Góp phần phân lập scopolamine từ cà đôc dược (datura metel l ), họ cà (solanaceae)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC −−−−−− LÊ HỒNG THẮM LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA DƢỢC MSSV: 2102482 CẦN THƠ 11–2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC −−−−−− LÊ HỒNG THẮM GÓP PHẦN PHÂN LẬP SCOPOLAMINE TỪ CÀ ĐỘC DƯỢC (DATURA METEL L.), HỌ CÀ (SOLANACEAE) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA DƯỢC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS LÊ THANH PHƯỚC CẦN THƠ 11–2013 BQ GIAO Dl)C VA DAO T O TRUONG DI HQC CAN THO NHIEN KHOA KHOA HO C TU Nam hc 2013-2014 D tai: "GOP PHAN PHAN LP SCOPOLAMINE TU CA DQC DUQC DATURA METEL L., HQ CA (SOLANACEAE)" LOI CAM DOAN Cn tha, thang nam 2013 Le HBng Thm Luiitn van t6t nghip di hc Chuyen nganh: H6a Duqc Ua bao v va dU'Q'C duyt Hi" vA u trna0 ng: Trn6ng Khoa: Trn6ng Chuyen nganh Can b9 hu6ng diln TS Le Thanh Phu&c Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập – Tự – Hạnh phúc Bộ Mơn Hóa Học NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn: TS Lê Thanh Phước Đề tài: Góp phần phân lập scopolamine từ Cà độc dược (Datura metel L.), họ Cà (Solanaceae) Sinh viên thực hiện: Lê Hồng Thắm MSSV: 2102482 Lớp: Hóa dược Khóa: 36 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày….tháng….năm 2013 Cán hướng dẫn Lê Thanh Phước Trường Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập – Tự – Hạnh phúc Bộ Mơn Hóa Học NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ CHẤM PHẢN BIỆN Cán chấm phản biện: Đề tài: Góp phần phân lập scopolamine từ Cà độc dược (Datura metel L.), họ Cà (Solanaceae) Sinh viên thực hiện: Lê Hồng Thắm MSSV: 2102482 Lớp: Hóa dược Khóa: 36 Nội dung nhận xét: e Nhận xét hình thức LVTN: f Nhận xét nội dung LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: g Nhận xét sinh viên tham gia đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): h Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày….tháng….năm 2013 Cán phản biện LỜI CẢM ƠN Quá trình thực luận văn giúp em học hỏi nhiều kiến thức bổ ích, nhiều kỹ kinh nghiệm thực tế hỗ trợ tốt cho công viêc sau Để đạt kết ngày hơm nhờ giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, giai đình, bạn bè Em xin chân thành cảm ơn: Các thầy cô khoa Khoc học Tự nhiên, thầy cô Bộ môn Hóa vấn học tập thầy Ngoan, thầy cô dẫn dắt lớp chúng em trãi qua năm dài quãng đường đại học, tận tình giúp đỡ chúng em học tập dạy cho chúng em kiến thức chuyên nghành thật bổ ích giúp chúng em vững chãi bước đường đời Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đết thầy Lê Thanh Phước, thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu giúp đỡ em suốt thời gian qua Em chân thành cảm ơn anh Lê Văn Nhã Phương anh Dương Hồng Long anh chị cơng ty Cổ phần Xuất nhập Y tế Domesco tận tình bảo giúp em có hội tiếp cận công việc thực tế, mở rộng kiến thức chuyên ngành Cuối cùng, em cảm ơn gia đình bạn lớp Hóa Dược K36 ln động viên giúp đỡ em hoàn thành tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn ! MỤC LỤC Lời cảm ơn Mục lục Danh mục hình Danh mục bảng Danh mục từ viết tắt Tóm tắt CHƯƠNG GIỚI THIỆU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan thực vật học 2.1.1 Khái quát họ Cà (Solanaceae) 2.1.2 Giới thiệu Cà độc dược (Datura metel L.) 2.1.3 Thực vật học 2.1.4 Hình thái thực vật 2.1.5 Sinh thái phân bố trồng hái 2.1.6 Thành phần hóa học 2.1.7 Tác dụng dược lý 2.2 Sợ lược alkaloid 2.2.1 Các đặc tính hóa lý alkaloid 2.2.2 Một vài nhóm cấu trúc alkaloid 2.2.3 Phương pháp chiết tách alkaloid khỏi 2.3 Giới thiệu hợp chất scopolamine 2.4 Một vài nghiên cứu khoa học Cà độc dược (Datura metel L.) 2.5 Cơ sở lý thuyết số phương pháp thực nghiệm 10 2.5.1 Kỹ thuật chiết ngâm dầm 10 2.5.2 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng 11 2.2 Phương pháp sắc ký 12 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Các phương tiện 20 3.1.1 Dung mơi, hóa chất 20 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị 20 3.1.3 Phương pháp xác định cấu trúc hàm lượng 20 3.1.4 Nguồn gốc nguyên liệu 21 3.1.5 Thời gian địa điểm thực đề tài 21 3.2 Phương pháp nghiên cứu 21 3.2.1 Phương pháp tách chiết 21 3.2.2 Phương pháp phân lập 22 3.3.1 Quá trình điều chế thu cao 25 3.3.2 Phân lập scopolamine từ cao C 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Quá trình điều chế loại cao 23 4.1.1 Quá trình điều chế thu cao ethanol 23 4.1.2 Quá trình điều chế cao chloroform (cao C) 23 4.2 Phân lập scopolamine từ cao C 25 4.2.1 Khảo sát SKLM từ cao C 25 4.2.2 Xử lý phân đoạn SC1 28 4.2.3 Xử lý phân đoạn SC2 28 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 5.1 Kết luận 30 5.2 Kiến nghị 30 Tài liệu tham khảo 31 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình 2.2 Hình 2.3 Hình 2.4 Hình 2.5 Hình 2.6 Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 4.1 Hình 4.2 Hình 4.3 Hình 4.4 Hình 4.5 Hình 4.6 Hình 4.7 Hình 4.8 Hình 4.9 Cây Cà độc dược (Datura metel L.) Vị trí Cà độc dược hệ thống phân loại thực Cây Cà độc dược .4 Công thức scopolamine Cách tính giá trị Rf .13 Cấu trúc mạng silica gel .14 Lá Cà độc dược khô 21 Qui trình điều chế loại cao 22 Cao ethanol từ Cà độc dược 23 Sơ đồ điều chế cao ethanol cao C từ Cà độc dược .25 SKLM scopolamine chuẩn so với cao C 26 SKLM cao C 26 SKC cao C 27 SKLM phân đoạn SC1 .27 SCK phân đoạn SC1 28 SKLM phân đoạn SC2 .28 SKLM scopolamine chuẩn phân đoạn SC3 28 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Một số khung alkaloid Bảng 2.2 Màu vết hợp chất hữu thuốc thử 16 Bảng 3.1 Hóa chất sử dụng 20 Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến khả tách chúng ra, bao gồm:  Sự lựa chọn chất hấp phụ  Sự lựa chọn dung mơi giải ly  Kích thước cột sắc ký, số lượng chất hấp phụ, lượng mẫu chất dung  Vận tốc giải ly Sắc ký cột hở tiến hành điều kiện áp suất khí Pha tĩnh thường hạt silica gel có kích thước tương đối lớn (50-150 μm) nạp cột thủy tinh Mẫu chất cần phân tách đặt phần đầu cột, phía pha tĩnh (có lớp thủy tinh che chở để lớp mặt không bị xáo trộn), bình chứa dung mơi giải ly đặt phía cao Dung mơi giải ly khỏi cột phần bên cột, hứng vào lọ đặt ống dẫn cột Hệ thống thường làm cho tách chậm, hiệu tách thấp so với HPLC Tuy vậy, sắc ký cột hở có ưu điểm pha tĩnh dụng cụ thí nghiệm rẻ tiền, dễ kiếm; triển khai với lượng lớn mẫu chất b Lựa chọn dung môi để khởi đầu giải ly Các hệ dung môi dùng cho SKLM ứng dụng vào SKC Tuy vậy, dung mơi có độ sơi q thấp có mùi khó chịu độc không nên dùng làm dung môi giải ly cột Trước triển khai SKC, thiết phải sử dụng SKLM để dò tìm hệ dung mơi giải ly cho phù hợp Sau chọn áp dụng hệ dung môi cho sắc ký cột Cần phải chỉnh tỉ lệ dung mơi cho có tính phân cực so với hệ dung mơi chọn Thông thường nên bắt đầu dung môi không phân cực để loại cách tương đối hợp chất không phân cực khỏi cột kế dung mơi giải ly tăng dần độ phân cực để đuổi hợp chất có tính phân cực Muốn thay đổi dung mơi có tính phân cực hơn, phải thay đổi cách cho thêm vào lần vài phần trăm lượng dung mơi có tính phân cực vào dung mơi giải ly Nếu cho thêm vào đột ngột làm gãy cột silica gel trộn với dung môi tạo nhiệt, nhiệt làm cho dung môi bốc cách cục bộ, sinh tạo bọt khí làm nứt, gãy cột, cột gãy làm khả tách cột Thông thường, hợp chất không phân cực di chuyển nhanh giải ly khỏi cột trước hợp chất phân cực di chuyển chậm (khối lượng phân tử liên quan đến thứ tự giải ly, hợp chất khơng phân cực có khối lượng phân tử lớn di chuyển chậm hợp chất khơng phân cực có khối lượng phân tử nhỏ hơn) c Kích thước cột sắc ký lượng chất hấp phụ  Tỷ lệ lượng mẫu cần tách lượng chất hấp phụ sử dụng Các khảo sát thực nghiệm cho thấy muốn tách tốt trọng lượng chất hấp phụ phải lớn 25-50 lần trọng lượng mẫu cần sắc ký (tính theo trọng lượng) Tuy nhiên, với hỗn hợp hợp chất khó tách riêng cần sử dụng số lượng lớn chất hấp phụ nhiều (lớn 100-200 lần), với hỗn hợp dễ tách sử dụng chất hấp phụ  Tỷ lệ chiều cao chất hấp thu cột đường kính cột sắc ký Các khảo sát thực nghiệm cho thấy muốn tách chất tốt, chiều cao chất hấp phụ nạp cột cần đạt tỷ lệ: chiều cao chất hấp phụ: đường kính cột vào khoảng (10:1) Muốn biết lượng chất hấp phụ có phù hợp với cột cho chất hấp phụ khơ vào cột để quan sát d Kỹ thuật nạp mẫu vào đầu cột Có hai cách để nạp mẫu chất cần tách lên đầu cột: nạp mẫu chất dạng dung dịch nạp mẫu chất dạng bột khô  Nạp mẫu chất dạng dung dịch Để nạp mẫu vào cột, phải theo tiến trình sau đây: mở khóa cột để hạ mực dung môi xuống sát với mực chất hấp phụ có cột, khóa cột lại, dùng ống nhỏ giọt để hút dung dịch mẫu cho vào đầu cột thật chậm Từ từ mở khóa cột dung dịch mẫu thấm xuống bề mặt chất hấp phụ đầu cột, lúc thấy mức dung dịch xuống sát mực chất hấp phụ khóa cột lại, dung dịch không chạy nữa; tiếp tục nạp cho hết lượng mẫu chất vào đầu cột Mở khóa để hạ mực dung dịch mẫu xuống sát mặt thoáng chất hấp phụ, khóa lại, dùng ống nhỏ giọt cho lượng nhỏ 5-10 mL dung môi bắt đầu rửa giải vào đầu cột lại mở khóa để dung dịch chảy  Nạp mẫu dạng bột khô Nếu chất mẫu không tan dung môi loại dung môi lựa chọn để bắt đầu trình giải ly cột, loại dung mơi phân cực, thay phải hòa tan mẫu dung mơi phân cực ảnh hưởng vào q trình giải ly, nạp mẫu “khơ” Trong bình cầu dùng để cô quay, mẫu chất cần sắc ký (x g) hòa tan dung mơi ethyl acetate methanol (50x g), cho thêm vào silica gel cỡ hạt lớn (10x g) Hỗn hợp cô quay chân khơng đến có bột silica gel khơ, giờ, mẫu cần sắc ký tẩm lên bề mặt hạt silica gel Đặt mẫu bột khô lên đầu cột, dùng dung mơi (loại lựa chọn để bắt đầu trình sắc ký cột), thấm ướt phần bột silica gel Cho lớp cát dày khoảng 3-6 mm đặt nhẹ lên mặt thoáng chất hấp thu để bảo vệ mặt cột Cuối cho dung môi vào đầy cột để bắt đầu trình giải ly e Theo dõi trình giải ly cột Đối với mẫu nguyên liệu ban đầu có màu, ta theo dõi q trình giải ly mắt thường, nhờ nhìn thấy dãy lớp có màu sắc ký khác nhau, tách xa Theo dõi dãy màu hứng chúng giải ly khỏi cột Nhưng đa số hợp chất hữu thường khơng có màu, nên dung dịch giải ly suốt khơng màu; ta phải theo dõi cách khác Phương pháp thông dụng hứng dung dịch giải ly lọ có đánh số thứ tự Hứng lọ thể tích Nên pha lượng lớn dung môi giải ly để hạn chế sai lệch nồng độ lọ Dung dịch lọ hứng SKLM mỏng Những lọ có kết SKLM giống (giống chứa nhiều hợp chất, hỗn hợp) gom chung lại với thành phân đoạn Đuổi dung môi áp suất phân đoạn cho cao phân đoạn f Thay đổi hệ dung môi giải ly cột SKC khởi đầu loại dung môi kết sắc ký cao ban đầu Thí dụ khởi đầu SKC ether dầu hỏa, tiếp tục giải ly lọ cuối cùng, hứng dung dịch giải ly ra, đuổi hết dung môi khỏi lọ này, cân lại khơng thấy có cặn cặn không đáng kể, đuổi bớt dung môi chấm sắc ký lớp mỏng mà khơng vết Điều có nghĩa dung mơi ete dầu hỏa lôi hết khỏi cột hợp chất không phân cực cao nạp đầu cột Tiếp theo, cần tăng thêm độ phân cực cho dung môi giải ly để tiếp tục trình SKC Lần lượt giải ly từ dung môi không phân cực đến dung môi phân cực CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Các phương tiện 3.1.1 Dung môi, hóa chất Dung mơi hóa chất sử dụng thực đề tài liệt kê bảng sau: Bảng 3.1 Hóa chất sử dụng Tên hóa chất Nước sản xuất Ethanol 96 Ether dầu hỏa (PE) Chloroform Ethyl acetate (EA) Methanol (Me) Na2SO4 khan H2SO4 Dd NH3 30% Nước cất Silica gel 60 F254 Bản SKLM Việt Nam Việt Nam, Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung Quốc Trung quốc Trung quốc Trung quốc Việt Nam Merck Merck 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị Dụng cụ, thiết bị:  Tủ sấy  Máy cô quay Buchi  Bếp từ  Phễu chiết  Bình lóng  Cột sắc ký  Ống mao quản, giấy lọc  Cốc thủy tinh, bình tam giác, ống đong, pipet, lọ thủy tinh, đũa thủy tinh,…   3.1.3 Phương pháp xác định cấu trúc hàm lượng Chạy SKLM với chất chuẩn, dùng thuốc thử đặc trưng, so sánh vết mỏng để định tính có diện chất Xác định hàm lượng kiểm tinh khiết phương pháp HPLC 3.1.4 Nguồn gốc nguyên liệu Lá Cà độc dược thu mua tỉnh Tiền Giang vào tháng năm 2013 Lá dạng khô, cắt nhỏ khoảng 1-1,5 cm Hình 3.1 Lá Cà độc dược khơ   3.1.5 Thời gian địa điểm thực đề tài Thời gian: tháng 08/2013 đến tháng 11/2013 Địa điểm: Phòng RD (Research Development), nhà máy Dược Liệu, Cơng ty Cổ phần Xuất nhập Y tế Domesco, tỉnh Đồng Tháp 3.2 Phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Phương pháp tách chiết Nguyên liệu chiết ethanol phương pháp ngâm dầm, lần ngâm khoảng 24 thu dịch chiết Dịch chiết lần ngâm gom lại cô quay đuổi dung môi thu cao ethanol tổng Điều chế cao chloroform phương pháp chiết lỏng-lỏng, sơ đồ điều chế loại cao: Nguyên liệu khô Ngâm dầm với ethanol 96 Dịch chiết cô quay đuổi dung mơi Cao ethanol tổng Acid hóa cao ethanol tổng Chiết lỏng-lỏng với PE, chloroform Dịch chiết PE, chloroform Dịch nƣớc acid Kiềm hóa Chiết lỏng-lỏng với chloroform Cao chloroform Hình 3.2 Qui trình điều chế loại cao 3.2.2 Phương pháp phân lập Sử dụng phương pháp SKC để tách chất, dò tìm hệ dung mơi giải ly cột kiểm tra trình SKC mức độ tinh hợp chất SKLM so với chất chuẩn CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Quá trình điều chế loại cao 4.1.1 Quá trình điều chế thu cao ethanol Mẫu nguyên liệu Cà độc dược khô ngâm ethanol 96với tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 1:4 Sau thời gian khoảng 24 giờ/mỗi lần ngâm thu lấy dịch chiết, lọc dịch chiết máy lọc áp suất thấp đem cô quay thu hồi dung môi Cứ lặp lại q trình thêm lần Sau đó, gom tất lần thu cao lại cao ethanol có màu xanh đen (Hình 4.1) Cao ethanol tổng gửi Phòng kiểm nghiệm xác định hàm lượng sopolamine phương pháp HPLC Hình 4.1 Cao ethanol từ Cà độc dược 4.1.2 Quá trình điều chế cao chloroform (cao C) Cao ethanol thu sử dụng cho trình điều chế cao C bước sau:  Acid hóa cao ethanol (chuyển alkaloid sang dạng muối) Cho hết lượng cao ethanol vào cốc 1000 mL, thêm từ từ dung dịch acid H2SO4 1N vào cốc đựng cao, khuấy thử giấy đo pH vạn đến pH hỗn hợp khoảng 2-3 ngừng cho acid, đun ấm thêm nước cất để hòa tan hết cao Hỗn hợp lọc máy lọc áp suất thấp tận chiết với dung môi PE, chloroform để loại bớt tạp Chuẩn bị bình lóng 1000 mL đặt giá đỡ, mở nắp khóa van lại Cho lần 400 mL hỗn hợp cao acid hóa cho vào bình lóng, tiếp tục cho thêm dung mơi PE vào bình khoảng 300-400 mL/lần chiết Đóng nắp bình lại, lắc để bình lóng n giá đỡ khoảng 15-20 phút để hỗn hợp bình lóng tách thành hai lớp: lớp màu nâu sậm lớp màu xanh đen Mở van, phần dung dịch màu nâu chảy sệt dung dịch chất lỏng màu xanh đen chảy hứng riêng cốc Lấy lớp tiếp tục chiết với PE màu lớp PE nhạt dần kiểm tra SKLM Nếu thấy khơng vết chứng tỏ chất trích hồn tồn vào dung mơi PE, sau gom lớp PE lần chiết lại cô quay thu hồi dung môi Tương tự, phần dịch nước màu nâu sậm chiết loại tạp tiếp với dung môi chloroform (300-400 mL/lần chiết) Lắc để n khoảng 15-20 phút, hỗn hợp bình lóng lúc tách thành hai pha, khác biệt khối lượng riêng nên pha nước nằm phía trên, pha hữu nằm phía Tách lấy pha hữu cô quay thu hồi dung môi chloroform, pha nước hứng cốc riêng để tiến hành kiềm hóa  Kiềm hóa pha nước (chuyển alkaloid dạng base) Cho từ từ dd NH3 30% vào cốc đựng pha nước, khuấy thử giấy đo pH vạn đến pH hỗn hợp khoảng 9-10 ngừng Sau đó, hỗn hợp chiết với dung mơi chloroform, kiểm tra SKLM pha hữu phun thuốc thử đặc trưng Dragendroff không thấy vết scopolamine dừng lại Dịch chiết từ dung mơi chloroform loại nước Na2SO4 khan, cô quay thu cao C (gồm họ alkaloid dạng base chất tan chloroform) dung môi chloroform thu hồi Cao C gửi Phòng kiểm nghiệm để xác định hàm lượng scopolamine phương pháp HPLC SƠ ĐỒ ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO Lá Cà độc dƣợc khô (1 kg) Ngâm dầm với ethanol 96 Dịch chiết đƣợc cô quay đuổi dung môi Cao ethanol tổng (250 g) Thêm H2SO4 1N đến pH=2-3, đun ấm Thêm nƣớc cất hòa tan hết cao, lọc Ch Dịch chiết PE, choloroform Dịch nƣớc acid Thêm dd NH3 30% đến pH=9-10 Chiết lỏng-lỏng với chlorofor Làm khan, cô quay thu hồi dung mơi Dịch nƣớc lại Cao C (3,8 g) Hình 4.2 Sơ đồ điều chế cao ethanol cao C từ Cà độc dược 4.2 Phân lập scopolamine từ cao C 4.2.1 Khảo sát SKLM từ cao C SKLM cao C scopolamine chuẩn với hệ dung mơi EA:Me:NH3 (9:1:0,5), thuốc thử Dragendorff, để quan sát hết toàn alkaloid cao C vị trí vết scopolamine so với alkaloid lại Hình 4.3 SKLM scopolamine chuẩn so với cao C Tuy nhiên, hình thuốc thử đặc trưng Dragendorff khơng thấy chất tạp khơng phải alkaloid Để quan sát đầy đủ chất cao phải hình vết mỏng thuốc thử H2SO4 (H2SO4 đậm đặc 20% methanol) Với thuốc thử này, vết họ alkaloid màu vàng nâu Hình 4.4 SKLM cao C SKLM cao C với nhiều hệ dung môi khác nhau, nhận thấy hệ dung môi PE-EA (80:20) đẩy vết tạp phân cực lên vị trí Rf ≤ 0,3 mỏng Tiến hành SKC cao C có khối lượng 3,8 g với cột có đường kính cm, sử dụng loại silica gel 60 GF254 khối lượng 80 g, dung môi giải ly PE, sau tăng dần độ phân cực dung mơi với hệ PE:EA Hứng dung dịch giải ly khỏi cột với thể tích lần 50 mL Theo dõi trình giải ly cột SKLM, gom lọ bi có SKLM vết scopolamine quay đuổi dung mơi Đặt tên phân đoạn có scopolamine SC1, có khối lượng 2,01 g Phân đoạn SC1 SKLM hình thuốc thử H2SO4, cho vết scopolamine màu vàng nâu kèm theo nhiều tạp màu xám đen Hình 4.5 SKC cao C Hình 4.6 SKLM phân đoạn SC1 4.2.2 Xử lý phân đoạn SC1 Tiến hành SKC phân đoạn SC1 có khối lượng 2,01 g với cột có đường kính 2,5 cm 40 g silica gel Giải ly cột với dung môi C tăng dần độ phân cực dung môi với hệ C:EA Hứng dung dịch giải ly khỏi cột với thể tích lần 20 mL Theo dõi trình giải ly cột SKLM, gom lọ bi có SKLM vết scopolamine quay đuổi dung môi thu phân đoạn SC2 với khối lượng 0,92 g Tiến hành SKLM phân đoạn SC2 cho vết scopolamine màu vàng nâu, nhiên tạp kéo Do đó, tiếp tục SKC phân đoạn này, hy vọng phân lập scopolamine tinh Hình 4.7 SKC phân đoạn SC1 Hình 4.8 SKLM phân đoạn SC2 4.2.3 Xử lý phân đoạn SC2 Tiến hành SKC phân đoạn SC2 có khối lượng 0,92 g, sử dụng buret 25 mL có đường kính cm (thay cho cột sắc ký đường kính cm) 15 g silica gel Giải ly cột với hệ dung môi C:EA (30:70) tăng dần độ phân cực Hứng dung dịch giải ly khỏi cột với thể tích lần 10 mL Theo dõi q trình giải ly cột SKLM, gom lọ bi có SKLM vết scopolamine cô quay đuổi dung môi phân đoạn SC3 có khối lượng 660 mg Kiểm tra lại phân đoạn SC3 SKLM so với scopolamine chuẩn, cho thấy vết giống Rf màu sắc Hình 4.9 SKLM scopolamine chuẩn phân đoạn SC3 Phân đoạn SC3 chất lỏng sệt, màu trắng, tan chloroform, ethanol, không tan PE nước CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Bước đầu phân lập scopolamine từ cà độc dược (Datura metel L.), thu kết sau:  Hàm lượng scopolamine nguyên liệu khô (được kiểm tra phương pháp HPLC) 0,124%  Một kg nguyên liệu khô điều chế 250 g cao ethanol tổng phương pháp ngâm dầm, hàm lượng scopolamine cao tổng 0,374%, hiệu suất chiết scopolamine giai đoạn nguyên liệu-cao ethanol 75,4%  Điều chế cao chloroform từ cao ethanol với khối lượng 3,8 g, hàm lượng sopolamine cao choloroform 21%, hiệu suất chiết scopolamine giai đoạn nguyên liệu-cao chloroform 64,4%  Đã tiến hành SKC 3,8 g cao C, thu phân đoạn có scopolamine (SC3) có khối lượng 660 mg Hiệu suất trình chiết scopolamine từ Cà độc dược 53,2%    5.2 Kiến nghị Nghiên cứu tách chiết scopolamine hệ thống CO2 siêu tới hạn Kiểm tra phân đoạn SC3 HPLC IR để có đánh giá xác Bán tổng hợp scopolamine tạo số dẫn xuất:  Scopolamine hydrobromide (C17H21NO4.HBr.3H2O);  Scopolamine hydrochloride (C17H21NO4.HCl);  Scopolamine methylnitrate (C17H21NO4.CH3NO3) TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Tất Lợi, 2004 Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học [2] http://vi.wikipedia.org/wiki/Họ-Cà, truy cập ngày 24-10-2013 [3] http://www.duoclieu.org/2012/02/ca-oc-duoc-datura-metel-l-ho-ca.html, truy cập ngày 18-10-2013 [4] Tôn Nữ Liên Hương, 2008 Nghiên cứu hợp chất thiên nhiên, Giáo trình đại học, khoa Khoa học Tự Nhiên, trường Đại học Cần Thơ [5] Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [6] http://www.drugfuture.com/chemdata/scopolamine.html, truy cập ngày 12-08-2013 [7] Varahalarao Vadlapudi D.S.V.G.K.Kaladhar, 2012 Antimicrobial study of plant extracts of Datura metelL against some important disease causing pathogens, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, S94-S97 [8] Bing-You Yang, Yong-Gang Xia, Qiu-Hong Wang, De-Qiang Dou, HaiXue Kuang, 2010 Two new amide alkaloids from theflower of Datura metelL., Fitoterapia, 81: 1003-1005 [9] Avaratnarajah Kuganathan Sashikesh Ganeshalingam, 2010 Chemical Analysis of Datura Metel Leaves and Investigation of the Acute Toxicity on Grasshoppers and Red Ants, E-Journal of Chemistry, 8(1): 107-112 [10] Nguyễn Thị Diệp Chi, 2008 Bài giảng phương pháp phân tích đại, Đại học Cần Thơ ... thực Góp phần phân l p scopolamine từ Cà đôc dược (Datura metel L. ), họ Cà (Solanaceae) CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan thực vật học 2.1.1 Khái quát họ Cà (Solanaceae) Họ Cà hay gọi họ. .. Cây Cà độc dược (Datura metel L. ) Cây Cà độc dược, tên khoa học Datura metel L. , thuộc họ Cà (Solanaceae) Tên gọi khác: Cây cà dược, cà diên, cà l c dược (Tày), mạn đà la, sùa tùa (H’mơng), hìa...TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC −−−−−− L HỒNG THẮM GĨP PHẦN PHÂN L P SCOPOLAMINE TỪ CÀ ĐỘC DƯỢC (DATURA METEL L. ), HỌ CÀ (SOLANACEAE) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN