Xác định một số thuốc giảm đau chống viêm trộn trái phép trong chế phẩm đông dược bằng HPTLC

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VINH DŨNG XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THUỐC GIẢM ĐAU CHỐNG VIÊM TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƯỢC BẰNG HPTLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI 2018 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VINH DŨNG Mã sinh viên :1301077 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THUỐC GIẢM ĐAU CHỐNG VIÊM TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐƠNG DƯỢC BẰNG HPTLC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : PGS.TS Phạm Thị Thanh Hà NCS ThS Đào Thị Cẩm Minh Nơi Thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích-Độc chất Viện công nghệ Dược phẩm Quốc gia HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Để khóa luận tốt nghiệp dược sĩ hồn thành cách thuận lợi nhất, tơi nhận nhiều giúp đỡ, bảo tận tình động viên quý Thầy, Cô giáo, anh chị kĩ thuật viên, bạn bè gia đình Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: PGS.TS.Phạm Thị Thanh Hà NCS.ThS Đào Thị Cẩm Minh người trực tiếp hướng dẫn, bảo động viên lúc khó khăn Bên cạnh cho xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh , Dược sĩ Thái Khoa Bảo Châu, Dược sĩ Nguyễn Thị Thanh Huyền nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình hồn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến toàn thể quý giảng viên, kĩ thuật viên mơn Hóa phân tích- Độc chất ln tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình làm thực nghiệm môn Xin cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, tồn thể q Thầy Cơ đặc biệt q Thầy Cơ mơn Hóa phân tích-Độc chất truyền đạt cho kiến thức quý báu thời gian học tập trường để vận dụng tốt vào khóa luận Cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè động viên giúp đỡ q trình hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 17, tháng 5, năm 2018 Nguyễn Vinh Dũng MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tình hình trộn trái phép thuốc giảm đau chống viêm chế phẩm đông dược 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Tại Việt Nam 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu .5 1.2.1 Cấu trúc, tính chất hóa lý thuốc giảm đau,chống viêm .5 1.2.2 Cơ chế tác dụng, tác dụng tác dụng không mong muốn thuốc giảm đau, chống viêm .7 1.3 Tổng quan phương pháp phân tích 1.3.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 1.3.2 Sắc ký lớp mỏng hiệu cao(HPTLC) 10 1.4 Một số nghiên cứu nhóm thuốc giảm đau chống viêm trộn trái phép chế phẩm đông dược .13 1.4.1 Trên giới 13 1.4.2 Tại Việt Nam .15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 1.1 Nguyên vật liệu, thiết bị đối tượng nghiên cứu 17 1.1.1 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu .17 1.1.2 Thiết bị, dụng cụ phục vụ nghiên cứu 18 1.1.3 Đối tượng nghiên cứu 18 1.2 Phương pháp nghiên cứu 19 