Xây dựng phương pháp phát hiện một số chất thuộc nhóm glucocorticoid trộn trái phép trong mỹ phẩm

Bộ giáo dục & đào tạo Bộ y tế Trờng đại học dợc hà nội Hoàng Thanh tâm Xây dựng phơng pháp Phát số chất thuộc nhóm glucocorticoid trộn trái phép mỹ phẩm luận văn thạc sĩ dợc học Hà nội - 2008 Bộ giáo dục & đào tạo Bộ y tế Trờng đại học dợc hà nội Hoàng Thanh tâm Xây dựng phơng pháp Phát mét sè chÊt thuéc nhãm glucocorticoid trén tr¸i phÐp mỹ phẩm luận văn thạc sĩ dợc học Chuyên ngành : Kiểm nghiệm thuốc độc chất M số : 60 -73 -15 Ng−êi h−íng dÉn khoa häc TS Đoàn Cao Sơn Ths Lê Thị Hờng Hoa Hà néi - 2008 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc kính trọng tơi xin chân thành cảm ơn: TS Đoàn Cao Sơn Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Ths Lê Thị Hường Hoa Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương Những người tận tình, trực tiếp hướng dẫn tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới : PGS.TS Trịnh Văn Lẩu Ths Bùi Thị Hoà TS Trần Việt Hùng Đã giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới thầy, cô giáo mơn Phân tích, mơn Hố dược đóng góp ý kiến q báu cho tơi q trình thực hoàn thành luận văn Nhân dịp xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng quản lý sau Đại học trường Đại học Dược Hà nội, bạn đồng nghiệp khoa Kiểm nghiệm Mỹ phẩm, khoa Kiểm nghiệm Đông dược - Dược liệu, khoa Vật lý đo lường, viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương tạo điều kiện thuận lợi giúp đõ tơi; gia đình bạn bè động viên, khích lệ tơi suốt q trình học tập trình thực luận văn Hà nội , ngày tháng năm 2008 DS Hoàng Thanh Tâm MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Vài nét glucocorticoid 1.2 Đặc tính glucocorticoid nghiên cứu 2.2.1 Dexamethason 2.2.2 Prednisolon acetat 2.2.3 Fluocinolon acetonid 2.2.4 Hydrocortison acetate 2.2.5 Cortison acetat Phương pháp phân tích 2.3.1 Phương pháp hoá học 2.3.2 Phương pháp quang phổ 2.3.3 Phương pháp sắc ký Kem bôi da mỹ phẩm 15 2.3.1 Định nghĩa 15 2.3.2 Phân loại 15 2.3.3 Thành phần 15 2.3.4 Đặc điểm q trình phân tích 16 2.3.5 Phát Glucocorticoid 17 Nhận xét 17 1.3 1.4 1.5 CHƯƠNG : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng 19 2.1.1 Các kem bôi da mỹ phẩm nghiên cứu 19 2.1.2 Các chất chuẩn nghiên cứu 20 2.2 Phương tiện nghiên cứu 20 2.3 Nội dung nghiên cứu 22 2.4 Phương pháp nghiên cứu 22 3.2.1 Nghiên cứu phát sắc ký lớp mỏng 23 3.2.2 Nghiên cứu phát sắc ký lỏng hiệu cao 23 3.2.3 Khảo sát xây dựng qui trình xử lý mẫu 23 Phương pháp xử lý số liệu 24 2.5 CHƯƠNG : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 25 3.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 25 3.1.1 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu 25 3.1.2 Khảo sát điều kiện sắc ký để tách vết 25 3.1.3 Xác định giới hạn phát 31 3.1.4 Áp dụng phương pháp kiểm tra mẫu 32 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 38 3.2.1 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu 38 3.2.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 38 3.2.3 Đánh giá phương pháp 39 3.2.4 Áp dụng phương pháp kiểm tra mẫu 55 3.2 CHƯƠNG : BÀN LUẬN 61 CHƯƠNG :KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 Tài liệu tham khảo 65 Phụ lục 69 Phụ lục 77 Phụ lục 82 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT C : Chuẩn DAD : Detector diod array GC : Glucocorticoid HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao LC- MS : Sắc ký lỏng khối phổ p.a : Tinh khiết phân tích PP : Phương pháp RSD : Độ lệch chuẩn tương đối ( relative standard deviation) Rf : Hệ số lưu giữ S : Độ lệch chuẩn SI : Hệ số tương đồng (Similarity index) STT : Số thứ tự T : Thử T+C : Thử + chuẩn TLC : Sắc ký lớp mỏng tr : Thời gian lưu UV : tử ngoại VIS : khả kiến λmax : bước sóng cho cực đại hấp thụ DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Kết kiểm tra TLC 33 mẫu kem 33 Bảng 3.2 Sự thích hợp hệ thống với dexamethason 42 Bảng 3.3 Sự thích hợp hệ thống với fluocinolon acetonid 42 Bảng 3.4 Sự thích hợp hệ thống với prednisolon acetat 43 Bảng 3.5 Sự thích hợp hệ thống với hydrocortison acetat 43 Bảng 3.6 Sự thích hợp hệ thống với cortison acetat 44 Bảng 3.7.Cực đại hấp thụ chất phân tích khơng có 47 mẫu thử Bảng 3.8 Kết chồng phổ tử ngoại khả kiến 50 Bảng 3.9 Kết thử độ lặp lại 51 Bảng 3.10 Kết thử độ với dexamethason 52 Bảng 3.11 Kết thử độ với fluocinolon acetonid 53 Bảng 3.12 Kết thử độ với prednisolon acetate 54 Bảng 3.13 Kết thử độ với hydrocostison acetate 55 Bảng 3.14 Kết thử độ với cortisone acetate 56 Bảng 3.15 Kết kiểm tra mẫu thị trường TLC 57 HPLC DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Sắc ký đồ phân tách chất thơng số đặc trưng 12 Hình 3.1 Kết chạy chuẩn hỗn hợp với hệ 28 Hình 3.2 Kết chạy chuẩn hỗn hợp với hệ 28 Hình 3.3 Kết chạy chuẩn hỗn hợp với hệ 28 Hình 3.4 Vị trí chuẩn sắc ký đồ 29 Hình 3.5 Sắc ký đồ tách chất mẫu thử với hệ 31 Hình 3.6 Sắc ký đồ tách chất mẫu thử với hệ 31 Hình 3.7 Sắc ký đồ tách chất mẫu thử với hệ 31 Hình 3.8 Sắc ký đồ xác định giới hạn phát 32 Hình 3.9 Kết TLC mẫu 1,2,3,4 chạy hệ 36 Hình 3.10 Kết TLC mẫu 1,2,3,4 chạy hệ 36 Hình 3.11 Kết TLC mẫu 1,2,3,4 chạy hệ 36 Hình 3.12 Kết TLC mẫu 5,6,7,8 chạy hệ 38 Hình 3.13 Kết TLC mẫu 5,6,7,8 chạy hệ 38 Hình 3.14 Kết TLC mẫu 5,6,7,8 chạy hệ 38 Hình 3.15 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp 44 Hình 3.16 Sắc ký đồ phổ đồ mẫu 45 Hình 3.17 Sắc ký đồ phổ đồ mẫu + Chuẩn 45 Hình 3.18 Chồng phổ UV-VIS Dexamethason 47 Hình 3.19 Chồng phổ UV-VIS Fluocinolon acetonid 48 Hình 3.20 Chồng phổ UV-VIS Prednisolon acetate 48 Hình 3.21 Chồng phổ UV-VIS Hydrocortison acetat 49 Hình 3.22 Chồng phổ UV-VIS Cortison acetat 49 Hình 3.23 Sắc ký đồ mẫu số 59 Hình 3.24 Phổ DAD mẫu số 59 Hình 3.25 Kết chồng phổ UV - VIS pic nghi ngờ 60 mẫu số với dexamethason Hình 3.26 Sắc ký đồ mẫu số 60 Hình 3.27 Kết chồng phổ UV - VIS pic nghi ngờ 61 mẫu số với dexamethason Hình 3.28 Phổ DAD mẫu số 62 Hình 3.29 Kết chồng phổ UV-VIS pic nghi ngờ 62 mẫu số với cortisone acetate Hình 3.30 Sắc ký đồ mẫu số 63 Hình 3.31 Phổ DAD mẫu số 63 Hình 3.32 Kết chồng phổ tử ngoại pic nghi ngờ 64 mẫu số với fluocinolon acetonid Hình PL 2.1 đến PL 2.9 Kết TLC mẫu thử nghiệm 77 - 81 Hình PL 3.1 đến PL 3.34 Phổ sắc ký đồ số mẫu thử nghiệm phương pháp HPLC 82 - 90 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo định nghĩa hiệp định hoà hợp mỹ phẩm ASEAN ‘‘Mỹ phẩm chất chế phẩm dùng tiếp xúc với phận bên thể người với lợi, niêm mạc miệng, với mục đích để làm làm thơm, làm thay đổi diện mạo, điều chỉnh mùi thể, bảo vệ trì điều kiện tốt’’ [4], [16] Tuy nhiên mỹ phẩm có chứa chất gây độc với thể việc dùng hàng ngày ảnh hưởng không nhỏ đến sức khoẻ vẻ đẹp người sử dụng Vì chất lượng mỹ phẩm vấn đề mà người tiêu dùng, nhà sản xuất, phân phối, nhà quản lý cần quan tâm Năm 2003, Bộ trưởng Bộ Thương mại Trương Đình Tuyển tham gia ký hiệp định hoà hợp Asean quản lý Mỹ phẩm, nước Asean cần tuân thủ qui định ký kết hiệp định Theo hiệp định có 422 chất nhóm chất cấm sử dụng mỹ phẩm; 65 chất nhóm chất có qui định giới hạn nồng độ hàm lượng sử dụng [16] Cũng theo hiệp định này, glucocorticoid nhóm chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm [16] có nhiều tác dụng phụ Nhưng có tác dụng chống viêm, làm nhẵn bóng da, glucocorticoid dễ bị lợi dụng trộn trái phép, mỹ phẩm đặc biệt loại kem bôi da [25], [27], [30], [32] Hiện nước ta chưa có qui trình, phương pháp thống để kiểm tra chất bị cấm sử dụng có mặt hàng mỹ phẩm Trước yêu cầu thực tế cấp bách đặt cho công tác giám sát kiểm tra chất lượng mỹ phẩm, thực đề tài : XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM GLUCOCORTICOID TRỘN TRÁI PHÉP TRONG MỸ PHẨM Với hai mục tiêu: 72 31 Pond's white beauty detox spot -less white cream Unilever NSX : 210608 11 C25 0504 Làm khiết dưỡng trắng da làm cho da ngời sáng khơng thâm nám Siêu thị Metro Hồng mai 32 Olay total white cream Procter and Gamble 62994811SJ Dành cho da thường, làm mờ vết thâm nám Siêu thị Metro Hoàng mai 33 Olay total white extra cream Procter and Gamble 63264811SJ Dành cho da sẫm màu, Siêu thị Metro làm da trắng mềm Hoàng mai mịn hơn, bảo vệ da khỏi sạm đen 73 PHỤ LỤC KẾT QUẢ TLC CỦA CÁC MẪU THỬ NGHIỆM (Với cách phát khác nhau) Soi UV 254 Phun H2SO4 hệ Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.1 Kết thử mẫu 1-4 Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.2 Kết thử mẫu 5-8 74 Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.3 Kết thử mẫu 9-12 Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.4 Kết thử mẫu 13-16 75 Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.5 Kết thử mẫu 17-20 chạy hệ Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.6 Kết thử mẫu 21-24 chạy hệ 76 Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.7 Kết thử mẫu 25-27 chạy hệ Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.8 Kết thử mẫu 28-30 77 Soi UV 254 Phun H2SO4 Phun xanh tetrazolium Hình PL 2.9 Kết thử mẫu 31-33 78 PHỤ LỤC PHỔ VÀ SẮC KÝ ĐỒ CỦA MỘT SỐ MẪU THỬ NGHIỆM BẰNG PP HPLC Hình PL3.1 Mẫu 13 Hình PL3.2 Mẫu 13 + Chuẩn Hình PL3.3 Mẫu 14 Hình PL3.4 Mẫu 14 + Chuẩn 79 Hình PL3.5 Mẫu 15 Hình PL3.6 Mẫu 15 + Chuẩn Hình PL3.7 Mẫu 16 Hình PL3.8 Mẫu 16 + Chuẩn 80 Hình PL 3.9 Mẫu 17 Hình PL 3.11 Mẫu 18 Hình PL 3.10 Mẫu 17 + Chuẩn Hình PL 3.12 Mẫu 18 + Chuẩn 81 Hình PL 3.13 Mẫu 19 Hình PL 3.14 Mẫu 19 + Chuẩn Hình PL 3.15 Mẫu 20 Hình PL 3.16 Mẫu 20 + Chuẩn 82 Hình PL 3.17 Mẫu 21 Hình PL 3.19 Mẫu 22 Hình PL 3.18 Mẫu 21 + Chuẩn Hình PL 3.20 Mẫu 22 + Chuẩn 83 Hình PL 3.21 Mẫu 23 Hình PL 3.22 Mẫu 23 + Chuẩn Hình PL 3.23 Mẫu 24 Hình PL 3.24 Mẫu 24 + Chuẩn 84 Hình PL 3.25 Mẫu 27 Hình PL 3.27 Mẫu 30 Hình PL 3.26 Mẫu 27 + Chuẩn Hình PL 3.28 Mẫu 30 + Chuẩn 85 Hình PL 3.29 Mẫu 31 Hình PL 3.30 Mẫu 31 + Chuẩn Hình PL 3.31 Mẫu 32 Hình PL 3.32 Mẫu 32 + Chuẩn 86 Hình PL 3.33 Mẫu 33 Hình PL 3.34 Mẫu 33 + Chuẩn ... XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM GLUCOCORTICOID TRỘN TRÁI PHÉP TRONG MỸ PHẨM Với hai mục tiêu: : Xây dựng phương pháp qui trình phân tích để phát số chất cấm thuộc nhóm glucocorticoid. .. đào tạo Bộ y tế Trờng đại học dợc hà nội Hoàng Thanh tâm Xây dựng phơng pháp Phát số chất thuộc nhóm glucocorticoid trộn trái phép mỹ phẩm luận văn thạc sĩ dợc học Chuyên ngành : Kiểm nghiệm... để phát đồng thời số chất cấm thuộc nhóm glucocorticoid kem bơi da mỹ phẩm chúng dạng vết áp dụng qui trình tìm để đánh giá chất lượng số mẫu mỹ phẩm thị trường 16 CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG