Phân lập vi khuẩn bacillus subtilis từ ruột cá

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP BACILLUS SUBTILIS TỪ RUỘT CÁ Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : T.S NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực MSSV: 1211100074 : HỒNG SẾCH HẾNH Lớp: 12DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2016 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thân hướng dẫn TS Nguyễn Thị Hai, giảng viên khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh Những kết có đồ án hồn tồn khơng chép từ đồ án tốt nghiệp người khác hình thức Các số liệu trích dẫn đồ án tốt nghiệp hồn tồn trung thực Tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm đồ án TP HCM, ngày 19 tháng 08 năm 2016 Sinh viên thực Hồng Sếch Hếnh ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Thị Hai tận tình hướng dẫn, bảo em suốt thời gian xây dựng đề cương, thực hoàn thành đồ án Em xin cám ơn đến thầy Huỳnh Văn Thành giúp đỡ, hỗ trợ tạo điều kiện tốt suốt trình em thực đồ án Em xin gửi lời cảm ơn đến quý Thầy, Cô khoa công nghệ Sinh học - Thực phẩm - Mơi trường tận tình bảo truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học tập để vận dụng kiến thức tảng vào thực đồ án Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình chăm sóc, dạy dỗ làm chỗ dựa tinh thần động viên, hỗ trợ kinh tế cho em suốt năm qua trình thực đồ án Em xin cám ơn đến bạn thực đề tài phòng thí nghiệm quan tâm, hỗ trợ em làm đồ án tốt nghiệp Cuối em xin cám ơn Thầy Cô Hội đồng phản biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án Em xin gửi lời chúc sức khỏe đến q Thầy Cơ Tp Hồ Chí Minh, 19 tháng năm 2016 Sinh viên thực Hồng Sếch Hếnh ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .1 LỜI CẢM ƠN .2 MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu 2.1 Tình hình nghiên cứu nước 2.2 Tình hình nghiên cứu nước 3 Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu .4 Ý nghĩa đề tài khoa học Các kết đạt đề tài Kết cấu đồ án tốt nghiệp .5 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .6 Đại cương Bacillus subtilis 1.1.Lịch sử phát 1.2.Đặc điểm phân loại phân bố vi khuẩn Bacillus subtilis 1.2.1.Đặc điểm phân loại 1.2.2.Phân bố 1.3.Đặc điểm hình thái [36] 1.4.Đặc điểm phân lập, nuôi cấy 1.4.1.Đặc điểm phân lập 1.4.2.Đặc điểm sinh hóa 1.5.Đặc điểm tế bào khả sinh bào tử 1.5.1.Đặc điểm tế bào 1.5.2.Cấu tạo bào tử 10 1.6.Tính đối kháng khả sinh bacteriocin 11 1.7.Ứng dụng Bacillus sản xuất đời sống [9] 11 i ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 1.8.Giới thiệu enzyme amylase protease tế bào 12 1.8.1.Enzyme amylase [12] 12 1.8.2.Enzyme protease 15 1.9.Một số enzyme cá 19 1.10.1.Thành phần cá, phụ phế phẩm cá 20 1.10.2.Tình hình đánh bắt, sản xuất Việt Nam 21 1.11.Phân bón có nguồn gốc từ cá 23 CHƯƠNG 2: VÂT LIÊU VA PHƯƠNG PHAP NGHIÊN CƯU 24 2.1.Thời gian địa điểm thực đề tài 24 2.1.1.Địa điểm nghiên cứu: 24 2.1.2.Thời gian nghiên cứu 24 2.2.Vật liệu nghiên cứu: 24 2.2.3.Thiết bị dụng cụ 25 2.3.Bố trí thí nghiệm .26 2.3.1.Bố trí thí nghiệm chung 26 2.3.2.Bố trí thí nghiệm chi tiết 26 2.4.Phương pháp nghiên cứu .30 2.4.1.Phương pháp thu mẫu xử lý mẫu 30 2.4.2.Phương pháp tăng sinh 30 2.4.3.Phương pháp pha loãng mẫu 30 2.4.4.Phương pháp phân lập vi khuẩn có khả phân giải protein [14] 31 2.4.5.Phương pháp định tính khả sinh protease chủng vi khuẩn phân lập 31 2.4.6.Kiểm tra độ khiết giống : 32 2.4.8.Phương pháp cấy chuyền [38] 32 2.4.9.Phương pháp bảo quản lạnh sâu : 32 2.4.10.Các phương pháp xác định đặc điểm hình thái 33 2.4.11.Các thử nghiệm sinh hóa chủng vi khuẩn phân lập nghi ngờ Bacillus subtilis 34 ii ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 2.4.12.Phương pháp đục lỗ thạch 37 2.4.13.Phương pháp nghiên cứu khả phân giải tinh bột, protein 38 2.4.14.Phương pháp xử lý số liệu thống kê 38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1.Kết phân lập lựa chọn chủng có khả Bacillus subtilis 39 3.2.Kết thử nghiệm sinh hóa 42 3.2.1.Kết test catalase 42 3.2.2.Nhuộm gram 42 3.2.3.Nhuộm bào tử 44 3.2.4.Kết thử nghiệm Citrate 45 3.2.5.Kết thử nghiệm Nitrate 46 3.2.6.Thử nghiệm MR - VP 47 3.2.7.Thử nghiệm indole 49 3.2.8.Thử nghiệm di động 50 3.2.9.Thử nghiệm lên men Carbohydrate 51 3.2.10.Khảo sát khả sinh enzyme protease amylase ngoại bào chủng vi khuẩn đề tài phân lập 52 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 4.1.Kết luận 58 4.2.Đề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO .59 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Kết định danh Bacillus subtiblis Bảng Phân loại protease theo Barret, 1984 18 Bảng Thành phần khối lượng cá tra số loài cá khác 22 Bảng Đặc điểm hình thái cụ thể chủng vi khuẩn đồ án phân lập .39 Bảng Kết định tính enzyme ngoại bào amylase protease chủng vi khuẩn phân lập 53 Bảng 3 Kết định danh sơ test sinh hóa chủng vi khuẩn phân lập từ ruột cá 55 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC HÌNH Hình 1 Tế bào Bacillus subtilis .6 Hình Sản lượng khai thác nuôi trồng thủy sản Việt Nam từ 1995 - 2015 22 Hình Sơ đồ bố trí bước thí nghiệm 26 Hình 2 Sơ đồ quy trình phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis có ruột cá .27 Hình Quy trình dịnh danh sơ chủng phân lập 29 Hình Kết thử nghiệm catalase .42 Hình Hình thái tế bào chủng vi khuẩn phân lập nhuộm Gram 44 Hình 3 Kết nhuộm soi bào tử chủng phân lập 45 Hình 4.Thử nghiệm Citrate chủng phân lập 46 Hình 3.5 Kết khảo sát khả khử nitrate chủng vi khuẩn phân lập .47 Hình Hình ảnh test Methyl red chủng phân lập 48 Hình 3.7 Kết phản ứng VP chủng vi khuẩn phân lập 49 Hình Phản ứng test indol chủng phân lập 50 Hình Khả di động chủng phân lập 51 Hình 10 Hình ảnh đặc trưng môi trường khảo sát khả lên men đường .52 Hình 11 Khảo sát định tính protease Casein agar với thuốc thử TCA 10 % 54 Hình 12 Kết test định tính enzyme amylase chủng vi khuẩn phân lập 55 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT N N A ut ri N N B ut ie M M R et hy V V P og es F F o A o O T Tr C ic A hl ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Hình 10 Hình ảnh đặc trưng môi trường khảo sát khả lên men đường 3.2.10.Khảo sát khả sinh enzyme protease amylase ngoại bào chủng vi khuẩn đề tài phân lập Các chủng vi khuẩn phân lập ruột cá nên nghi ngờ chúng có khả tiết enzyme ngoại bào hỗ trợ tiêu hóa cho vật chủ (cá) tiêu hóa thức ăn có thành phần protein, tinh bột, cellulose… nhiên hạn hẹp thời gian nên đề tài nghiên cứu khả sinh enzyme protease amylase ngoại bào chủng vi khuẩn phân lập Do nghiên cứu đề tài khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào protease amylase chủng vi khuẩn phân lập môi trường Starch agar % Casein agar % Bảng Kết định tính enzyme ngoại bào amylase protease chủng vi khuẩn phân lập C h B D B D B D B D B D B D B D B D A pr m ot + + + + + + + + + + + + + + + + 3.2.10.1 Thử nghiệm protease Các chủng vi khuẩn phân lập được đem thử nghiệm hoạt tính protease với chất Casein sử dụng thuốc thử TCA 10 % để rõ vòng phân giải đĩa thạch Kết thử nghiệm cho thấy chủng phân giải protease với đường kính vòng phân giải lớn chứng minh chủng vi khuẩn có khả tiết protease mạnh Điều giải thích sau: chủng vi khuẩn phân lập từ ruột cá ăn nhiều thức ăn protein nên chúng có hệ enzyme protease phong phú, hoạt tính mạnh Hình ảnh test thử nghiệm kiểm tra định tính khả sinh enzyme protease: Hình 11 Khảo sát định tính protease Casein agar với thuốc thử TCA 10 % Tất chủng phân lập có khả tiết enzyme protease ngoại bào mạnh đường kính vòng phân giải lớn chủng BDH3 với đường kính 14 mm đường kính vòng phân giải nhỏ chủng BDH2 với đường kính vòng phân giải mm Kết vòng phân giải protein chủng cao hẳn so với kết vòng phân giải amylase chúng chủng sống đường ruột cá ăn nhiều thịt nên hệ enzyme protease chúng mạnh Vì chủng vi khuẩn tiết mạnh protease nên đề tài chọn chủng để khảo sát ảnh hưởng pH đến hoạt tính enzyme protease 3.2.10.2 Thử nghiệm Amylase Sử dụng thuốc nhuộm Lugol cho chất tinh bột, khuẩn lạc vi khuẩn phân lập phân giải chất tinh bột đường kính vòng phân giải lại yếu Các chủng có sinh enzyme tạo vòng phân giải suốt xung quanh điểm cấy BDH1 BDH2 BDH3 BDH4 BDH5 BDH6 BDH8 BDH10 Hình 12 Kết test định tính enzyme amylase chủng vi khuẩn phân lập Các chủng phân lập có khả sinh enzyme amylase gần nhiên lại có đường kính vòng phân giải khơng lớn, đường kính vòng phân giải từ - mm Nguyên nhân chủng vi khuẩn có khả sinh amylase mà vòng phân giải lại yếu chúng phân lập từ nguồn ruột cá, mà lồi cá lại có thức ăn chủ yếu tinh bột (cá ngừ, cá nục, cá diêu hồng) Sau thực loạt test thử nghiệm sinh hóa, kết định danh sơ chủng nghi ngờ Bacillus subtilis có kết bảng sau: Bảng 3 Kết định danh sơ test sinh hóa chủng vi khuẩn phân lập từ ruột cá Chủng T h N h u N h u D i In d Si m m N itr V P M R C at T h ủ T h ủ y L ên m L ên m L ên m L ên m L ên m B D H + B D H + B D H + B D H + B D H + B D H + B D H + B D H + + + + + + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - + + + + + + + + Ghi chú: (+) dương tính; (-) âm tính Kết khảo sát cho thấy chủng vi khuẩn Gram dương, có khả sinh bào tử, thử nghiệm Catalase dương tính, có khả phân giải Casein tinh bột Vi khuẩn có khả tiết enzyme amylase, protease để thủy phân chất môi trường thành amino acid phân tử nhỏ tế bào sử dụng cho trình trao đổi chất để sinh trưởng phát triển Theo nghiên cứu Holt (1994) (trích Lý Kim Hữu, 2005) Bacillus subtilis vi khuẩn gram dương, có khả sinh bào tử, có thử nghiệm Catalase, Amylase, protease, MR - VP, Nitrate, Citrate dương tính, indol âm tính, có khả lên men loại đường Glucose, Sucrose, Maltose, Mannitol Trên sở kết dịnh danh sơ cho thấy chủng phân lập có khả Bacillus subtilis [14] CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Đề tài phân lập Bacillus subtilis ruột cá đạt số kết sau: Từ mẫu ruột cá thu thập từ chợ phân lập chủng vi khuẩn có đặc điểm hình thái, sinh hóa Bacillus subtilis Từ chủng phân lập chủng có khả phân giải protein tốt 4.2 Đề nghị Do thời gian nghiên cứu hạn hẹp nên đề tài dừng lại việc phân lập khảo sát ảnh hưởng pH đến khả phân giải protein chủng Một số hướng nghiên cứu tiếp cho đề tài hoàn thiện thêm là: Nghiên cứu yếu tố môi trường ảnh hưởng đến tăng trưởng thu enzyme chủng Nghiên cứu phối hợp chủng với với chủng khác nhằm thủy phân phụ phế phẩm giàu protein Tiếp tục phân lập thêm nhiều chủng vi khuẩn có khả phân giải protein mạnh ruột cá TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1].Nguyễn Thị Bảo Khánh, Huỳnh Thị Bích Hạnh, Nguyễn Thị Kim Hương, Phan Thị Bich Nga, Lâm Nguyễn Duy Anh, Phạm Huyền Ngân, Lê Thị Kiều, 2014 Báo cáo nghiên cứu phát triển sản phẩm tận dụng phụ phế phẩm cá tra - basa [2].Đỗ Thị Thanh Hương Trương Thị Mộng Thu, Giá trị dinh dưỡng cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) khai thác sản phẩm giá trị gia tăng Bộ môn Dinh dưỡng Chế biến Thủy sản Khoa Thủy sản – Đại học Cần Thơ [3].Phạm Thị Hải Âu, 2011 Nghiên cứu ứng dụng công nghệ enzyme để sản xuất sản phẩm protein thủy phân từ cá tạp phế liệu nhà máy chế biến cá [4].Lê Văn Hưng, 2003 Phát triển Nông nghiệp hữu giới hướng phát triển Việt Nam Hội thảo “Thông tin quản lý vườn ăn theo hướng hữu cơ” [5].Nguyễn Văn Bộ, 2000 Nông nghiệp hữu Việt Nam - thách thức hội Báo cáo hội thảo “Hướng tới hội mở rộng xuất sản phẩm Nông nghiệp hữu Việt Nam” [6].Lê Quốc Phong, Phạm Anh Cường, Mai Văn Quyền, 2014 Ứng dụng công nghệ sinh học sản xuất phân hữu [7].Huy Thông, 2015 Hiệu sử dụng đất nơng nghiệp Việt Nam thấp [8].Lý Kim Hữu, 2005 Khảo sát đặc điểm vi khuẩn Bacillus subtilis tìm hiểu điều kiện ni cấy thích hợp sản xuất thử nghiệm chế phẩm probiotic LVTN, khoa chăn nuôi thú y, Trường Đại học Nông Lâm TP.HCM [9].Bùi Thị Phi, 2007 Phân lập, khảo sát đặc điểm vi khuẩn Bacillus subtilis tìm hiểu khả sinh enzyme vi khuẩn để sản xuất thử nghiệm chế phẩm sinh học [10].Nguyễn Thị Trần Thụy, 2009 Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus phân lập từ đất vườn sinh protease kiềm [11].Giáo trình vi sinh đại cương BSTY Nguyễn Xuân Hòa - PGS TS Phạm Hồng Sơn Trường Đại Học Nông Lâm Huế - Khoa Chăn Nuôi –Thú Y - Bộ môn Ký sinh – Truyền nhiễm [12].Ngô Tự Thành, Bùi Thị Việt Hà, Vũ Minh Đức, Chu Văn Mẫn, 2009 Nghiên cứu hoạt tính enzyme ngoại bào số chủng Bacillus phân lập khả ứng dụng chúng xử lý nước thải [13].Nguyễn Hồi Hương Cơng nghệ enzyme Giáo trình giảng dạy [14].Nguyễn Huỳnh Mai Nhi, 2015 Phân lập số chủng vi sinh vật chịu mặn có khả phân hủy protein nước thải chế biến thủy sản [15].Phạm Minh Nhựt Các phương pháp phân tích vi sinh vật Giáo trình giảng dạy [16] Phạm Minh Nhựt Thực hành vi sinh đại cương Giáo trình giảng dạy [17].Thời thị Bích Nga, 2011 Phương pháp bảo quản chế biến cá [18].Giá trị dinh dưỡng cá tra (pangasianodon hypophthalmus) khai thác sản phẩm giá trị gia tăng Đỗ Thanh Hương Trương Thị Mộng Thu Bộ môn dinh dưỡng chế biến thủy sản khoa thủy sản đại học Cần thơ [19].Nguyễn Thị Hồng Đậm, 2015 Nghiên cứu sử dụng enzyme protease thương mại việc sản xuất nước mắm cá đù Tài liệu tiếng anh [20].Rahul Krishnan, 2014 Probiotic potential of Bacillus species isolated from freshwater fish Anabas testudineus in Labeo rohita [21].Cohn, ferdinand (1872) Uber Untersuchungen Bacterien Beitrage zur Biologie der PFLANZEN.1.pp.127-224 [22].Nakano, Michiko M ; Zuber, Peter (1998) "Anaerobic Growth of A "Strict Aerobe" (Bacillus Subtilis)" Annual Review of Microbiology 52(1) 165-90 doi 10,1146 / annurev Micro.52.1.165.PMID 9.891.797 [23] Odisha, India Mrunmaya kumar panda, 2013 Isolation and characterization of a thermophilic Bacillus sp with protease activity isolated from hot spring of Tarabalo [24].Isolation and identification of Bacillus subtilis as probiotic from intestinal microflora of common carp Cyprinus carpio L 2012 [25].Eric Weinert, Jr.1, Sherri A Miller1, David M Ikeda1, Kim C S Chang1, Joseph M McGinn1, and Michael W DuPonte2, 2014 Natural Farming: Fish Amino Acid [26].P ESAKKIRAJ, G Immanuel, S.M Sowmya, P lyapparaj, A.Palavesam, 2009 Evaluation of Protease-producing Ability of Fish Gut Isolate Bacillus cereus for Aqua Feed Tài liệu internet [27].https://websrv1.ctu.edu.vn/coursewares/thuysan/dinhduongthucanthuysan/ddvathucan/CHUONG1.htm [28].http://www.mard.gov.vn/Pages/news_detail.aspx?NewsId=42956 [29] http://www.mard.gov.vn/Pages/news_detail.aspx?NewsId=44797 [30] http://luanvan.net.vn/luan-van/de-tai-tan-dung-phe-lieu-tu-ca-37945/ [31] http://vasep.com.vn/1192/OneContent/tong-quan-nganh.htm [32].https://voer.edu.vn/m/thanh-phan-hoa-hoc-va-tinh-chat-cua-dong-vat-thuysan/b9fbb727 [33] http://tomvang.com/tin-tuc/tan-dung-phu-pham-tu-che-bien-thuy-san/ [34].http://tailieu.vn/doc/bao-cao-nghien-cuu-ung-dung-enzyme-protease-tu-vikhuan-bacillus-subtilis-de-thuy-phan-phu-pham 1494062.html [35].http://doan.edu.vn/do-an/luan-van-nghien-cuu-thu-nhan-enzyme-tu-phe-lieuca-24959/ [36] http://web.mst.edu/~microbio/BIO221_2009/B_subtilis.html [37] https://en.wikipedia.org/wiki/Bacillus_subtilis [38].http://luanvan.co/luan-van/de-tai-xac-dinh-moi-truong-toi-uu-de-thu-sinh-khoiva-enzyme-cua-vi-khuan-bacillus-subtilis-lactobacillus-acidophilus-27984/ [39] https://en.wikipedia.org/wiki/Glycerol [40]http://www.iasj.net/iasj?func=fulltext&aId=66521 PHỤ LỤC PHỤ LỤC A: THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG VÀ MƠI TRƯỜNG THỬ NGHIỆM SINH HĨA TRONG CÁC THÍ NGHIỆM A1 Thành phần môi trường NB tăng sinh Pepton/trypton 7,5 g/l Meat extract 3g/l Yeast extract 5g/l NaCl 5g/l Succrose 5g/l Nước cất 1000 ml A2 Thành phần môi trường NA Pepton 7,5 g/l Meat extract 3g/l Yeast extract 5g/l NaCl 5g/l Sucrose 5g/l Agar 20g/l Nước cất 1000 ml A3 Môi trường lên men carbohydrate Pepton 7,5 g/l Meat extract 3g/l Yeast extract 5g/l NaCl 5g/l Carbohydrate 10g/l Methyl red 0.002g/l Agar 20g/l Nước cất 1000 ml A4 Mơi trường thử nghiệm hoạt tính protease Casein 10g/l Agar 20g/l Nước cất 1000 ml A5 Môi trường thử nghiệm hoạt tính Amylase Starch 10g/l Agar 20g/l Nước cất 1000 ml PHỤ LỤC B : BẢNG KẾT QUẢ VÒNG PHÂN GIẢI CASEIN p tê L L L Gi H n ần ần ần p B 1 H D p B 1 H D p B 1 H D 3 p B 1 H D 9 p B 1 H D 8 p B 1 H D p B 1 H D p B 1 H D 5 p B 1 H D p B 1 H D p B 1 H D 3 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p pH H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H p H B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D B D 7 12 61 41 61 71 91 91 61 31 71 71 61 62 42 21 71 51 41 6 6 16 81 81 61 61 82 01 51 41 61 51 81 92 12 51 81 61 41 5 12 61 31 61 61 81 61 31 71 51 71 72 12 21 51 61 42 ... phân lập Bacillus subtilis từ ruột cá Jamal K.H Al Faragi Sundus A.A Alsaphar, 2012 hay Rahul Krishnan phân lập từ cá nước ngọt, 2014 Mục đích nghiên cứu Phân lập chủng vi khuẩn Bacillus subtilis. .. cứu thử nghiệm chủng vi khuẩn có khả phân giải protein từ nguồn ruột cá thu thập từ chợ - Phạm vi giới hạn đề tài: Vi khuẩn Bacillus subtilis phân giải protein có nguồn gốc từ cá Ý nghĩa đề tài... phẩm từ cá bảo vệ môi trường Các kết đạt đề tài - Phân lập chủng vi khuẩn có khả sinh enzyme protease phân giải protein từ cá, từ kết phân lập sau định danh sơ phản ứng test sinh hóa đặc trưng Bacillus