Ứng dụng phương pháp bố trí thí nghiệm tối ưu để đánh giá ảnh hưởng của một số yếu tố đến sự suy giảm hàm lượng của chế phẩm 3 vitamin b1, b6, b12

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÊ ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ KIM DUNG ÚNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP B ố TRÍ THÍ NGHIỆM TỐI u ĐỂ ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT s ố YẾU TỐ ĐẾN S ự SUY GIẢM HÀM LƯỢNG CỦA CHế PHẨM VITAMIN: B„ B6 VÀ B12 Chuyên ngành: Kiểm nghiệm dược độc chất Mã số: 3.02.05 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS PTS TRẦN TỬ AN Hà Nội 1999 MỤC LỤC Lời cảm ơn Mở đầu Phần 1: 1.11.1.11.1.1.11.1.1.21.1.1.31.1.21.1.2.1 1.1.2.21.1.1.31.1.3.1 1.1.3.21.1.3.3 1.1.41.21.2.11.2.21.31.3.11.3.21.3.31.3.3.1 1.3.3.2Phần 2: 2.12.12.32.3.12.3.2Phần 3: 3.13.1.13.1.23.1.33.2- trang Tổng quan Phương pháp chung đánh giá độ ổn định chế phẩm Nội dung nghiên cứu độ ổn định thuốc Định nghĩa Mục tiêu việc nghiên cứu độ ổn định thuốc Các tiêu đánh giá độ ổn định thuốc Các yếu tố áp dụng nghiên cứu độ ổn định thuốc Yếu tố ngoại lai Yếu tố nội Các phương pháp nghiên cứu độ ổn định thuốc Phương pháp nghiên cứu lão hoá cấp tốc Phương pháp nghiên cứu lão hoá điều kiện thường Đánh giá hai phương pháp Độ ổn đinh chế phẩm 3B Phương pháp bố trí thí nghiệm tối ưu Phương pháp bố trí thí nghiệm tối ưu 2k Phương pháp bố trí thí nghiệm tối ưu 2k tâm trực giao Phương pháp xác đinh vitamin B1? B6 B l2 chế phẩm viên Phương pháp tách riêng Các phương pháp quang phổ Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Nguyên tắc định lượng Các chương trừih HPLC áp dụng để đinh tínhvà định lượng vitamin Nội dung, đối tượng phương pháp nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Xử lý tốn thống kê số liệu thí nghiệm theo mơ hình 2k tâm trực giao Kết nghiên cún bàn luận Chọn lấy mẫu bảo quản mẫu iọ n lấy mẫu Hàm lượng ban đầu mẫu Bảo quản mẫu Tiến hành thí nghiệm 4 4 6 7 10 11 12 12 14 16 18 18 18 18 18 21 24 24 24 24 24 25 30 30 30 30 30 3] 3.2.13.2.23.2.33.2.43.2.5- Máy móc dụng cụ Điều kiện thí nghiệm độ ổn định Điều kiện tiến hành đinh lượng HPLC Chất chuẩn Đánh giá độ lặp lai độ phương pháp điều kiện thực nghiệm 3.3- Kết đinh lượng 3.4- Xử lý bàn luận kết thí nghiệm 3.4.1- Xử lý kết thí nghiệm 3.4.2- Bàn luận kết thí nghiệm 3.4.2.1- Độ ổn định vitamin Bj B6 3.4.2.2- Độ ổn đinh vitamin B12 3.5- Dự báo tuổi thọ thuốc Phần 4: Kết luận ý kiến để xuất 4.1- Kết luận 4.1.1- Về phương pháp bố trí thí nghiệm 4.1.2- Về độ ổn đinh chế phẩm 3B 4.2- Ý kiến đề xuất Tài liệu tham khảo Phụ lục 11 31 32 33 33 34 37 41 41 49 49 49 51 54 54 54 55 55 57 60 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực mơn Phân tích dược, phòng Vật lý đo lường - Viện kiểm nghiệm Trung tâm kiểm nghiệm dược phẩm - Sở Y tế Hà Nội hướng dẫn PGS PTS Trần Tử An Trong q trình thực luận văn này, chúng tơi nhận đóng góp q báu PTS Trịnh Văn Lẩu, PGS PTS Phạm Quang Tùng, PGS PTS Bùi Kim Liên, DS CKĨĨ Đào Hùng Phi, DS Nguyễn Thi Thuận nghiệp phòng Vật lý đo lường, thày giáo chun ngành kiểm nghiêm, phòng Đào tạo sau đại học - trường Đại học Dược Hà Nội; đồng thòi chúng tơi nhận giúp đỡ tạo điều kiện Lãnh đạo Trung tâm KNDP Hà Nội bạn bè đồng nghiệp Nhân dịp này, chúng tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đối vói giúp đỡ q báu thày cô, nghiệp đon vị kể - - MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, thị trường thuốc nước ta lưu hành nhiều loại thuốc có thành phần hỗn họp dược chất, nhiều vitamin Các chế phẩm nhiều xí nghiệp dược nước sản xuất cơng ty nước ngồi nhập vào nước ta nhiều tên biệt dược khác Độ ổn đinh chế phẩm nghiên cứu, ghi nhân hồ sơ đăng ký thuốc, kiểm tra lại cách chặt chẽ Việc nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng chất làm tăng độ ổn định dược phẩm chưa đầu tư nhiều Thời gian gần đây, việc theo dõi thay đổi hàm lượng vitamin chế phẩm 3B số sở sản xuất nghiên cứu quan tâm, đặc biệt có ghi nhận suy giảm hàm lượng vitamin B12 Trong luận văn này, thông qua nghiên cứu khảo sát suy giảm hàm lượng vitamin viên 3B, muốn thử nghiệm mơ hình bố trí thí nghiệm tối ưu hoá thống kê k cho việc đánh giá ảnh hưởng số yếu tố đến độ ổn đinh chế phẩm thuốc Để nghiên cứu vấn đề trên, lựa chọn đề tài "Úng dụng phương pháp bố trí thí nghiệm tối ưu để đánh giá ảnh hưởng số yếu tố đến suy giảm hàm lượng chế phẩm vitamin B„ B6 B12" Mục tiêu đề tài là: - Sử dụng mơ hình bố trí thí nghiệm k tâm trực giao để đánh giá ảnh hưởng yếu tố riêng lẻ tương tác chúng đến suy giảm hàm lượng hoạt chất chế phẩm, - Úng dụng mơ hình bố trí thí nghiệm k tâm trực giao để đánh giá ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ, độ ẩm thời gian đến độ ổn định chế phẩm vitamin Bj, B6 B12 Luận văn cơng trình khoa học bước đầu nghiên cứu việc ứng dụng mơ hình bố trí thí nghiệm việc đánh giá ảnh hưởng yếu tố (điều kiện bảo quản) đến độ ổn định chế phẩm Chúng cố gắng để kết nghiên cứu đạt chất lượng PHẦN ls TỔNG QUAN 1.1- PHƯƠNG PHÁP CHUNG ĐÁNH GIÁ ĐỘ Ổn ĐỊNH CHÊ PHAM 1.1.1- NỘI DUNG NGHIÊN c ú u ĐỘ Ổn ĐỊNH CỦA THUÔC 1.1.1.1- Định nghĩa Độ ổn đinh thuốc khả thuốc (nguyên liệu hay thành phẩm bào chế), bảo quản đồ bao gói chuyên dụng, giữ nguyên đặc tính vốn có vật lý, hố học, vi sinh, đặc tính trị liệu độc tính giói hạn qui định [2], [4], Mọi thành phần có hay khơng có đặc tính trị liệu dạng thuốc phân liều ảnh hưửng đến độ ổn đinh chế phẩm Các yếu tố bên nhiệt độ, xạ, độ ẩm, tạp chất không khí (đặc biệt cacbon dioxyd hoi nước) có ảnh hưởng đến độ ổn đinh Yếu tố người có ảnh hưởng đinh đến đến độ ổn đinh thuốc (trong cách bảo quản ) [24], [25] 1.1.1.2- Mục tiêu việc nghiên cứu độ ổn định thuốc Nghiên cứu độ ổn định thuốc nhằm mục tiêu sau [4]: - Lưa chọn công thức bào chế hơp lý, thống bao bì hồn chỉnh, - Xác đinh tuổi thọ điều kiện bảo quản hợp lý, - Chứng minh tuổi thọ đề xuất, - Thẩm đinh thay đổi cơng thức q trình sản xuất có yếu tố ảnh hưởng bất lọi đến độ ổn đinh chế phẩm để có biện pháp khắc phục -4- 1.1.1.3- Các tiêu đánh giá độ ổn định thuốc Độ ổn định thuốc đánh giá thông qua chi tiêu, thông số sau [4], [8 ], [20], [21], [24], [25], [26]: - Hình dạng nên ngồi: + Thay đổi màu, + Thay đổi hình dạng, - Vật lý học: + Màu sắc, + Mùi vị, + Trạng thái, + Độ đồng nhất, + Độ hồ tan, - Hố học: + Định tính: Sự thay đổi thành phần, + Đinh lượng: Sự biến đổi hàm lượng hoạt chất, + Sản phẩm phân huỷ, + Tạp chất liên quan, + Thay đổi pH, - Sinh học: + Hoạt lực, + Độ nhiễm khuẩn, + Nấm mốc, + Chất gây sốt, - Đặc tính trị liệu: + Tác dụng điều trị mong muốn bị giảm hay còn, - Độc tính : + Độc tính tăng lên hay lúc đầu, - Các đặc điểm khác: + Oi khét, -5- 1.1.2- CÁC YẾU TỐ ĐƯỢC ÁP DỤNG NGHIÊN c ứ u ĐỘ Ổn ĐỊNH CỦA THUỐC Điều kiện nghiên cứu độ ổn định thuốc xác định vùng khí hậu dự kiến sản phẩm thuốc phân phối sử dụng Người ta chia khí hậu giới để nghiên cứu độ ổn định thuốc thành khu vục theo hướng dẫn WHO Việt Nam nên áp dụng vùng khí hậu IV (vùng khí hậu nóng ẩm) có nhiệt độ bảo quản tối đa < 60 °c, độ ẩm tối đa < 75 %RH Khí hậu Việt Nam khí hậu nhiệt đới gió mùa với tổng xạ mặt trời cao vào khoảng 125-135 kcal/cnr, mùa hè nóng độ ẩm cao nhũngyếu tố bất lợi đến việc bảo quản, lưu thông phân phối thuốc, ảnh hưởngđến độ ổn đinh thuốc [4], [8 ], [26] Có thể phân yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn đinh thuốc thành hai nhóm: Yếu tố ngoại lai yếu tố nội 1.1.2.1- Yếu tô ngoại lai Nhiệt độ Nhiệt độ thường thúc đẩy nhanh trình phân huỷ thuốc Đối với loại thuốc, cần xác định nhiệt độ thực nghiệm tối đa thích họp để tránh làm thay đổi trạng thái thuốc gây phản ứng mà khơng xảy điều kiện thường Ví dụ: - Nguyên liệu < 60 °c, - Viên nang, viên nén, dung dịch tiêm truyền < 60 °c, - Thuốc đạn, thuốc phun sương < 30 °c, - Các thuốc khác < 40 °c Ánh sáng Một số hoạt chất bị phân huỷ tác dụng ánh sáng thường, đa số chất bị ảnh hưởng tia cực tím xạ mặt trời Độ ẩm Độ ẩm cao thúc đẩy nhanh phân huỷ phản ứng thuỷ phân làm thay đổi tính chất lý học thuốc Đồ bao gói Chất lượng nguyên liệu bị ảnh hưởng độ kiềm thuỷ tinh, đồ bao gói kim loại, nút cao su 1.1.2.2- Yếu tô nội - Sản phẩm phân huỷ tạp chất có nguyên liệu, - Nước kết tữih: Trong trình kết tinh, dược chất dạng khan hay hydrat hố Trong trình sản xuất bảo quản tác động số yếu tố nhiệt độ, dung môi hay áp suất, phần nước kết tinh bị làm giảm tính bền vững dược chất suy yếu mạng lưói tinh thể 1.1.3- CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚtJ ĐỘ Ổn ĐỊNH CỦA THUÔC 1.1.3.1- Phương pháp nghiên cứu lão hoá cấp tốc Nguyên tắc Phương pháp nghiên cứu lão hoá cấp tốc [2], [4], [21], [24]: nghiên cứu bố trí để làm tăng tốc độ phân huỷ hoá học thay đổi lý học thuốc điều kiện bảo quản khắc nghiệt với mục đích theo dõi nhũng phản úng phân huỷ xảy ra, từ dự kiến tuổi thọ thuốc điều kiện bảo quản bình thường Nguyên tắc phương pháp đòi hỏi yếu tố gây lão hố phải nằm giới hạn khơng làm thay đổi chế phản ứng phân huỷ không làm biến đổi trạng thái tập họp, Gấu trúc lý hoá nguyên liệu thuốc thành phẩm bào chế -7- yêu cầu 06 ngày Bảng 3.18 hình 3.2 trình bày suy giảm hàm lượng vitamin B12 viên 3B điều kiện theo thời gian đến ngày Bảng 3.18: Suy giảm hàm lượng vitamin Bp viên 3B theo thòi gian TT 20 °c & 70 %RH 35 °c & 80 %RH Thòi gian, ngày Hàm lượng B12 Thời gian, ngày Hàm lượng B 12 10 97,507 97,348 20 94,897 95,925 30 93,066 94,510 40 92,015 93,103 50 91,745 91,704 6 90,312 7 88,928 - 52- Hình 3.1: Hàm lượng vitamin B12 điều kiện 20 °c 70 %RH theo thời gian Hình 3.2: Hàm lượng vitamin Bp điều kiện 35 °c 80 %RH theo thời gian - 53 - PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ Ý KIẾN ĐỂ XUÂT 4.1- KẾT LUẬN Trên sở nghiên cứu độ ổn định chế phẩm 3B Việt Nam sản xuất đưa số kết luận sau: 4.1.1- VỂ PHƯƠNG PHÁP BƠ TRÍ THÍ NGHIỆM Trong đề tài này, sử dụng phương pháp bố trí thí nghiệm 2k tâm trực giao để đánh giá ảnh hưởng yếu tố thời gian, nhiệt độ độ ẩm khơng khí chế phẩm vitamin Bj, B6 B12 Đây phương pháp bố trí thí nghiệm đa yếu tố có sở toán thống kê chặt chẽ, tổ chức thực xử lý tính tốn đơn giản đánh giá tương đối xác đầy đủ ảnh hưởng yếu tố Trong số mô hình thí nghiệm đa yếu tố, 1TLƠ hình thích họp để nghiên cứu độ ổn định chế phẩm 3B So vớ i mơ hình k đầy đủ khiến kiểm nghiệm viên phải làm nx k thí nghiệm mà cho hồi qui bậc 1, mơ hình k tâm trực giao u cầu kiểm nghiệm viên làm số thí nghiệm nhỏ (2 k+ k+n) mà cho hồi qui bậc Bố trí thí nghiệm đa yếu tố cho biết vai trò ảnh hường yếu tố riêng lẻ ảnh hưởng tương tác yếu tố đến suy giảm hàm lượng hoạt chất chế phẩm Như dùng phương pháp bố trí thí nghiệm k cho phép ta tiếp cận tốt đến tuổi thọ thực thuốc, đánh giá tổng hợp ảnh hưởng yếu tố Trước tuổi thọ thuốc thường xác định thơng qua lão hố cấp tốc ngoại suy cho điều kiện thường 20 °c 70 %RH Vì thời gian có hạn nên chúng tơi chưa nghiên cứu để dự báo tuổi thọ thuốc - 54 - 1TLỞ rộng dải thông số 4.1.2- VỂ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA CHẾ PHAM 3B Trong điều kiện bảo quản thuốc Việt Nam chế phẩm 3B theo nghiên cứu chúng tơi khơng thể có tuổi thọ sở sản xuất đăng ký Trong ba vitamin Bị, B6 Bp hàm lượng vitamin B, B6 suy giảm không đáng kể theo thời gian, nhiệt độ độ ẩm khơng khí Hàm lượng vitamin Bp ngược lại suy giảm đáng kể: Sự suy giảm chịu tác động mạnh nhiệt độ thời gian ảnh hưởng tổng họp chúng, độ ẩm tác động nhiều Dựa vào suy giảm hàm lượng vitamin Bp dự báo tuổi thọ thuốc Trong phạm vi đề tài này, nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố thời gian, nhiệt độ độ ẩm khơng khí đến độ ổn định chế phẩm, tức yếu tố bảo quản lưu thơng phân phối thuốc Để nghiên cứu sâu độ ổn đinh thuốc, theo chúng tơi cần có nghiên cứu phương pháp bào chế 4.2- Ý KIẾN ĐỂ XUẤT - Có thể sử dụng mơ hình bố trí thí nghiệm 2k tâm trực giao để đánh giá tuổi thọ thực tế thuốc điều kiện bảo quản cụ thể thông qua phương trình hồi qui thu từ việc bố trí thí nghiệm không gian yếu tố đủ lớn, mà trước hết thời gian Có thể phải theo dõi bố trí thí nghiệm khoảng tháng điều kiện lão hố cấp tốc có hệ số hồi qui tữi cậy nhằm ngoại suy suy giảm hàm lượng hoạt chất, từ dự báo xác hon tuổi thọ chế phẩm - Nên nghiên cứu sử dụng mơ hình để đánh giá suy giảm hàm lượng hoạt chất chế phẩm ảnh hưởng tá dược kỹ - 55 - thuật bào chế Một mẫu chế phẩm 3B hãng Roche với hạn dùng 9/2000 kiểm tra hàm lượng B 12 thấy đến 82,4% chúng tỏ nhà sản xuất có bí kỹ thuật bào chế Trong đó, số chế phẩm 3B sản xuất nước có độ ổn đinh thấp, ví dụ: Viên vitamin 3B XNLH Dược phẩm Hậu Giang XN Dược phẩm Trà Vinh có thơng báo rút số đăng ký, ngồi có số chế phẩm 3B sỏ' sản xuất khác nước bị thu hồi Để dùng mơ hình 2k cho đánh giá tuổi thọ thuốc, nên có so sánh kết suy giảm hàm lượng tính theo phương trình hổi qui mơ hình suy giảm thực tế q trình bảo quản thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Bảo quản thuốc dụng cụ y tế Nhà xuất Y học, 1982, tr 5-10 Phạm Ngọc Bùng Độ Ổn định thuốc cách xác định Tài liệu giảng dạy sau đại học Trường Đại học Dược Hà Nội, 1975, tr 5-13 Đặng Văn Giáp Phân tích liệu khoa học chương trình MSEXCEL Nhà xuất Giáo dục, 1997, tr 35-89 Trịnh Văn Lẩu Phương pháp nghiên cứu độ Ổn định thuốc Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế, 1997, tr 5-17 Phạm Luận Giáo trình sở lý thuyết sắc kỷ lỏng hiệu cao Trường Đại học Tổng họp Hà Nội, 1989, tr 36-64 Lê Đức Ngọc Xử lý số liệu k ế hoạch hoá thực nghiệm Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Khoa Hoá học, Hà Nội 8/1997, tr 48-52 Thái Phan Quỳnh Như Đinh tính, định lượng vitamin Bị, B-,, B5, Bó, Bp, c , p p thuốc hỗn họp vitamin phương pháp sắc kỷ lỏng hiệu cao Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế Nguyễn Thi Kim Thanh Nghiên cứu độ Ổn định nguyên liệu kháng sinh Ampicilin, Rifampicin Ciprofloxacin ảnh hưởng nhiệt độ độ ẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Luận án Thạc sĩ Dược học Hà Nội, 1998, tr 19-20 Tiêu chuẩn sở viên bao phim vitamin vitamin Bj, Bố Bp 52TCZ1-14/96 Xí nghiệp Dược phẩm Trung ương I 10 Tiêu chuẩn sở viên bao phim vitamin vitamin B ị , B6 Br Công ty Dược Vật tư Y tế cửu Long - 57 - 11 Tiêu chuẩn sở viên bao phim vitamin vitamin Bj, Bó B12 Xí nghiệp Liên hiệp Dược phẩm Hậu Giang 12 Tiêu chuẩn sở viên bao phim vitamin vitamin Bj, B6 Bp Công ty Dược Vật tư Y tế Trà Vinh 13 Analysis o f oil and water soluble vitamins in multivitamin preparation National Control Bureau - Ministry of Health - Malaysia December 1820, 1995, p 14 Bruce Sunderland Stability o f pharmaceuticals March 1998 15 Common Physical Techniques in Purification, p 45, table 10 16 Douglas c Montgomery Design and Analysis o f Experiments 3rd Edition John Willey & Sons, 1991, p 197-249, p 270-310, p 479-563, p 600-606 17 D A Doombos Reviwe article “Optimisation in pharmaceutical sciences ” Pharmaceutisch Weekblad April 24, 1981, Vol No 2, p 33-61 18 Guidelines fo r stability testing o f pharmaceutical products Food and Drug Administration Ministry of Public Health Thailand, 1992 19 Herbert A Liberman, Leo Lachman Pharmaceutical dosage forms, tablets Marcel Dekker Inc., New York and Basel Volume 3, p 344-346, 354 20 ICH Harmonised tripartite guideline Stability testing o f new drugs, substances and products October 7, 1993, p 2-7 - 58 - 21 Jens T Carstensen Drug stability principles and practices Marcel Dekker Inc., New York, Basel, Hongkong 2nd Edition Revised and Expanded, p 4, p 558 22 Kenneth E Avis Pharmaceutical dosage forms Parenteral Medication Marcel Dekker Inc., New York and Basel.Volume 2, p 68-70 23 Leo Lachman, Herbert A Liberman, Joseph L Kanig The theory and practice o f industrial pharmacy, 1986, p 786-795 24 The United States P h a rm a co p o eiaVol 21-1985 25 The United States Pharmacopoe LO' Vol 22-1985 26 The United States Pharm acopoeia Vol 23-1985 27 WHO Collaborating Center for Chemical Reference Substances ICPS 1979 11.23/SO, LA MH - 59 - PHỤ LỤC Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục Sắc ký Sắc ký Sắc ký Sắc ký Sắc ký Sắc ký đồ đồ đồ đồ đồ đồ của của của - 60 - Phụ lục 1: sắc ký đồ Bj B6 viên 3B *:;r• a: I IJ Ck cc.: O' Ỡ Cũ: H» ;x LU K' cu a :: K •• »:.-j a :i c o c o I.XI IX' o U“ ! co ' •Si' " " lo ’X ' r o o LL IX H»•rs •X h c: Cu.‘ C5> * •!!i! i' y ã: LU Ch: a: HM h~ C: r~ •X Ít: 1— h- tti ’.£• C-.I U i LO C I 1.0 Ct:* cc: *•£' r LO -* ôM \C' ft; r K* l.r:* ị •X o •X UJ ũ S - 61 - Phụ lục 2: sắc ký đồ Bp viên 3B 3B_XNDFTW l_06 069 9_khao sat on dinh Injection Date Sample Name Acq Operator Method Last changed 18/08/1999 10:19:02 AM thu Vial c :\HPCHEM\l\METHODS\B12_USP.M 18/08/1999 10:17:17 AM (modified after loading) Phuong phap dinh luong vitamin B12 theo duoc dien My DAD1 A, Sig=550,4 Ref=650,5( mAU CO i J , ■ D I , 2.5 , , , Area Percent Report Sorted ByMultiplier Dilution : : : Signal 1: DAD1 A, Peak RetTime # [min] 1 631 Totals : Type _ BB Signal 1.0000 1.0000 s i g = 5 ,4 R e f =65 ,5 Width [min] Area [mAU*s] Height [mAU] 1 0.1897 Area o o 1 1 94.36719 45470 100.0000 94.36719 7.45470 Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report *** - 62 - Phụ lục 3: sắc ký đồ B, B6 viên 3B xác định độ lặp lại er* ỡ- •X LI Q: •:r ơ' O'­ NN :r (V HH LU IX r li.' CJ n* LO ô:r h~ cc zz K ' '•£ c : C*-J r - * M I L ôv ct O CD LU •X Ù:: hh•X \C ' * 1.1" IX ' c\ •• " U"| CO Nh I IJ CO r co r 'X (S> C-4 K' •X O :x f~~ LU :e : *1- IX •X •X CJ' Oi CM Ch -i-H h - CO r Ilk 1—1 C£| " Ki HM H— Cù o •X LO K ' V V r*íỊ*i :.T in IX 1 " •X’ I**:" f ' u