.656 37 19 1.541 1.474 20 1.367 677 21 1.121 1.604 0.301 0.233 0.286 0.483 0.789 0.679 0.662 0.626 0.557 0.514 0.435 0.340 0.200 22 0.531 0.942 0.730 0.608 0.672 0.941 1.318 1.598 1.556 1.5 62 1.712 1.964 1.691 1.065 TB 1.511 1.620 1.733 1.578 1.665 1.760 2.130 2.133 2.491 2.463 2.458 2.440 2.5 56 2.419 1.679 SD 0.781 0.739 0.968 0.905 0.924 0.966 1.095 0.950 1.562 1.432 1.298 1.017 991 r > r r r > Nông độ thuôc huyêt tương NTN sau uông thuồc chúng - đa liêu "— JJu'ri giait(giờ) Nồ n g đ< Gliclazid huvct tuon í (Híỉ/ ml.) -48 - 24 1.151 1.047 1.378 1.265 2.029 3 2.893 3.060 2.326 2.262 2.030 1.917 1.821 1.871 1.397 2.003 1.661 1.689 2.057 7 7 4.059 3 3.234 2.777 2.6 4 69 980 1.692 1.355 1.269 1.277 1.626 6 4.286 3.624 3.093 3.299 2.682 2.615 1.852 1.190 1.713 1.894 1.521 1.491 2.453 3.498 5.450 4.610 4.482 4.101 4.175 4.080 3.522 2.767 2.038 1.896 1.329 1.195 1.577 2.234 2.588 5.308 4.821 4 4.3 9 2.170 2.234 1.382 NTN 10 12 16 24 0.679 0.708 0.557 0.876 1.537 2.052 2.320 2.192 2.141 1.921 1.828 1.621 1.410 1.190 1.017 2.735 3.000 2.861 4.751 5.342 5.390 6.350 8.081 6.604 6.193 6.152 4.622 3.558 4 2.649 10 1.733 77 1.462 1.761 8 2.908 2.848 2 3.207 2.959 2.8 98 78 2.178 1.865 11 2.892 2.483 2.517 2.579 3 3 3.430 3 3.6 6 3 2.971 2.355 12 55 0.732 0.586 0.730 1.500 1.012 2.028 2.038 1.899 1.529 1.937 1.878 1.516 13 2 1.161 1.810 2.054 9 6 0 2 91 97 14 1.143 1.060 1.021 1.523 1.515 5 2.393 3 2 2 64 1.304 15 1.319 1.060 1.280 1.949 2.700 2.459 2.397 2.192 02 1.933 1.806 0.895 0.756 16 1.9 99 2.174 1.871 1.768 1.786 2.859 5 4.593 4.571 72 79 3 3.248 4 17 0.990 0.592 0.634 0.906 1.639 2.921 2.492 1.9 66 1.904 2 1.920 1.583 160 0.728 18 2.915 3 3.633 2.711 7 7.6 6.944 8.934 7 4.852 3.030 19 0.637 1.010 1.2 70 1.476 2 2.838 3.914 4.188 4.023 4.247 3.792 2.927 2.235 96 1.1 19 20 0.869 0.819 1.494 1.747 3.715 41 4.247 3.836 3 2.619 2 1.703 0.929 21 0.876 1.214 1.302 1.461 3.404 6.646 6 4.590 3 1.483 0.814 22 0.722 0.833 0.761 0.716 0.787 1.709 4.205 2.498 4.119 4.819 3.967 3.095 2.597 1.434 0.810 TB 1.420 1.441 26 1.708 2.229 3.098 03 3.907 3.800 3.678 3.517 2.994 2.651 2.150 1.568 SI) 0.777 0.728 0.740 0.992 0.948 1.635 1.528 1.655 1.428 1.728 1.430 1.099 1.091 1.042 0.895 ... đương sinh học viên nén GUclaiỉd giải phóng chậm sản xuất Việt Nam theo mơ hình thử đơn liều đa liều Muc tiêu đề tài là: Xây dụng thẩm định phương pháp phân tích Gliclazid huyết tương người phương... Đánh giá tương đương sinh học cho chế phẩm gliclazid giải phóng chậm sản xuất nước so với Diamicron® MR 30 mg Phần 1: TỎNG QUAN 1.1 TỒNG QUAN ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 1.1.1... GIÁ SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 1.1.1 Khái niệm chung 1.1.2 Các phương pháp đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học 1.1.3 Quy trình thực đánh giá tương đương sinh học