Nghiên cứu một số chỉ tiêu trong quy trình sản xuất, kiểm nghiệm vacxin giải độc tố escherichia coli phòng bệnh tiêu chảy và sưng phù đầu ở lợn

Luận văn, thạc sỹ, tiến sĩ, cao học, kinh tế, nông nghiệp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN HỮU MẪN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỈ TIÊU TRONG QUY TRÌNH SẢN XUẤT, KIỂM NGHIỆM VACXIN GIẢI ðỘC TỐ ESCHERICHIA COLI PHÒNG BỆNH TIÊU CHẢY VÀ SƯNG PHÙ ðẦU Ở LỢN LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRƯƠNG QUANG HÀ NỘI - 2010 LỜI CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Mọi giúp ñỡ ñã ñược cảm ơn Tác giả luận văn Nguyễn Hữu Mẫn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CÁM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài ngồi nỗ lực thân tơi nhận nhiều giúp ñỡ, tạo ñiều kiện Viện sau ñại học, Ban chủ nhiệm Khoa Thú y, trường ðHNN Hà Nội; Ban giám đốc, Trung tâm Nghiên cứu thuộc Cơng ty HANVET; thầy cô giáo Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm, ñặc biệt hướng dẫn nhiệt tình chu đáo PGS.TS Trương Quang Tôi xin bày tỏ lời cám ơn chân thành tới q phịng ban, thầy mơn, PGS.TS Trương Quang đồng nghiệp giúp đỡ, hướng dẫn tơi hồn thành tốt luận văn Xin trân trọng cám ơn ! Tác giả luận văn Nguyễn Hữu Mẫn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cám ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình viii MỞ ðẦU i TỔNG QUAN 2.1 Tình hình nghiên cứu nước 2.2 Tình hình nghiên cứu nước 2.3 Vi khuẩn Escherichia coli 2.4 Bệnh tiêu chảy phù ñầu lợn E coli gây 19 2.5 Tìm hiểu vacxin 27 ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 3.1 ðối tượng, ñịa ñiểm nghiên cứu 37 3.2 Nội dung nghiên cứu 37 3.3 Nguyên liệu 37 3.4 Phương pháp nghiên cứu 38 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 4.1 Kiểm tra vơ trùng vacxin giải độc tố E coli 51 4.2 Xác ñịnh liều sử dụng vacxin giải ñộc tố E coli 52 4.2.1 ðối với lợn sau cai sữa 52 4.2.2 ðối với lợn nái chửa 54 4.3 Xác định tiêu an tồn vacxin giải độc tố E coli 56 4.3.1 Xác ñịnh tiêu an tồn liều an tồn vacxin giải độc tố E coli chuột bạch Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii 56 4.3.2 Xác ñịnh tiêu an tồn vacxin giải độc tố E coli ñộng vật 58 4.4 Nghiên cứu xác ñịnh hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli 60 4.4.1 Xác định hàm lượng giải độc tố có vacxin giải ñộc tố E coli 60 4.4.2 Xác ñịnh hiệu lực vacxin ñối với chuột bạch 61 4.4.3 Xác ñịnh hiệu lực vacxin ñối với lợn 68 4.5 Nghiên cứu ñiều kiện bảo quản thời gian bảo quản vacxin giải ñộc tố E coli 4.5.1 Kết kiểm tra tình trạng vật lý hiệu giá giải ñộc tố vacxin thời gian bảo quản 4.5.2 75 75 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli thời ñiểm khác thời gian bảo quản ñối với chuột bạch 77 4.6 Thử nghiệm thực ñịa kiểm tra hiệu lực vacxin ngồi thực địa 79 4.6.1 Kết kiểm tra an tồn vacxin ngồi thực địa 79 4.6.2 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin thực ñịa 80 4.6.3 Khảo sát ñộ dài miễn dich vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn ngồi thực địa 84 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 86 5.1 Kết luận 86 5.2 ðề nghị 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv 88 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADP Agar –gel Diffuse Precipitation BA Blood agar CFU Colony – Forming Unit DD Dưới da ðC ðối chứng E.coli Escherichia coli FT Fluid Thioglycolate FX Phúc xoang HGKT Hiệu giá kháng thể HGKðTTB Hiệu giá kháng độc tố trung bình MD Miễn dịch MLD Minimum Lethal Dose NA Nutrient Agar NB Nutrient Brorth SA Sabouraud Agar TCCS Tiêu chuẩn sở TM Tĩnh mạch TN Thí nghiệm Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp v DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Kết kiểm tra vơ trùng vacxin giải độc tố E coli 4.2 Kết kiểm tra hiệu giá kháng ñộc tố lợn sau cai sữa trước sau tiêm vacxin giải ñộc tố E coli 4.3 51 53 Kết kiểm tra hiệu giá kháng ñộc tố huyết lợn nái chửa trước sau tiêm vacxin giải ñộc tố E coli 55 4.4 Kết kiểm tra tiêu an toàn vacxin ñối với chuột bạch 57 4.5 Kết kiểm tra tiêu an tồn vacxin lợn sau cai sữa 59 4.6 Kết kiểm tra tiêu an tồn vacxin lợn nái chửa 60 4.7 Kết xác ñịnh hiệu giá giải ñộc tố vacxin 61 4.8 Kết kiểm tra hiệu giá kháng ñộc tố E coli huyết chuột miễn dịch phản ứng kết tủa nhanh phiến kính 4.9 Kết xác định liều tối thiểu gây chết 100% chuột bạch dịch lọc canh trùng E coli 4.10 62 64 Kết xác ñịnh liều tối thiểu gây chết 100% chuột bạch hỗn hợp canh trùng E coli cường ñộc 66 4.11 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli ñối với chuột bạch 67 4.12 Kết xác ñịnh liều tối thiểu gây bệnh cho 100% lợn sau cai sữa dịch lọc canh trùng E coli 4.13 Kết xác ñịnh liều tối thiểu gây bệnh cho 100% lợn sau cai sữa hỗn hợp canh trùng E coli cường ñộc 4.14 69 70 Kết kiểm tra tính sinh miễn dịch hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn sau cai sữa 73 4.15 Tổng hợp kết xác ñịnh hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli 74 4.16 Kết kiểm tra tình trạng vật lý hiệu giá giải ñộc tố vacxin trình bảo quản 4.17 76 Kết kiểm tra ñịnh kỳ hiệu lực vacxin bảo quản nhiệt độ phịng chuột bạch Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi 77 4.18 Kết kiểm tra ñịnh kỳ hiệu lực vacxin bảo quản nhiệt ñộ từ - 8°C ñối với chuột bạch 4.19 Kết kiểm tra an tồn vacxin giải độc tố E coli tiêm cho lợn ngồi thực địa 4.20 81 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn nái mang thai ngồi thực địa 4.22 80 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn sau cai sữa ngồi thực địa 4.21 78 82 Tổng hợp so sánh kết kiểm tra hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli tiêm cho lợn sau cai sữa lợn nái mang thai ñịa phương 4.23 Kết khảo sát ñộ dài miễn dịch vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn sau cai sữa 4.24 83 84 Kết khảo sát ñộ dài miễn dịch vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn nái mang thai Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vii 85 DANH MỤC CÁC HÌNH STT 4.1 Tên hình Trang HGKðTTB lợn sau cai sữa trước sau tiêm vacxin giải ñộc tố E coli với liều khác 4.2 HGKðTTB lợn nái chửa trước sau tiêm vacxin giải ñộc tố E coli 4.3 61 Hiệu giá kháng độc tố E coli trung bình huyết chuột TN/ðC với hiệu giá giải ñộc tố vacxin 4.5 55 Phản ứng ADP giải ñộc tố E coli với kháng ñộc tố huyết chuột ñã ñược miễn dịch 4.4 53 62 Phản ứng kết tủa sau 36 - 48 phản ứng ống nghiệm giải ñộc tố E coli với kháng ñộc tố huyết chuột ñã ñược miễn dịch 4.6 Chuột bạch chết tiêm canh trùng E coli ñộc ñể xác ñịnh liều tối thiểu gây chết 100% 4.7 75 Hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn sau sai sữa lợn nái mang thai ni địa phương 4.10 71 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli ñối với chuột bạch lợn 4.9 66 Lợn phát bệnh tiêm canh trùng E coli cường ñộc ñể xác ñịnh liều tối thiểu gây bệnh 100% lợn 4.8 63 83 Kết xác ñịnh ñộ dài miễn dịch vacxin giải ñộc tố E coli ñối với lợn sau cai sữa nái mang thai Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp viii 85 MỞ ðẦU Trong q trình chăn ni lợn Việt Nam, có nhiều bệnh gây thiệt hại lớn kinh tế, có hội chứng tiêu chảy Ngun nhân gây tiêu chảy có nhiều: Virus gây viêm dày ruột (TGE), Rotavirus, Coccidia Vi khuẩn E coli nguyên nhân quan trọng gây bệnh tiêu chảy lợn sinh sau cai sữa [46] Tập đồn vi khuẩn E coli, có 2000 chủng có khoảng 10% gây bệnh Ở lợn, từ sơ sinh trưởng thành ln bị E coli công [31]: Lứa tuổi lợn sơ sinh gây bệnh: Lợn phân trắng Lứa tuổi lợn theo mẹ gây bệnh: Tiêu chảy (rối loạn tiêu hoá) Lứa tuổi lợn trước sau cai sữa gây bệnh: Sưng phù ñầu lợn Yếu tố gây bệnh vi khuẩn E coli đa dạng học gây tổn thương tổ chức, bội nhiễm gây rối loạn chức năng, gây bệnh nội, ngoại ñộc tố tiết Do vậy, bệnh E coli gây thiệt hại lớn cho chăn nuôi lợn nước tiên tiến Việt Nam ðể chống lại bệnh E coli, nhà thú y ñã sử dụng nhiều phương thuốc, từ cổ truyền đơng y đến kháng sinh ñại, kể liệu pháp hoá sinh, dinh dưỡng kỹ thuật cao… khống chế ñược phần Ở Việt Nam ñã áp dụng nhiều biện pháp có kết quả, tác dụng tốt kháng sinh Mấy thập kỷ qua, thuốc kháng sinh ñã giúp nhà chăn nuôi giảm bớt phần ñáng kể tổn thất dịch bệnh Tuy nhiên, mặt trái kháng sinh ngày lộ rõ: Các nhà khoa học nước khẳng ñịnh E coli ñã kháng thuốc với tỷ lệ cao [16], [36] ðể khắc phục tình trạng này, giới Việt Nam ñã có chế phẩm sinh học ñời, ñó có chứa vi khuẩn có lợi ñối kháng với vi khuẩn E coli Subtilis, Lactobacillus acidophillus ñể giúp vật chống lại bệnh [7], [13], [43] Và gần lại nghiên cứu thành cơng thêm sản phẩm kháng thể E coli, thuốc sinh học ñặc hiệu chống lại vi khuẩn E coli mà không gây hậu xấu dùng kháng sinh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... cứu số tiêu quy trình sản xuất, kiểm nghiệm vacxin giải độc tố E coli phịng bệnh tiêu chảy sưng phù đầu lợn? ?? Mục đích nghiên cứu : Xây dựng quy trình kiểm nghiệm, đánh giá chất lượng vacxin giải. .. nghiên cứu vacxin E coli, nhiên chưa nghiên cứu phịng chống độc tố Trong ñộc tố phần quan trọng bệnh sinh bệnh E coli yếu tố gây bệnh, làm bệnh trở nên trầm trọng Vấn ñề mở hướng nghiên cứu độc. .. tố E coli ñối với ñộng vật 58 4.4 Nghiên cứu xác ñịnh hiệu lực vacxin giải ñộc tố E coli 60 4.4.1 Xác ñịnh hàm lượng giải độc tố có vacxin giải độc tố E coli 60 4.4.2 Xác ñịnh hiệu lực vacxin