THÔNG TIN TÀI LIỆU
Header Page of 128 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC −−−−−− LÊ HỒNG THẮM LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA DƢỢC MSSV: 2102482 CẦN THƠ 11–2013 Footer Page of 128 Header Page of 128 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC −−−−−− LÊ HỒNG THẮM GĨP PHẦN PHÂN LẬP SCOPOLAMINE TỪ CÀ ĐỘC DƢỢC (DATURA METEL L.), HỌ CÀ (SOLANACEAE) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA DƢỢC CÁN BỘ HƢỚNG DẪN TS LÊ THANH PHƢỚC CẦN THƠ 11–2013 Footer Page of 128 Header Page of 128 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Năm học 2013-2014 Đề tài: “GÓP PHẦN PHÂN LẬP SCOPOLAMINE TỪ CÀ ĐỘC DƢỢC DATURA METEL L., HỌ CÀ (SOLANACEAE)” LỜI CAM ĐOAN ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… Cần thơ, ngày tháng năm 2013 Lê Hồng Thắm Luận văn tốt nghiệp đại học Chuyên ngành: Hóa Dƣợc Đã bảo vệ đƣợc duyệt Hiệu trƣởng:………………………… Trƣởng Khoa:………………………… Trƣởng Chuyên ngành Cán hƣớng dẫn TS Lê Thanh Phƣớc Footer Page of 128 Header Page of 128 Trƣờng Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Mơn Hóa Học NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Cán hƣớng dẫn: TS Lê Thanh Phƣớc Đề tài: Góp phần phân lập scopolamine từ Cà độc dƣợc (Datura metel L.), họ Cà (Solanaceae) Sinh viên thực hiện: Lê Hồng Thắm MSSV: 2102482 Lớp: Hóa dƣợc Khóa: 36 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ): Đánh giá nội dung thực đề tài: Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày….tháng….năm 2013 Cán hƣớng dẫn Lê Thanh Phƣớc Trƣờng Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập – Tự – Hạnh phúc Bộ Mơn Hóa Học Footer Page of 128 Header Page of 128 NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ CHẤM PHẢN BIỆN Cán chấm phản biện: Đề tài: Góp phần phân lập scopolamine từ Cà độc dƣợc (Datura metel L.), họ Cà (Solanaceae) Sinh viên thực hiện: Lê Hồng Thắm MSSV: 2102482 Lớp: Hóa dƣợc Khóa: 36 Nội dung nhận xét: e Nhận xét hình thức LVTN: f Nhận xét nội dung LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ): Đánh giá nội dung thực đề tài: Những vấn đề hạn chế: g Nhận xét sinh viên tham gia đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): h Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày….tháng….năm 2013 Cán phản biện LỜI CẢM ƠN Quá trình thực luận văn giúp em học hỏi đƣợc nhiều kiến thức bổ ích, nhiều kỹ kinh nghiệm thực tế hỗ trợ tốt cho công viêc sau Để đạt đƣợc kết nhƣ ngày hơm nhờ giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, giai đình, bạn bè Em xin chân thành cảm ơn: Các thầy cô khoa Khoc học Tự nhiên, thầy cô Bộ mơn Hóa vấn học tập thầy Ngoan, thầy cô dẫn dắt lớp chúng em trãi Footer Page of 128 Header Page of 128 qua năm dài quãng đƣờng đại học, tận tình giúp đỡ chúng em học tập dạy cho chúng em kiến thức chuyên nghành thật bổ ích giúp chúng em vững chãi bƣớc đƣờng đời Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đết thầy Lê Thanh Phƣớc, thầy tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu giúp đỡ em suốt thời gian qua Em chân thành cảm ơn anh Lê Văn Nhã Phƣơng anh Dƣơng Hồng Long anh chị cơng ty Cổ phần Xuất nhập Y tế Domesco tận tình bảo giúp em có hội tiếp cận công việc thực tế, mở rộng kiến thức chuyên ngành Cuối cùng, em cảm ơn gia đình bạn lớp Hóa Dƣợc K36 ln động viên giúp đỡ em hoàn thành tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn ! MỤC LỤC Lời cảm ơn Mục lục Danh mục hình Danh mục bảng Danh mục từ viết tắt Tóm tắt CHƢƠNG GIỚI THIỆU Footer Page of 128 Header Page of 128 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan thực vật học 2.1.1 Khái quát họ Cà (Solanaceae) 2.1.2 Giới thiệu Cà độc dƣợc (Datura metel L.) 2.1.3 Thực vật học 2.1.4 Hình thái thực vật 2.1.5 Sinh thái phân bố trồng hái 2.1.6 Thành phần hóa học 2.1.7 Tác dụng dƣợc lý 2.2 Sợ lƣợc alkaloid 2.2.1 Các đặc tính hóa lý alkaloid 2.2.2 Một vài nhóm cấu trúc alkaloid 2.2.3 Phƣơng pháp chiết tách alkaloid khỏi 2.3 Giới thiệu hợp chất scopolamine 2.4 Một vài nghiên cứu khoa học Cà độc dƣợc (Datura metel L.) 2.5 Cơ sở lý thuyết số phƣơng pháp thực nghiệm 10 2.5.1 Kỹ thuật chiết ngâm dầm 10 2.5.2 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng 11 2.2 Phƣơng pháp sắc ký 12 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Các phƣơng tiện 20 3.1.1 Dung mơi, hóa chất 20 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị 20 3.1.3 Phƣơng pháp xác định cấu trúc hàm lƣợng 20 3.1.4 Nguồn gốc nguyên liệu 21 3.1.5 Thời gian địa điểm thực đề tài 21 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 3.2.1 Phƣơng pháp tách chiết 21 3.2.2 Phƣơng pháp phân lập 22 3.3.1 Quá trình điều chế thu cao 25 3.3.2 Phân lập scopolamine từ cao C 27 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Quá trình điều chế loại cao 23 4.1.1 Quá trình điều chế thu cao ethanol 23 4.1.2 Quá trình điều chế cao chloroform (cao C) 23 4.2 Phân lập scopolamine từ cao C 25 4.2.1 Khảo sát SKLM từ cao C 25 4.2.2 Xử lý phân đoạn SC1 28 4.2.3 Xử lý phân đoạn SC2 28 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 5.1 Kết luận 30 Footer Page of 128 Header Page of 128 5.2 Kiến nghị 30 Tài liệu tham khảo 31 Footer Page of 128 Header Page of 128 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 2.4 Hình 2.5 Hình 2.6 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 4.1 Hình 4.2 Hình 4.3 Hình 4.4 Hình 4.5 Hình 4.6 Hình 4.7 Hình 4.8 Hình 4.9 Footer Page of 128 Cây Cà độc dƣợc (Datura metel L.) Vị trí Cà độc dƣợc hệ thống phân loại thực Cây Cà độc dƣợc Công thức scopolamine Cách tính giá trị Rf 13 Cấu trúc mạng silica gel 14 Lá Cà độc dƣợc khô 21 Qui trình điều chế loại cao 22 Cao ethanol từ Cà độc dƣợc 23 Sơ đồ điều chế cao ethanol cao C từ Cà độc dƣợc 25 SKLM scopolamine chuẩn so với cao C 26 SKLM cao C 26 SKC cao C 27 SKLM phân đoạn SC1 27 SCK phân đoạn SC1 28 SKLM phân đoạn SC2 28 SKLM scopolamine chuẩn phân đoạn SC3 28 Header Page 10 of 128 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Một số khung alkaloid Bảng 2.2 Màu vết hợp chất hữu thuốc thử 16 Bảng 3.1 Hóa chất sử dụng 20 Footer Page 10 of 128 Header Page 29 of 128 Có nhiều yếu tố ảnh hƣởng đến khả tách chúng ra, bao gồm: Sự lựa chọn chất hấp phụ Sự lựa chọn dung mơi giải ly Kích thƣớc cột sắc ký, số lƣợng chất hấp phụ, lƣợng mẫu chất đƣợc dung Vận tốc giải ly Sắc ký cột hở đƣợc tiến hành điều kiện áp suất khí Pha tĩnh thƣờng hạt silica gel có kích thƣớc tƣơng đối lớn (50-150 μm) đƣợc nạp cột thủy tinh Mẫu chất cần phân tách đƣợc đặt phần đầu cột, phía pha tĩnh (có lớp thủy tinh che chở để lớp mặt khơng bị xáo trộn), bình chứa dung mơi giải ly đƣợc đặt phía cao Dung mơi giải ly khỏi cột phần bên dƣới cột, đƣợc hứng vào lọ đặt ống dẫn cột Hệ thống nhƣ thƣờng làm cho tách chậm, hiệu tách thấp so với HPLC Tuy vậy, sắc ký cột hở có ƣu điểm nhƣ pha tĩnh dụng cụ thí nghiệm rẻ tiền, dễ kiếm; triển khai với lƣợng lớn mẫu chất b Lựa chọn dung môi để khởi đầu giải ly Các hệ dung mơi dùng cho SKLM ứng dụng vào SKC Tuy vậy, dung mơi có độ sơi q thấp có mùi khó chịu độc khơng nên dùng làm dung mơi giải ly cột Trƣớc triển khai SKC, thiết phải sử dụng SKLM để dò tìm hệ dung mơi giải ly cho phù hợp Sau chọn đƣợc áp dụng hệ dung môi cho sắc ký cột Cần phải chỉnh tỉ lệ dung môi cho có tính phân cực so với hệ dung môi chọn Thông thƣờng nên bắt đầu dung môi không phân cực để loại cách tƣơng đối hợp chất không phân cực khỏi cột kế dung mơi giải ly đƣợc tăng dần độ phân cực để đuổi hợp chất có tính phân cực Muốn thay đổi dung mơi có tính phân cực hơn, phải thay đổi cách cho thêm vào lần vài phần trăm lƣợng dung mơi có tính phân cực vào dung môi giải ly Nếu cho thêm vào đột ngột làm gãy cột silica gel đƣợc trộn với dung môi tạo nhiệt, nhiệt làm cho dung môi bốc cách cục bộ, sinh tạo bọt khí làm nứt, gãy cột, cột gãy làm khả tách cột Thông thƣờng, hợp chất không phân cực di chuyển nhanh đƣợc giải ly khỏi cột trƣớc hợp chất phân cực di chuyển chậm (khối lƣợng phân tử liên quan đến thứ tự giải ly, hợp chất không phân cực có khối lƣợng phân tử lớn di chuyển chậm hợp chất khơng phân cực có khối lƣợng phân tử nhỏ hơn) Footer Page 29 of 128 Header Page 30 of 128 c Kích thƣớc cột sắc ký lƣợng chất hấp phụ Tỷ lệ lƣợng mẫu cần tách lƣợng chất hấp phụ sử dụng Các khảo sát thực nghiệm cho thấy muốn tách tốt trọng lƣợng chất hấp phụ phải lớn 25-50 lần trọng lƣợng mẫu cần sắc ký (tính theo trọng lƣợng) Tuy nhiên, với hỗn hợp hợp chất khó tách riêng cần sử dụng số lƣợng lớn chất hấp phụ nhiều (lớn 100-200 lần), với hỗn hợp dễ tách sử dụng chất hấp phụ Tỷ lệ chiều cao chất hấp thu cột đƣờng kính cột sắc ký Các khảo sát thực nghiệm cho thấy muốn tách chất tốt, chiều cao chất hấp phụ nạp cột cần đạt tỷ lệ: chiều cao chất hấp phụ: đƣờng kính cột vào khoảng (10:1) Muốn biết lƣợng chất hấp phụ có phù hợp với cột cho chất hấp phụ khô vào cột để quan sát d Kỹ thuật nạp mẫu vào đầu cột Có hai cách để nạp mẫu chất cần tách lên đầu cột: nạp mẫu chất dạng dung dịch nạp mẫu chất dạng bột khô Nạp mẫu chất dạng dung dịch Để nạp mẫu vào cột, phải theo tiến trình sau đây: mở khóa cột để hạ mực dung môi xuống sát với mực chất hấp phụ có cột, khóa cột lại, dùng ống nhỏ giọt để hút dung dịch mẫu cho vào đầu cột thật chậm Từ từ mở khóa cột dung dịch mẫu thấm xuống bề mặt chất hấp phụ đầu cột, lúc thấy mức dung dịch xuống sát mực chất hấp phụ khóa cột lại, dung dịch khơng chạy nữa; tiếp tục nạp cho hết lƣợng mẫu chất vào đầu cột Mở khóa để hạ mực dung dịch mẫu xuống sát mặt thống chất hấp phụ, khóa lại, dùng ống nhỏ giọt cho lƣợng nhỏ 5-10 mL dung môi bắt đầu rửa giải vào đầu cột lại mở khóa để dung dịch chảy Nạp mẫu dạng bột khô Nếu chất mẫu không tan dung môi loại dung mơi lựa chọn để bắt đầu q trình giải ly cột, loại dung mơi phân cực, thay phải hòa tan mẫu dung mơi phân cực ảnh hƣởng vào q trình giải ly, nạp mẫu “khơ” Footer Page 30 of 128 Header Page 31 of 128 Trong bình cầu dùng để cô quay, mẫu chất cần sắc ký (x g) đƣợc hòa tan dung mơi nhƣ ethyl acetate methanol (50x g), cho thêm vào silica gel cỡ hạt lớn (10x g) Hỗn hợp đƣợc cô quay chân khơng đến có bột silica gel khơ, giờ, mẫu cần sắc ký đƣợc tẩm lên bề mặt hạt silica gel Đặt mẫu bột khơ lên đầu cột, dùng dung mơi (loại lựa chọn để bắt đầu trình sắc ký cột), thấm ƣớt phần bột silica gel Cho lớp cát dày khoảng 3-6 mm đặt nhẹ lên mặt thoáng chất hấp thu để bảo vệ mặt cột Cuối cho dung môi vào đầy cột để bắt đầu trình giải ly e Theo dõi trình giải ly cột Đối với mẫu nguyên liệu ban đầu có màu, ta theo dõi trình giải ly mắt thƣờng, nhờ nhìn thấy dãy lớp có màu sắc ký khác nhau, tách xa Theo dõi dãy màu hứng chúng đƣợc giải ly khỏi cột Nhƣng đa số hợp chất hữu thƣờng khơng có màu, nên dung dịch giải ly suốt không màu; ta phải theo dõi cách khác Phƣơng pháp thông dụng hứng dung dịch giải ly lọ có đánh số thứ tự Hứng lọ thể tích nhƣ Nên pha lƣợng lớn dung môi giải ly để hạn chế sai lệch nồng độ lọ Dung dịch lọ hứng đƣợc SKLM mỏng Những lọ có kết SKLM giống (giống nhƣng chứa nhiều hợp chất, hỗn hợp) đƣợc gom chung lại với thành phân đoạn Đuổi dung môi áp suất phân đoạn cho cao phân đoạn f Thay đổi hệ dung mơi giải ly cột SKC đƣợc khởi đầu loại dung môi kết sắc ký cao ban đầu Thí dụ khởi đầu SKC ether dầu hỏa, tiếp tục giải ly lọ cuối cùng, hứng dung dịch giải ly ra, đuổi hết dung môi khỏi lọ này, cân lại khơng thấy có cặn cặn khơng đáng kể, đuổi bớt dung mơi chấm sắc ký lớp mỏng mà khơng vết Điều có nghĩa dung mơi ete dầu hỏa lôi hết khỏi cột hợp chất không phân cực cao nạp đầu cột Tiếp theo, cần tăng thêm độ phân cực cho dung mơi giải ly để tiếp tục q trình SKC Lần lƣợt giải ly từ dung môi không phân cực đến dung môi phân cực Footer Page 31 of 128 Header Page 32 of 128 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Các phƣơng tiện 3.1.1 Dung mơi, hóa chất Dung mơi hóa chất sử dụng thực đề tài đƣợc liệt kê bảng sau: Bảng 3.1 Hóa chất sử dụng Tên hóa chất Ethanol 96 Ether dầu hỏa (PE) Chloroform Ethyl acetate (EA) Methanol (Me) Na2SO4 khan H2SO4 Dd NH3 30% Nƣớc cất Silica gel 60 F254 Bản SKLM Nƣớc sản xuất Việt Nam Việt Nam, Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung quốc Trung quốc Trung quốc Việt Nam Merck Merck 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị Dụng cụ, thiết bị: Tủ sấy Máy cô quay Buchi Bếp từ Phễu chiết Bình lóng Cột sắc ký Ống mao quản, giấy lọc Cốc thủy tinh, bình tam giác, ống đong, pipet, lọ thủy tinh, đũa thủy tinh,… 3.1.3 Phƣơng pháp xác định cấu trúc hàm lƣợng Chạy SKLM với chất chuẩn, dùng thuốc thử đặc trƣng, so sánh vết mỏng để định tính có diện chất Xác định hàm lƣợng kiểm tinh khiết phƣơng pháp HPLC Footer Page 32 of 128 Header Page 33 of 128 3.1.4 Nguồn gốc nguyên liệu Lá Cà độc dƣợc đƣợc thu mua tỉnh Tiền Giang vào tháng năm 2013 Lá dạng khô, cắt nhỏ khoảng 1-1,5 cm Hình 3.1 Lá Cà độc dƣợc khô 3.1.5 Thời gian địa điểm thực đề tài Thời gian: tháng 08/2013 đến tháng 11/2013 Địa điểm: Phòng RD (Research Development), nhà máy Dƣợc Liệu, Công ty Cổ phần Xuất nhập Y tế Domesco, tỉnh Đồng Tháp 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.2.1 Phƣơng pháp tách chiết Nguyên liệu đƣợc chiết ethanol phƣơng pháp ngâm dầm, lần ngâm khoảng 24 thu đƣợc dịch chiết Dịch chiết lần ngâm đƣợc gom lại cô quay đuổi dung môi thu đƣợc cao ethanol tổng Điều chế cao chloroform phƣơng pháp chiết lỏng-lỏng, sơ đồ điều chế loại cao: Footer Page 33 of 128 Header Page 34 of 128 Nguyên liệu khô Ngâm dầm với ethanol 96 Dịch chiết cô quay đuổi dung môi Cao ethanol tổng Acid hóa cao ethanol tổng Chiết lỏng-lỏng với PE, chloroform Dịch chiết PE, chloroform Dịch nƣớc acid Kiềm hóa Chiết lỏng-lỏng với chloroform Cao chloroform Hình 3.2 Qui trình điều chế loại cao 3.2.2 Phƣơng pháp phân lập Sử dụng phƣơng pháp SKC để tách chất, dò tìm hệ dung mơi giải ly cột kiểm tra q trình SKC nhƣ mức độ tinh hợp chất SKLM so với chất chuẩn Footer Page 34 of 128 Header Page 35 of 128 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Quá trình điều chế loại cao 4.1.1 Quá trình điều chế thu cao ethanol Mẫu nguyên liệu Cà độc dƣợc khô đƣợc ngâm ethanol 96 với tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:4 Sau thời gian khoảng 24 giờ/mỗi lần ngâm thu lấy dịch chiết, lọc dịch chiết máy lọc áp suất thấp đem cô quay thu hồi dung môi Cứ lặp lại trình thêm lần Sau đó, gom tất lần thu cao lại đƣợc cao ethanol có màu xanh đen (Hình 4.1) Cao ethanol tổng đƣợc gửi Phòng kiểm nghiệm xác định hàm lƣợng sopolamine phƣơng pháp HPLC Hình 4.1 Cao ethanol từ Cà độc dƣợc 4.1.2 Quá trình điều chế cao chloroform (cao C) Cao ethanol thu đƣợc sử dụng cho trình điều chế cao C bƣớc sau: Acid hóa cao ethanol (chuyển alkaloid sang dạng muối) Cho hết lƣợng cao ethanol vào cốc 1000 mL, thêm từ từ dung dịch acid H2SO4 1N vào cốc đựng cao, khuấy thử giấy đo pH vạn đến pH hỗn hợp khoảng 2-3 ngừng cho acid, đun ấm thêm nƣớc cất để Footer Page 35 of 128 Header Page 36 of 128 hòa tan hết cao Hỗn hợp đƣợc lọc máy lọc áp suất thấp tận chiết lần lƣợt với dung môi PE, chloroform để loại bớt tạp Chuẩn bị bình lóng 1000 mL đặt giá đỡ, mở nắp khóa van lại Cho lần 400 mL hỗn hợp cao đƣợc acid hóa cho vào bình lóng, tiếp tục cho thêm dung mơi PE vào bình khoảng 300-400 mL/lần chiết Đóng nắp bình lại, lắc để bình lóng yên giá đỡ khoảng 15-20 phút để hỗn hợp bình lóng tách thành hai lớp: lớp dƣới màu nâu sậm lớp màu xanh đen Mở van, phần dung dịch màu nâu chảy sệt dung dịch chất lỏng màu xanh đen lần lƣợt chảy đƣợc hứng riêng cốc Lấy lớp dƣới tiếp tục chiết với PE màu lớp PE nhạt dần kiểm tra SKLM Nếu thấy khơng vết chứng tỏ chất đƣợc trích hồn tồn vào dung mơi PE, sau gom lớp PE lần chiết lại cô quay thu hồi dung môi Tƣơng tự, phần dịch nƣớc màu nâu sậm đƣợc chiết loại tạp tiếp với dung môi chloroform (300-400 mL/lần chiết) Lắc để yên khoảng 15-20 phút, hỗn hợp bình lóng lúc tách thành hai pha, khác biệt khối lƣợng riêng nên pha nƣớc nằm phía trên, pha hữu nằm phía dƣới Tách lấy pha hữu cô quay thu hồi dung môi chloroform, pha nƣớc đƣợc hứng cốc riêng để tiến hành kiềm hóa Kiềm hóa pha nƣớc (chuyển alkaloid dạng base) Cho từ từ dd NH3 30% vào cốc đựng pha nƣớc, khuấy thử giấy đo pH vạn đến pH hỗn hợp khoảng 9-10 ngừng Sau đó, hỗn hợp đƣợc chiết với dung môi chloroform, kiểm tra SKLM pha hữu phun thuốc thử đặc trƣng Dragendroff khơng thấy vết scopolamine dừng lại Dịch chiết từ dung môi chloroform đƣợc loại nƣớc Na2SO4 khan, cô quay thu đƣợc cao C (gồm họ alkaloid dạng base chất tan chloroform) dung môi chloroform thu hồi Cao C đƣợc gửi Phòng kiểm nghiệm để xác định hàm lƣợng scopolamine phƣơng pháp HPLC Footer Page 36 of 128 Header Page 37 of 128 SƠ ĐỒ ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO Lá Cà độc dƣợc khô (1 kg) Ngâm dầm với ethanol 96 Dịch chiết đƣợc cô quay đuổi dung môi Cao ethanol tổng (250 g) Thêm H2SO4 1N đến pH=2-3, đun ấm Thêm nƣớc cất hòa tan hết cao, lọc Chiết lỏng-lỏng với PE, chloroform Dịch chiết PE, choloroform Dịch nƣớc acid Thêm dd NH3 30% đến pH=9-10 Chiết lỏng-lỏng với chloroform Làm khan, cô quay thu hồi dung mơi Dịch nƣớc lại Cao C (3,8 g) Hình 4.2 Sơ đồ điều chế cao ethanol cao C từ Cà độc dƣợc 4.2 Phân lập scopolamine từ cao C 4.2.1 Khảo sát SKLM từ cao C SKLM cao C scopolamine chuẩn với hệ dung môi EA:Me:NH3 (9:1:0,5), thuốc thử Dragendorff, để quan sát hết toàn alkaloid cao C vị trí vết scopolamine so với alkaloid lại Footer Page 37 of 128 Header Page 38 of 128 Hình 4.3 SKLM scopolamine chuẩn so với cao C Tuy nhiên, hình thuốc thử đặc trƣng Dragendorff khơng thấy đƣợc chất tạp khơng phải alkaloid Để quan sát đầy đủ chất cao phải hình vết mỏng thuốc thử H2SO4 (H2SO4 đậm đặc 20% methanol) Với thuốc thử này, vết họ alkaloid màu vàng nâu Hình 4.4 SKLM cao C Footer Page 38 of 128 Header Page 39 of 128 SKLM cao C với nhiều hệ dung môi khác nhau, nhận thấy hệ dung môi PE-EA (80:20) đẩy vết tạp phân cực lên vị trí Rf ≤ 0,3 mỏng Tiến hành SKC cao C có khối lƣợng 3,8 g với cột có đƣờng kính cm, sử dụng loại silica gel 60 GF254 khối lƣợng 80 g, dung môi giải ly PE, sau tăng dần độ phân cực dung mơi với hệ PE:EA Hứng dung dịch giải ly khỏi cột với thể tích lần 50 mL Theo dõi trình giải ly cột SKLM, gom lọ bi có SKLM vết scopolamine quay đuổi dung mơi Đặt tên phân đoạn có scopolamine SC1, có khối lƣợng 2,01 g Phân đoạn SC1 đƣợc SKLM hình thuốc thử H2SO4, cho vết scopolamine màu vàng nâu kèm theo nhiều tạp màu xám đen Hình 4.5 SKC cao C Footer Page 39 of 128 Hình 4.6 SKLM phân đoạn SC1 Header Page 40 of 128 4.2.2 Xử lý phân đoạn SC1 Tiến hành SKC phân đoạn SC1 có khối lƣợng 2,01 g với cột có đƣờng kính 2,5 cm 40 g silica gel Giải ly cột với dung môi C tăng dần độ phân cực dung môi với hệ C:EA Hứng dung dịch giải ly khỏi cột với thể tích lần 20 mL Theo dõi trình giải ly cột SKLM, gom lọ bi có SKLM vết scopolamine quay đuổi dung môi thu đƣợc phân đoạn SC2 với khối lƣợng 0,92 g Tiến hành SKLM phân đoạn SC2 cho vết scopolamine màu vàng nâu, nhiên tạp kéo Do đó, tiếp tục SKC phân đoạn này, hy vọng phân lập đƣợc scopolamine tinh Hình 4.7 SKC phân đoạn SC1 Hình 4.8 SKLM phân đoạn SC2 4.2.3 Xử lý phân đoạn SC2 Tiến hành SKC phân đoạn SC2 có khối lƣợng 0,92 g, sử dụng buret 25 mL có đƣờng kính cm (thay cho cột sắc ký đƣờng kính cm) 15 g silica gel Giải ly cột với hệ dung môi C:EA (30:70) tăng dần độ phân cực Hứng dung dịch giải ly khỏi cột với thể tích lần 10 mL Theo dõi q trình giải ly cột SKLM, gom lọ bi có SKLM vết scopolamine cô quay đuổi dung môi đƣợc phân đoạn SC3 có khối lƣợng 660 mg Footer Page 40 of 128 Header Page 41 of 128 Kiểm tra lại phân đoạn SC3 SKLM so với scopolamine chuẩn, cho thấy vết giống Rf màu sắc Hình 4.9 SKLM scopolamine chuẩn phân đoạn SC3 Phân đoạn SC3 chất lỏng sệt, màu trắng, tan chloroform, ethanol, không tan PE nƣớc Footer Page 41 of 128 Header Page 42 of 128 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Bƣớc đầu phân lập đƣợc scopolamine từ cà độc dƣợc (Datura metel L.), thu đƣợc kết sau: Hàm lƣợng scopolamine nguyên liệu khô (đƣợc kiểm tra phƣơng pháp HPLC) 0,124% Một kg nguyên liệu khô điều chế đƣợc 250 g cao ethanol tổng phƣơng pháp ngâm dầm, hàm lƣợng scopolamine cao tổng 0,374%, hiệu suất chiết scopolamine giai đoạn nguyên liệu-cao ethanol 75,4% Điều chế cao chloroform từ cao ethanol với khối lƣợng 3,8 g, hàm lƣợng sopolamine cao choloroform 21%, hiệu suất chiết scopolamine giai đoạn nguyên liệu-cao chloroform 64,4% Đã tiến hành SKC 3,8 g cao C, thu đƣợc phân đoạn có scopolamine (SC3) có khối lƣợng 660 mg Hiệu suất trình chiết scopolamine từ Cà độc dƣợc 53,2% 5.2 Kiến nghị Nghiên cứu tách chiết scopolamine hệ thống CO2 siêu tới hạn Kiểm tra phân đoạn SC3 HPLC IR để có đƣợc đánh giá xác Bán tổng hợp scopolamine tạo số dẫn xuất: Scopolamine hydrobromide (C17H21NO4.HBr.3H2O); Scopolamine hydrochloride (C17H21NO4.HCl); Scopolamine methylnitrate (C17H21NO4.CH3NO3) Footer Page 42 of 128 Header Page 43 of 128 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Tất Lợi, 2004 Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học [2] http://vi.wikipedia.org/wiki/Họ-Cà, truy cập ngày 24-10-2013 [3] http://www.duoclieu.org/2012/02/ca-oc-duoc-datura-metel-l-ho-ca.html, truy cập ngày 18-10-2013 [4] Tôn Nữ Liên Hƣơng, 2008 Nghiên cứu hợp chất thiên nhiên, Giáo trình đại học, khoa Khoa học Tự Nhiên, trƣờng Đại học Cần Thơ [5] Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [6] http://www.drugfuture.com/chemdata/scopolamine.html, truy cập ngày 12-08-2013 [7] Varahalarao Vadlapudi D.S.V.G.K.Kaladhar, 2012 Antimicrobial study of plant extracts of Datura metelL against some important disease causing pathogens, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, S94-S97 [8] Bing-You Yang, Yong-Gang Xia, Qiu-Hong Wang, De-Qiang Dou, Hai-Xue Kuang, 2010 Two new amide alkaloids from theflower of Datura metelL., Fitoterapia, 81: 1003-1005 [9] Avaratnarajah Kuganathan Sashikesh Ganeshalingam, 2010 Chemical Analysis of Datura Metel Leaves and Investigation of the Acute Toxicity on Grasshoppers and Red Ants, E-Journal of Chemistry, 8(1): 107-112 [10] Nguyễn Thị Diệp Chi, 2008 Bài giảng phương pháp phân tích đại, Đại học Cần Thơ Footer Page 43 of 128 ... cứu phân lập hợp chất có giá trị y học Với mong muốn bƣớc đầu phân lập hợp chất scopolamine, đề tài đƣợc chọn để thực Góp phần phân lập scopolamine từ Cà đơc dƣợc (Datura metel L.), họ Cà (Solanaceae)”... TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC −−−−−− LÊ HỒNG THẮM GÓP PHẦN PHÂN LẬP SCOPOLAMINE TỪ CÀ ĐỘC DƢỢC (DATURA METEL L.), HỌ CÀ (SOLANACEAE) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN... BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Năm học 2013-2014 Đề tài: “GÓP PHẦN PHÂN LẬP SCOPOLAMINE TỪ CÀ ĐỘC DƢỢC DATURA METEL L., HỌ CÀ (SOLANACEAE)” LỜI CAM ĐOAN …………………………………………………………………………………
Ngày đăng: 01/03/2019, 21:23
Xem thêm: