KỸ THUẬT CHUẨN BỊ TINH TRÙNG CHO PHƯƠNG PHÁP IUI (IntraUterine Insemination)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC J K KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ THUẬT CHUẨN BỊ TINH TRÙNG CHO PHƯƠNG PHÁP IUI (IntraUterine Insemination) Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : BÙI THỊ TƠN THẤT Niên khóa : 2006 - 2010 Tháng 07/2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC J K KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ THUẬT CHUẨN BỊ TINH TRÙNG CHO PHƯƠNG PHÁP IUI (IntraUterine Insemination) Hướng dẫn khoa học ThS BS HOÀNG THỊ DIỄM TUYẾT CNXN LẠI VĂN TẦM Tháng 07/2010 Sinh viên thực BÙI THỊ TÔN THẤT LỜI CẢM ƠN Trải qua tháng thực tập phòng xét nghiệm Nam Khoa, khoa Hiếm Muộn Bệnh Viện Từ Dũ Tp HCM, thời gian ngắn ngủi học nhiều kiến thức kỹ thuật cần thiết, tất nhờ vào giúp đỡ dạy bảo tận tình bác sĩ anh chị phòng xét nghiệm Nam Khoa, khoa Hiếm Muộn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc, phòng Kế Hoạch Tổng Hợp Bệnh Viện Từ Dũ ThS.BS Hoàng Thị Diễm Tuyết tạo điều kiện cho tơi có hội thực tập, xin gửi lời cảm ơn đến anh chị phòng xét nghiệm Nam Khoa giúp tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Con xin cảm ơn cha mẹ anh hai nuôi khôn lớn đến ngày hơm nay, gia đình dìu dắt nâng đỡ cho bước vào đời, chỗ dựa tinh thần cho vấp ngã Khơng có gia đình khơng có ngày hơm “Công cha nghĩa mẹ ơn thầy” Thầy cô người lái đò tận tụy giúp tơi dòng sơng kiến thức dìu dắt tơi qua năm đại học Con xin chân thành cảm ơn tập thể thầy trường đại học Nơng Lâm nói chung thầy cô Bộ môn Công nghệ sinh học nói riêng Thầy khơng cho kiến thức chun mơn mà truyền đạt cho cách đối nhân xử thế, kinh nghiệm sống quý báu Con xin chân thành biết ơn dạy dỗ tận tình tập thể thầy trường thầy cô qua đời Bốn năm đại học cho tơi có người bạn tốt Các bạn bên cạnh, chia sẻ giúp đỡ nhiều Đời sinh viên tơi thật có ý nghĩa tuyệt vời có bạn: tập thể lớp DH06SH, anh chị, bạn ký túc xá… Xin chân thành cảm ơn nhớ bạn thân yêu Xin chúc tất người hạnh phúc, yên vui thành cơng i TĨM TẮT Cơ chế sinh lý thụ tinh người phức tạp hiệu Sự ảnh hưởng yếu tố bên ngồi (mơi trường sống làm việc….) yếu tố bên (hormone ) dẫn đến tình trạng muộn, vơ sinh có trường hợp vơ sinh khơng rõ ngun nhân Chính vậy, đời phát triển kỹ thuật hỗ trợ sinh sản giải phần lớn nhu cầu điều trị bệnh nhân khiếm khuyết khả sinh sản Cùng với phát triển kỹ thuật này, việc sử dụng tinh trùng qua lọc rửa (chuẩn bị tinh trùng) trở thành tiêu chuẩn phương pháp điều trị sinh sản, đặc biệt phương pháp IUI (phương pháp đơn giản, rẻ tiền phổ biến nhất) mang đến thành công cao cho IUI Đề tài “Kỹ thuật chuẩn bị tinh trùng cho phương pháp IUI” thực qua hai bước chính: Phân tích tinh dịch đồ đánh giá khả sinh sản, dựa vào kết chọn lọc phương pháp lọc rửa tinh trùng phù hợp Sử dụng hai phương pháp lọc rửa: Swim – up Gradient với qui định chất lượng tinh trùng khác đối tượng mẫu tinh dịch khác Kết quả: Chọn lọc tinh trùng chất lượng cao, loại bỏ thành phần bất lợi tinh dịch trình thụ tinh Mối quan hệ tỷ lệ có thai điều trị IUI chất lượng tinh trùng sau chuẩn bị, thấy hiệu phương pháp chuẩn bị tinh trùng điều trị vô sinh IUI ii SUMMARY Fertility mechanism of human is complex and less effective The common reason led to this thing that influences of outside facts (working and living environment) and inside facts (hormone) can lead to sterile problems, or infertile cases don’t know reasons The origination and development of assisted reproductive techniques tackled many demands of patients who don’t have fertilizable ability Beside this development of techniques, sperm preparation (washed sperm) has become not only criteria for using in assisted reproductive techniques, especially in IUI (the most cheap and popular technique), but also have brought the successes in treatment The thesis “preparing sperm for IUI method” is carried out by two main stages: Doing semen analysis, assessing fertilizable ability, and basing on result analysis to choose suitable preparation Using two washed methods: Swim – up and Gradient with different requirements about number, motility, viscosity of sperm and so on Results: Sperm preparations either select sperms have high quality or decrease negative components of semen which affect fertilization Relationship between pregnancy rate in IUI treatment and quality of washed sperm This thing will point out the usefulness of sperm preparation iii MỤC LỤC Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Summary iii Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách bảng .vii Danh sách hình ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Nội dung thực 1.3 Yêu cầu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ sở khoa hoc 2.1.1 Đại cương trình hình thành tinh trùng người 2.1.1.1 Sơ lược tinh trùng 2.1.1.2 Quá trình sinh tinh 2.1.1.3 Sự di chuyển tinh trùng 12 2.1.2 Sự phát triển noãn, trưởng thành nỗn phóng nỗn 13 2.1.2.1 Sự hình thành nỗn 16 2.1.2.2 Sự phát triển nang noãn 17 2.1.2.3 Sự di chuyển nang noãn 20 2.1.2.4 Tác động số kích thích sinh dục lên sinh nỗn 20 2.1.3 Sinh lý thụ tinh 22 2.1.4 Sơ lược kỹ thuật IUI 26 2.2 Cơ sở thực tiễn 28 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Thời gian địa điểm 32 3.2 Nội dung nghiên cứu 32 3.3 Phương pháp thực 32 3.3.1 Quy trình phân tích tinh dịch đồ 32 3.3.2 Phương pháp chuẩn bị tinh trùng 46 iv 3.3.2.1 Đại cương 46 3.3.2.2 Phương pháp Swim - up 47 3.3.2.3 Phương pháp Gradient 49 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 4.1 Kết 51 4.2 Thảo luận 54 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Đề nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT CKKH : Chu kỳ kinh nguyệt CNSH : Công Nghệ Sinh Học E2 : Estradiol FSH : Follicle Stimulating Hormone - hormone kích thích nang trứng GH : Human Growth Hormone - hormone phát triển thể Giai đoạn GV : Giai đoạn Germinal Vesicle Giai đoạn MII : Giai đoạn metaphase II (giai đoạn noãn trưởng thành có phóng nỗn) GnRH : Gonadotropin Releasing hormone - hormone giải phóng FSH LH ICSI : Intracytoplasmic sperm injection - Bơm tinh trùng vào bào tương trứng IUI : IntraUterine Insemination - Bơm tinh trùng vào tử cung IVF : Invitro Fertilization - Thụ tinh ống nghiệm LH : Luteinizing Hormone - hormone kích thích hồng thể NST : Nhiễm sắc thể TT : Tinh trùng WHO : World Health Organization - Tổ chức y tế giới vi DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 2.1 Một số thuốc tác động gây hại ảnh hưởng đến trình sinh tinh 11 Bảng 2.2 Mối quan hệ số lượng TT di động lọc rửa với tỷ lệ thai điều trị IUI 29 Bảng 2.3 Mối liên hệ mật độ % tinh trùng di động với tỷ lệ thai lâm sàng 30 Bảng 2.4 Ảnh hưởng số lượng TT di động hình dạng lên thành cơng IUI 