1.2.1 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu .19 1.2.2 Khảo sát dung môi pha động 19 1.2.3 Thẩm định phương pháp .20 1.2.4 Sơ khảo sát chế phẩm đông dược thu thập thị trường 21 1.3 Phương pháp xử lý số liệu 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 23 3.1 Khảo sát dung môi pha động .23 3.2 Khảo sát dung môi chiết loại tạp 25 3.2.1 Khảo sát dung môi loại tạp 26 3.2.2 Khảo sát dung môi chiết .27 3.3 Thẩm định phương pháp .30 3.3.1 Tính chọn lọc 30 3.3.2 Tính thích hợp hệ thống 31 3.3.3 Khoảng tuyến tính .32 3.3.4 Độ đúng, độ xác .33 3.3.5 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng .36 3.4 Sơ khảo sát chế phẩm đông dược thu thập thị trường .38 CHƯƠNG BÀN LUẬN 48 4.1 Về phương pháp xử lý mẫu 48 4.2 Về lựa chọn phương pháp phân tích 49 4.3 Về thẩm định phương pháp 50 4.4 Sơ khảo sát chế phẩm đông dược thu thập thị trường 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .53 TÀI LIỆU THAM KHẢO .55 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT AOAC Hiệp hội nhà hóa phân tích thống(Association of Official Analytical Chemists) COX Cyclooxygenase HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (High performance thin layer chromatography) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High performance liquid chromatography) INDO Indomethacin IBU Ibuprofen KETO Ketoprofen LOD Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) LC Liquid chromatography MS Khối phổ (Mass spectrometry) MS/MS Khối phổ hai lần (tandem mass spectrometry) M Sắc ký lỏng (Phân tử khối) NSAID Thuốc chống viêm khơng steroid (Non-steroidal anti-inflammatory drug) PTHQ Phương trình hồi quy PARA Paracetamol PIRO Piroxicam PDE-5 Phosphodiesterase-5 S/N Tín hiệu/nhiễu(signal-to-noise) Spic Diện tích pic QT Quy trình TOF Thời gian bay(Time of flight) TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) UV Cực tím (Ultra violet) DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Cấu trúc hóa học paracetamol Hình Cấu trúc hóa học piroxicam Hình Cấu trúc hóa học indomethacin .6 Hình Cấu trúc hóa học ketoprofen Hình Cấu trúc hóa học ibuprofen .7 Hình Hệ thống sắc ký lớp mỏng hiệu cao 12 Hình Kết khảo sát hệ dung môi pha động 23 Hình Kết khảo sát hệ dung môi pha động n-hexan: ethyl acetat: acid acetic (6:2,5:1,5) 24 Hình 3 Kết quét phổ UV vủa chất phân tích 25 Hình Kết khảo sát dung mơi loại tạp 27 Hình Kết khảo sát dung mơi chiết viên nang 29 Hình Quy trình xử lý mẫu .29 Hình Sắc ký đồ thể độ chọn lọc chất phân tích mẫu 30 Hình Sắc ký đồ analog thể độ chọn lọc chất phân tích mẫu .31 Hình Sắc ký đồ xác định LOD nén chất phân tích 37 Hình 10 Biểu đồ số lượng mẫu dạng bào chế chế phẩm đông dược thu thập thị trường 38 Hình 11 Biểu đồ nơi thu mẫu số lượng mẫu có khơng có số đăng ký 39 Hình 12 Biểu đồ địa điểm thu mẫu 39 Hình 13 Sắc ký đồ phân tích mẫu chế phẩm đơng dược thị trường 42 Hình 14 Kết chồng phổ mẫu dương tính Paracetamol 43 Hình 15 Kết chồng