Xác định một số corticoid trộn trái phép trong chế phẩm đông dược bằng HPTLC

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ ĐỨC MƯỜ LÊ ĐỨC MƯỜI XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CORTICOID TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2018 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ ĐỨC MƯỜI Mã sinh viên : 1301279 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CORTICOID TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh NCS.Ths Đào Thị Cẩm Minh Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích & Độc chất Viện Cơng nghệ dược phẩm quốc gia HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, nhận giúp đỡ tận tình thầy giáo, anh chị kỹ thuật viên, ủng hộ gia đình bạn bè Tơi xin chân thành bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh NCS Ths Đào Thị Cẩm Minh, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực hồn thành khóa luận Đặc biệt, cho phép tơi gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS TS Phạm Thị Thanh Hà động viên, nhiệt tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực Tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên mơn Hóa phân tích - Độc chất nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian làm thực nghiệm môn Tôi xin cảm ơn Ban lãnh đạo anh chị cán Viện công nghệ dược phẩm quốc gia tạo điều kiện hỗ trợ thiết bị trình thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn thầy Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo đại học tồn thể thầy môn trường Đại học Dược Hà Nội tận tình dạy dỗ giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập trường Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp đỡ hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2018 Lê Đức Mười MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thuốc tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Tại Việt Nam 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.2.1 Tác dụng 1.2.2 Tác dụng không mong muốn 1.2.3 Chỉ định 1.2.4 Cấu trúc, tính chất vật lý 1.3 Một số nghiên cứu phát corticoid trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.3.1 Trên giới 1.3.2 Tại Việt Nam 10 1.4 Tổng quan phương pháp nghiên cứu 11 1.4.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 11 1.4.2 Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC) 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị đối tượng nghiên cứu 17 17 2.1.1 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 17 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 17 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Thu thập mẫu 18 2.2.2 Xử lý mẫu 19 2.2.3 Khảo sát điều kiện sắc ký 19 2.2.4 Thẩm định phương pháp phân tích xây dựng 20 2.2.5 Ứng dụng phân tích mẫu thu thập 20 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 20 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 21 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích 21 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 21 3.1.2 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 23 3.2 Thẩm định phương pháp 28 3.2.1 Độ chọn lọc 28 3.2.2 Độ thích hợp hệ thống 29 3.2.3 Khoảng tuyến tính 29 3.2.4 Độ độ xác 30 3.2.5 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng 32 3.3 Ứng dụng phương pháp HPTLC để phân tích mẫu thực 33 3.4 Bàn luận 38 3.4.1 Về lựa chọn phương pháp 38 3.4.2 Về lựa chọn điều kiện sắc ký 39 3.4.3 Về xử lý mẫu 39 3.4.4 Về thẩm định phương pháp 40 3.4.5 Về ứng dụng phương pháp 41 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt AR BETA AOAC CHCl3 DEXA EtOAc EtOH H HPLC HPTLC Tiếng anh tên khoa học Association of Official Analytical Chemists Analytical Reagent Tiếng việt Hiệp hội nhà hóa phân tích thống Thuốc thử phân tích Betamethason Cloroform Dexamethason acetat Ethyl acetat Ethanol Hiệu suất High Performance Liquid Chromatography High Performance Thin Layer Chromatography HYRO Health Sciences Authority (Singapore) International Conference on ICH Harmonisation LC-MS/MS Liquid chromatography – mass spectrometry/mass spectrometry LOD Limit of Detection LOQ Limit of Quantitation MeOH Methanol Non-Steroidal Anti-Inflammatory NSAID Drug PREL PREN QT RSD Relative Standard Deviation S/N Signal/noise SD Standard Deviation TLC Thin Layer Chromatography TPCN Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lớp mỏng hiệu cao Hydrocortison acetat HAS Hội nghị hòa hợp Quốc tế Sắc ký lỏng hai lần khối phổ Giới hạn phát Giới hạn định lượng Thuốc giảm đau chống viêm không steroid Prednisolon Prenison Quy trình Độ lệch chuẩn tương đối Tín hiệu/nhiễu Độ lệch chuẩn Sắc ký lớp mỏng Thực phẩm chức DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Cấu trúc, tính chất vật lý thuốc corticoid Bảng 1.2 Các nghiên cứu xác định số corticoid chế phẩm đông dược Bảng 1.3 So sánh vài thông số HPTLC TLC 13 Bảng 2.1 Các nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 17 Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi rửa loại tạp (n=2) 24 Bảng 3.2 Kết khảo sát dung môi chiết (n=2) 26 Bảng 3.3 Kết đánh giá độ thích hợp hệ thống (n=6) 29 Bảng 3.4 Kết đánh giá khoảng tuyến tính nồng độ diện tích pic 30 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ đúng, độ xác ngày khác ngày (n=6) 31 Bảng 3.6 Kết LOD LOQ chất phân tích 33 Bảng 3.7 Kết đánh giá mẫu dương tính 38 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Sơ đồ chế chống viêm glucocorticoid Hình 1.2 Quy trình phân tích thiết bị HPTLC 15 Hình 3.1 Kết khảo sát thành phần dung môi pha động 21 Hình 3.2 Kết khảo sát tỷ lệ hệ dung môi 22 Hình 3.3 Phổ hấp thụ UV chất phân tích 23 Hình 3.4 Kết khảo sát dung môi rửa loại tạp 24 Hình 3.5 Kết khảo sát dung môi chiết viên nén 27 Hình 3.6 Sơ đồ xử lý mẫu phân tích 27 Hình 3.7 Sắc ký đồ đánh giá độ chọn lọc phương pháp HPTLC 28 Hình 3.8 Sắc ký đồ analog đánh giá độ chọn lọc phương pháp viên nén 28 Hình 3.9 Sắc ký đồ analog xác định LOD viên nén 33 Hình 3.10 Sắc ký đồ phân tích chế phẩm đơng dược thị trường 35 Hình 3.11 Kết so sánh phổ mẫu nghi ngờ dương tính với phổ chuẩn dexamethason acetat 36 Hình 3.12 Kết so sánh phổ mẫu nghi ngờ dương tính với phổ chuẩn betamethason 37 Hình 3.13 Kết so sánh phổ mẫu nghi ngờ dương tính với phổ chuẩn prednison 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Sử dụng thuốc thực phẩm chức (TPCN) có nguồn gốc từ đông dược thay cho chế phẩm có nguồn gốc tổng hợp hóa dược xu phổ biến Việt Nam