Khảo sát quá trình lên men bioethanol sử dụng nguyên liệu vỏ cacao (theobroma cacao)

Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học ThS Trần Thị Tưởng An Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngoài ra, đồ án sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung đồ án Trường đại học Cơng nghệ TP.HCM không liên quan đến vi phạm tác quyền, quyền tơi gây q trình thực (nếu có) TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 LÊ TRUNG KHA Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Qua thời gian làm luận văn phòng thí nghiệm Năng lượng sinh học– Đại Học Bách Khoa Thành Phố Hồ Chí Minh, tơi hướng dẫn giúp đỡ tận tình quý thầy cô: ThS Trần Thị Tưởng An, Bộ môn Q Trình & Thiết Bị, Khoa Kỹ Thuật Hóa Học, Trường Đại học Bách Khoa, TP Hồ Chí Minh Cám ơn cô tạo điều kiện cho em làm luận văn trường Đại Học Bách Khoa, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, động viên hỗ trợ kinh phí giúp em hồn thành tốt đề tài luận văn Cám ơn thầy Quân, anh, chị làm việc phòng thí nghiệm tạo điều kiện cho em làm việc phòng Một lần xin chân thành cám ơn quý thầy cô bạn! Sinh viên thực Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bioethanol 1.1.1 Giới thiệu chung bioethanol 1.1.2 Phân loại bioethanol 1.1.2.1 Bioethanol hệ thứ 1.1.2.2 Bioethanol hệ thứ hai 1.1.2.3 Bioethanol hệ thứ ba 1.1.3 Nguồn nguyên liệu cho sản xuất 1.1.3.1 Sucrose 1.1.3.2 Tinh bột 1.1.3.3 Lignocellulose 1.1.3.4 Cellulose 1.1.3.5 Hemicellulose .10 1.1.3.6 Lignin 11 1.1.4 Ưu nhược điểm bioethanol 11 1.1.4.1 Ưu điểm 11 1.1.4.2 Nhược điểm 12 1.1.5 Tình hình sản xuất tiêu thụ bioethanol giới Việt Nam 12 1.1.5.1 Trên giới 12 i Đồ án tốt nghiệp 1.1.5.2 Tại Việt Nam 17 1.1.6 Các cơng trình nghiên cứu sản xuất bioethanol 19 1.1.6.1 Trên giới 19 1.1.6.2 Ở Việt Nam 21 1.1.7 Sản xuất bioethanol tử nguyên liệu lignocelluloses 22 1.1.7.1 Quá trình tiền xử lý 22 1.1.7.2 Quá trình thuỷ phân 23 1.1.7.3 Quá trình lên men 24 1.1.7.4 Quá trình chưng cất tinh chế 25 1.2 Cacao 25 1.2.1 Giới thiệu cacao 25 1.2.1.1 Tên khoa học 25 1.2.1.2 Thành phần giá trị dinh dưỡng vỏ cacao 26 1.2.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ cacao nước ta 27 1.3 Lựa chọn chủng nấm men sản xuất ethanol 29 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 30 2.2 Đối tượng nghiên cứu 30 2.3 Vật liệu nghiên cứu 30 2.3.1 Nguyên vật liệu 30 2.3.2 Thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu 31 2.4 Tiến hành thí nghiệm 31 2.4.1 Lên men theo phương pháp thuỷ phân lên men riêng biệt (Separate hydrolysis and fermemtation, SHF) 32 2.4.1.1 Thí nghiệm 1: Tiền xử lý 34 ii Đồ án tốt nghiệp 2.4.1.2 Thí nghiệm 2: Thuỷ phân 34 2.4.1.3 Thí nghiệm 3: Lên men 36 2.4.2 Thuỷ phân Lên men đồng thời (Simultaneous saccharification and fermemtation, SSF) 37 2.4.2.1 Thí nghiệm 1: Tiền xử lý 39 2.4.2.2 Thí nghiệm 2: Thuỷ phân lên men đồng thời 39 2.4.3 Thí nghiệm xác định hoạt tính enzyme .41 2.5 Các phương pháp phân tích 42 2.5.1 Phương pháp xác định đường khử phương pháp DNS 42 2.5.2 Phương pháp xác định lượng cellulose Anthrone 42 2.5.3 Xác định pH, độ cồn tổng số chất khơ hồ tan 43 2.5.4 Phương pháp nuôi cấy nấm men 43 2.5.5 Phương pháp đếm khuẩn lạc 45 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Kết khảo sát phương pháp thuỷ phân 47 3.1.1 Thuỷ phân cellulose 47 3.1.2 Thuỷ phân H2SO4 48 3.2 Kết khảo sát phương pháp lên men 50 3.2.1 Kết khảo sát thời gian lên men SHF .50 3.2.2 Kết khảo sát nhiệt độ lên men SHF 53 3.2.3 Kết khảo sát ảnh hưởng pH lên men SHF 55 3.2.4 Kết khảo sát tỉ lệ giống nấm men lên men SHF 56 3.2.5 Kết khảo sát thời gian lên men SSF .58 3.2.6 Kết khảo sát nhiệt độ lên men SSF 60 3.2.7 Kết khảo sát ảnh hưởng pH lên men SSF 62 iii Đồ án tốt nghiệp 3.3 Kết đo hoạt tính enzyme 62 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC A Cách xây dựng đường chuẩn định lượng cellulose PHỤ LỤC B.Cách xây dựng đường chuẩn định lượng đường khử PHỤ LỤC C Kết thí nghiệm iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ETBE Ethyl Tert-Butyl Ether ROP Tổ chức Roots of Peace SSF Thuỷ phân lên men đồng thời SHF Thuỷ phân lên men riêng biệt SSCF Đồng đường hoá đồng lên men UTZ Tiêu chuẩn quốc tế chứng nhận sản xuất tốt VCC Ban điều phối phát triển Cacao v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Năng lượng tạo đốt cháy lít nhiên liệu Bảng 1.2 Sản lượng ethanol theo khu vực 14 Bảng 1.3 Sản xuất Ethanol Mỹ từ 1981 – 2010 15 Bảng 1.4 Tổng số nhà máy ethanol công suất Mỹ qua năm 16 Bảng 1.5 Một số nhà máy sản xuất ethanol Việt Nam .18 Bảng 1.6 Thành phần hóa học vỏ cacao 29 vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc linocellulose Hình 1.2 Chuỗi mạch thẳng cellulose 10 Hình 1.3 Sản lượng ethanol giới theo lĩnh vực qua năm 17 Hình 1.4 Nhà máy bio-ethanol Dung Quất 18 Hình 1.5 Ảnh hưởng trình tiền xử lý đến quy trình biến đổi lignocellulose thành ethanol 22 Hình 1.6 Trái cacao 26 Hình 1.7 Thành phần cấu tạo trái cacao 27 Hình 2.1 Quy trình lên men SHF 32 Hình 2.2 Quy trình lên men SSF 37 Hình 2.3 Khuẩn lạc môi trường SDA 43 Hình 2.4 Khuẩn lạc mơi trường thạch nghiêng SDA 44 Hình 2.5 Nhân giống cấp môi trường SDB 44 Hình 2.6 Nhân giống cấp mơi trường SDB 45 Hình 3.1 Hàm lượng glucose cellulose thuỷ phân cellulase ngày 47 Hình 3.2 Hàm lượng glucose cellulose thuỷ phân cellulase ngày 48 Hình 3.3 Hàm lượng glucose cellulose thuỷ phân cellulase ngày 48 Hình 3.4 Hàm lượng glucose cellulose thuỷ phân H2SO4 49 Hình 3.5 Sự thay đổi độ cồn theo thời gian lên men SHF 50 Hình 3.6 Sự thay đổi độ Brix theo thời gian lên men SHF 51 Hình 3.7 Sự thay đổi hàm lượng glucose theo thời gian lên men SHF 52 Hình 3.8 Sự thay đổi độ cồn Brix theo nhiệt độ lên men SHF 53 Hình 3.9 Sự thay đổi hàm lượng glucose cellulose theo nhiệt độ lên men SHF 53 vii Đồ án tốt nghiệp Hình 3.10 Sự thay đổi độ cồn Brix theo pH lên men SHF 55 Hình 3.11 Sự thay đổi hàm lượng glucose cellulose theo pH lên men SHF 55 Hình 3.12 Sự thay đổi độ cồn Brix theo tỉ lệ giống lên men SHF 56 Hình 3.13 Sự thay đổi hàm lượng glucose cellulose theo tỉ lệ giống lên men SHF 57 Hình 3.14 Sự thay đổi độ cồn theo thời gian lên men SSF 58 Hình 3.15 Sự thay đổi độ Brix theo thời gian lên men SSF 58 Hình 3.16 Sự thay đổi hàm lượng glucose theo thời gian lên men SSF 59 Hình 3.17 Sự thay đổi độ cồn brix theo nhiệt độ lên men SSF 60 Hình 3.18 Sự thay đổi hàm lượng glucose cellulose theo nhiệt độ lên men SSF 61 Hình 3.19 Sự thay đổi độ cồn Brix theo pH lên men SSF 62 Hình 3.20 Sự thay đổi hàm lượng glucose cellulose theo pH lên men SSF 62 viii Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 4.1.1 Quá trình tiền xử lý Từ khảo sát phương pháp tiền xử lý nguyên liệu trước rút điểm tối ưu cho trình tiền xử lý vỏ cacao: - Nồng độ NaOH : 2% - Thời gian: ngày - Tỉ lệ NaOH : nguyên liệu = 10:1 - Nhiệt độ phòng 4.1.2 Quá trình thủy phân Kết rút từ khảo sát: - Nồng độ enzyme cellulose : 5% - Thời gian thủy phân : ngày - Nhiệt độ : 50oC - pH 5.0 4.1.3 Quá trình SHF - Thời gian lên men : 18 - Nhiệt độ : 37oC - pH 5.0 - Tỉ lệ giống : 5% 4.1.4 Quá trình SSF - nồng độ enzyme cellulose : 5% - Thời gian : 40 - Nhiệt độ 37oC - pH 5.0 - Tỉ lệ giống : 5% 64 Đồ án tốt nghiệp 4.2 Kiến nghị Từ số liệu rút từ khảo sát cho thấy phần khả thực trình SHF SSF so sánh khả tạo ethanol từ vỏ cacao trình Tuy nhiên, khơng có điều kiện để nghiên cứu sâu nên hạn chế nhiều mặt Một vấn đề hạn chế lượng cellulose nhiều kể sau lên men khiến cho khả lên men chưa thực đạt mong muốn Vì cần nghiên cứu để sử dụng triệt để lượng đường 5C giai đoạn tiền xử lý thủy phân cần thiết 65 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] GS Nguyễn Đức Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam, 2004, Nhà xuất Y Dược, 915 [2] Nguyễn Văn Pháp, 2013, Bước đầu khảo sát tiền xử lý thủy phân vỏ cacao để làm nguyên liệu cho trình lên men bioethanol saccharomyces cerevisiae, Khóa luận tốt nghiệp đại học, đại học Cần Thơ, Việt Nam [3] Phạm Minh Nhựt 2013 Thực hành vi sinh đại cương Trường Đại học Công Nghệ TP HCM [4] Võ Thành Trung, Lê Như Hậu, Nguyễn Thanh Hằng Nghiên cứu điều kiện thủy phân rong lông cứng (Cladophora socialis Kutzing) ứng dụng sản xuất cồn, Viện nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang, Trường Đại Học Bách khoa Hà Nội, 2011, 9(4A), 575 – 580 TÀI LIỆU TIẾNG ANH [5] Aloia Romaní, G.G, Juan Carlos Parajó Bioethanol production from autohydrolyzed Eucalyptus globulus by Simultaneous Saccharification and Fermentation operating at high solids loading Fuel, 2012, 94, 305-212 [6] BC, Lee H Genetic improvement of Saccharomyces cerevisiae for xylose fermentation Biotechnol Adv, 2007, 25, 425-441 [7] B.C Akin-Osanaiye, H.C.N.a.A.S.A Ethanol Production from Carica papaya (Pawpaw) Fruit Waste, 2008, 3(3), 188-193 [8] Be Miller An introduction to pectins: Structure and properties Chemistry and Functions of Pectins, ACS Symposium Series 310 American Chemical Society, Washington DC, 1996 [9] Graeme M.Walker Bioethanol: Science and technology of fuel alcohol, 2010, 8–9 66 Đồ án tốt nghiệp [10] In Seong Choi, J.-H.K, Seung Gon Wi, Kyoung Hyoun Kim, Hyeun-Jong Bae Bioethanol production from mandarin (Citrus unshiu) peel waste using popping pretreatment, 2012, – [11] Hossain, A.B.M.S, Ahmed, S A, Ahmed M Alshammari, Faris M A Adnan, Annuar, M S M, Hadeel Mustafa1 and Norah Hammad Bioethanol fuel production from rotten banana as anenvironmental waste management and sustainable energy African Journal of Microbiology Research, 2011, 5(6), 586- 598 [12] Karhumaa K, W.B, Hahn-Hagerdal B, Boles E, Gorwa-Grauslund MF Coutilization of L-arabinose and D-xylose by laboratory and industrial Saccharomyces cerevisiae strains Microb Cell Fact, 2006, 5:18 [13] Karimi Pretreatment of Lignocellulosic Wastes to Improve Ethanol and Biogas Production from International Journal of Molecular Sciences, 2008, 9, 1621-1651 [14] Kulanthaivel Senthilguru, Narasinganallur Sankaranarayanan Vasanthi and a.K.P Kannan Ethanol production from lignocellulosic waste Department of Biotechnology, Bannari Amman Institute of Technology, Sathyamangalam, Erode District 638 401, Tamil Naudu, India, 2011 [15] Lynd LR, v.Z.W, McBride JE, Laser M Consolidated bioprocessing of cellulosic biomass: an update Curr Opin Biotechnol, 2005, 16, 577-583 [16] María Boluda-Aguilar, A.L.-G Production of bioethanol by fermentation of lemon (Citrus limon L.) peel wastes pretreated with steam explosion Food Engineering Politécnica and Agricultural Equipment Department, Universidad de Cartagena, Paseo Alfonso XIII, 48 E-30203 Cartagena, Spain, 2012 [17] Mehdi Dashtban, Lignocellulosic H.S, Wensheng Qin Residues Opportunities International Journal of Fungal & Bioconversion Perspectives Biological Sciences, 2009, 5(6), 578-595 67 of from Đồ án tốt nghiệp [18] Othman Abd Samah, Yeap Geok Hua & Nurul Nadiah Hussin Production of Ethanol from Cocoa Pod Hydrolysate, 2011 [19] Parveen Kumar, D.M.B, Michael J Delwiche, and Pieter Stroeve Industrial & Engineering Chemistry Research Methods for Pretreatment Lignocellulosic Biomass for Efficient Hydrolysis and Biofuel of Production, 2009, 48(8), 3713–3729 [20] Razif Harun, M.K.D Influence of acid pre-treatment on microalgal biomass for bioethanol production Process Biochemistry, 2011, 46(1), 304–309 [21] Ribeiro, M.A Electron beam processing of sugarcane bagasse to cellulose hydrolysis International Nuclear Atlantic Conference, 2009 [22] Simone Brethauer, C.E.W, Review Continuous hydrolysis and fermentation for cellulosic ethanol production Center for Environmental Research and Technology and Chemical and Environmental Engineering Department, University of California, Riverside, CA 92507, United States, 2009 [23] Wyman Production and Utilization Applied Energy Technology Series, Taylor & Francis, Washington, DC, 1996 TÀI LIỆU TỪ INTERNET [24] Cacao Việt Nam – Triển vọng phát triển, http://www.baomoi.com/Cacao-VietNam-Trien-vong-phat- trien/45/6563950.epi, truy cập ngày 20/6/2014 [25] Cacao sữa nóng, http://theribboncafe.wordpress.com/2013/02/20/cacao-suanong/, truy cập [26].Cacao Việt ngày 9/4/2013 Nam - "Hướng biển lớn", http://www.tiengiang.gov.vn/xemtin.asp?cap=3&id=19266&idcha=9662 [27] Luận văn phân tích ưu nhược điểm xăng sinh học, http://luanvan.net.vn/luan-van/de- tai- phan-tich-cac-uunhuoc-diem-khi- su-dung-xang-sinh-hoc-thay-the-cho-cac-nhien- lieu-truyen- thong-o-vietnam-47716/ truy cập ngày 15/6/2014 68 Đồ án tốt nghiệp [28].Một số giống ca cao phổ biến nay, http://www.baovecaytrong.com/kythuatcaytrongchitiet.php?Id=379&caytron gk [29].Tình ythuat=c hình sản a%20cao, truy cập ngày 20/6/2014 xuất tiêu thụ Ethanol giới, http://www.asiacreative.vn/tinh-hinh-san-xuat-va-tieu-thu-ethanol-tren-thegioi/, truy cập ngày 18/06/2014 [30] Đột phá lượng, http://nhienlieusinhhoc.blogspot.com/, truy cập ngày 14/6/2014 [31] Lignocellulose structure http://www.sfi.mtu.edu/FutureFuelfromForest/LignocellulosicBiomass.htm [32] Cấu trúc cellulose http://www.hsc.csu.edu.au/chemistry/core/identification/chem922/chem922n et.html [33] Optimization of fermentation parameters for production of ethanol from kinnow waste and banana peels by simultaneous saccharification and fermentation, 2007 http://pubmedcentralcanada.ca/articlerender.cgi?accid=PMC3450031, cập ngày [34] truy 3/7/2014 KADAMBINI GAUR, « PROCESS PRODUCTION OF ETHANOL OPTIMIZATION VIA FOR THE FERMENTATION » http://dspace.thapar.edu:8080/dspace/bitstream/123456789/102/1/3040010 truy cập ngày 02/7/2014 [35] Optimization and Production of Bioethanol from Cashew Apple Juice Using Immobilized Yeast Cells by Saccharomyces cerevisiae, http://www.researchgate.net/publication/242354151_Optimizati on_and_Production_of_Bioethanol_from_Cashew_Apple_Juic e_Using_Immobilized_Yeast_Cells_by_Saccharomyces_cerevisiae, truy cập ngày 18/6/2014 69 Đồ án tốt nghiệp [36] Optimization of Ethanol Fermentation from Pineapple Peel Extract Using Response Surface Methodology (RSM), http://connection.ebscohost.com/c/articles/889 41283/optimization- ethanolfermentation-from- pineapple-peel-extract-using-response- surfacemethodology-rsm, truy cập ngày 03/07/2014 [37] Separate Hydrolysis and Fermentation of Pretreated Spruce, http://liu.divaportal.org/smash/record.jsf?pid=diva2:427842 truy cập ngầy 15/6/2014 70 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC PHỤ LỤC A CÁCH XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN ĐỊNH LƯỢNG CELLULOSE Nguyên tắc: Phương pháp dựa phản ứng tạo màu đường khử với thuốc thử Anthrone, Cường độ màu hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với nồng độ đường khử phạm vi định đo máy quang phổ so màu, Dựa theo đồ thị chuẩn CMC tinh khiết với thuốc thử, tính hàm lượng cellulose mẫu nghiên cứu, Hợp chất tạo thành có độ hấp thu mạnh bước sóng 630nm, Cách pha Anthrone: Cân 0,2g Anthrone hòa tan 100ml H2SO4 98%, Dung dịch sau pha chứa chai thủy tinh nâu để điều kiện lạnh - 6oC trước dung, Dựng đường chuẩn CMC tinh khiết với thuốc thử Anthrone:  Dung dịch CMC chuẩn (20mg/ml): cân xác 1g CMC hòa n 50 ml nước cất,  Hút 1, 2, 3, 4, 5, 6, ml dung dịch CMC vào bình định mức 100 ml, thêm nước cất đến vạch mức, Các dung dịch pha có nồng độ CMC 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0, 1,2, 1,4 mg/ml  Cho 5ml thuốc thử Anthrone vào ống nghiệm chứa 0,5ml dung dịch trên, Nung cách thủy phút, Làm lạnh nhanh đo OD bước sóng 630nm, Từ giá trị OD, vẽ đồ thị đường chuẩn CMC, Cách tiến hành:  Hút 0,5ml dung dịch (đã pha loãng đến nồng độ thích hợp) + 5ml dung dịch Anthrone, Đồ án tốt nghiệp  Nung cách thủy hỗn hợp phút, Làm lạnh nhanh đo OD bước sóng 540nm,  Từ giá trị OD thu được, dựa vào đồ thị đường chuẩn CMC suy hàm lượng celulose mẫu, PHỤ LỤC B CÁCH XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ  Cân xác g glucose hòa n 200 ml nước cất,  Hút 1, 2, 3, 4, ml dung dịch đường glucose vào bình định mức 50 ml, thêm nước cất đến vạch mức,  Các dung dịch pha có nồng độ glucose 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5 mg/ml  Thực phản ứng ml dịch đường ml DNS, đun cách thủy phút , Từ kết đo xác định đường chuẩn Đồ án tốt nghiệp Tương quan nồng độ glucose OD (540nm) Nồng độ Glucose (mg/ml) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 A= OD (540nm) 0,147 0,438 0,706 1,166 1,573 1,793 y = 3.4557x + 0.1066 R² = 0.9907 1.8 1.6 A(nm) 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 Glucose(mg/ml) Đường chuẩn glucose PHỤ LỤC C: KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM Bảng Kết khảo sát thời gian SHF Thời gian (giờ) Độ cồn(%) Độ brix Glucose Cellulose (%) (mg/ml) (mg/ml) 3.2 8,1 10,92 ± 0,81 30,12 ± 5.15 3,2 8,2 10,11 ± 1,12 31,88 ± 4,11 3,4 7,7 8,92 ± 0,82 30,02 ± 2,99 3,3 7,8 9,11 ± 1,10 27,99 ± 3,97 10 3,4 8,0 7,66 ± 0,51 28,12 ± 3,42 12 3,6 7,8 7,14 ± 0,88 27,03 ± 3,11 Đồ án tốt nghiệp 14 4,0 7,8 5,97 ± 0.92 25,17 ± 2,96 16 4,2 7,6 5,15 ± 1.01 26,12 ± 1,88 18 4,4 7,7 4,62 ± 1.32 24,88 ± 1,99 20 4,2 7,6 4,92 ± 0,44 25,12 ± 2,12 22 4,2 3,88 ± 0, 32 21,44 ± 3,01 24 4,1 7,6 4,02 ± 1,44 26,55 ± 3,55 26 4,1 7,6 2,87 ± 0,12 26,12 ± 4,11 28 4,1 7,2 2,99 ± 1,1 24,89 ± 4,53 30 4,2 7,4 3,85 ± 0,98 21,15 ± 5,12 32 4,1 7,4 3,77 ± 0,33 22,84 ± 3,51 34 4,0 7,4 3,04 ± 0, 12 18,89 ± 3,12 36 4,0 7,4 3,22 ± 0,51 19,11 ± 4,11 38 3,8 7,3 1,91 ± 0,08 16,27 ± 3,66 40 3,8 7,1 1,13 ± 0, 12 21,87 ± 2,51 42 3,8 6,2 0,89 ± 0,02 19,15 ± 1,88 44 3,8 6,1 0,64 ± 0,02 18,89 ± 1,98 46 3,5 6,6 0,78 ± 0,1 19,97± 4,11 48 3,6 6,6 0,77 ± 0,08 18,71 ± 3,15 Đồ án tốt nghiệp Bảng Kết khảo sát nhiệt độ SFH Nhiệt độ Độcồn Độ Brix Glucose Cellulose (oC) (%) (%) (mg/ml) (mg/ml) 35 4,2 6,67 ± 1,96 39,13 ± 3,45 37 4,4 7,7 4,62 ± 1.32 38,19 ± 3,51 39 4,3 7,5 4,88 ± 1,21 34,01 ± 5,82 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng pH SHF Glucose Độcồn Độ (%) (%) 4.5 3,8 6,82 ± 1,26 34,13 ± 3,63 4,4 7,8 4,67 ±1,22 28,59 ± 4,12 5.5 4,5 7,5 4,31 ± 1,32 30,01 ± 2,31 pH Brix (mg/ml) Cellulose (mg/ml) Bảng Kết khảo sát tỉ lệ giống nấm men SHF Tỉ lệ giống (%) Độcồn Độ Brix (%) (%) Glucose (mg/ml) Cellulose (mg/ml) 2,5 3,4 8,8 6,12 ± 2.31 33,21 ± 3,41 4,4 7,8 4,67 ± 1,22 27,29 ± 1,45 7,5 4,5 7,2 5,68 ± 1,72 27,13 ± 3.54 Đồ án tốt nghiệp Bảng Kết khảo sát thời gian SSF Thời gian Độ cồn(%) Độ brix Glucose Cellulose (%) (mg/ml) (mg/ml) 30,12 ± 5.15 (giờ) 0,2 8,1 8,12 ± 0,53 0,2 8,2 11,13 ± 1,04 31,88 ± 4,11 0,4 7,7 13,2 ± 0,81 0,8 7,8 14,11 ± 1,10 27,99 ± 3,97 10 1,4 8,0 17,66 ± 3,11 28,12 ± 3,42 12 1,6 7,8 17,14 ±2,88 14 2,0 7,8 15,93 ± 1.92 25,17 ± 2,96 16 3,4 7,6 15,12 ± 1.05 21,13 ± 1,89 18 3,8 7,7 14,52 ± 3.32 24,38 ± 1,99 20 4,2 7,6 14,32 ± 0,44 21,12 ± 3,12 22 4,2 24 4,1 7,6 14,42 ± 1,44 2255 ± 3,55 26 4,1 7,6 11,37 ± 3,14 24,12 ± 4,11 28 4,1 7,2 12,99 ± 1,12 24,89 ± 4,53 30 4,2 7,4 3,85 ± 0,98 32 4,1 7,4 11,37 ± 0,93 22,84 ± 3,51 13,28 ± 0, 52 30,02 ± 2,99 27,03 ± 3,11 21,434± 3,21 23,12 ± 1,312 Đồ án tốt nghiệp 11,14 ± 1, 34 4,0 7,4 36 4,0 7,4 10,22 ± 0,55 19,11 ± 2,31 38 4,2 7,3 10,11 ± 0,08 16,27 ± 1,61 40 4,4 7,1 9,33 ± 0,62 21,87 ± 4,25 42 3,8 6,2 8,89 ± 072 19,15 ± 2,81 44 3,8 6,1 7,14 ± 0,02 18,89 ± 2,14 46 3,5 6,6 8,72 ± 0,1 19,97± 2,15 48 3,6 6,6 7,71 ± 0,08 18,21 ± 3,14 32 18,89 ± 3,16 Bảng Kết khảo sát nhiệt độ SSF Nhiệt độ Độ cồn Độ Brix Glucose Cellulose 35oC 3,9 8,8 13,02 ± 1,31 28,82 ± 2,55 37oC 4,1 10,22 ± 0,81 30,12 ± 4,12 39oC 4,2 9,2 10,77 ± 1,31 26,78 ± 1,92 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng pH SSF pH Độ cồn Độ brix Glucose Cellulose 4,5 3,3 8,4 13,42 ± 1,52 30,92 ± 2,55 4,1 10,22 ± 0,81 29,12 ± 4,12 5,5 3,9 9,2 10,01 ± 2,01 31,12 ± 2,55 Đồ án tốt nghiệp Bảng Anova thuỷ phân cellulase 5% ngày ... 3.2.4 Kết khảo sát tỉ lệ giống nấm men lên men SHF 56 3.2.5 Kết khảo sát thời gian lên men SSF .58 3.2.6 Kết khảo sát nhiệt độ lên men SSF 60 3.2.7 Kết khảo sát ảnh hưởng pH lên men SSF... 48 3.2 Kết khảo sát phương pháp lên men 50 3.2.1 Kết khảo sát thời gian lên men SHF .50 3.2.2 Kết khảo sát nhiệt độ lên men SHF 53 3.2.3 Kết khảo sát ảnh hưởng pH lên men SHF 55... lên men bioethanol sử dụng nguyên liệu vỏ cacao (theobroma cacao) Nhiệm vụ nghiên cứu Đề tài tập trung vào nghiên cứu: 4.1 Khảo sát so sánh kết thuỷ phân vỏ cacao enzyme H2SO4 4.2 Khảo sát yếu