Phân lập chất từ cao n-butanol của lá cây Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.), họ Cúc (Asteraceae)

T R ƯỜ N G ĐẠ I H Ọ C C Ầ N T H Ơ K H OA K H OA H Ọ C T Ự N H I Ê N BÁO CÁO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Phân lập chất từ cao n-butanol Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.), họ Cúc (Asteraceae) Cán hướng dẫn: PGs.Ts Tôn Nữ Liên Hương Sinh viên thực hiện: Huỳnh Văn Lợi NỘI DUNG BÁO CÁO Giới thiệu Thực nghiệm Kết thảo luận Kết luận kiến nghị 1.1 Giới thiệu Lá đắng  Tên khoa học: Vernonia amygdalina Del  Họ Cúc (Asteraceae)  Tên khác: Lá đắng, mật gấu nam,…  Phân bố: Hầu vùng nhiệt đới châu Phi, Nigeria, Zimbabwe,… Audu, S.A and et al, 2012 A study review of documented phytochemistry of Vernonia amygdalina (Family Asteraceae) as the basis for pharmacologic activity of plant extract Journal of Natural Sciences Research, 2(7): 1-8 Clement, E and et al, 2014 Significance of Bitter Leaf (Vernonia amagdalina) in Tropical Diseases and Beyond: A Review Malar Chemoth Cont, 3(1): 1-10 Giới thiệu 1.2 Tác dụng dược lý Y học dân gian  Trị sốt, sốt rét  Trị tiêu chảy, kiết lỵ  Trị viêm gan  Rối loạn tiêu hóa, giun sán,… Giới thiệu Hoạt tính sinh học  Kháng nấm, khuẩn  Hạ đường huyết  Ức chế dòng tế bào ung thư: BT-549, MCF-7,… 1.3 Thành phần hóa học Steroid glycoside Vernodalin Vernolide Apigenin 7-O-β-glucoside Giới thiệu Syringaresinol-O-β-glucoside 2.1 Điều chế cao thô Bột 14,5 Kg Nguyên liệu Ngâm dầm với methanol Cao tổng 2,0 Kg Chiết lỏng-lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần Cao Hex 350 g Cao DC 16 g Thực nghiệm Cao Ea 36 g Cao n-butanol 125 g Cao Me/H2O 2.2 Phân lập hợp chất từ n-butanol Cao n-butanol 125 g Sắc ký cột với dianion HP-20 VB1 VB2 VB3 VB4 VB5 Sắc ký cột với RP-C18 Sắc ký cột với RP-C18 VB2.1 VB2.2 VB3.1 … VB3.2 VB2.5 … VB3.5 Sắc kýSắc cộtkývới cộtRP-C18 pha thường VB2.2.1 V3.1.1 VB2.2.2… VA.Bu03 Thực nghiệm VB2.2.3 VB3.1.7VB2.2.4… VB2.2.5 VB3.1.12 VA.Bu04 VA.Bu07 2.3 Hoạt tính kháng viêm in vitro Albumin Test solution Đệm Phosphate Test cotrol OD 255 nm Thực nghiệm Dịch cao chiết Product control Standard solution Ủ 37 oC, 20 phút Ủ 57 oC, phút Thêm đệm Làm lạnh 3.1 Hợp chất VA.Bu03 - Dạng gum, không màu - Khối lượng: 15 mg - Tan tốt EtOAc MeOH - Rf 0,43 hệ dung môi DC:Me (9:1) Ea:Me (95:5) Kết thảo luận DC:Me (9:1) C:Me (85:15) CTPT: C5H9NO2 [M] = 112 amu [M-OCH3]+ m/z 84,0 Kết thảo luận [M+Na]+ m/z 138,8 10 C-2 C-4’ C-3’ C-1’ C-5’ C-2’ C-6’ H-6’ H-2’ H-5’ Kết thảo luận 25 Bảng liệu phổ VA.Bu04 luteolin Vị trí CH VA.Bu04 (MeOD) δH ppm (J, Hz) Luteolin [55] (DMSO_d6) δC ppm 166,0 6,56, s 103,9 183,9 163,2 6,23 (d, 2,5) 100,1 166,4 6,46 (d, 2,0) 95,0 159,4 10 105,3 1′ 123,7 2′ 7,39, br xác s VA.Bu04 định là114,2 Luteolin 3′ 147,1 (IUPAC: 2-(3,4-dihydroxyphenyl) 4′ 151,0 5,7-dihydroxy-4-chromenone) 5′ 6,92 (dd, 7,0, 2,0) 116,8 6′ 7,40 (dd, 7,5, 2,5) Kết thảo luận 120,3 δH ppm (J, Hz) δC ppm 6,67, s 6,18 (d, 2,0) 6,37 (d, 2,0) 7,39 (d, 1,7) 6,88 (d, 8,5) 163,9 102,9 181,6 161,4 98,8 164,1 93,8 157,3 103,7 121,5 113,4 145,7 149,7 116,0 7,40 (dd, 8,5, 1,7) 119,0 26 C-2’ C-6’ C-3’ C-5’ C-3–OCHC-6 C-8 H-6’ H-2’ H-5’ H-4’ –OCH H-33 H-8 H-6 Kết thảo luận 27 C-4 C-7 C-4’ C-2 C-5 C-9 C-2’ C-1’ C-3’ C-10 C-3 C-6 C-8 C-6’ C-5’ H-3’ H-5’ H-3 H-8 H-6 Kết thảo luận 28 C-7 –OCH3 Kết thảo luận 29 Bảng liệu phổ VA.Bu07 genkwanin Vị trí C/H VA.Bu07 (DMSO_d6) δH ppm (J, Hz) δC ppm Genkwanin [56] (DMSO_d6) δH ppm (J, Hz) 164,1 6,85 (s) 103,0 6,63 (s) 181,9 161,2 6,38 (d, 2,0) 97,3 6,21 (d, 2,0) 165,1 6,77 (d, 2,0) 92,7 6,46 (d, 2,0) 157,2 10 104,6 VA.Bu07 xác định Genkwanin 1′ 121,0 (IUPAC: 5-hydroxyl-2-(4-hydroxyl 2′,6′ 7,96 (d, 9,0) 128,5 7,94 (d, 9,0) 3′,5′ 6,93 (d, 9,0) 116,0 7,08 (d, 9,0) phenyl)-7-methoxy-4H-chromen-4-one) 4′ 161,3 -OCH3 3,87 (s) 56,0 3,88 (s) Kết thảo luận δC ppm 164,1 103,0 181,9 161,2 97,9 165,1 92,7 157,2 104,7 121,1 128,5 116,0 161,3 56,6 30 3.4 Hoạt tính kháng viêm in vitro 60 50 40 30 20 y = 0,0498x + 19,965 R² = 0,9888 10 60 120 50 100 40 30 y = 0,0349x + 19,484 R² = 0,9873 20 10 0 500 1000 1500 Nồng độ cao tổng (μg/mL) Phần trăm ức chế (%) 70 Phần trăm ức chế (%) Phần trăm ức chế (%) 80 80 60 40 y = 0,0808x + 46,805 R² = 0,9818 20 0 500 1000 1500 Nồng độ cao n-butanol (μg/mL) 500 1000 Nồng độ cao dichlofenac (μg/mL) Biểu đồ thể khả kháng viêm cao tổng, cao n-butanol dichlofenac Kết thảo luận 31 3.4 Hoạt tính kháng viêm in vitro 874,38 Giá trị IC50 (μg/mL) 1000 800 603,11 600 400 200 39,54 Dichlofenac Cao tổng Cao n-butanol Biểu đồ thể khả ức chế biến tính albumin nhiệt Kết thảo luận 32 4.1 Kết luận Pterolactam Luteolin Kết luận kiến nghị Genkwanin 33 4.2 Kiến nghị Tiếp tục khảo sát khảo sát thêm hoạt tính sinh học cao hợp chất vừa cô lập Kết luận kiến nghị 34 Chân thành cảm ơn Thầy/cô bạn lắng nghe! T R ƯỜ N G ĐẠ I H Ọ C C Ầ N T H Ơ K H OA K H OA H Ọ C T Ự N H I Ê N BÁO CÁO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Phân lập chất từ cao n-butanol Lá đắng (Vernonia amygdalina Del.), họ Cúc (Asteraceae) Cán hướng dẫn: PGs.Ts Tôn Nữ Liên Hương Sinh viên thực hiện: Huỳnh Văn Lợi B A ... thảo luận Kết luận kiến nghị 1.1 Giới thiệu Lá đắng  Tên khoa học: Vernonia amygdalina Del  Họ Cúc (Asteraceae)  Tên khác: Lá đắng, mật gấu nam,…  Phân bố: Hầu vùng nhiệt đới châu Phi, Nigeria,... Điều chế cao thô Bột 14,5 Kg Nguyên liệu Ngâm dầm với methanol Cao tổng 2,0 Kg Chiết lỏng-lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần Cao Hex 350 g Cao DC 16 g Thực nghiệm Cao Ea 36 g Cao n-butanol. .. Cao Hex 350 g Cao DC 16 g Thực nghiệm Cao Ea 36 g Cao n-butanol 125 g Cao Me/H2O 2.2 Phân lập hợp chất từ n-butanol Cao n-butanol 125 g Sắc ký cột với dianion HP-20 VB1 VB2 VB3 VB4 VB5 Sắc ký