giới Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) có đến 80% người dân nước phát triển sử dụng thường xuyên thuốc cổ truyền chăm sóc sức khỏe Dân số sử dụng thuốc đơng dược để điều trị ban đầu chiếm 90% dân số Ethiopia, chiếm 75% dân số Mali, chiếm 70% Myannar, chiếm 70% Rawanda, chiếm 60% Tanzania chiếm 60% Uganda Ở Châu Âu, doanh thu đem lại từ sản phẩm thuốc có nguồn gốc thảo dược lên đến 3,7 tỷ Euro năm [28] Chế phẩm đơng dược có nguồn gốc từ thực vật, động vật khoáng vật Chúng thường quảng cáo "tự nhiên" với người tiêu dùng, nhiều người ưa chuộng, tin dùng an tồn, tác dụng phụ so với chế phẩm dược thông thường Mặc dù chế phẩm đông dược sử dụng từ lâu, người có kiến thức đầy đủ an toàn hiệu chúng Ngồi ra, chúng khơng quản lý tốt có sẵn cửa hàng thực phẩm sức khỏe, siêu thị mạng internet Do nhiều sở sản xuất chế phẩm có nguồn gốc tự nhiên pha trộn trái phép chất tổng hợp nhằm đánh lừa người sử dụng hiệu nhanh chóng chúng [28] Nhiều nghiên cứu khác báo cáo trường hợp chế phẩm đơng dược có trộn lẫn khơng khai báo thuốc hóa dược khác [34] Điển hình nhóm hoạt chất thường trộn trái phép thuốc giảm glucose máu, thuốc chống viêm glucocorticoid, thuốc giảm đau thuốc chống viêm không steroid, thuốc hạ huyết áp, thuốc giảm béo, thuốc ức chế phosphodiesterase – [28], [36] Trong đó, chiếm tỷ lệ cao nhóm thuốc giảm đau chống viêm báo cáo chủ yếu từ nghiên cứu Trung Quốc, Singapore, Pakistan, Nam Phi Ấn Độ [37] Bên cạnh tác dụng nhanh chóng nhóm thuốc mang lại chúng mang lại nhiều tác hại nguy hiểm cho người dùng Sử dụng corticoid thời gian dài gây hội chứng cushing, loét dày tá tràng, tình trạng loãng xương, suy giảm chức tuyến thượng thận, [10], [26] Việc phát corticoid chế phẩm đơng dược gặp nhiều khó khăn hàm lượng thấp chất cần phân tích, phức tạp mẫu thử Hiện Việt Nam giới có số nghiên cứu phát thuốc corticoid trộn trái phép vào chế phẩm đông dược phương pháp TLC [10], [32]; HPLC [9], [6], [35]; LC – MS [27]; LC – MS/TOF [37] Phương pháp HPTLC với ưu điểm phân tích đồng thời nhiều mẫu, độ đặc hiệu cao chi phí lại thấp; phương pháp cần thiết để phân tích nhanh, đồng thời nhiều mẫu để xác định có mặt corticoid trộn trái phép chế phẩm đông dược [28], [38] Tại Việt Nam, tác giả Lê Đào Khánh Long xác định corticoid: betamethason, dexamethason, hydrocortison, prednison prednisolone trộn trái phép chế phẩm đông dược TLC Tuy nhiên, việc phát corticoid bước sóng 254 nm hay thuốc thử hóa học dẫn đến trường hợp dương tính giả; quy trình chiết chất có nhiều giai đoạn, tốn thời gian dung môi [10] Từ thực tế trên, nhằm phát triển phương pháp phân tích xác định đồng thời nhiều tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược với độ tin cậy cao, chi phí thấp, góp phần vào cơng tác kiểm tra phát xác định tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược, tiến hành đề tài: “Xác định số corticoid trộn trái phép chế phẩm đông dược HPTLC” Với mục tiêu: Xây dựng phương pháp xác định đồng thời betamethason, dexamethason acetat, hydrocortison acetat, prednisolon prednison trộn lẫn chế phẩm đông dược phương pháp HPTLC Ứng dụng phương pháp HPTLC để xác định betamethason, dexamethason acetat, hydrocortison acetat, prednisolon prednison (nếu có) trộn lẫn chế phẩm đông dược lưu hành thị trường BNN051 Thuốc đặc trị Số lơ: Khơng có lần/ngày chữa bệnh SĐK: Khơng có gói/lần (Bột) Nhà SX: Thuốc đông y gia truyền VNH070 Viên khớp Bách Số lô: 0125 lần/ngày xà SĐK: 22966/2013/ATTP-XNCB 2-3 viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Công ty TNHH Nam Dược 10 11 VNH072 VNH086 Viên khớp Tâm Số lô: 02112016 lần/ngày Bình SĐK: 8957/2014/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Dược phẩm Tâm Bình Xương khớp PV Số lô: 010214/100214 (Viên nang) SĐK: 13315/2013/ATTP-XNCB viên/lần lần/ngày Nhà SX: Công ty CP Dược thảo Phúc Vinh 12 VNH087 Viên khớp Tâm Số lơ: 08042016 lần/ngày Bình SĐK: 8957/2014/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Công ty TNHH SX & TM Dược phẩm Tâm Bình 13 BNH091 Viêm thấp khớp Số lơ: Khơng có lần/ngày (Bột) SĐK: Khơng có gói/lần Nhà SX: Thuốc gia truyền Đông y Đỗ Thái Nam 14 HCH092 Viêm thấp khớp Số lơ: Khơng có lần/ngày (Hồn cứng) SĐK: Khơng có gói/lần Nhà SX: Thuốc gia truyền Đơng y Đỗ Thái Nam 15 VGH095 Cagu Số lô: 0216 3-4 lần/ngày (Viên ngậm) SĐK: VD-24476-16 viên/lần Nhà SX: Công ty CP Công nghệ cao Traphaco 16 HCH096 Gout NQT Số lơ: Khơng có lần/ngày (Hồn cứng) SĐK: Khơng có 15 viên/lần Nhà SX: Nhà thuốc Y học cổ truyền Ngơ Q Thích 17 VEH098 Xương khớp Số lơ: 201216 lần/ngày Nhất Nhất SĐK: V277-H12-13 viên/lần (Viên nén) Nhà SX: Công ty TNHH Dược phẩm Dược phẩm Nhất Nhất 18 BNC101 Trị viêm khớp Số lô: Không có lần/ngày (Bột) SĐK: Khơng có gói/lần Nhà SX: Thuốc gia truyền 19 VEH104 Topmin Flex Số lô: 1016 1-2 lần/ngày (Viên nén) SĐK: 6959/2015/ATTP-XNCB viên/lần Nhà SX: Công ty CP Dược phẩm Unitechpharm Việt Nam 20 VEH106 Dưỡng khớp Số lô: 1102016 lần/ngày (Viên nén) SĐK: 2479/2015/ATTP-XNCB 3-4 viên/liền Nhà SX: Công ty TNHH Dược phẩm Tradiphar 21 VNN112 Gai cột sống Số lô: Z2017-01 2-3 lần/ngày (Viên nang) SĐK: 5367/2014/ATTP-XNCB viên/lần Nhà SX: Công ty CP dược phẩm Tâm Anh Minh 22 HCN114 Tê thấp phong Số lơ: 050517 2-3 lần/ngày hồn SĐK: VND-3215-05 12-15 (Hồn cứng) Nhà SX: Đơng nam dược Trung viên/lần An 23 HCH119 Tỷ viêm hồn Số lơ: 021216 lần/ngày (Hoàn cứng) SĐK: V1109-H12-10 25 viên/lần Nhà SX: Cơ sở Đặng Nguyên Đường 24 VNH120 Tỷ Tiên Phương Số lô: 020816 lần/ngày (Viên nang) SĐK: 7782/2016/ATTP-XNCB viên/lần Nhà SX: Công ty TNHH Đông dược Thiên Hưng 25 VNN125 Xương khớp Số lô: 02-040416 2-3 lần/ngày Bách Hợp SĐK: 20276/2015/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Công ty TNHH Dược phẩm thương mại thành công 26 27 VNN128 VEN129 Tisore- Khu Số lô: 061116 lần/ngày phong hóa thấp SĐK: V706-H12-10 viên/lần Xuân Quang Nhà SX: Công ty TNHH Đông (Viên nang) Dược Xuân Quang Viên gout Số lô: 010216 KingPhar SĐK: 24922/2013/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nén) Nhà SX: Cơng ty cổ phần hóa lần/ngày dược Việt Nam 28 HCN130 Kim cang thiết Số lơ: Khơng có lần/ngày cốt hồn SĐK: Khơng có 20-30 (Hoàn cứng) Nhà SX: Doang nghiệp tư nhân viên/lần thương mại dịch vụ Ký 29 HCN131 Thân thống hoàn Số lơ: Khơng có 2-3 lần/ngày (Hồn cứng|) SĐK: Khơng có 25-30 Nhà SX: Cơ sở Quảng An viên/ngày Đường 30 HCN141 Viêm thấp khớp Số lơ: Khơng có lần/ngày (Hồn cứng) SĐK: Khơng có viên/lần Nhà SX: Thuốc gia truyền đông y Đỗ Thái Nam 31 HCN142 Phong nhức Số lơ: Khơng có lần/ngày hồn SĐK: Khơng có 1/2 gói /lần (Hồn cứng) Nhà SX: Cơ sở Đức tế, lương y Trần Ngọc Ánh 32 33 HCN143 VNN145 Phong thấp cốt Số lơ: Khơng có lần/ngày thống hồn SĐK: V502-H12-10 1/2 gói /lần (Hồn cứng) Nhà SX: Cơ sở Đức Thành Viên xương Số lô: 32/2016 khớp sutong SĐK: 11855/2015/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Công ty TNHH Giai lần/ngày Cảnh 34 35 VNN146 VNN147 Thống phong Số lô: 12K0923 lần/ngày tiên thảo đơn SĐK: Khơng có 1-2 viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Sản xuất Malaysia Cường lực toan Số lô: 20K0108 lần/ngày thống linh SĐK: Khơng có viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Công ty sản xuất dược phẩm Quảng Khắc Bảo Kiến Vinh 36 VNN150 Dưỡng cốt Số lô: 010515 2-3 lần/ngày khang SĐK: 6531/2014/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Cơng ty TNHH Hoa Thiên Phú Bình Dương 37 HMN151 u thống hồn (Hồn mềm) Số lơ: 01016 2-3 lần/ngày SĐK: V1215-H12-10 4-5 viên/lần Nhà SX: Cơ sở Đặng Nguyên Đường 38 39 HMN152 Cốt thống long VNN156 Số lơ: Khơng có lần/ngày phụng SĐK: 3578/2016/ATTP-XNCB hộp/lần (Hoàn mềm) Nhà SX: Cơ sở Long Phụng Gai cốt hồn Số lơ: Khơng có lần/ngày (Viên nang) SĐK: Khơng có viên/lần Nhà SX: Cơng ty TA Ang Pharmaceutical 40 VEN157 Gai xương Số lô: 010115 lần/ngày KingPhar SĐK: 26562/2013/ATTP-XNCB viên/lần (Viên nén) Nhà SX: Cơng ty cổ phần hóa dược Việt Nam 41 VNN158 Tảo Phong Số lô: 0316 lần/ngày thông huyết SĐK: Khơng có viên/lần hồn Nhà SX: Sản xuất Malaysia (Viên nang) 42 43 44 VNN159 VNN160 HCN161 Linh tiên song Số lô: 7375 lần/ngày đằng tố SĐK: Khơng có viên/lần (Viên nang) Nhà SX: WeLip Pharma Tuyết liên Số lô: 5717 lần/ngày phong thấp linh SĐK: Khơng có viên/lần (Viên nang) Nhà SX: WeLip Pharma Tứ đằng tố Số lơ: Khơng có lần/ngày (Hồn cứng) SĐK: Khơng có viên/lần Nhà SX: Taizou NanFeng Pharmaceutical 45 HCN163 Nam Liên Truy Số lô: 349568 lần/ngày phong thấu cốt SĐK: Khơng có viên/lần hồn Nhà SX: Cơng ty TNHH Đơng 46 VNN168 (Hồn cứng) Dược Lâm Vĩnh Sanh Natheron Số lơ: 141216 (Viên nang) SĐK: 12336/2015/ATTP-XNCB 2-3 viên/lần lần/ngày Nhà SX: Cơng ty cổ phần dược phẩm Hồng Giang 47 48 HCN169 VNH171 Thiên ma thấu Số lô: 010319 lần/ngày cốt hoàn SĐK: 1127/2015/ATTP-XNCB viên/lần (Hoàn cứng) Nhà SX: Cơ sở Thủy Xương Dưỡng khớp Số lô: 010115 lần/ngày linh SĐK: 5773/2014/ATTP-XNCB 4-6 viên/lần (Viên nang) Nhà SX: Doanh nghiệp bào chế Đông dược Việt 49 50 HCH175 HCH176 Đăc trị chữa Số lơ: Khơng có lần/ngày viêm đa khớp, SĐK: Khơng có 20 viên/lần thấp, gút Nhà SX: Hiệu thuốc gia truyền (Hoàn cứng) Quảng Thái Long, Thanh Hóa Thuốc trị tận Số lơ: Khơng có lần/ngày gốc bệnh đau SĐK: Khơng có gói/ngày nhức, mỏi Nhà SX: Thuốc gia truyền xương, khớp, gân, (Hoàn cứng) Phụ lục Kết ứng dụng phân tích mẫu thực Bảng PL4 Kết ứng dụng phân tích mẫu thực STT Mẫu thực BETA DEXA HYRO PREL PRED BNN001 - - - - - HCH015 - - - - - VNH018 - - - - - VNN029 - - - - - HCH039 - - - - - HCN044 - - - - - VEH050 - - - - - BNN051 - - - - - VNH070 - - - - - 10 VNH072 - - - - - 11 VNH086 - - - - - 12 VNH087 - - - - - 13 BNH091 - - - - - 14 HCH092 - - - - - 15 VGH095 - - - - - 16 HCH096 - - - - - 17 VEH098 - - - - - 18 BNC101 - + - - - 19 VEH104 - - - - - 20 VEH106 - - - - - 21 VNN112 - - - - - 22 HCN114 - - - - - 23 HCH119 - - - - - 24 VNH120 - - - - - 25 VNN125 - - - - - 26 VNN128 - - - - - 27 VEN129 - - - - - 28 HCN130 - - - - - 29 HCN131 - - - - - 30 HCN141 - - - - - 31 HCN142 - - - - - 32 HCN143 - - - - - 33 VNN145 - - - - - 34 VNN146 - - - - - 35 VNN147 - - - - - 36 VNN150 - - - - - 37 HMN151 - - - - - 38 HMN152 - - - - - 39 VNN156 - - - - - 40 VEN157 - - - - - 41 VNN158 - - - - - 42 VNN159 - - - - - 43 VNN160 - - - - - 44 HCN161 - - - - - 45 HCN163 - - - - - 46 VNN168 - - - - - 47 HCN169 - - - - - 48 VNH171 - - - - - 49 HCH175 - + - - - 50 HCH176 - + - - - (-): Dưới LOD; (+): Dương tính Phụ lục Sắc ký đồ định lượng mẫu dương tính Bước sóng 254 nm Mẫu dương tính BNC101 Mẫu dương tính HCH175 Mẫu dương tính HCH176 Hình PL5 Sắc ký đồ kết định danh mẫu dương tính Phụ lục Hình ảnh mẫu dương tính Mẫu BNC101 Mẫu HCH175 Mẫu HCH176 Hình PL6 Hình ảnh mẫu dương tính Phụ lục Cơng thức thuốc cách bào chế mẫu ✓ Nền viên nén: Viên nén Đại tần giao thang Bảng PL7.1 Công thức thuốc Đại tần giao thang STT 10 11 12 13 14 15 16 Thành phần Tần giao Thạch cao Đuơng quy Bạch thược Xuyên khung Sinh địa Thục địa Bạch truật Bạch linh Cam thảo chích Hồng cầm Phòng phong Khương hoạt Độc hoạt Bạch Tế tân Tên khoa học Radix Gentianae macrophyllae Gypsum Fibrosum Radix Angelicae sinensis Radix Paeoniae lactiflorae Rhizoma Ligustici wallichii Radix Rehmanniae glutinosae Radix Rehmanniae glutinosae praeparata Rhizoma Atractylodis macrocephalae Poria Radix Glycyrrhizae praeparata Radix Scutellariae Radix Saposhnikoviae divaricatae Rhizoma et Radix Notopterygii Radix Angelicae pubescentis Radix Angelicae dahuricae Radix et Rhizoma Asarii Khối lương 8g 8g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 4g 2g ❖ Cách bào chế Điều chế bột mịn cao dược liệu: Cân thành phần dược liệu theo công thức thái nhỏ Thêm lượng nước ngập dược liệu, đun sôi Giảm nhiệt độ (đủ để trì nước sơi), tiếp tục đun sơi giờ, bổ sung nước để đảm bảo nước ngập dược liệu Sau lọc qua vải thu dịch chiết lần Thêm tiếp nước vào bã dược liệu đến ngập, đun sôi Giảm nhiệt độ đun sôi tiếp giờ, bổ sung nước để đảm bảo nước ngập dược liệu Sau lọc qua vải lọc thu dịch chiết lần Gộp dịch lọc lần lần đem cô cách thủy đến cao đặc Sấy khô cao đặc đến thu cao khô Xay rây qua rây 200 µm thu bột mịn cao dược liệu Trộn bột mịn cao dược liệu với tá dược độn (tinh bột) Thêm tá dược dính (hồ tinh bột) tạo khối ẩm Xát hạt qua rây 1000 µm thu hạt ướt Sấy hạt đến hàm ẩm thích hợp sửa lại hạt qua rây 1000 µm Thêm tá dược trơn (talc, magnesi stearat) với tỷ lệ 1% vào khối hạt sau trộn dập viên thuốc điều chế 50 viên nén (0,2 g/viên) ✓ Nền viên nang: Viên nang độc hoạt ký sinh thang Bảng PL7.2 Công thức thuốc độc hoạt ký sinh thang STT 10 11 12 13 14 15 Thành phần Độc hoạt Tang ký sinh Thục địa Đỗ trọng Ngưu tất Tế tân Tần giao Bạch linh Quế tâm Phòng phong Xuyên khung Đảng sâm Cam thảo Đương quy Bạch thược Tên khoa học Radix Angelicae pubescentis Herba Loranthi Radix Rehmanniae glutinosae praeparata Cortex Eucommiae Radix Achyranthis bidentatae Radix et Rhizoma Asarii Radix Gentianae macrophyllae Poria Cortex Cinnamomi Radix Saposhnikoviae divaricatae Rhizoma Ligustici wallichii Radix Ginseng Radix Glycyrrhizae Radix Angelicae sinensis Radix Paeoniae lactiflorae Khối lượng 12 g 12 g 16 g 16 g 16 g 6g 12 g 12 g 6g 12 g 8g 12 g 6g 12 g 12 g ❖ Cách bào chế Điều chế bột mịn cao dược liệu: Cân thành phần thục địa, đỗ trọng, ngưu tất theo công thức thuốc thái nhỏ Thêm lượng nước ngập dược liệu, đun sôi Giảm nhiệt độ (đủ để trì nước sơi), tiếp tục đun sôi giờ, bổ sung nước để đảm bảo nước ngập dược liệu Sau lọc qua vải lọc thu dịch chiết lần Thêm tiếp nước vào bã dược liệu đến ngập, đun sôi Giảm nhiệt độ đun sôi tiếp giờ, bổ sung nước để đảm bảo nước ngập dược liệu Sau lọc qua vải lọc thu dịch chiết lần Gộp dịch lọc lần lần đem cô cách thủy đến cao đặc Sấy khô cao đặc đến thu cao khô Xay rây qua rây 200 µm thu bột mịn cao dược liệu Điều chế bột mịn dược liệu: Cân thành phần độc hoạt, tang ký sinh, tế tân, tần giao, bạch linh, quế tâm, phòng phong, xuyên khung, đảng sâm, cam thảo, đương quy, bạch thược theo công thức thuốc thái nhỏ Trộn đều, sấy khô xay thành bột mịn, rây qua rây kích thước 200 µm, đồng mẫu thu bột mịn dược liệu Trộn bột cao dược liệu với bột dược liệu, thêm tá dược trơn (aerosil) tỷ lệ 1% trộn đồng nhất, rây qua rây kích thước 200 µm đóng vào nang cứng số Một thuốc điều chế đươc 150 viên nang (0,6 g/viên) ✓ Nền bột: Bột Tam tý thang Bảng PL7.3 Công thức thuốc Tam tý thang STT 10 11 12 13 14 15 16 Thành phần Đảng sâm Hoàng kỳ Bạch linh Cam thảo Đương quy Xuyên khung Bạch thược Sinh địa Đỗ trọng Ngưu tất Tục đoạn Tế tân Quế tâm Tần giao Độc hoạt Phòng phong Tên khoa học Codonopsis pilosula Radix Astragali membranacei Poria Radix Glycyrrhizae Radix Angelicae sinensis Rhizoma Ligustici wallichii Radix Paeoniae lactiflorae Radix Rehmanniae glutinosae Cortex Eucommiae Radix Achyranthis bidentatae Radix Dipsaci Radix et Rhizoma Asarii Cortex Cinnamomi Radix Gentianae macrophyllae Radix Angelicae pubescentis Radix Saposhnikoviae divaricatae Khối lượng 24 g 36 g 36 g 18 g 36 g 36 g 36 g 48 g 30 g 48 g 48 g 12 g 24 g 36 g 36 g 30 g ❖ Cách bào chế Cân loại dược liệu theo công thức thái nhỏ Trộn đều, sấy khơ xay thành bột mịn, rây qua rây kích thước 200 µm, đồng mẫu Bột đóng gói khối lượng 1,2g/gói Một thuốc điều chế 380 gói (1,2 g/gói) Phụ lục Hình ảnh mẫu Hình PL8.1 Nền viên nén – Viên nén Đại tần giao thang Hình PL8.2 Nền viên nang – Viên nang Độc hoạt ký sinh thang Hình PL8.3 Nền bột – Bột Tam Tý Thang ... dùng: – 30 mg/ngày 1.3 Một số nghiên cứu phát corticoid trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.3.1 Trên giới Nghiên cứu phát xác định thuốc tân dược trộn trái phép chế phẩm đông thu hút nhiều nhóm... phân tích xác định đồng thời nhiều tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược với độ tin cậy cao, chi phí thấp, góp phần vào cơng tác kiểm tra phát xác định tân dược trộn lẫn chế phẩm đông dược, ... phẩm đông dược lưu hành thị trường CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thuốc tân dược trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.1.1 Trên giới Hiện nay, tình trạng chế phẩm đông dược bị trộn trái phép