Phân lập vi khuẩn lactic từ ruột cá

Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu riêng tơi với hướng dẫn TS Nguyễn Thị Hai khoa CNSH-TP-MT trường Đại học Cơng Nghệ thành phố Hồ Chí Minh Mọi số liệu hình ảnh đồ án số liệu hình ảnh riêng tôi, không chép hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án hồn tồn trung thực Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm đồ án tơi Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực Phan Thị Gìn Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Nguyễn Thị Hai, người tận tình giúp đỡ, bảo em hoàn thành tốt đồ án tốt nghiệp Em chân thành cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành hỗ trợ trình em làm đồ án phòng thí nghiệm trường Đại học Công Nghệ Tp HCM Đồng thời em xin gửi lời cám ơn đến quý Thầy, Cô khoa Công Nghệ Sinh Học-Thực Phẩm - Môi Trường trường đại học Cơng Nghệ thành phố Hồ Chí Mnh truyền tải kiến thức cho em trình học tập trường để em có kiến thức để hồn thành đồ án tốt nghiệp minh Kiến thức khơng giúp em hồn thành đồ án tốt nghiệp mà tảng hữu ích cho cơng việc em sau Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đinh em, người chỗ dựa tinh thần quý báo em giúp em vượt qua khó khăn cơng việc hoc hành sống Em xin gửi lời cám ơn đến bạn phòng thí nghiệm giúp đỡ, hỗ trợ em trình thực đồ án tốt nghiệp Và cuối cùng, em xin gửi lời cám ơn đến Hộ đồng phản biện giành thời gian theo đọc nhận xét đồ án tốt nghiệp em Em xin kính chúc q Thầy Cơ nhiều sức khỏe Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm2016 Sinh Viên thực Phan Thị Gìn Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1.Đặt vấn đề 2.Nội dung nghiên cứu 3.Mục đích nghiên cứu 4.Phương pháp nghiên cứu 5.Đối tượng phạm vi nghiên cứu 6.Ý nghĩa đề tài 7.Các kết đề tài 8.Kết cấu đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa vi khuẩn lactic Đặc điểm hình thái Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 1.1.2.1 Nhu cầu dinh dưỡng cacbon 1.1.2.2 Nhu cầu dinh dưỡng nitơ 1.1.2.3 Nhu cầu dinh dưỡng vitamin 1.1.2.4 Nhu cầu muối khoáng 1.2 Đặc điểm phân loại vi khuẩn lactic 1.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình trao đổi chất vi khuẩn Lactic 10 Ảnh hưởng oxy 10 Ảnh hưởng nhiệt độ 11 Ảnh hưởng pH 12 Ảnh hưởng nồng độ NaCl 13 Ảnh hưởng nồng độ glucose 13 1.4 Lên men lactic vi khuẩn lactic 13 1.5 Sự phân bố vi khuẩn lactic tự nhiên 14 i Đồ án tốt nghiệp 1.6 Môt số ứng dụng vi khuẩn lactic 14 i Đồ án tốt nghiệp Trong công nghiệp thực phẩm 14 Trong công nghiệp 15 Trong nông nghiệp môi trường 16 Trong chăn nuôi 16 1.7 Tình hình nghiên cứu giới 16 1.8 Tình hình nghiên cứu nước 18 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Vật liệu nghiên cứu 20 Nguồn vật liệu nghiên cứu 20 Thời gian nghiên cứu: 20 Chủng vi khuẩn đối chứng 20 Dụng cụ thiết bị 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 Phương pháp thu mẫu 21 Phương pháp phân lập mẫu 21 Phương pháp làm 21 Thử nghiệm sinh hóa 22 2.2.4.1 Thử nghiệm khả tiết enzyme catalse 22 2.2.4.2 Phương pháp nhuộm Gram 23 2.2.4.3 Phương pháp nhuộm bào tử 24 2.2.4.4 Phương pháp thử khả phân giải CaCO3 25 2.2.4.5 Phương pháp thử khả di động 25 2.2.4.6 Khảo sát khả lên men loại đường khác 26 2.2.4.7 Thử nghiệm idole 27 2.2.4.8 Thử nghiệm methyl red 28 2.2.4.9 Thử nghiệm voges proskauer 29 2.2.4.10 Thử nghiệm Simmon citrate 29 2.3 Sơ đồ quy trình phân lập mẫu 31 ii Đồ án tốt nghiệp 2.4 Khảo sát khả kháng khuẩn chủng vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá 31 Khảo sát khả kháng khuẩn 31 Phương pháp nghiên cứu tính kháng loài vi khuẩn lactic với chủng Bacillus phân lập từ ruột cá 32 Khảo sát khả sinh acid lactic mối liên hệ với mật độ tế bào 33 Khảo sát ảnh hưởng độ mặn đến tốc độ tăng trưởng tế bào 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn nghi ngờ vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá 35 Hình thái khuẩn lạc 35 Kết nhuộm Gram 35 Kết nhuộm bào tử 35 Kết test sinh hóa 38 3.1.4.1 Kết thử catalase 38 3.1.4.2 Kết thử indole 39 3.1.4.3 Kết thử nghiệm Methyl Red 40 3.1.4.4 Kêt thử nghiệm Voges Proskauer (VP) 41 3.1.4.5 Kết thử nghiệmsimmon citrate 41 3.1.4.6 Kết khả di động 42 3.1.4.7 Kết lên men cacbohydrate 43 3.1.4.8 Kết lên men Glucose 43 3.1.4.9 Kết lên men Lactose 44 3.1.4.10 Lên men Sucrose 45 3.1.4.11 Lên men Arabinose 45 3.1.4.12 Kết khả phân giải CaCO3 46 3.2 Mối liên hệ mật độ tế bào khả sinh acid tổng 49 Đồ án tốt nghiệp 3.3 Khả kháng khuẩn vi khuẩn lactic phân lập 50 kháng E.coli 50 Kết đối kháng với Salmonella 52 Đồ án tốt nghiệp 3.4 Kết khả đối kháng với vi khuẩn Staphylococcus 53 3.5 Kết khả đối kháng chủng Bacillus 55 3.6 Kết ảnh hưởng độ mặn đến tốc độ tăng trưởng tế bào vi khuẩn latic 57 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 4.1 Kết luận 60 4.2 Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC PHỤ LỤC A: THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG VÀ MƠI TRƯỜNG THỬ SINH HĨA TRONG CÁC THÍ NGHIỆM PHỤ LỤC B: ĐƯỜNG CONG TĂNG TRƯỞNG CỦA CHỦNG VI KHUẨN LACTIC PHÂN LẬP ĐƯỢC PHỤ LỤC C KẾT QUẢ MẬT ĐỘ TẾ BÀO TRONG CÁC ĐỘ MẶN KHÁC NHAU PHỤ LỤC D KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ PHỤ LỤC E: HÌNH ẢNH 21 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Nhiệt độ thích hợp cho giống vi khuẩn lactic 11 Bảng 1.2 Khoảng pH thích hợp vi khuẩn lactic 12 Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái tế bào vi khuẩn lactic nghi ngờ vi khuẩn lactic 36 Bảng 3.2 Đặc điểm vi khuẩn nghi ngờ vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá 37 Bảng 3.3: khả phân giải CaCO3 môi trường MRS 46 Bảng 3.4 Kết test sinh hóa loại vi khuẩn lactic 47 Bảng 3.5 Hàm lượng acid tổng có vi khuẩn phân lập từ ruột cá 49 Bảng 3.6 Bảng kết đối kháng E.coli 51 Bảng 3.7 Kết đối kháng Salmonella 52 Bảng 3.8: Kết đối kháng vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá với vi khuẩn Staphylococcus 54 Bảng 3.9: Kết đối kháng chủng vi khuẩn lactic vi khuẩn Bacillus phân lập từ ruột cá……………………………………………………………………………….54 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Quy trình phân lập vi khuẩn lactic 31 Hình 3.1 Kết thử catalase chủng vi khuẩn phân lập từ ruột cá 39 Hình 3.2 kết thử nghiệm indole 40 Hình 3.4 kết thử nghiệm VP 41 Hình 3.5 Kết qua thử nghiệm simon citrate 42 Hình 3.6 Kết thử khả di động 43 Hình 3.7 Kết thử nghiệm lên men Glucose 44 Hình 3.8 Kết thử nghiệm lên men Lactose 44 Hình 3.9 Kết thử nghiệm lên men Sucrose 45 Hình 3.10 Kết thử nghiệm lên men Arabinose 44 Hình 3.11 Biểu đồ thể mối quan hệ hàm lượng % tổng OD hiệu chỉnh 48 Hình 3.12 Kết hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn E coli 51 Hình 3.13 Kết hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Salmonella 53 Hình 3.14 Kết hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn Staphylococcus 54 Hình 3.15 Biểu đồ ảnh hưởng độ mặn đến tốc độ tăng trưởng vi sinh vật 58 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 22 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 23 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 24 Đồ án tốt nghiệp E.2 KẾT QUẢ VỀ KHẢ NĂNG SỐNG HÒA HỢP Ủ VI KHUẨN LACTIC VÀ VI KHUẨN BACILLUS PHÂN LẬP TỪ RUỘT CÁ T T e ê n n c c h h ủ L B ủ B D H L B B D H 25 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 26 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 27 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 28 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 29 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 30 Đồ án tốt nghiệp L B B D H L B B D H L B B D H 31 Đồ án tốt nghiệp E.3.KẾT QUẢ KHÁNG KHUẨN L B L B L B 32 Đồ án tốt nghiệp L B L B L B 33 Đồ án tốt nghiệp L B L B L B 34 Đồ án tốt nghiệp L B S L B L B 35 Đồ án tốt nghiệp L B L B L B 36 ... Kết đối kháng vi khuẩn lactic phân lập từ ruột cá với vi khuẩn Staphylococcus 54 Bảng 3.9: Kết đối kháng chủng vi khuẩn lactic vi khuẩn Bacillus phân lập từ ruột cá …………………………………………………………………………….54... Phân lập chủng vi khuẩn lactic Định danh sơ chủng vi khuẩn lactic  Định lượng axít lactic sinh chủng vi khuẩn lactic phân lập  Đánh giá số đặc tính kháng khuẩn vi khuẩn lactic điều kiện invitro... thiểu vi c ô nhiễm môi trường Các kết đề tài Phân lập chủng vi sinh vật có khả tiết acid lactic bacteriocine có ruột cá Từ kết phân lập định danh sơ cho thấy chủng vi sinh vật phân lập vi khuẩn lactic