phổ mẫu dương tính Paracetamol 43 Hình 16 Kết chồng phổ mẫu dương tính indomethacin 44 Hình 17 Kết chồng phổ mẫu dương tính giả Paracetamol 44 Hình 18 Kết chồng phổ mẫu dương tính giả Indomethacin 45 Hình 19 Biểu đồ số mẫu dương tính kết luận qua hai phương pháp TLC HPTLC 45 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 So sánh HPTLC TLC .11 Bảng Một số nghiên cứu phát thuốc giảm đau, chống viêm giới 14 Bảng Một số nghiên cứu phát thuốc giảm đau chống viêm Việt Nam 15 Bảng Chất chuẩn - hóa chất dùng nghiên cứu .17 Bảng Kết khảo sát dung môi loại tạp .26 Bảng Kết khảo sát dung môi chiết 28 Bảng 3 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống HPTLC .32 Bảng Kết khoảng tuyến tính chất phân tích 33 Bảng Kết đánh giá độ đúng, độ xác chất phân tích 34 Bảng Kết phân tích LOD, LOQ mẫu chất phân tích 38 Bảng Kết định lượng mẫu dương tính paracetamol indomethacin 46 ĐẶT VẤN ĐỀ Sản phẩm chăm sóc sức khỏe thảo dược, thuốc có nguồn gốc Đơng dược sử dụng toàn giới lựa chọn thay hiệu tương đối an toàn cho thuốc có nguồn gốc tổng hợp hóa dược Theo tổ chức y tế giới có đến 80% dân số nước phát triển sử dụng sản phẩm cho việc chăm sóc sức khỏe họ doanh thu sản phẩm thị trường châu Âu năm 2003 tỷ đô la Mỹ [trong tiêu thụ nhiều Đức (39%) Pháp (21%)] [26] Tuy nhiên, sản phẩm không quy định nghiêm ngặt loại thuốc đại, khơng có kiểm sốt có hệ thống chất lượng chúng Trong nhiều trường hợp chúng bán sở thuốc Đông y gia truyền để điều trị bệnh mãn tính Để chứng minh sản phẩm họ hiệu quả, số sở cố tình trộn trái phép thuốc tổng hợp hóa dược cho sản phẩm Việc gây nguy nghiêm trọng cần quan tâm sử dụng thuốc thời gian dài [38] Trong nghiên cứu Đài Loan tiến hành 2609 mẫu thuốc đông dược, có tới 23,7% số phát trộn thuốc hóa dược hay nghiên cứu khác 3320 mẫu thuốc có nguồn gốc thảo dược Singapore 1,2% số phát trộn trái phép thuốc hóa dược[28],[42],[39] Các loại thuốc sử dụng để pha trộn bao gồm: (1) Các thuốc giảm đau chống viêm nhóm steroids khơng steroids (NSAIDs) để điều trị viêm khớp dạng thấp, dị ứng hen suyễn: (2) Các chất ức chế PDE-5 điều trị rối loạn chức tình dục; (3) sibutramin để điều trị chứng béo phì (4) thuốc điểu trị đái tháo đường nhóm sulfonylure (clorpropamid, tolbutamid, glibenclamid) [38] Trong đó, nhóm thuốc giảm đau chống viêm phát nhiều [38],[34] Việc sử dụng lâu dài chế phẩm đông dược có trộn lẫn thuốc nhóm giảm đau chống viêm trộn với liều cao gây tác dụng không mong muốn biến chứng nguy hiểm như: Loét dày, xuất huyết tiêu hóa, suy thượng thận, suy gan, co thắt phế quản, giảm đời sống hồng cầu,…[38],[2], [3] Với thực tế trên, việc phát xử lý kịp thời trường hợp trộn trái phép thuốc giảm đau chống viêm chế phẩm đông dược cấp bách để đảm bảo an toàn cho người sử dụng Ở Việt Nam, có số cơng trình nghiên cứu phát thuốc giảm đau chống viêm trộn trái phép chế phẩm đông dược phát số corticoid kỹ thuật sắc ký lớp mỏng [10], sắc ký lỏng hiệu thương mại Thành Công Công ty Viên vai gáy 85 VNN126 Bách Hợp (Viên nang) 02- 17995/2014/AT 200616 TP-XNCB TNHH Dược phẩm thương mại 1-2lần/ngày viên/lần Thành Cơng 86 HCN127 Bách Thơng (Hồn cứng) 070516 3945/2016/ATT Cơ sở Dân lần/ngày P-XNCB Lợi gói/lần Tisore- Khu Cơng ty phong hóa 87 VNN128 thấp Xn 061116 V706-H12-10 Quang KingPhar Dược Xuân viên/lần Công ty cổ Viên gout VEN129 lần/ngày Quang (Viên nang) 88 TNHH Đơng 010216 (Viên nén) 24922/2013/AT phần hóa lần/ngày TP-XNCB dược Việt viên/lần Nam Kim cang 89 HCN130 thiết cốt hoàn - - DNTN-TMDV Vị Ký (Hoàn cứng) Thân thống 90 HCN131 hoàn - - (Hoàn cứng) Viêm thấp 91 92 HCH141 HCN142 khớp - - truyền đông y (Hoàn cứng) Đỗ Thái Nam Phong nhức Cơ sở Đức tế, hoàn Phong thấp HCN143 Đường Thuốc gia - - (Hoàn cứng) 93 Quảng An cốt thống hoàn lương y Trần Ngọc Ánh V502- - H12-10 71 lần/ngày 20-30 viên/lần 2-3lần/ngày 25-30 viên/lần lần/ngày viên/lần lần/ngày 1/2 gói /lần Cơ sở Đức lần/ngày Thành 1/2 gói /lần (Hồn cứng) Viên xương 94 VNN145 khớp sutong (Viên nang) 32/201 11855/2015/AT TP-XNCB Thống 95 VNN146 Công ty TNHH Giai Cảnh lần/ngày viên/lần Sản xuất phong tiên 12K092 thảo đơn - Malaysia lần/ngày (Phân phối 1-2 viên/lần HCM) (Viên nang) Công ty sản xuất dược Cường lực 96 97 VNN147 HCN149 toan thống 20K010 linh - 99 100 HMN15 Phước Thiên sinh hoàn - - khang 010515 6531/2014/ATT TNHH Hoa 2-3lần/ngày P-XNCB Thiên Phú viên/lần Bình Dương 01016 Cơ sở Đặng 2-3 Nguyên lần/ngày Đường 4-5 viên/lần 3578/2016/ATT Cơ sở Long lần/ngày P-XNCB Phụng hộp/lần V1215-H12-10 (Hoàn mềm) Cốt thống long phụng HCN153 - (Hoàn mềm) thống kinh Phước Thiên - - (Hoàn cứng) VNN154 linh chi ND (Viên nang) Đường- Nha - Trang Công ty Xương khớp 102 - Công ty Yêu thống hoàn Đường- Nha Trang Xạ hương 101 viên/lần Độc hoạt ký (Viên nang) HMN15 Khắc Bảo Kiến Vinh Dưỡng cốt VNN150 lần/ngày (Viên nang) (Hoàn cứng) 98 phẩm Quảng 011014 21349/2014/AT TNHH lần/ngày TP-XNCB TMDV Nam 2-3 viên/lần Dược Sài 72 Gòn Viên xương 103 HCN155 Cơng ty khớp Linh 006040 31692/2015/AT TNHH Đông 2-3lần/ngày Chi 16 TP-XNCB Dược Vĩnh 4-5 viên/lần (Hoàn cứng) 104 VNN156 Gai cốt hoàn (Viên nang) Xuân TA Ang - VEN157 KingPhar 010115 thơng huyết hồn phần hóa lần/ngày TP-XNCB dược Việt viên/lần Nam Sản xuất 0316 - (Hoàn cứng) VNN159 song đằng tố Malaysia lần/ngày (Phân phối viên/lần Hà Nội) Linh tiên 107 viên/lần 26562/2013/AT Tảo Phong VNN158 lần/ngày Công ty cổ (Viên nén) 106 Pharmaceutic al Gai xương 105 - 7375 - 5717 - (Viên nang) WeLip lần/ngày Pharma viên/lần WeLip lần/ngày Pharma viên/lần Tuyết liên 108 VNN160 phong thấp linh (Viên nang) Taizou 109 HCN161 Tứ đằng tố (Hoàn cứng) - - NanFeng lần/ngày Pharmaceutic viên/lần al Phong thấp 110 VNN162 linh (Viên nang) 201702 - 10 Nam Liên 111 HCN163 Truy phong thấu cốt Phân phối lần/ngày Hà Nội viên/lần Công ty 349568 VNB-3333 -05 TNHH Đông lần/ngày Dược Lâm viên/lần Vĩnh Sanh hoàn 73 (Hoàn cứng) Cốt thống 112 HCN165 hoàn (Hoàn cứng) 060720 13086/2014/AT 19 TP-XNCB Hoạt lạc 113 VNN166 vương 010816 (Viên nang) Phong thấp 114 HCN167 hoàn 020816 17492/2016/AT TP-XNCB 2200/2012/ATT P-XNCB (Hoàn cứng) Cơ sở sản xuất Phương Hòa Đường Cơng ty TNHH Tiêu Dao Cơ sở sản xuất Bảo Nghĩa lần/ngày 1/2 gói/lần lần/ngày 2-3 viên/lần lần/ngày 10 viên/lần Cơng ty cổ 115 VNN168 Natheron (Viên nang) 141216 12336/2015/AT phần dược lần/ngày TP-XNCB phẩm Hoàng 2-3 viên/lần Giang Thiên ma 116 HCN169 thấu cốt hoàn 010319 1127/2015/ATT P-XNCB (Hoàn cứng) Dưỡng khớp 117 VNH171 linh 010115 5773/2014/ATT P-XNCB (Viên nang) 118 HCH175 Cơ sở sản xuất Thủy Xương DNTN bào chế Đông dược Việt Đăc trị chữa Hiệu thuốc viêm đa gia truyền khớp, hấp, - - Quảng Thái gút Long, Thanh (Hồn cứng) Hóa lần/ngày viên/lần lần/ngày 4-6 viên/lần lần/ngày, 20 viên/lần Thuốc trị tận góc bệnh đau nhức, 119 HCH176 mỏi xương, - - khớp, gân, (Hoàn cứng) 74 Thuốc gia truyền lần/ngày gói/lần Phụ lục 3: Hình ảnh mẫu dương tính Hình PL 3.1.Mẫu dương tính BN01 Hình PL 3.2.Mẫu dương tính HC008 Hình PL 3.3.Mẫu dương tính BN51 Hình PL 3.4.Mẫu dương tính BNH091 Hình PL 3.5.Mẫu dương tính HCH092 75 Hình PL 3.6 Mẫu dương tính HCH141 Hình PL 3.7 Mẫu dương tính VNN156 76 Hình PL 3.8 Mẫu dương tính VNN162 Hình PL 3.9.Mẫu dương tính HCH176 Phụ lục 4: Kết định lượng mẫu dương tính Bước sóng phát hiện: 254 nm , kí hiệu: C: Hỗn hợp chất chuẩn Định lượng paracetamol Mẫu dương tính BN 01 77 Mẫu dương tính HC 008 Mẫu dương tính BN 51 78 Mẫu dương tính BNH 091 Mẫu dương tính HCH 092 79 Mẫu dương tính HCH 141 Mẫu dương tính VNN 156 80 Mẫu dương tính VNN 162 Mẫu dương tính HCH 176 Định lượng Indomethacin Mẫu dương tính BN 01 81 Phụ lục 5: Kết chồng phổ mẫu dương tính giả paracetamol indomethacin Chuẩn paracetamol HCH 167 HMH 152 VEH043 VEH 071 82 Chuẩn paracetamol VNH 146 VNN 159 Chuẩn paracetamol VNN 145 Hình PL 5.1 Kết chồng phổ mẫu dương tính giả paracetamol 83 Chuẩn Indomethacin HCH 092 VNH 074 Chuẩn Indomethacin HCN 169 Hình PL 5.2 Kết chồng phổ mẫu dương tính giả Indomethacin 84 Phụ lục 6: Hình ảnh mẫu tự tạo Hình PL 6.1 Nền viên nén- Viên nén Đại tần giao thang Hình PL 6.2 Nền thuốc bột- Bột Tam tý thang Hình PL 6.3 Nền viên nang – Viên nang Độc hoạt ký sinh thang 85 ... Một số nghiên cứu nhóm thuốc giảm đau chống viêm trộn trái phép chế phẩm đông dược 1.4.1 Trên giới Trên giới thời gian qua có nhiều nghiên phát nhóm thuốc giảm đau chống viêm trộn trái phép chế. .. phương pháp HPTLC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tình hình trộn trái phép thuốc giảm đau chống viêm chế phẩm đông dược 1.1.1 Trên giới Trên giới nay, vấn đề trộn trái phép thuốc tân dược chế phẩm đông dược diễn... TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN VINH DŨNG Mã sinh viên :1301077 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THUỐC GIẢM ĐAU CHỐNG VIÊM TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐƠNG DƯỢC BẰNG HPTLC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người