31 Bảng 3.1 Tỷ lệ pha loãng dựa số lượng TT quan sát vật kính 40x 37 Bảng 3.2 Số ô vuông đếm phụ thuộc vào số lượng TT ô vuông lớn 38 Bảng 3.3 Trình bày cách tính kết mật độ tinh trùng / ml tinh dịch 39 Bảng 4.1 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai 51 Bảng 4.2 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ TT lọc rửa 51 Bảng 4.3 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai 51 Bảng 4.4 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ TT lọc rửa 52 Bảng 4.5 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai 52 Bảng 4.6 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ TT lọc rửa 52 Bảng 4.7 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai 52 Bảng 4.8 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ TT lọc rửa 52 Bảng 4.9 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai 53 Bảng 4.10 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ TT lọc rửa 53 Bảng 4.11 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai (1/2010 - 17/5/2010) 53 Bảng 4.12 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân (1/2010 - 17/5/2010) 53 Bảng 4.13 So sánh tỷ lệ thai năm 2009 năm 2010 54 vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc tế bào tinh trùng Hình 2.2 Sơ đồ mơ tả hình thành tinh trùng từ tế bào mầm .4 Hình 2.3 Giải phẫu mơ học tinh hồn Hình 2.4 Quá trình hình thành tinh trùng Hình 2.5 Các nội tiết tố điều hòa hoạt động tinh hồn .9 Hình 2.6 Đường tinh trùng quan sinh dục nam giới .13 Hình 2.7 Cơ quan sinh dục nữ .14 Hình 2.9 Cấu trúc nang noãn bậc ba trước xuất noãn 15 Hình 2.10 Sơ đồ mơ tả hình thành nỗn từ tế bào mầm 16 Hình 2.11 Quá trình giảm phân I II noãn 17 Hình 2.12 Cơ chế phóng noãn .19 Hình 2.13 Tác động kích thích tố sinh dục 21 lên sinh noãn buồng trứng 21 Hình 2.14 Sơ đồ nội tiết tố giai đoạn phát triển 22 Hình 2.15 Tinh trùng với enzyme thể đỉnh vào tế bào trứng 23 Hình 2.16 Phản ứng cực đầu tinh trùng xâm nhập vào tế bào trứng 24 Hình 2.17 Sự hợp nhân tinh trùng trứng thành nhân hợp tử 25 Hình 2.18 Sự di chuyển phôi thụ tinh 25 Hình 3.1 Đo thể tích tinh dịch 34 Hình 3.3 So màu pH mẫu với giấy 35 Hình 3.4 Hóa chất pha loãng đánh giá mật độ tinh trùng 37 Hình 3.5 Buồng đếm Neubauer cải tiến .38 Hình 3.6 Bộ thuốc nhuộm Eosin – Nigrosin 40 Hình 3.7 Sự bắt màu tinh trùng sống chết nhuộm Eosin – Nigrosin 41 Hình 3.8 Bộ nhuộm Papanicolaou đánh giá hình thái tinh trùng 42 Hình 3.9 Hình dạng tinh trùng bình thường 43 Hình 3.11 Trang thiết bị điển hình 48 Hình 3.12 Sơ đồ qui trình thực phương pháp Swim – up 48 Hình 3.13 Trang thiết bị cụ thể 49 Hình 3.14 Sơ đồ qui trình thực Gradient .50 viii Tinh trùng cổ gập Tinh trùng có phần dày Tinh trùng có bào tương cổ Tinh trùng bất thường bề mặt Hình 3.10 Hình dạng bất thường tinh trùng (Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) Theo WHO laboratory manual, 2010 nhuộm làm thay đổi đường kính tinh trùng, tinh trùng nhuộm nhỏ tinh trùng tinh dịch tươi (Katz ctv, 1986) Chất lượng phiến phết phụ thuộc vào thể tích tinh dịch mật độ tinh trùng, góc miếng lame kéo tốc độ kéo phiến phết Hình dạng tinh trùng bình thường giới hạn ≥ % Các kỹ thuật đặc biệt phân tích tinh dịch y Xuất tinh ngược dòng + Định nghĩa: Hiện tượng khơng thấy thấy tinh dịch xuất ngồi, đạt đến đỉnh điểm khối cảm có cảm giác xuất tinh quan hệ tình dục + Ngun nhân: Có hai ngun nhân rối loạn chức hệ thần kinh giao cảm bệnh tiểu đường, bệnh nhân dùng loại thuốc chẹn Beta, thuốc trầm cảm Tai biến sau phẫu thuật phẫu thuật nội soi u tiền liệt tuyến, phẫu thuật vùng chậu + Hướng chẩn đoán: cho bệnh nhân uống natri bicacbonat gói pha lít nước / 24 Cho bệnh nhân tiểu trước làm xét nghiệm + Cách lấy mẫu phân tích: lấy cách thủ dâm, sau đo thu tồn thể tích nước tiểu sau bệnh nhân có cảm giác xuất tinh + Hướng điều trị: Chia mẫu vào tube 14 ml đáy nhọn Ly tâm 3000 v/10ph Sau ly tâm hút bỏ phần trên, thu cặn lắng tiến hành phân tích tinh dịch đồ cặn lắng 45 y Kháng thể kháng tinh trùng + Nguyên nhân: Thắt ống dẫn tinh, sinh thiết tinh hoàn, tinh hoàn ẩn, nhiễm khuẩn đường sinh dục + Chỉ định: Tinh trùng kết dính tinh dịch, tỷ lệ tinh trùng sống thấp, tiền sử thắt ống dẫn tinh, phản ứng tinh trùng - chất nhầy cổ tử cung (test sau giao hợp) sau - + Kỹ thuật phân tích (kỹ thuật gắn hạt miễn dịch) Tinh trùng rửa loại bỏ tinh tương cách ly tâm, trộn với dung dịch đệm.Huyền dịch tinh trùng với dung dịch hạt miễn dịch Soi kính hiển vi phản pha vật kính 40 x Dương tính tỷ lệ tinh trùng di động ngưng kết > 10 % + Hướng điều trị: Thụ thai nhân tạo – bơm tinh trùng vào buồng tử cung (IUI), thụ tinh ống nghiệm (IVF, ICSI), sử dụng thuốc ức chế miễn dịch y Mẫu tinh dịch khơng có tinh trùng Đây mẫu tinh dịch khơng có tinh trùng sau soi tươi 40x + Hướng chẩn đoán: Cho tinh dịch vào tube 14 ml đáy nhọn, ly tâm 3000 v/10ph Đổ bỏ phần trên, giữ lại phần cặn lắng Hút 50 μl cho lên lame, quan sát phân tích vật kính 40 x Thơng qua kết phân tích từ tinh dịch đồ, rút kết luận ban đầu khả sinh sản nam giới, từ đưa hướng điều trị thích hợp bước quan trong việc chọn lựa phương pháp lọc rửa tinh trùng hiệu cho IUI 3.3.2 Phương pháp chuẩn bị tinh trùng (lọc, rửa tinh trùng) 3.3.2.1 Đại cương Chuẩn bị tinh trùng phương pháp thường áp dụng chu kỳ điều trị sử dụng kỹ thuật hỗ trợ sinh sản Mục đích chủ yếu nhằm loại bỏ thành phần tinh dịch tinh trùng chết, yếu, dị dạng; chọn lọc tinh trùng khỏe mạnh sử dụng cho trình thụ tinh Trong sinh lý thụ tinh bình thường, sau giao hợp, tinh dịch phóng vào âm đạo Những tinh trùng di động tốt, thụ tinh trứng tự bơi qua lớp nhầy cổ tử cung để lên đường sinh dục phụ nữ Kết tượng tinh trùng với khả di động tốt tự tách khỏi tinh dịch để tiếp tục đường vào tử cung đến vòi trứng để thụ tinh trứng Tinh dịch có chức trung hòa bảo vệ 46 tinh trùng khỏi mơi trường acid âm đạo Nó có phần chức ổn định nuôi dưỡng tinh trùng Tuy nhiên, tinh dịch có nhiều ảnh hưởng xấu lên tinh trùng sau phóng vào âm đạo phụ nữ Người ta thấy tinh dịch làm giảm sức sống tinh trùng, giảm độ di động tinh trùng khả thụ tinh tinh trùng Dựa sở sinh lý đó, người ta áp dụng nhiều biện pháp để tách tinh trùng khỏi tinh dịch để sử dụng tinh trùng vào mục đích điều trị Tinh trùng sau tách khỏi tinh dịch sử dụng vào nhiều mục đích: (1) IUI, (2) phương pháp hỗ trợ sinh sản, (3) thử nghiệm thăm dò chức tinh trùng Các kỹ thuật chuẩn bị tinh trùng nói chung tương đối đơn giản dễ thực Trong trình nghiên cứu phương pháp để chuẩn bị tinh trùng có nhiều kỹ thuật giới thiệu ứng dụng như: dùng hạt thủy tinh, lọc khối sợi thủy tinh, cột sephacle Nhưng tính chất phức tạp giá thành cao nên sử dụng, hai phương pháp sử dụng rộng rãi Swim-up (bơi lên), phương pháp sử dụng thang nồng độ (gradient) phổ biến sử dụng bệnh viện Từ Dũ TpHCM Từ kỹ thuật chuẩn bị tinh trùng sử dụng thang nồng độ, swim-up phát triển, việc sử dụng tinh trùng chuẩn bị cô đặc trở thành chuẩn mực kỹ thuật IUI Việc chọn phương pháp chuẩn bị tinh trùng chủ yếu phụ thuộc vào chất tự nhiên mẫu tinh dịch (Conale ctv, 1994) Ví dụ: Swim – up sử dụng cho mẫu đánh giá mật độ hình dạng tinh trùng bình thường nhiều Nhưng trái lại, trường hợp mẫu tinh trùng (mật độ < 20 x 106 /ml), tinh trùng dị dạng (hình dạng bình thường < 30 %), tinh trùng yếu (A < 25 %, A+B < 50%), sử dụng lọc theo thang gradient để thu nhiều tinh trùng 3.3.2.2 Phương pháp Swim - up a Nguyên tắc Phương pháp áp dụng giới từ năm 1970, dựa sở sinh lý sau phóng vào âm đạo, tinh trùng di động tốt tự bơi lên trên, thóat khỏi lớp tinh dịch phía vào cổ tử cung b Điều kiện thực Mẫu tinh dịch phải đạt đủ tiêu chuẩn sau: Thể tích xuất tinh ≥ ml, mật độ tinh trùng ≥ 50 triệu / ml, độ di động tinh trùng A ≥ 25% B ≥ 50%, độ nhớt không cao khơng có tượng kết dính 47 c Trang thiết bị cần thiết a) b) c) d) Hình 3.11 Trang thiết bị điển hình (a) Mơi trường Fercult Flushing; (b) Tube 15 ml; (c) Máy bách phân bạch cầu; (d) Tube ml (nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) d Phương pháp thực H ì n h Sơ đồ qui trình thực phương pháp Swim – up Cho vào ống nghiệm đáy tròn 15 ml : 1,5 ml mơi trường ni cấy Cho ml tinh dịch ly giải thật nhẹ nhàng, xuống đáy lớp môi trừơng Đặt nghiêng ống nghiệm góc 45o tủ cấy khỏang 30 – 45 phút Tạo điều kiện thuận lợi cho tinh trùng bơi lên khỏi lớp tinh dịch bên Hút khoảng 0,7 – ml phần tinh trùng bơi lên lớp mơi trường, cho vào ống nghiệm đáy tròn loại ml (có chứa sẵn ml mơi trường cấy), sau trộn Ly tâm 12000 v/ph 10 phút 48 Hút bỏ lớp phần trên, giữ lại khỏang 0,3 – 0,4 ml phần cặn Để tủ cấy CO2 %, 370C 15 phút Ỉ sẵn sàng cho IUI 3.3.2.3 Phương pháp lọc theo thang nồng độ (Gradient) a Nguyên tắc Các dung môi Silt select nồng độ khác có chức lọc, loại bỏ tinh trùng chết, dị dạng, di động thành phần tinh dịch Những tinh trùng sống, di động nhanh, hình dạng bình thường, có tỉ trọng cao lắng xuống đáy ống nghiệm Phần tinh trùng lọc được, rửa lần với môi trừơng cấy để loại bớt Silt select môi trừơng cấy Phương pháp Gradient áp dụng cho tất loại mẫu khác b Trang thiết bị cần thiết Môi trường cấy Fercult Flushing Dung môi lọc Silt select Tube đáy nhọn 14 ml, đáy tròn ml tiệt trùng Pipette Pauster Máy ly tâm Kính hiển vi Buồng đếm hồng cầu Tủ ấm CO2 Tủ cấy vô trùng Máy bách phân bạch cầu a) b) c) Hình 3.13 Trang thiết bị cụ thể (a) Mơi trường Silt select; (b)Tube ml; (c) Tube đáy nhọn 14 ml (nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) c Phương pháp thực Chuẩn bị trước hai môi trường lọc Silt select 45 % 90 % Cho lớp môi trường Silt select 45 % 90 % vào tube 14 ml đáy nhọn, theo thứ tự lớp 45 % trước sau đến lớp 90 %; lớp 1,5 ml Lúc lớp Silt select 90 % nặng đẩy lớp 45 % lên tạo thành hai lớp cách biệt Cho khoảng ml tinh dịch lên lớp Silt select 45 % phân cách thật nhẹ nhàng Ly tâm 1200 vòng/15 phút, hút bỏ phần Giữ lại 0,5 ml đáy, cho vào tube đáy tròn ml có chứa sẵn ml môi trường cấy, 49 trộn Ly tâm 1200 vòng/ 10ph Thực rửa lần Tiếp tục hút bỏ lớp môi trường trên, giữ lại khoảng 0,5 ml Cho 0,5 ml giữ lại vào tube ml có chứa 2ml mơi trường ni cấy, thực rửa lần để loại bỏ hạt silica môi trường lọc bám tinh trùng để tránh gây dị ứng cho người phụ nữ thực IUI Ly tâm 1200 vòng/ 10ph Sau đó, hút bỏ lớp giữ lại 0,3 ml Để tủ cấy CO2 %, 370C 15 phút Ỉ sẵn sàng cho IUI H ì n h S đồ qui trình thực Gradient ‘ Một số điều cần lưu ý Tinh dịch thường lấy khoảng trước thực bơm tinh trùng Thời gian kiêng xuất tinh từ – ngày trước lấy tinh dịch để điều trị Tinh dịch phải lấy tay (thủ dâm) vào lọ sạch, tiệt trùng Để giảm nguy nhiễm trùng, người chồng thường cho uống Doxycyclin 100 mg, viên/ ngày, vòng ngày 50 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết Tiến hành khảo sát mối quan hệ mật độ tinh trùng sau lọc rửa với tỷ lệ có thai chu kỳ điều trị IUI, khoa Hiếm Muộn, bệnh viện Từ Dũ, từ tháng 1/2010 đến ngày 17 – 5/2010 Từ đó, tiến hành so sánh xác suất có thai hai nhóm bệnh nhân có mật độ tinh trùng sau lọc rửa ≥ x 106 /ml < x 106 /ml Ở đây, ta không trọng đến tỷ lệ % tinh trùng di động sau lọc rửa; tiến hành lọc rửa tinh trùng, loại bỏ tinh dịch, thành phần bất lợi ảnh hưởng khơng tốt đến q trình thụ tinh, kể tinh trùng chất lượng (tinh trùng chết, dị dạng) Mật độ tinh trùng sau lọc rửa chọn tiêu chuẩn khảo sát dựa vào sở sinh lý thụ tinh Chuẩn bị tinh trùng (lọc rửa tinh trùng) góp phần đặc tinh trùng thể tích nhỏ đạt mật độ tinh trùng đủ để thụ tinh trứng Cả hai phương pháp chuẩn bị tinh trùng Swim – up Gradient cho tỷ lệ thai thành công điều trị Vì hai phương pháp chọn lọc tinh trùng chất lượng cao, đặc tinh trùng thể tích nhỏ Bảng 4.1 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai tháng 1/2010 Tổng số ca điều trị IUI 101 Số ca có thai 21 Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 20,8 Bảng 4.2 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác tháng 1/2010 Tổng ca điều trị IUI Số ca có thai 101 21 Mật độ TT sau lọc rửa Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) ≥ x 106 /ml < x 106 /ml 16,83 3,96 17 TT: tinh trùng, tất ca điều trị IUI thực chu kỳ thứ 1, tiến hành bơm lần (Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) Bảng 4.3 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai tháng 2/2010 Tổng ca điều trị IUI Số ca có thai 51 Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 33,33 Bảng 4.4 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác tháng 2/2010 Tổng ca điều trị IUI Số ca có thai 9 Mật độ TT sau lọc rửa Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) ≥ x 106 /ml < x 106 /ml 100 TT: tinh trùng, tất ca điều trị IUI thực chu kỳ thứ 1, tiến hành bơm lần (Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) Bảng 4.5 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai tháng 3/2010 Tổng ca điều trị IUI Số ca có thai Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 71 8,45 Bảng 4.6 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác tháng 3/2010 Tổng ca điều trị IUI 71 Số ca có thai Mật độ TT sau lọc rửa Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) ≥ x 106 /ml < x 106 /ml 7,04 1,41 (TT: tinh trùng, tất ca điều trị IUI thực chu kỳ thứ 1, tiến hành bơm lần Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) Bảng 4.7 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai tháng 4/2010 Tổng ca điều trị IUI 115 Số ca có thai 11 Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 9,57 Bảng 4.8 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác tháng 4/2010 Tổng ca điều trị IUI 115 Số ca có thai 11 Mật độ TT sau lọc rửa 11 ≥ x 106 /ml < x 106 /ml Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 9,57 TT: tinh trùng, tất ca điều trị IUI thực chu kỳ thứ 1, tiến hành bơm lần (Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) 52 Bảng 4.9 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai từ 1/5/2010 – 17/5/2010 Tổng ca điều trị IUI 70 Số ca có thai 13 Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 18,57 Bảng 4.10 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác từ 1/5/2010 – 17/5/2010 Tổng ca điều trị IUI 70 Số ca có thai 13 Mật độ TT sau lọc rửa Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) ≥ x 106 /ml < x 106 /ml 18,57 13 TT: tinh trùng, tất ca điều trị IUI thực chu kỳ thứ 1, tiến hành bơm lần (Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) Bảng 4.11 Tổng kết số ca điều trị IUI trường hợp có thai từ tháng 1/2010 đến 17/5/2010 Tổng ca điều trị IUI 366 Số ca có thai 54 Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) 14,75 Bảng 4.12 So sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác từ tháng 1/2010 đến 17/5/2010 Tổng ca điều trị IUI 366 Số ca có thai 54 49 Mật độ TT sau lọc rửa Tỷ lệ thai /chu kỳ (%) ≥ x 106 /ml < x 106 /ml 13,39 1,37 TT: tinh trùng, tất ca điều trị IUI thực chu kỳ thứ 1, tiến hành bơm lần (Nguồn khoa muộn, bệnh viện Từ Dũ) Biểu đồ so sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân khác 1.37 % ≥ x 106 /ml < x 106 /ml 13.39 % Hình 4.1 Biểu đồ so sánh tỷ lệ thai hai nhóm bệnh nhân 53 4.2 Thảo luận Kết trình bày so sánh tỷ lệ thai /chu kỳ hai nhóm bệnh nhân với mật độ tinh trùng sau lọc rửa khác Điều chứng minh hỗ trợ ưu điểm mà phương pháp chuẩn bị tinh trùng mang đến cho IUI Nhóm bệnh nhân có mật độ tinh trùng sau lọc rửa ≥ x 106 /ml (đủ tiêu chuẩn để thực IUI) tỷ lệ thai chiếm cao, 49 ca tổng số 54 ca thành công với tỷ lệ thai /chu kỳ 13,4 % Tỷ lệ so sánh với năm 2009 (nguồn khoa Hiếm muộn, bệnh viện Từ Dũ), cho thấy tỷ lệ thai thành công năm 2010 tăng cao năm 2009 Bảng 4.13 So sánh tỷ lệ thai năm 2009 năm 2010 Tỷ lệ thai / chu kỳ (%) Năm 2009 Giữa năm 2010 13,1 13,4 Số lượng tinh trùng sau lọc rửa ≥ x 106 /ml (nguồn khoa Hiếm muộn, bệnh viện Từ Dũ, Tp HCM) Nhóm bệnh nhân có mật độ tinh trùng sau lọc rửa < x 106 /ml (không đủ tiêu chuẩn để thực IUI), thường bệnh nhân định điều trị IVF, ICSI Vì mật độ tinh trùng sau lọc rửa thấp tỷ lệ thành công thực IUI không cao (5 ca tổng số 54 ca thành công với tỷ lệ thai /chu kỳ 1,37 %) Có thể lý đó, họ muốn thực IUI Những bệnh nhân xác suất có thấp thể tích tinh dịch thấp, mật độ thấp, tinh trùng di động yếu, hình dạng bình thường thấp), qua việc chuẩn bị tinh trùng mang đến cho họ có hội thành cơng dù mỏng manh, trải qua điều trị IVF, ICSI nhiều thời gian kinh tế Tuy nhiên, có trường hợp điều trị IUI có số lượng tinh trùng sau lọc rửa cao lại khơng thành cơng ngồi mật độ tinh trùng có nhiều yếu tố ảnh hưởng khác yếu tố buồng trứng (buồng trứng đa nang), lạc nội mạc tử cung, rối loạn hormone sinh dục…Vì vậy, tùy vào nguyên nhân vô sinh cặp vợ chồng mà tiên đốn tỷ lệ thành cơng điều trị Chất lượng mật độ tinh trùng sau lọc rửa phụ thuộc vào chất tự nhiên tinh dịch thể tích tinh dịch, mật độ di động tinh trùng trước lọc rửa; bên cạnh đó, thao tác chun viên phòng thí nghiệm quan trọng không thực kỹ thuật cẩn thận làm thất thoát mẫu lọc rửa loại bỏ tinh trùng chết không triệt để dẫn đến xác suất có thai thấp 54 Mật độ di động tinh trùng sau lọc rửa dùng làm sở để bác sĩ lâm sàng tiên lượng tỷ lệ thành công giúp tư vấn hội mang thai cao điều trị IUI 55 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Mỗi phương pháp chuẩn bị tinh trùng với ưu nhược điểm khác thích hợp với mẫu tinh dịch khác cho kết tốt bước lọc rửa tinh trùng với ưu điểm bật như: chọn tinh trùng bình thường, di động tốt cho phương pháp điều trị Đồng thời cô đặc tinh trùng thể tích nhỏ, thuận lợi cho phương pháp điều trị; loại tế bào chết, hầu hết vi sinh vật, phần lớn chất độc tinh trùng; loại phần lớn prostaglandins tinh dịch, tránh co thắt tử cung phương pháp IUI; kích thích hoạt hóa đầu tinh trùng, tạo thuận lợi cho trình thụ tinh với trứng; giảm phần lớn nguy nhiễm trùng từ tinh dịch, phương pháp chuẩn bị tinh trùng phát loại hầu hết vi sinh vật có tinh dịch; tránh nguy sốc phản vệ xảy cho tinh dịch vào buồng tử cung, mang lại an toàn thành công cao điều trị IUI Đồng thời điều kiện ban đầu giúp tư vấn xác phương pháp điều trị muộn phù hợp với bệnh nhân giúp mang lại kết cao điều trị 5.2 Đề nghị Tiến hành lọc rửa nên kết hợp hai phương pháp Swim – up Gradient tùy theo đối tượng mẫu để thu tinh trùng chất lượng cao mật độ nhiều Trong phương pháp Gradient, bước rửa thứ hai ta giảm tốc độ, thời gian quay để tránh tổn thương cho tinh trùng lực ly tâm Đề nghị bệnh viện tổ chức nhiều hội thảo hội nghị chuyên đề muộn, vô sinh cho sinh viên chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học trường Đại học để giúp nắm vững kiến thức 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ môn sinh lý học, trường Đại học Y Hà Nội 2001 Sinh lý học II Nhà xuất Y học Hồ Mạnh Tường Vương Thị Ngọc Lan 2002 Thụ tinh nhân tạo Nhà xuất y học, Tp HCM Phan Kim Ngọc Phạm Văn Phúc 2006 Công nghệ sinh học người động vật Nhà xuất giáo dục Tp HCM Sở y tế Tp HCM, bệnh viện Từ Dũ TpHCM 1999 Hiếm muộn, vô sinh kỹ thuật hỗ trợ sinh sản Nhà xuất Tp HCM Trần Thị Dân Dương Nguyên Khang 2006 Sinh lý vật nuôi Nhà xuất nông nghiệp Tp HCM TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI WHO (World Health Organization) 2010 WHO laboratory manual for the Examination and processing of human semen Wainer R, Albert M, Dorion A, Bailly M, Bergere M, Lombroso R, Gombault M, Selva J Obstetric and Gynecology Department, Poissy – Saint Germain Hospital, 78300 Poissy, Versailles, Saint Quentin en Yveline University, France.bob.wainer@wanadoo.fr TÀI LIỆU TỪ INTERNET http://www.PubMed.com http://www.ivftudu.com.vn http://www.nhasinhhoctretuoi.com http://www.GiaoDucSucKhoe.com.vn 57 PHỤ LỤC a) b) d) c) e) f) Hình Các dụng cụ phòng thí nghiệm (a) Lọ đựng mẫu tinh dịch; (b) Pipette 12 ml; (c) Đầu cone; (d) Lame lamelle; (e) Micropipette; (f) Máy lắc a) b) c) d) e) Hình 1(tt) (a) Kính hiển vi; (b) Tủ cấy; (c) Tủ ấm CO2; (d) Tủ ủ 37oC; (e) Máy ly tâm ngang ... SUMMARY Fertility mechanism of human is complex and less effective The common reason led to this thing that influences of outside facts (working and living environment) and inside facts (hormone)... fertilization Relationship between pregnancy rate in IUI treatment and quality of washed sperm This thing will point out the usefulness of sperm preparation iii MỤC LỤC Lời cảm ơn ... trùng bình thường 43 Hình 3.11 Trang thi t bị điển hình 48 Hình 3.12 Sơ đồ qui trình thực phương pháp Swim – up 48 Hình 3.13 Trang thi t bị cụ thể 49 Hình 3.14 Sơ