3.2.1. Thẩm định quy trình định lượng viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.1.1. Độ tuyến tính Pha dung dịch A có nồng độ 400 μgml: cân chính xác 40 mg fenofibrat chuẩn cho vào bình định mức 100 ml. Thêm 70 ml dung dịch methanol, siêu âm hòa tan. Điền thêm thể tích đến vạch bằng dung dịch SLS 0,05M. Từ dung dịch A, pha loãng thành các dụng dịch có nồng độ lần lượt là 2, 4, 10, 16, 20 và 24 μgml. Đo độ hấp thu của 6 mẫu bằng quang phổ UVVis ở bước sóng 291 nm. Dùng mẫu trắng là dung dịch SLS 0,05M. Phương trình hồi quy tuyến tính được xác định bằng phương pháp bình phương cực tiểu 2. 3.2.1.2. Độ chính xác Cân 20 viên thuốc bất kì, tính khối lượng trung bình của một viên. Nghiền trộn kĩ lượng viên trên trong cối sứ đến khi thu được một hỗn hợp đồng nhất. Chuẩn bị đồng thời 6 mẫu thử, mỗi mẫu được tiến hành như sau 2: Cân chính xác khoảng một lượng bột thuốc tương ứng với 80 mg fenofibrat cho vào bình định mức 100 ml. Thêm vào 70 ml Methanol. Siêu âm trong 15 phút. Điền thêm thể tích đến vạch bằng dung dịch SLS 0,05 M. Lọc dung dịch thu được qua giấy lọc (bỏ 10 ml dịch lọc đầu). Lấy 10 ml dung dịch lọc cho vào bình định mức 100 ml. Thêm dung dịch SLS 0,05 M đến vạch, được dung dịch A. Lấy 10 ml dung dịch A pha loãng vừa đủ 100 ml bằng dung dịch SLS 0,05 M, được dung dịch B. Các mẫu thử (dung dịch B) được đo độ hấp thu UVVis ở buớc sóng 291 nm. Dựa trên kết quả thu được, xác định độ lệch chuẩn tương đối RSD. Phương pháp được gọi là đạt độ chính xác nếu RSD ≤ 2%. 3.2.1.3. Độ đúng 9 mẫu thử (được chuẩn bị như các dung dịch B trong phần thẩm định độ chính xác) được đo quang phổ hấp thu UVVis ở bước sóng 291 nm. Ghi nhận kết quả đo quang. Lấy 9 bình định mức 100 ml, cho chính xác 10 ml dung dịch ở mỗi mẫu (được chuẩn bị như các dung dịch A trong thẩm định độ chính xác) vào mỗi bình. Pha 3 dung dịch chuẩn fenofibrat với 3 nồng độ 64 μgml (80%), 80 μgml (100%), 96 μgml (120%). Lấy 10 ml mỗi dung dịch chuẩn fenofibrat cho vào 3 bình định mức 100 ml đã chuẩn bị ở trên (mỗi mức hàm lượng 3 bình định mức). Điền thể tích đến vạch bằng dung dịch SLS 0,05 M thu được các giai mẫu có nồng độ fenofibrat 14,4 μgml, 16 μgml, 17,6 μgml. Các mẫu thử được phân tích bằng phương pháp đo hấp thu UVVis. Dựa trên kết quả thu được, tính tỉ lệ phục hồi. Phương pháp được gọi là đạt độ đúng nếu tỉ lệ phục hồi nằm trong khoảng 100 2% 2. 3.2.1.4. Khảo sát ảnh hưởng của tá dược lên kết quả định lượng Để đảm bảo kết quả định lượng hàm lượng hoạt chất là chính xác, tránh sự nhiễu của các thành phần khác có trong công thức. Chuẩn bị 5 mẫu: Mẫu 1: Mẫu chuẩn (chứa 160 mg fenofibrat chuẩn). Mẫu 2: Mẫu tá dược 1 (chứa lượng tá dược tương ứng với 1 viên (tá dược độn là PC)). Mẫu 3: Mẫu tá dược 2 (chứa lượng tá dược tương ứng với 1 viên (tá dược độn là SMCC)). Mẫu 4: Mẫu thử 1 (chứa lượng tá dược như mẫu 2 và 160 mg fenofibrat chuẩn). Mẫu 5: Mẫu thử 2 (chứa lượng tá dược như mẫu 3 và 160 mg fenofibrat chuẩn). Pha loãng 5 mẫu như nhau đến khi nồng độ fenofibrat trong mẫu 1, 4, 5 tương ứng là 16 μgml. Quét phổ của 5 mẫu. Tá dược được xem là không ảnh hưởng đến kết quả định lượng khi không có đỉnh hấp thu của tá dược ở bước sóng 291 nm.
iii LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học thực Khoa Dược- Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh thời gian từ 04/ 2010 đến 07/ 2010 hướng dẫn Cơ TS Võ Thụy Cẩm Vy Xin kính gửi đến Cơ TS Võ Thụy Cẩm Vy lòng biết ơn sâu sắc quan tâm, tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, giúp cho khóa luận thực hồn thành tốt đẹp Xin trân trọng cám ơn Cô TS Trịnh Thị Thu Loan dành nhiều thời gian quý báu để đọc, nhận xét góp ý, giúp cho khóa luận hồn chỉnh Xin gửi lời cám ơn chân thành đến Thầy Cô, Anh Chị Bộ môn Bào Chế, Bộ môn Công Nghiệp Dược, Bộ môn Kiểm Nghiệm, Bộ môn Dược Liệu Ban chủ nhiệm Khoa Dược tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành khóa luận Cám ơn quan tâm, động viên, nhiệt tình giúp đỡ bạn lớp D2005, anh chị D2004 bạn nghiệm chế viên D2006, D2007 suốt trình học tập thời gian thực khóa luận Nguyễn Thu Hiền DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VLDL LDL HDL Very low density lipoprotein (lipoprotein tỉ trọng thấp) Low density lipoprotein (lipoprotein tỉ trọng thấp) High density lipoprotein (lipoprotein tỉ trọng cao) iv LDL-R TG PVP SLS CD β- CD HPMC SMCC PC Low density lipoprotein receptor Triglycerid Polyvinylpyrrolidone Natri lauryl sulfat Cyclodextrin Beta cyclodextrin Hydroxypropylmethylcellulose Siliced microcrystalline cellulose (cellulose vi tinh thể có silic) Powdered cellulose (cellulose bột) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Bảng 2.2 Bảng 2.3 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 4.1 Điều trị tăng cholesterol chế độ ăn Phân loại cao lipid huyết theo Fredrickson/ WHO Tính chất β-CD Danh sách ngun liệu, hóa chất, dung mơi Danh sách thiết bị bào chế kiểm nghiệm Danh sách phần mềm chuyên dụng Thành phần công thức viên nén fenofibrat 160mg Kết thẩm định độ tuyến tính quy trình định lượng 14 19 19 20 23 Bảng 4.2 fenofibrat 30 Kết thẩm định độ xác quy trình định lượng fenofibrat viên nghiên cứu Bảng 4.3 Kết thẩm định độ quy trình định lượng fenofibrat viên nghiên cứu Bảng 4.4 Kết độ hòa tan viên Lipanthyl Supra Bảng 4.5 Kết độ hòa tan viên Lipicard 160 mg Bảng 4.6 Kết độ hòa tan công thức cốm Bảng 4.7 Kết khảo sát độ cứng 36 Bảng 4.8 Thành phần công thức viên nén fenofibrat 160mg 37 Bảng 4.9 Mơ hình thực nghiệm viên fenofibrat 160mg 38 Bảng 4.10 Kết khảo sát độ hòa tan viên fenofibrat 160mg thử 38 nghiệm Bảng 4.11 Kết luyện 39 Bảng 4.12 Kết tối ưu 40 v Bảng 4.13 Thành phần công thức viên nén fenofibrat 160 mg kiểm 40 chứng Bảng 4.14 Kết kiểm nghiệm bán thành phẩm lô kiểm chứng 41 Bảng 4.15 Kết kiểm soát đồng hàm lượng hoạt chất khối 41 hạt Bảng 4.16 Định lượng lô kiểm chứng 41 Bảng 4.17 Kết kiểm nghiệm độ hòa tan lơ 41 Bảng 4.18 Kết kiểm nghiệm độ hòa tan lơ 42 Bảng 4.19 Bảng so sánh độ hòa tan thực nghiệm dự đoán 42 Bảng 4.20 Kết kiểm nghiệm độ đồng khối lượng viên 43 Bảng 4.21 Kết kiểm nghiệm độ cứng viên 43 Bảng 4.22 Kết kiểm nghiệm độ mài mòn viên 43 Bảng 4.23 So sánh độ hòa tan viên Lipanthyl Supra cơng thức tối ưu 44 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 4.1 Cấu trúc phân tử fenofibrat Cấu trúc hình học (a) cấu trúc lập thể (b) cyclodextrin 13 Sự hình thành phức bao 15 Đồ thị biểu diễn tương quan nồng độ dung dịch Hình 4.2 Hình 4.3 Hình 4.4 Hình 4.5 Hình 4.6 fenofibrat độ hấp thu Đồ thị biểu diễn độ hấp thu mẫu Đồ thị biểu diễn độ hấp thu mẫu Đồ thị biểu diễn độ hấp thu mẫu Đồ thị biểu diễn độ hấp thu mẫu Đồ thị biểu diễn độ hấp thu mẫu Hình 4.7 Đồ thị biểu diễn tốc độ phóng thích fenofibrat Lipanthyl Hình 4.8 Lipicard 34 Đồ thị biểu diễn tốc độ phóng thích hoạt chất công thức Sơ đồ 3.1 Sơ đồ 3.2 tối ưu Lipanthyl Supra 44 Sơ đồ điều chế viên nén fenofibrat 160 mg 24 Sơ đồ thiết kế tối ưu hóa cơng thức viên nén fenofibrat 30 32 32 33 33 33 vi 160mg 28 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ Các nguyên vật liệu, thiết bị phần mềm điều chế viên nén fenofibrat 160mg trình bày Bảng 3.1., Bảng 3.2., Bảng 3.3 Bảng 3.1 Danh sách nguyên liệu, hóa chất, dung mơi Tên hóa chất Tiêu chuẩn Fenofibrat Số lơ : CML20091007H β-cyclodextrin BP 2003 USP Methanol Phân tích Nước cất Natri lauryl sulfat DĐVN III USP Natri croscarmellose USP Hypromellose 15cps Polyvinylpyrrolidon Cellulose vi tinh thể có silic Cellulose bột USP USP USP USP Natri stearyl fumarat Talc Nguồn gốc Trung Quốc Pháp Trung Quốc Hạn dùng 10/11/2012 04/2012 Việt Nam Trung Quốc Đức 02/2012 USP Đức Trung Quốc Mỹ Đức Đức 02/2012 12/2010 11/2010 02/2012 01/2012 USP Trung Quốc 11/2011 Bảng 3.2 Danh sách thiết bị bào chế kiểm nghiệm Tên thiết bị Mã số Nguồn gốc Máy thử độ hòa tan Erweka DT Đức Cân phân tích Précisa XB 220A Đức Máy quang phổ UV/Vis Shimadzu 2550 Nhật Máy thử độ cứng Erweka Đức Máy thử độ mài mòn Erweka Đức vii Cân điện tử Sartorius TE 142 Đức Máy xát hạt Erweka KU1 Đức Máy sửa hạt Erweka AR 402 Đức Máy đo độ ẩm hồng ngoại Kern Đức Máy dập viên xoay tròn CJB- 3B- 27 Ấn Độ Bảng 3.3 Danh sách phần mềm chuyên dụng Tên phần mềm Công dụng Nguồn cung cấp Design-Expert 8.02 Trial BCPharsoft OPT Thiết kế mơ hình Tối ưu hóa cơng thức Intelligensys Ltd, UK Khoa Dược, ĐHYD Tp HCM 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.2.1 Thẩm định quy trình định lượng viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.1.1 Độ tuyến tính Pha dung dịch A có nồng độ 400 μg/ml: cân xác 40 mg fenofibrat chuẩn cho vào bình định mức 100 ml Thêm 70 ml dung dịch methanol, siêu âm hòa tan Điền thêm thể tích đến vạch dung dịch SLS 0,05M Từ dung dịch A, pha lỗng thành dụng dịch có nồng độ 2, 4, 10, 16, 20 24 μg/ml Đo độ hấp thu mẫu quang phổ UV/Vis bước sóng 291 nm Dùng mẫu trắng dung dịch SLS 0,05M Phương trình hồi quy tuyến tính xác định phương pháp bình phương cực tiểu [2] 3.2.1.2 Độ xác Cân 20 viên thuốc bất kì, tính khối lượng trung bình viên Nghiền trộn kĩ lượng viên cối sứ đến thu hỗn hợp đồng Chuẩn bị đồng thời mẫu thử, mẫu tiến hành sau [2]: Cân xác khoảng lượng bột thuốc tương ứng với 80 mg fenofibrat cho vào bình định mức 100 ml Thêm vào 70 ml Methanol Siêu âm 15 phút Điền thêm thể tích đến vạch dung dịch SLS 0,05 M Lọc dung dịch thu qua giấy lọc (bỏ 10 ml dịch lọc đầu) Lấy 10 ml dung dịch lọc cho vào bình định mức viii 100 ml Thêm dung dịch SLS 0,05 M đến vạch, dung dịch A Lấy 10 ml dung dịch A pha loãng vừa đủ 100 ml dung dịch SLS 0,05 M, dung dịch B Các mẫu thử (dung dịch B) đo độ hấp thu UV/Vis buớc sóng 291 nm Dựa kết thu được, xác định độ lệch chuẩn tương đối RSD Phương pháp gọi đạt độ xác RSD ≤ 2% 3.2.1.3 Độ mẫu thử (được chuẩn bị dung dịch B phần thẩm định độ xác) đo quang phổ hấp thu UV/Vis bước sóng 291 nm Ghi nhận kết đo quang Lấy bình định mức 100 ml, cho xác 10 ml dung dịch mẫu (được chuẩn bị dung dịch A thẩm định độ xác) vào bình Pha dung dịch chuẩn fenofibrat với nồng độ 64 μg/ml (80%), 80 μg/ml (100%), 96 μg/ml (120%) Lấy 10 ml dung dịch chuẩn fenofibrat cho vào bình định mức 100 ml chuẩn bị (mỗi mức hàm lượng bình định mức) Điền thể tích đến vạch dung dịch SLS 0,05 M thu giai mẫu có nồng độ fenofibrat 14,4 μg/ml, 16 μg/ml, 17,6 μg/ml Các mẫu thử phân tích phương pháp đo hấp thu UV/Vis Dựa kết thu được, tính tỉ lệ phục hồi Phương pháp gọi đạt độ tỉ lệ phục hồi nằm khoảng 100 ± 2% [2] 3.2.1.4 Khảo sát ảnh hưởng tá dược lên kết định lượng Để đảm bảo kết định lượng hàm lượng hoạt chất xác, tránh nhiễu thành phần khác có công thức Chuẩn bị mẫu: - Mẫu 1: Mẫu chuẩn (chứa 160 mg fenofibrat chuẩn) - Mẫu 2: Mẫu tá dược (chứa lượng tá dược tương ứng với viên (tá dược độn PC)) - Mẫu 3: Mẫu tá dược (chứa lượng tá dược tương ứng với viên (tá dược độn SMCC)) - Mẫu 4: Mẫu thử (chứa lượng tá dược mẫu 160 mg fenofibrat chuẩn) ix - Mẫu 5: Mẫu thử (chứa lượng tá dược mẫu 160 mg fenofibrat chuẩn) Pha loãng mẫu đến nồng độ fenofibrat mẫu 1, 4, tương ứng 16 μg/ml Quét phổ mẫu Tá dược xem không ảnh hưởng đến kết định lượng khơng có đỉnh hấp thu tá dược bước sóng 291 nm 3.2.2 Khảo sát độ hòa tan in vitro viên đối chiếu: Độ hòa tan viên nén Lipanthyl Supra 160 mg (số lô: 93487, hạn dùng: 31/10/2010) viên nén Lipicard 160 mg (số lô: 18007206, hạn dùng: 19/01/2011) đánh giá điều kiện sau [28]: - Thiết bị: máy thử độ hòa tan kiểu cánh khuấy - Môi trường: dung dịch Natri lauryl sulfat 0,05 M - Tốc độ cánh khuấy: 50 vòng/ phút - Thể tích mơi trường thử: 1000 ml - Nhiệt độ: 37 ± 0,5 0C Quy trình Cân khối lượng viên, cho vào môi trường nhiệt độ quy định 10 ml mẫu rút sau thời điểm 10, 20, 30 45 phút Bổ sung lại dung dịch SLS 0,05 M sau lần rút mẫu Pha lỗng thích hợp dung dịch SLS 0,05 M đo độ hấp thu bước sóng 291 nm Phần trăm fenofibrat hòa tan vào mơi trường thời điểm tính theo đường chuẩn xây dựng Cơng thức tính độ hòa tan fenofibrat thời điểm: n Dj (%) = (1000 Cj +10 Ci )×100% ( i= j – 1) a i =1 ∑ Trong : - Dj: độ hòa tan fenofibrat (%) thời điểm lấy mẫu phút thứ j - a: lượng fenofibrat cho vào (mg) - Cj: nồng độ fenofibrat (mg/ml) thời điểm j - Ci: nồng độ fenofibrat (mg/ml) thời điểm i x 3.2.3 Thăm dò cơng thức viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.3.1 Lựa chọn tá dược Với mục đích điều chế viên nén có khả kiểm sốt tốc độ phóng thích hoạt chất, việc lựa chọn tá dược dính tá dược rã quan trọng HPMC PVP hai tá dược dính hay sử dụng hệ thống phóng thích biến đổi nên chọn để khảo sát Điều chế công thức cốm gồm fenofibrat, β-CD, natri croscarmellose 3%, sử dụng PVP HPMC làm tá dược dính với tỉ lệ 1%, 3%, 5% So sánh độ hòa tan cơng thức để lựa chọn tá dược dính thích hợp 3.2.3.2 Thăm dò độ cứng viên nén fenofibrat 160 mg Độ cứng yếu tố quan trọng, ảnh hưởng lớn đến thời gian rã, độ hòa tan viên Dập viên với độ cứng khác để chọn độ cứng phù hợp với viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.4 Quy trình điều chế viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.4.1 Thành phần công thức Thành phần công thức viên nén feofibrat 160 mg trình bày Bảng 3.4 Bảng 3.4 Thành phần công thức viên nén fenofibrat 160mg Thành phần viên ( 730 mg) Fenofibrat β- CD 160 mg 252 mg Natri croscarmellose HPMC 7,3-36,5 mg 7,3-36,5 mg Talc 14,6 mg Natri stearyl fumarat 9,5 mg Tá dược độn Vđ Trong cơng thức thiết kế có: - Thành phần cố định: fenofibrat, β- CD, talc, natri stearyl fumarat xi - Thành phần thay đổi tỉ lệ : natri croscarmellose, HPMC - Thành phần thay đổi loại tá dược: tá dược độn ( SMCC, PC) 3.2.4.2 Quy trình điều chế Các giai đoạn điều chế viên nén fenofibrat 160mg tóm tắt theo Sơ đồ 3.1 Fenofibrat, β-CD, natri croscarmellose trộn 15 phút Hỗn hợp nguyên liệu ban đầu + tá dược dính, xát hạt qua rây 2mm, sửa hạt qua rây 1mm Cốm trộn tá dược độn phút Hỗn hợp hạt trộn với natri stearyl fumarat, talc phút Hỗn hợp hạt dập viên dập viên Viên nén fenofibrat Sơ đồ 3.1 Sơ đồ điều chế viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.5 Kiểm nghiệm viên nén fenofibrat 160 mg 3.2.5.1 Kiểm nghiệm bán thành phẩm Độ ẩm Hỗn hợp hạt đo ẩm máy đo độ ẩm hồng ngoại Hạt trước dập viên phải có độ ẩm ≤ 5% xii Tốc độ chảy Cân 50 g hạt, cho chảy qua phễu tiêu chuẩn hóa, tốc độ chảy hạt khối lượng hạt thuốc chảy qua phễu giây Chỉ số nén Cân lượng hạt, đổ nhẹ nhàng vào ống đong dung tích 100cm Xác định thể tích chiếm chỗ hạt trước sau chịu qui trình gõ chuẩn hóa Tính số nén hạt Hạt có đặc tính chảy tốt giá trị số nén 0,05) Bảng 4.19 Bảng so sánh độ hòa tan thực nghiệm dự đốn Thời điểm ( phút) 10 20 30 45 Lô 42,03 74,10 88,03 97,72 Lô 41,32 70,26 84,02 96,25 Độ hòa tan (%) Giá trị dự đốn 37,14 73,74 83,02 99,50 Vậy phần mềm BCPharsoft OPT dự đốn xác thành phần cơng thức tính chất sản phẩm công thức tối ưu 4.5 KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM VIÊN NÉN FENOFIBRAT 160 mg CỦA CÔNG THỨC TỐI ƯU 4.5.1 Hình thức Viên dạng caplet, dài 17mm, màu trắng, mặt viên nhẵn, bóng, cạnh thành viên lành lặn 4.5.2 Độ đồng khối lượng Khối lượng trung bình m = 734,16 mg Chênh lệch khối lượng cho phép ± 5% 20 viên thử nằm trong khoảng 697,45 mg đến 770,87 mg (± 5% so với khối lượng trung bình) Đạt Bảng 4.20 Kết kiểm nghiệm độ đồng khối lượng viên xxx Viên 10 Khối lượng (mg) 734,4 734,7 737 740 734,3 731,5 722,4 740,4 731,3 738,8 Viên 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Khối lượng (mg) 727,0 736,8 732,4 734,6 735,5 728,6 743,7 732,9 735,6 731,2 4.5.3 Độ cứng 20 viên có độ cứng khoảng 60 – 80 N Đạt Bảng 4.21 Kết kiểm nghiệm độ cứng viên Viên 10 Độ cứng (N) 66 69 72 70 77 76 69 75 70 78 Viên 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Độ cứng (N) 77 69 71 71 65 78 75 70 73 69 4.5.4 Độ mài mòn Bảng 4.22 Kết kiểm nghiệm độ mài mòn viên Độ mài mòn Lần Lần Lần Trung bình 0,42% 0,37% 0,45% 0,413% Độ mài mòn trung bình viên thành phẩm 0,413 %